雷公藤内酯醇对HL60细胞增殖周期调控的实验研究

目的：探讨雷公藤内酯醇对HL60细胞体外抗癌作用及其机制。方法：选用HL60细胞株，运用细胞培养、MTT法、流式细胞仪研究不同浓度雷公藤内酯醇对其增殖及细胞DNA含量分布的影响。结果：雷公藤内酯醇对HL60细胞具有明显的增殖抑制作用，呈时间与剂量依赖性，且细胞周期被阻滞于G1／S期，具有上调细胞G1／S检测点的能力。结论：雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力，能干扰HL60细胞G1／S检测点的转换。     

雷公藤内酯醇抗单核细胞白血病细胞株THP-1的实验研究

目的:探讨雷公藤内酯醇对人类单核细胞白血病细胞株THP-1增殖和凋亡的影响。方法:运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术(FCM)等检测雷公藤内酯醇对THP-1细胞株增殖和凋亡的影响。结果:雷公藤内酯醇能明显抑制THP-1细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,作用48 h时其半数抑制浓度IC50为18 nmol/L,且经雷公藤内酯醇处理后THP-1细胞G1/S期所占的百分比较对照组上升(P<0.05)。雷公藤内酯醇作用后48 h的变化与THP-1细胞凋亡率具有相关性,r=0.97,P<0.05,而作用24 h,其无明显诱导凋亡的作用。结论:雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,干扰THP-1细胞周期,上调细胞G1/S期检测点,并具有促进细胞凋亡的作用。     

雷公藤内酯醇体外抑制人脐静脉内皮细胞增殖的实验研究

获取人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,体外培养成功后,分别加入不同浓度的雷公藤内酯醇,并测细胞增殖曲线。以^3H-TDR掺入技术,研究雷公藤内酯醇对血管内皮细胞DNA合成的抑制作用。雷公藤内酯醇可呈剂量依赖性的使^3H-TDR掺入值下降,抑制HUVEC的增殖、游走。认为雷公藤内酯醇是一具有潜力的新生血管抑制剂。     

血红素氧合酶-1/一氧化碳系统对胰岛素样生长因子-Ⅰ诱导的兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究血红素氧合酶-1／一氧化碳（HO-1／CO）系统对胰岛素样生长因子-I（IGF-I）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响及分子机制。方法体外培养兔主动脉VSMCs,用IGF-I诱导其增殖,用氯化血红素和锌原卟啉-9,分别诱导和阻断HO-1的表达,从而促进和抑制CO生成,通过RT．PCR及Western blot检测HO-1mRNA和蛋白的表达,采用酶联免疫法测定培养上清液中碳氧血红蛋白含量,应用同位素^3H-TdR掺入试验检测VSMCs增殖,采用流式细胞技术检测细胞增殖周期。结果氯化血红素显著诱导VSMCs HO-1 mRNA及蛋白的表达,显著增加VSMCs培养上清液中CO的生成量,呈剂量依赖趋势;梯度浓度的氯化血红素对IGF-I增高的VSMCs ^3H-TdR掺入量抑制率分别为29．6％、45．0％和54．1％,显著抑制细胞周期进程,导致G0／G1细胞显著增多,S期和G2／M期细胞显著减少（P均〈0．01）,与加入的氯化血红素及上清液中碳氧血红蛋白含量呈剂量依赖趋势;锌原卟啉-9则导致相反的结果。结论内源性CO通过抑制VSMCs的DNA合成及细胞周期进程直接参与VSMCs的增殖调节;HO-1表达上调是细胞对抗氧化应激和损伤的保护性反应;HO-1 mRNA及蛋白表达增加是内源性CO抑制VSMCs增殖的基础。     

卡托普利对血管平滑肌细胞增殖和PDGF—B、bFGF及相关癌基因的影响

采用内皮素建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型。用氚-胸腺嘧啶核苷（［3H］－TdR）参入法，流式细胞术，免疫细胞化学及NorthemBlot杂交方法，观察卡托普利（Cap）对VSMC增殖的作用及对生长因子PDGF－B，bFGF及其相关癌基因c－sis，c－myc表达的影响。结果发现：Cap能逆转内皮素所致的［3H］－TdR参入量增多，阻止血管平滑肌细胞由静止期（G0／G1期）进入DNA合成期（S期）和有丝分裂（G2／M期），并能逆转内皮素引起的PDGF—B，bFGF抗原，c－sis，c－mycmRNA表达增强。提示：aop有抑制血管平滑肌细胞增殖作用，与生长因子及癌基因调控的分子生物学机制有关。     

