亚洲璃眼蜱基因组多态DNA的研究

我们首先报道了ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术研究微小牛蜱ＤＮＡ的多态性。本文则用３个引物＂Ｐｚ＂（ＣＧＧＣＣＣＧＧＴＡ）、＂Ｐｗ＂（ＣＧＧＣＣＣＣＧＧＴ）和＂Ｐｙ＂（ＣＴＧＣＡＧＧＡＣＡ）对亚洲璃眼蜱基因组ＤＮＡ作ＲＡＰＤ－ＰＣＲ，均能扩增出多态性ＤＮＡ图谱；各引物扩增的ＤＮＡ片段的分子大小是：＂ｐｚ＂为１３８０、１２３０、９５５、９１２、８７１、７９４、７４１、６６８、６４６、５６２、５３７、４４２；＂ｐｗ＂为９５５、７２４、６６８、５６２、５３７、４５７、２７９；＂Ｐｙ＂为１０７２、９１２、８３２、７９４、６１２、５８２、５６２、５３７、４２２、３８５。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术简便、快速，并能在ＤＮＡ水平上揭示其差异和进化关系，可发展成为理想的蜱类分类学技术之一。     

日本血吸虫31／32KDa蛋白质基因扩增及克隆

目的 克隆日本血吸虫３１／３２ＫＤａ蛋白质的编码基因，用于血吸虫病免疫诊断和预防，方法 以日本血吸虫成虫ＲＮＡ为模板逆转录合成ｃＤＮＡ链，参照Ｓ．ｍ３１／３２编码序列设计合成引物，用ＰＣＲ法扩增３１／３２ＫＤａ蛋白质基因编码序列，将其克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体。并用双酶切和以质粒为模板的ＰＣＲ进行鉴定。结果 ＲＴ－ＰＣＲ扩增出一条约１２７０ｂｐ大小的特异性条带，重组质粒的双酶切和以质粒为模板的ＰＣＲ均     

随机引物多聚酶链反应对细菌分型的价值及影响因素探讨

随机引物多聚酶链反应对细菌分型的价值及影响因素探讨高瞻，ＫａｔｈｙＪａｃｋｓｏｎ，ＤａｖｉｄＥ．Ｌｅｓｌｉｅ’踌机引物多聚酶链反应（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙ－ｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡＰＣＲ，简称ＲＡＰＤＰＣＲ）是在对所扩增基因一无所知的情况...     

河南省淡色库蚊,家蝇对常用杀虫剂的抗药性研究

本项研究提示了我省淡色库蚊、家蝇对常用的ＤＤＴ、ＤＤＶＰ、马拉硫磷、二氯苯醚菊酯和溴氰菊酯等五种杀虫剂均已产生了不同程度的抗药性，而且呈上升趋势。尤其ＤＤＶＰ和溴氰菊酯的抗性已很高，淡色库蚊对ＤＤＶＰ的抗性最高达到２１．５倍，家蝇达到１８．４１倍；淡色库蚊对溴氰菊酯的抗性９２年较８６年最高的上升了１７．３倍；对蚊、蝇产生的抗药性，各地都应引起高度的重视，采取措施加以防止抗性的继续升高，合理地使用杀虫剂，以延长杀虫剂的使用寿命。     

三种利什曼原虫和我国新疆皮肤利什曼原虫kDNA分子…

本研究自新疆克拉玛依地区皮肤利什曼病（ＣＬ）患者的皮肤病变组织内抽提微量的利什曼原虫ｋＤＮＡ，采用引物１３Ａ、１３Ｂ进行ＰＣＲ扩增，获１２０ｂｐ扩增区带（ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰ），并转移到尼龙膜上，分别与地高辛标记的Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ、Ｌ．ｇｅｒｂｉｌｌｉ ｋＤＮＡ探针进行Ｓｏｕｔｈｅｍ印迹杂交。结果：病变组织内利什曼原虫ｋＤＮＡ的ＰＣＲ扩增区带仅与Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ ｋＤＮＡ探     

5种库蚊的COⅠ基因分子进化分析

目的 了解无锡市库蚊细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因特征和蚊虫分子系统进化关系.方法 对无锡市淡色库蚊、三带喙库蚊、二带喙库蚊、小拟态库蚊和褐尾库蚊的CO Ⅰ基因进行扩增、测序,在GenBank中对所测序列进行同源性比对,分析基因特征、颠换率、分化年代,利用Mega 4.1软件构建分子系统树.结果 小拟态库蚊的COⅠ基因为首次测序;5种库蚊的COⅠ基因序列长度为692～717 bp,GC含量为29.91％～31.42％,颠换率为5.610％～8.555％,分化年代为2.44×106a～3.72×106a;每种蚊虫为单系群的支持值均≥98.结论 COⅠ基因具有种间特异性,可用于5种库蚊的分类鉴别.     

