羟基喜树碱脂质体对人食管癌Ecal09细胞株作用的研究

目的研究羟基喜树碱脂质体对人食管癌Ecal09细胞增殖、凋亡以及相关蛋白表达的影响。方法将人食管痛细胞株Ecal09常规培养于RPMI-1640培养基中，实验分空白对照组和浓度分别为0．1、1、10、50mmol／L的羟基喜树碱脂质体组，应用MTF法检测羟基喜树碱脂质体对食管癌细胞增殖的影响，Western blot检测细胞膜P糖蛋白水平的改变，流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的改变。结果各剂量组羟基喜树碱脂质体均对人食管癌Ecal09细胞的增殖具有抑制作用，并伴随着对细胞凋亡的羼导，以及对和多药耐药性（MDR）相关的P糖蛋白的抑制。结论羟基喜树碱脂质体能够抑制人食管癌细胞的增殖，诱导其凋亡并能够抑制P糖蛋白的表达，减少细胞耐药，且在0．1～50mmol／L浓度范围内，随着浓度增加，上述抑制作用增强，存在浓度依赖性。     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞株的增殖抑制作用研究

目的：观察褪黑素（Mel）联合顺铂（DDP）对人食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响.方法：以DDP 2.5 mg/L、不同浓度Mel及两药联合作用于食管癌Eca109细胞.通过MTT实验检测用药后对食管癌Eca109细胞增殖的影响,并计算抑制率;通过集落克隆形成实验观察用药后对细胞集落克隆形成的影响;通过流式细胞仪检测用药后细胞凋亡率的变化.结果：DDP 2.5 mg/L与不同浓度Mel联合用药组对食管癌Eca109细胞生长抑制率均明显高于单独使用DDP或Mel组（P＜0.01）;10-5 mol/L Mel诱导人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为7.8%,10-5 mol/L Mel与2.5 mg/L DDP联合刺激人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为32.0%,高于DDP本身诱导的24 h凋亡率9.7%（P＜0.01）.结论：Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并增强其诱导凋亡作用,为临床食管癌的治疗提供了一定的实验研究基础.     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞的抑制作用及其机制

目的:观察褪黑素(Mel)联合顺铂(DDP)对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用,并探讨相关的分子机制。方法:通过MTT实验检测Mel与DDP不同浓度分别单用或两药联合处理后食管癌Eca109细胞增殖情况;流式细胞仪检测用药后细胞凋亡情况;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:Mel与DDP联用对食管癌Eca109细胞增殖的抑制率均高于单用Mel与DDP时对食管癌Eca109细胞的抑制率(P<0.05);Mel单独诱导食管癌Eca109细胞凋亡作用不强,但可增强DDP诱导的食管癌细胞凋亡(P<0.01);Mel与DDP联用后食管癌Eca109细胞Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强。结论:Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并具有增强DDP诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的作用,其机制可能与上调Bax表达和下调Bcl-2的表达有关。     

冰片与顺铂联用对Eca109/DDP细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨冰片与顺铂(cisplatin,DDP)联用对耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法：采用递增药物质量浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)。冰片联合DDP作用于Eca109(DDPr)细胞,MTT法检测Eca109(DDPr)细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果：递增药物质量浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1μg/ml DDP的培养液中正常生长,其对DDP的耐药指数为15.886,所得细胞命名为耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)。单用冰片浓度≤1.560μg/ml时,对Eca109(DDPr)细胞无明显抑制作用(P＞0.05),但与DDP1μg/ml合用能显著促进DDP抑制Eca109(DDPr)细胞的增殖（P＜0.05）,并促进DDP诱导Eca109(DDPr)细胞周期改变、细胞凋亡增加。细胞周期表现为G1期细胞明显增多（P＜0.05）,S期细胞、G2期细胞明显减少（P＜0.05）;细胞的凋亡率明显增加（P＜0.05）。结论：冰片促进DDP抑制Eca109(DDPr)细胞增殖可能与改变Eca109(DDPr)细胞周期、增加细胞凋亡有关。     