新型KATP通道开放剂埃他卡林对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究新型KATP通道开放剂埃他卡林（iptakalim）对内皮素-1（ET-1）诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）增殖的影响。方法 内皮素-1诱导培养建立人肺动脉平滑肌细胞增殖模型;氚-胸腺嘧啶核苷（3H—TdR）掺入法观察脱氧核糖核酸（DNA）合成;流式细胞仪技术检测HPASMC细胞周期。结果埃他卡林能剂量依赖性抑制内皮素-1所致的3H—TdR掺入量增多,阻止HPASMC由静止期（G0／G1期）进入DNA合成期（S期）和有丝分裂期（G2／M期）。特异性KATP通道阻断剂格列本脲可拮抗埃他卡林对。H—TdR掺入的抑制作用。结论 埃他卡林可能通过激活KATP通道来抑制ET-1诱导入肺动脉平滑肌细胞的增殖作用,有望成为治疗肺动脉高压的新药。     

青蒿素对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :观察青蒿素 (artemisinin ,Art)对体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 (VSMC)的增殖、DNA合成及细胞周期的影响 ,探讨作用机制。方法 :体外培养大鼠主动脉VSMC ,分为不同浓度的Art组及对照组。观察细胞生长曲线 ;四甲基偶氮唑盐微量酶反应 (MTT)法检测细胞活性 ;3H 胸腺嘧啶脱氧核苷(3H- TdR)掺入法观察其对DNA合成的影响 ;通过HE染色、DNA梯带检测和流式细胞术观察细胞的凋亡并测定细胞周期。结果 :与对照组相比 ,各浓度Art组VSMC计数不同程度减少 ,3H- TdR掺入率降低 ,细胞增殖受抑制 ,VSMC凋亡增加 ,并呈浓度依赖性 ;Art诱导细胞凋亡 ;使细胞周期阻滞于G0 / G1 期。结论 :Art对体外培养VSMC的增殖有抑制作用 ,可能通过抑制细胞DNA合成 ,诱导细胞凋亡及干扰细胞周期等途径发挥作用     

槲皮素及异鼠李素对去甲肾上腺素促人血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的观察槲皮素、异鼠李素和去甲肾上腺素对培养人血管平滑肌细胞增殖的影响。方法利用培养的人主动脉平滑肌细胞，采用细胞计数和^3H-胸腺嘧啶掺入法，观察槲皮素、异鼠李素和去甲肾上腺素对血管平滑肌细胞增殖、DNA合成的影响，以及槲皮素、异鼠李素和酚妥拉明对去甲肾上腺素促血管平滑肌细胞增殖、DNA合成的影响。结果槲皮素有明显抑制血管平滑肌细胞增殖和DNA合成的作用，而异鼠李素作用较弱。在所观察1—200μmol／L的浓度范围内，槲皮素和异鼠李素均在200μmol／L浓度发挥了最大的抑制作用，其抑制作用有剂量依赖关系。去甲肾上腺素有促进血管平滑肌细胞增殖、DNA合成的作用，而这些促进作用能被酚妥拉明所阻滞。槲皮素和异鼠李素均呈剂量依赖性抑制去甲肾上腺素促血管平滑肌细胞增殖和DNA合成的作用，且槲皮素和异鼠李素有明显的协同作用。槲皮素和异鼠李素对去甲肾上腺素刺激作用的抑制明显强于酚妥拉明。槲皮素和异鼠李素对血管平滑肌细胞无细胞毒性作用。结论槲皮素和异鼠李素是细胞毒性低的天然黄酮类物质，对血管平滑肌细胞增殖、DNA合成尤其是对去甲肾上腺素刺激的血管平滑肌细胞增殖、DNA合成有较强的抑制作用。     

阿司匹林对脂多糖诱导的大鼠平滑肌细胞增殖的影响

目的观察阿司匹林对脂多糖(LPS)诱导的体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法采用组织贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞,选3-9代细胞用于实验。用乳酸脱氢酶活性测定法进行细胞毒性试验,观察阿司匹林加入对细胞有无毒性。采用四唑盐比色法计数不同浓度阿司匹林处理下,LPS诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖数量的变化。用流式细胞仪检测分别加入LPS和阿司匹林2mmol/L后大鼠血管平滑肌细胞周期变化。结果与对照组比较,阿司匹林5mmol/L组细胞上清液中乳酸脱氢酶活性无明显升高(P>0.05)。阿司匹林(0.5、1、2mmol/L)呈剂量依赖性的抑制大鼠主动脉平滑肌细胞的增值,实验显示2mmol/L浓度的阿司匹林在培养第五天时抑制的效果最大,与LPS组比较有极显著的差异。与LPS组比较,阿司匹林(2mmol/L)可使细胞静止期/DNA合成前期(Go/G1)的大鼠主动脉平滑肌细胞所占比例显著升高,而DNA合成期(S期)细胞所占比例显著降低。结论阿司匹林能呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖,并将细胞抑制在G0/G1。     