用RAPD技术分析甲型溶血性链球菌DNA

目的 应用ＲＡＰＤ技术分析甲型溶血性链球菌ＤＮＡ多态性并对其分型。方法 随机设计１７ｂｐ和１０ｂｐ两条引物,采用近年来建立起来的ＲＡＰＤ技术对３０株甲型溶血性链球菌ＤＮＡ进行扩增,扩增产物经凝胶电泳后得到指纹图。结论 甲型溶血性链球菌ＤＮＡ用ＲＡＰＤ技术分析,把该菌进一步分型且方法操作简单,结果准确、稳定。     

三种伊蚊细胞系基因组多态性DNA的研究

目的：探讨3种伊蚊细胞系基因组多态性DNA。方法：应用3个引物，通过随机引物扩增多态性DNA聚合酶链反应技术（RAPD-PCR），对东乡伊蚊、埃及伊蚊和白纹伊蚊的细胞系基因组DNA进行扩增。结果：分别扩增出不同数量和分子大小的多态DNA图谱；3种伊蚊细胞的基因组DNA扩增产物除了有部分相同分子大小的DNA条带外，还有各自独特的DNA条带。结论：此方法简便、快速、精确，可用于蚊虫的分子分类研究。     

济宁市淡色库蚊抗药性发展趋势研究

目的：了解纹虫对常用杀虫剂抗药性发展趋势。方法：在济宁市区采集淡色库蚊,采用区分剂量法和ＷＨＯ浸渍法测定每种杀虫剂致蚊虫的死亡率和半数致死浓度（ＬＣ５０）,并计算抗性指数。结果：淡色库蚊对ＤＤＶＰ和溴氰菊酯抗药性较强,ＤＤＶＰ抗性指数由８．３０倍上升到２０．６３倍,溴氰菊酯波动在１３．０９～４４．２１倍之间,对ＤＤＴ由１．１１倍上升到１１．５３倍,对马拉硫磷由１．７６倍上升到６．１６倍,     

肾综合征出血热病毒分型的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对４株肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒进行了分型。ＨＦＲＳ病毒的ＲＮＡ经逆转录为ＣＤＮＡ后用ＮＴＮ（野鼠型）、ＳＥＯ（家鼠型）两种引物进行体外扩增，经琼脂糖凝胶电泳，ＰＣＲ产物的ＮＤＡ片段与Ｍａｒｋ对照，证实扩增出的产物为ＨＦＲＳ病毒ＤＮＡ片段。ＰＣＲ分型与物异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）间接免疫荧光法分型作比较，结果相符合。     

改进一步单管RT—PCR检测水中肠道病毒

为克服常规反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）检测肠道病毒的缺点和不足，在实验基础上建立了一步单管ＲＴ－ＰＣＲ检测水中的脊灰病毒，采用热裂解法提取样品中脊灰病毒的总ＲＮＡ，反转录（ｃＤＮＡ）与ＰＣＲ反应在ＰＣＲ仪上一步进行，操作方法简单，中间可能污染的环节少，最大限度地减少了由环境造成的可能污染。设计合成的引物Ｅ１－Ｅ２取自多种肠病毒保守的５′非编码区核酸序列，可用于多种肠道病毒的扩增；Ｐ１－Ｐ２为脊灰病毒３个血清型的共用引物，只扩增脊灰病毒，具有较强的特异性。改进后的ＲＴ－ＰＣＲ的敏感性与常规ＲＴ－ＰＣＲ比有所提高，可检测到细胞培养悬液或水中１０个ＰＦＵ的脊灰病毒。     

金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的建立金黄色葡萄球菌随机扩增ＤＮＡ多态性（ＲＡＰＤ）分型技术，以应用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法对临床分离的１５株金黄色葡萄球菌，酚氯仿法提取其ＤＮＡ后行ＲＡＰＤ分型，同时进行噬菌体分型。结果１５株临床分离株大多数产生独特而稳定的ＲＡＰＤ带型，可分成５个噬菌体型和１４个ＲＡＰＤ谱型。采用同一反应体系，产肠毒素金黄色葡萄球未出现ＲＡＰＤ谱型。结论ＲＡＰＤ基因分型技术不需已知核酸序列，分型率高，分辨力强，简便快捷，可为金黄色葡萄球菌临床分离株提供分型标志，是分子流行病学研究的有效方法     

金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的建立金黄色葡萄球菌随机扩增ＤＮＡ多态性（ＲＡＰＤ）分型技术，以应用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法对临床分离的１５株金黄色葡萄球菌，酚氯仿法提取其ＤＮＡ后行ＲＡＰＤ分型，同时进行噬菌体分型。结果１５株临床分离株大多数产生独特而稳定的ＲＡＰＤ带型，可分成５个噬菌体型和１４个ＲＡＰＤ谱型。采用同一反应体系，产肠毒素金黄色葡萄球菌未出现ＲＡＰＤ谱型。结论ＲＡＰＤ基因分型技术不需已知核酸序列，分型率高，分辨力强，简便快捷，可为金黄色葡萄球菌临床分离株提供分型标志，是分子流行病学研究的有效方法。     