豆根管食通口服液对人食管癌细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：观察中药复方制剂——豆根管食通口服液对体外培养的食管癌Eca－109细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及对凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法：随机取Eca－109细胞分为三组：实验组、阳性对照组和空白对照组，采用MTT分析法测定不同浓度的豆根管食通口服液对Eca－109细胞增殖的抑制作用；通过倒置显微镜、HE染色观察凋亡细胞；采用免疫组织化学法测定Eca－109细胞内Bcl－2和Bax蛋白的表达。结果：MTT结果显示。豆根管食通口服液对Eca－109细胞的增殖有明显的抑制作用。倒置显微镜、光学显微镜下可发现药物作用组出现细胞核固缩、核碎裂等。免疫组织化学结果显示药物作用组bcl—2蛋白表达降低，bax蛋白表达增高（P〈0．01）。结论：豆根管食通口服液对人食管癌Eca－109细胞系有抗增殖及诱导凋亡作用，其分子机制可能是下调bcl－2基因表达．上调bax基因表达。     

白藜芦醇抑制食管癌Eca109细胞增殖的初步研究

目的观察白藜芦醇对人食管癌Eca109细胞增殖影响及凋亡诱导作用。方法噻唑蓝法测定细胞生长抑制率,倒置显微镜、透射电镜和HE染色法观察细胞的形态变化,流式细胞术用于检测白藜芦醇培养Eca109细胞前后的细胞凋亡情况。结果白藜芦醇对Eca109细胞生长有抑制作用,抑制率达76.42%,并呈剂量、时间效应关系。倒置显微镜下可见细胞生长明显被抑制,胞浆内颗粒增多增粗,部分细胞变圆悬浮在培养基中;HE染色和透射电镜观察发现白藜芦醇能诱导Eca109细胞呈现典型的细胞凋亡特征,如细胞体积变小,染色质浓缩等。流式细胞术检测结果显示,40 mg/L白藜芦醇培养Eca109细胞72 h后细胞凋亡率达19.52%,在DNA直方图上有明显的亚二倍体凋亡峰。结论白藜芦醇能明显抑制Eca109细胞增殖,并进一步诱导食管癌细胞凋亡。     

冰片与顺铂联用对Eca109(DDPr)细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨冰片与顺铂(cisplatin,DDP)联用对耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)增殖?细胞周期和凋亡的影响?方法:采用递增药物浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr),将冰片联合DDP作用于Eca109(DDPr)细胞,MTT法检测Eca109(DDPr)细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡?结果:递增药物浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1 μg/ml DDP的培养液中稳定生长,其对DDP的耐药指数为15.886;单用冰片浓度≤1.560 μg/ml时,对Eca109(DDPr)细胞无明显抑制作用(P > 0.05),但与1 μg/ml DDP合用能显著促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用(P < 0.05),并促进DDP诱导Eca109(DDPr)的细胞周期改变?细胞凋亡增加,细胞周期表现为G1期细胞明显增多(P < 0.05),S期细胞?G2期细胞明显减少(P < 0.05),细胞的凋亡率明显增加(P < 0.05)?结论:冰片促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用,可能与改变Eca109(DDPr)细胞周期?增加细胞凋亡有关?     

ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体对食管癌细胞凋亡的影响

目的探讨ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响。方法应用MTT法实验观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,同时应用原位末端标记（TUNEL）法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响,应用透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果应用MTT法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用（P<0.05）。以Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达（P<0.05）。HPLC结果显示,食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内三种多胺含量均明显降低（P<0.05）。TUNEL标记检测结果显示,Ad-ODC-AdoMetDCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡（P<0.05）,透射电镜下可见典型的细胞凋亡特征,表现为细胞体积缩小,核皱缩、碎裂,染色质呈块状边集等。结论ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体能显著抑制食管癌细胞生长增殖,降低细胞多胺合成,促进细胞凋亡,为探讨食管癌基因治疗的可行性提供了实验依据。     

羟基喜树碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨羟基喜树碱在体外对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,为乳腺癌的临床用药提供实验依据。方法：将不同浓度（10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）的羟基喜树碱作用于人乳腺癌MCF-7细胞48 h,并设不加羟基喜树碱溶液的MCF-7细胞作为对照组,用MTT法测定MCF-7细胞的增殖情况,用Hoechst33258染色检测MCF-7细胞的凋亡情况,以RT-PCR检测羟基喜树碱对MCF-7细胞Casepase-3 mRNA表达的影响。结果：与对照组比较,50μmol/L、100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱对细胞增殖均有抑制作用（P〈0.05、P〈0.01）,尤以200μmol/L的抑制作用最明显,其抑制率呈浓度依赖性增加。荧光显微镜观察显示,100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱处理组中可见典型的凋亡形态学改变。与对照组比较,各羟基喜树碱处理组中MCF-7细胞Caspase-3 mRNA表达水平均升高（P〈0.05、P〈0.01）,并呈浓度依赖性升高趋势。结论：羟基喜树碱可在体外抑制MCF-7细胞增殖,并通过Caspase-3途径诱导细胞凋亡,达到抑制肿瘤细胞生长的作用。     

DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2''''-脱氧胞苷对人食管癌细胞株Eca109的影响

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对人食管癌细胞株Eca109增殖作用的影响.方法应用不同浓度(10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L)的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR,于不同作用时间(24～168 h) 处理人食管鳞癌细胞株Eca109,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定5-aza-CdR作用下Eca109细胞株的生存率,倒置显微镜观察细胞的形态学变化.结果不同药物浓度组在同一作用时间下,细胞株生存率差异有统计学意义(P＜0.05);同一药物浓度不同作用时间组之间(24～96 h)的细胞生存率差异也有统计学意义(P＜0.05),且96 h时对人食管鳞癌细胞株Eca109生长抑制作用最明显.形态学观察显示癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块.结论5-aza-CdR有抑制人食管癌细胞株Eca109生长的作用,抑制作用呈时间依赖性及浓度依赖性;并且干预后癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态改变.     

LIGHT-Fc基因转染对食管癌细胞株Eca109抑制作用的初步研究

目的探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应.方法以DOTAP脂质体介导LIGHT-Fc基因转染人食管癌细胞株Eca109,通过绘制细胞生长曲线及MTF比色法观察LIGHT-Fc转染对Eca109细胞生长的影响,用RT-PCR法检测LIGHT受体在Eca109细胞上的表达.结果LIGHT-Fc基因的表达可以抑制Eca109细胞的生长.在低血清培养时,Eca109/LIGHT细胞的生长曲线较对照组明显降低;MTT比色显示Eca109/LIGHT的细胞活力与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).结论LIGHT-Fc基因转染对人食管癌Eca109细胞具有体外抑制作用,但全面评价有待进一步的研究.     

DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2＇-脱氧胞苷对人食管癌细胞株Eca109的影响

目的：探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2＇-脱氧胞苷（5-aza-CdR）对人食管癌细胞株Eca109增殖作用的影响.方法：应用不同浓度（10^-7、10^-6、10^-5、10^-4 mol/L）的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR,于不同作用时间（24～168 h） 处理人食管鳞癌细胞株Eca109,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定5-aza-CdR作用下Eca109细胞株的生存率,倒置显微镜观察细胞的形态学变化.结果：不同药物浓度组在同一作用时间下,细胞株生存率差异有统计学意义（P＜0.05）;同一药物浓度不同作用时间组之间（24～96 h）的细胞生存率差异也有统计学意义（P＜0.05）,且96 h时对人食管鳞癌细胞株Eca109生长抑制作用最明显.形态学观察显示：癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块.结论：5-aza-CdR有抑制人食管癌细胞株Eca109生长的作用,抑制作用呈时间依赖性及浓度依赖性;并且干预后癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态改变.     