螺内酯抑制心肌成纤维细胞增殖的实验研究

目的:研究螺内酯对培养的心肌成纤维细胞增殖的作用,揭示螺内酯抑制心肌纤维化的可能机制。方法:进行新西兰白兔心脏心肌成纤维细胞的培养;测定细胞计数,细胞活性(WST-1分解)和DNA合成(BrdU掺入),并以流式细胞仪测定细胞周期等以表示细胞增殖。结果:不同浓度的螺内酯(2.5×10-7~5×10-5mol/L)分别作用1、3、7 d后,心肌成纤维细胞的数量明显减少,并呈剂量-时间-效应(P<0.01)。细胞经不同浓度螺内酯(2.5×10-7~5×10-5mol/L)作用1 d后,DNA合成、活细胞代谢活性和细胞周期的DNA合成期(S) DNA合成后期(G2) 分裂期(M)的百分比明显减少(P<0.01)。结论:螺内酯可能通过抑制心肌成纤维细胞的增殖而抑制心肌纤维化。     

姜黄素对血管平滑肌细胞增殖及cyclinD1和p21waf1/cip1蛋白表达的影响

目的 观察姜黄素（curcumin）抑制大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和诱导细胞周期停滞的作用,以及对细胞周期蛋白cyclinD1,p21waf1/cip1表达的影响。方法 采用组织贴块法体外培养大鼠VSMC,MTT法测定姜黄素对VSMC增殖的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期分布,Western印迹法检测cyclinD1,p21waf1/cip1蛋白的变化。结果 MTT示不同浓度姜黄素(7.5～120 μmol/L)在24～72 h范围内,浓度和时间依赖性抑制VSMC增殖;30 μmol/L以上浓度姜黄素显著抑制增殖的VSMC细胞周期进程,使S及G2/M期减少(P<0.05),G0/G1期增加(P<0.05);30 μmol/L的姜黄素可抑制cyclinD1表达,促进p21waf1/cip1蛋白表达。结论 姜黄素具有明确的抑制VSMC增殖和细胞周期停滞的作用,其与cyclinD1,p21waf1/cip1蛋白变化有关。     

过表达p27基因抑制血管损伤后新生内膜的形成

目的　探讨p2 7基因转染对血管损伤后新生内膜形成的影响。方法　以腺病毒为载体转染p2 7基因 ,用MTT法观察其对血管平滑肌细胞增殖的影响 ,用流式细胞仪检测细胞周期 ;在兔颈总动脉球囊损伤模型上转染p2 7基因 ,采用免疫组织化学法检测p2 7基因的表达 ,检测其对新生内膜形成的影响。结果　p2 7可明显抑制培养的血管平滑肌细胞增殖 ,细胞停滞于G1期。兔颈总动脉球囊损伤后转染p2 7基因可以减少新生内膜的形成达 2 7 4 3%。结论　以腺病毒为载体转染p2 7基因可以有效地抑制血管平滑肌细胞增殖及血管损伤后新生内膜的形成。     

Rapamycin inhibits human in stent restenosis vascular smooth muscle cells independently of pRB phosphorylation and p53

OBJECTIVE: Drug-eluting stents containing the immunosuppressant rapamycin markedly inhibit in stent restenosis (ISR). However, the molecular mechanisms that underlie its effect on ISR-derived vascular smooth muscle cells (VSMCs), as opposed to normal VSMCs, are unknown. Specifically, as ISR-VSMCs have altered cell cycle regulation, rapamycin may arrest these cells via novel molecular pathways. METHODS: We isolated human VSMCs from sites of ISR, and examined the effect of rapamycin on cell proliferation using MTT assay, time lapse videomicroscopy and flow cytometry. Regulation of G(1)-S transition was examined using Western blotting, and cell size and protein synthesis examined using flow cytometry and collagen assay, respectively. The requirement for pRB and p53 was examined using ISR VSMCs expressing E1A and a dominant negative p53, respectively. RESULTS: ISR-VSMC proliferation was potently inhibited by rapamycin. Arrest was confined to G(1), as cell proliferation (but not cell size) of S/G(2)-arrested cells was unaffected by rapamycin. Moreover, ISR-VSMC lines generated with disrupted p53 or pRB function still arrested in the presence of rapamycin, suggesting that these genes are dispensable for rapamycin-induced arrest. Significantly, rapamycin completely inhibited the phosphorylation of p70(S6K), an mTOR-regulated kinase implicated in the control of proliferation, but had no effect on collagen or total protein synthesis. CONCLUSIONS: We demonstrate that rapamycin is a potent inhibitor of ISR VSMC proliferation during G(1). Rapamycin's action does not require p53 or pRB. We show that p70(S6K) is markedly inhibited in rapamycin-arrested ISR cells, suggesting that regulation of its upstream kinase, mTOR, is important for the control of proliferation in ISR cells.     