2株分离的嗜人T细胞白血病病毒Ⅰ型的PCR检测

「目的」用ＰＣＲ法检测嗜人Ｔ细胞白血病病毒Ⅰ型（ＨＴＬＶ－Ⅰ）的分离情况。「方法」采集２例日本鹿儿岛县成人Ｔ淋巴细胞白血病（ＡＬＴ）病人的肝素抗凝血,分离外周血单核细胞（ＰＢＭＣｓ）,加入植物血凝素和白介素－２,与健康人ＰＢＭＣｓ共培养进行ＨＴＬＶ－Ｉ的分离,然后抽提ＤＮＡ,用ＨＴＬＶ－Ｉ的ｇａｘｌ两引物进行ＰＣＲ扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳确定病原分离结果。「结果」２株都扩增出了ＨＴＬＶ－     

PCR检测蚊体内间日疟原虫子孢子感染的研究

根据间日疟原虫ＳＳＵｒＲＮＡ基因序列，设计合成１对引物，以Ｃｈｃｌｃｘ－１００煮沸法制备ＤＮＡ模板，采用ＰＣＲ方法，间日疟原虫子孢子模板预期被扩增出１７ｂｐ的ＤＮＡ条带，并将该法与蚊虫解剖镜检检测子孢子方法相比较。结果：１只解剖镜检见有子孢子的大劣按蚊蚊体及１只解剖镜检阳性的大劣按蚊唾腺的模板，ＰＣＲ均为阳性，被扩增出预期大小的ＤＮＡ片段；以该技术检测经蚊体解剖镜未发现疟原虫子孢子的９８只按蚊，结果均为阴性。结论：该检测体系灵敏、特异，对于蚊体内间日疟原虫子孢子感染的检测具有一定的应用价值。     

试验用淡色库蚊室内标准养殖技术研究

目的规范试验用淡色库蚊的标准化养殖方法,从而获得品质一致的标准化试虫,为驱、灭蚊药物登记试验提供科学、可靠的试验素材,保证登记试验的生物测定效果的质量,为科学合理评价驱、灭蚊药物提供技术保证。方法通过规范淡色库蚊的养殖条件、饲料质量、饲养技术,以羽化后第4天雌性成蚊体重为评价指标,验证3批次及多区域养殖技术的可靠性。结果标准化养殖3批次淡色库蚊平均体重测定结果表明,3种幼虫养殖配方均可成功养殖出合格淡色库蚊,且重复性好;不同实验室间标准化养殖淡色库蚊平均体重指标测定结果表明,3种配方在南、北方地区均适用。结论使用本养殖技术,南、北方地区均可成功养殖出供药物效果测定试验用合格体重的淡色库蚊,且重复性好,说明该养殖技术可成为淡色库蚊实验室标准化养殖技术。     

随机引物多聚酶链反应对革兰氏阴性分型的影响因素研究

随机引物多聚酶链反应对革兰氏阴性分型的影响因素研究高瞻ＫａｔｈｙＪａｃｋｓｏｎＤａｖｉｄＥ．Ｌｅｓｌｉｅ江苏省卫生防疫站（２１０００９南京）随机引物多聚酶链反应（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡＰＣＲ，简称ＲＡＰＤＰＣＲ）是...     

PCR检测旋毛虫DNA的研究

根据旋毛虫幼虫１．６ｋｂ基因序列而设计合成引物并进行多聚酶链反应（ＰＣＲ）以检测含旋毛虫幼虫及纯幼虫。扩增产物经琼脂糖凝胶电冰，可见扩增出了特异的６７０ｂｐ与５００ｂｐ大小的ＤＮＡ条带，而正常肌肉对照未见扩增出此条带。本法可检测０．０１条幼虫产物，具有高敏感性和特异性。     

淡色库蚊乙酰胆碱酯酶Ι基因单链构象多态性分析

为了解不同地区淡色库蚊样本乙酰胆碱酯酶Ι基因(ace1)多态性,探讨单链构象多态性分析(SS-CP)技术在蚊虫抗性分子监测中应用的可行性,本文采集浙江省杭州、舟山、湖州、金华等市区淡色库蚊样本,对其进行ace1基因PCR扩增及SSCP分析。结果显示,浙江省淡色库蚊现场品系以及敏感品系ace1基因片段共存在2个SSCP型,分别命名为ace1-A型(杭州、舟山、湖州现场品系以及敏感品系)和ace1-B型(金华现场品系)。经序列测定,SSCP型ace1-A和ace1-B之间存在两个碱基的差异。实验证明PCR-SSCP可快速高效分析淡色库蚊ace1基因的多态性,适于蚊虫抗性分子监测使用。     

苯丙酮尿症的基因诊断

生物素－－链抗生物素蛋白系统的固相技术，对ＰＣＲ扩增后ＤＮＡ片段进行直接顺序分析，检测了系统地区１３例经典型ＰＫＵ患者ＰＡＨ点突变，结果表明，１３例ＰＫＵ患者中检出７种点突变；发现７种ＰＡＨ基因突变组合类型，其中空谈４３Ｑ、Ｒ４１３Ｐ、Ｙ２０４Ｃ和Ｒ１１１Ｘ是分别位于ＰＡＨ基因第７、１２、６和３外显子处的４种常见突变。本研究准确可靠导确定了ＰＡＨ基因分子缺陷的遗传机理，为该疾病的基因治疗提供了科学