姜黄素对体外培养的人食管癌Ec-109细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究姜黄素对体外培养的人食管癌(esophageal carcinoma 109,Ec-109)细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同浓度姜黄素对人食管癌Ec-109细胞增殖的影响;流式细胞术检测Ec-109细胞的凋亡情况;免疫细胞化学方法检测Fas、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达的情况.结果 姜黄素可显著抑制Ec-109细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(inhibitory concentraltion 50,IC50)为22.09μmol/L(姜黄素浓度为80μmol/L作用60h).不同浓度姜黄素均可诱导Ec-109细胞凋亡.姜黄素可显著下调Ec-109细胞PCNA蛋白表达,显著上调Fas蛋白表达.结论 姜黄素可抑制体外培养的人食管癌Ec-109细胞的增殖,诱导其凋亡.     

紫杉醇对人食管癌Eca109细胞株生长的影响

目的：观察不同浓度的紫杉醇对食管癌细胞Eca109的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验,细胞形态学观察及流式细胞仪等方法对人食管癌细胞Eca109进行检测和观察。结果：MTT实验显示紫杉醇可抑制食管癌细胞增殖;光镜及电镜可发现药物作用组细胞核固缩、解聚以及凋亡小体,流式细胞仪检测显示G1峰前有明显的凋亡峰。细胞周期分析提示紫杉醇可将Eca细胞阻滞于G2－M期,且与浓度相关。结论：紫杉醇对人食管癌细胞系Eca109细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于G2－M期,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

仙鹤草水提液对食管癌Eca109细胞生长的抑制作用

目的:研究仙鹤草水提液对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用及其可能机制.方法:MTT法测定0g/L、2 g/L、4 g/L、8 g/L、16 g/L的仙鹤草水提液分别作用于Eca109细胞24 h、48 h、72 h,观察对Eca109细胞生长的抑制作用;采用免疫组织化学染色技术检测16 g/L仙鹤草水提液作用72 h对Eca109细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响.结果:MTT结果显示16 g/L仙鹤草水提液作用48 h和72 h后Eca109细胞生长明显受抑;免疫组化结果显示16 g/L仙鹤草水提液作用72 h后Eca109细胞内Bcl-2蛋白表达下调,P53蛋白表达上调.结论:仙鹤草水提液体外能诱导Eca109细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达及上调P53蛋白表达有关.     

木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制

目的 研究木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制。方法 Eca109细胞经不同浓度木犀草苷处理后,MTT法检测Eca109细胞增殖;倒置显微镜观察Eca109细胞形态的变化;流式细胞术检测Eca109细胞周期变化及细胞凋亡情况;RT-PCR检测Eca109细胞cyclin D1、survivin和c-myc基因表达。结果 MTT实验表明,木犀草苷80、120、160、200、240 μmol/L对Eca109细胞均有抑制作用,且与浓度相关。木犀草苷可引起Eca109细胞形态改变、体积缩小,并与周围细胞脱离,浓度为240 μmol/L时使细胞呈出芽状,有的细胞伸出多个伪足样突起;浓度为160、240 μmol/L时,可将细胞阻滞于G₂/M期,诱导细胞凋亡;浓度为240 μmol/L并处理Eca109细胞48 h后,使Eca109细胞cyclin D1、survivin和c-myc基因表达低于对照组（P＜0.05）。结论 木犀草苷对食管鳞状癌Eca109细胞的生长有显著抑制作用,其通过改变细胞周期、诱导细胞凋亡及抑制相关基因的表达发挥抗肿瘤作用。     