Chronic l-arginine treatment reduces vascular smooth muscle cell hypertrophy through cell cycle modifications in spontaneously hypertensive rats

OBJECTIVE: To investigate the effect of long-term l-arginine supplementation on phenotype and proliferative status of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from spontaneously hypertensive rats (SHR) as well as the possible changes in nitric oxide (NO) availability. METHODS: Male SHR, 22 weeks of age, received l-arginine (660 mg/kg per day) in their drinking water for 12 weeks. VSMCs from untreated (C-VSMC) and l-arginine-treated (l-Arg-VSMC) SHR were isolated from the common carotid artery, cultured and used until passage five. Size, protein content, cell proliferation and ploidy were evaluated in carotid VSMCs in culture, as well as the possible association of NO in these changes. RESULTS: Relative cell size, total protein content per cell, and number of polyploid cells were significantly lower in l-Arg-VSMC compared to C-VSMC. Fetal calf serum stimulation (10% FCS) increased cell number only in l-Arg-VSMC. DNA synthesis, assessed by [H]methylthymidine incorporation after 10% FCS stimulation, was higher in l-Arg-VSMC than in C-VSMC. Cell cycle analysis revealed a significant increase of the number of l-Arg-VSMC at the G1 phase, together with a reduction at the G2 + M phase. In contrast, C-VSMC were arrested at the G2 + M phase of the cell cycle. Nitrite/nitrate levels, as well as intracellular cyclic guanosine monophosphate (cGMP) content, were significantly higher in l-Arg-VSMC. This was accompanied by enhanced inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression and activity and a decreased constitutive nitric oxide synthase (cNOS) activity in these cells. CONCLUSIONS: The results suggest that chronic treatment with l-arginine induces changes in VSMC size, ploidy and cell cycle. These changes are accompanied by iNOS induction and stimulation of the NO-cGMP pathway.     

白藜芦醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察白藜芦醇 (resveratrol,Res)对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)的增殖、DNA合成及细胞凋亡的影响 ,并探讨其机制。方法　体外培养大鼠主动脉VSMC ,分为不同浓度的Res组及对照组。观察细胞生长曲线 ;四甲基偶氮唑盐 (MTT)微量酶反应法检测细胞活性 ;3H 胸腺嘧啶脱氧核苷 (3H TdR)掺入法观察其对DNA合成的影响 ;HE染色 ,DNA梯带检测及流式细胞术检测细胞凋亡。结果　与对照组比较 ,本研究各浓度Res组VSMC计数均有不同程度的减少 ,3H TdR掺入率明显降低 ,细胞增殖受抑制 ,VSMC凋亡增加 ,并呈浓度依赖性。结论　Res对体外培养的大鼠主动脉VSMC增殖有明显的抑制作用 ,可能是通过抑制细胞DNA合成 ,诱导细胞凋亡等途径发挥作用     

全反式维甲酸对培养的大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对培养的大鼠动脉平滑肌细胞(VSMCs)的影响。方法 血管平滑肌细胞采用组织贴块法培养。ATRA(2.5×10-6mol/L)分别作用于经PDGF—BB(10 ng/ml)和20％FCS刺激后的VSM—Cs,作用24h后分别行3H—TdR,3H—Leucine掺入实验测定。结果 ATRA明显抑制由PDGF—BB(10ng/ml)和20％FCS促进的VSMCs的DNA和蛋白质合成。结论ATRA具有抑制VSMCs增殖的作用。     

p38MAPK表达与血管平滑肌细胞增殖关系的研究

目的探讨丝裂素活化蛋白激酶p38(p38MAPK)的表达与血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的关系以及检测p38MAPK反义寡核苷酸(AODN)对VSMC增殖的抑制作用。方法将培养大鼠胸主动脉VSMC,随机分为对照组、p38MAPKAODN组、正义寡核苷酸(SODN)组。采用噻唑蓝比色分析法(MTT)和流式细胞仪检测VSMC,用蛋白免疫印迹法测定p38MAPK蛋白量。结果p38MAPKAODN能减少p38MAPK蛋白表达,明显抑制VSMC增殖,其抑制作用与p38MAPK蛋白表达相关,呈剂量依赖性。结论p38MAPKAODN能抑制大鼠VSMC增殖,该信号分子与VSMC增殖密切相关,可能是VSMC增殖的信号途径。