羟基喜树碱诱导非小细胞肺癌细胞株凋亡实验研究

目的 应用流式细胞仪观察羟基喜树碱对非小细胞肺癌细胞株体外生长的影响,了解羟基喜树碱对非小细胞肺癌细胞株的效应,为临床治疗非小细胞肺癌提供理论依据.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,测定HCPT对非小细胞肺癌细胞株EBC-1和A-549的生长及集落形成的抑制作用,并绘制量-效曲线.流式细胞仪检测羟基喜树碱诱导非小细胞肺癌细胞株凋亡.结果 羟基喜树碱对非小细胞肺癌细胞株的集落形成抑制试验明显呈剂量依赖性,HCPT和DDP对EBC-1(鳞状上皮)和A549(腺癌)的24h的50%抑制浓度(IC50)分别为67ng/L和154ng/L;4 950ng/L和58 101ng/L,明显高于顺铂(P＜0.01),羟基喜树碱可诱导EBC-1和A549细胞株发生S G2/M期阻滞,HCPT引起凋亡,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 羟基喜树碱可显著诱导非小细胞肺癌细胞株发生凋亡,对EBC-1和A549细胞株体外增殖有明显抑制作用.     

DTT与顺铂诱导对食管癌Eca109细胞磷酸化P38表达的影响

目的:探讨磷酸化P38在顺铂和DTT诱导的食管癌Eca109细胞凋亡中的作用.方法:分别用DTT与顺铂诱导处理食管癌Eca109细胞,未加药组作为对照.采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;用免疫组化方法检测磷酸化P38的表达情况.结果:与对照组相比,DTT处理组及顺铂处理组细胞凋亡率明显升高.免疫组化结果显示:2处理组磷酸化P38的水平均明显高于对照组(P＜0.05);DTT处理组磷酸化P38大部分位于细胞核内,而顺铂组磷酸化P38则主要弥散于细胞浆内.结论:磷酸化P38在DTT和顺铂诱导的食管癌Eca109细胞凋亡时细胞内分布不同,激活的P38可能通过不同途径参与细胞凋亡.     

血红素加氧酶-1对食管癌细胞株Eca109增殖及凋亡作用的影响

目的 研究血红素加氧酶-1(heme oxygenase,HO-1)对食管癌细胞株Eca109增殖活性及凋亡作用的影响.方法 利用体外设计合成的靶向抑制HO-1的低分子RNA(siRNA)沉默食管鳞癌Eca109细胞HO-1基因的表达,应用RT-PCR、Western blot检测HO-1 mRNA和蛋白表达水平,分别以MTS法、流式细胞术检测干扰HO-1后食管鳞癌Eca109细胞增殖和凋亡水平.结果 RT-PCR、Western blot检测结果显示转染HO-1 siRNA可以成功抑制食管鳞癌Eca109细胞HO-1的表达;与空白组、阴性对照组比较,HO-1 siRNA干扰组Eca109细胞增殖能力明显减弱,细胞凋亡率显著增加.结论 HO-1siRNA可有效沉默食管癌细胞HO-1的表达,抑制细胞的增殖活性,促进细胞的凋亡.     

肿瘤特异性Caspase-8表达载体对食管癌细胞Eca109体外增殖和凋亡作用的研究

目的研究肿瘤特异性Caspase-8表达载体对食管癌细胞Eca109体外增殖和凋亡作用。方法用脂质体法将人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控的肿瘤特异性表达载体hTERT-Caspase-8,瞬时转染端粒酶阳性的食管癌细胞株Eca109及端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞株MRC-5。结果转染hTERT-Caspase-8对细胞Eca109的生长具有显著抑制作用,细胞凋亡水平显著升高;转染hTERT-Caspase-8对MRC-5的生长和凋亡均无明显影响。结论上述发现提示hTERT启动子可以调控Caspase-8基因在食管癌细胞中靶向性表达,选择性抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,可能是肿瘤靶向性基因治疗中比较理想的转录调控元件。