基因工程杀蚊幼蓝藻的研究

应用基因工程手段研制杀蚊幼蓝藻,是解决苏云金杆菌和球形芽孢杆菌等短持效问题的途径之一。但国际上基因工程蓝藻的毒效一直限于较低水平,甚至需要破碎细胞才能检测到对蚊幼虫的毒杀作用。本文将球形芽孢杆菌毒素基因装配鱼腥藻启动子后,转移入鱼腥藻进行表达,所得基因工程株对蚊幼虫具有十分显著的毒效,对淡色库蚊幼虫24h半致死浓度为2.31×10~4细胞/ml;其对淡色库蚊、中华按蚊、白纹伊蚊幼虫的毒效依次递减,这与球形芽孢杆菌相似。由于鱼腥藻易培养、生态适应性广等,可望成为蚊虫特效控制的新型武器。     

双效微生物制剂现场灭蚊幼效果观察

目的 现场观察双效微生物灭蚊幼制剂灭蚊幼效果,探索适合灭蚊幼施药剂量及施药周期.方法 随机确定实验区污水坑塘和对照区污水坑塘,按5 mL/㎡加水稀释10倍,用电动喷雾器均匀喷洒在水面上,观察蚊幼密度.结果 该制剂施药后1-20 d,灭蚊幼效果达100%,施药后30 d灭蚊幼效果仍达72.41%,通过数据分析,投药间隔以...     

基因工程杀蚊幼蓝藻稳定性的实验研究

目的：探讨基因工程藻高效杀蚊幼活性，以确定其质粒表达情况。方法：抗性筛选及蚊虫毒效测试。结果：随机筛选出的基因工程单藻落无一抗性丢失，且３种基因工程藻对淡色库蚊仍具较高毒效，ＬＣ５０（２４小时）Ａ．７１２０ｐＤＣ２６为８．２６×１０３ｃｅｌｓ／ｍｌ；Ａ．ｓｕｂｔｒｏｐｉｃｐＤＣ２６为２．６２×１０４ｃｅｌｓ／ｍｌ；Ａ．ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｔｏｘ为４．２１×１０３ｃｅｌｓ／ｍｌ。结论：穿梭质粒在基因工程藻细胞内稳定遗传，并持续高效表达。     

苏云金杆菌和球形芽孢杆菌（3—4）灭蚊幼漂浮颗粒剂的效果观察

湖北省寄生虫病防治研究所研制的Ｂｔｉ和ＢＳ－Ｃ３－４１漂浮颗粒剂在现场中对中华按蚊和致乏库蚊幼虫的效果进行了试验，结果显示Ｂｔｉ漂浮颗粒剂对稻田中的中华按蚊有较好的毒杀效果。剂量为０．４５ｇ／ｍ＾２时，２４小时中华按蚊幼虫密度下降率为８６。６％￣１００％。持效达１４￣１５天，ＢＳ－Ｃ３－４１漂浮颗粒剂剂量为０．４５ｇ／ｍ＾２￣０．５４ｇ／ｍ＾２，４８小时加幼虫密度下降率为９０．４％￣９７．４％，持     

基因工程杀蚊幼蓝藻的研究

基因工程杀蚊幼蓝藻的研究＊阎歌蚊虫是一些热带病的重要传播媒介。人们应用各项技术进行了杀灭和控制蚊虫的研究工作。化学杀虫剂在蚊虫控制方面起到一定的积极作用，但也带来环境污染及蚊虫抗性等问题。生物制剂如球形芽孢杆菌（Ｂ．ｓ）和苏云金杆菌（Ｂ．ｔ）的应用，...     

鱼腥藻表达苏云金杆菌CryIVD基因现场灭蚊效果观察

利用分子生物学技术 ,将含苏云金杆菌 (B .t .i)毒蛋白基因CryIVD的表达质粒转入鱼腥藻中表达 ,建立新型转基因工程藻 ,进行灭蚊。该工程藻经大量培养后 ,2 0 0 1年夏在山东省邹城市城区进行了现场灭蚊试验。1　材料和方法　转基因工程藻 ,由山东省寄生虫病防治研究所提供。选择 6处幼虫密度较高的水体 ,喷施工程藻前 ,各滋生地自然条件相似 ,均有少量水草、鱼虫等 ,没有鱼类及浮萍生长 ,滋生物主要为淡色库蚊及白纹伊蚊。记录每一滋生地的体积、表面积、水深。随机分为试验组和对照组进行试验 ,用5 0 0ml幼虫采集勺调查幼虫的种类、幼虫…     

五种杀虫剂现场灭蚊幼效果观察

目的了解几种不同作用机制的化学杀虫剂在灭蚊幼中的效果及持效期,为今后防治蚊幼工作提供可靠的依据。方法选择污水沟和苇塘后测量水体体积,分别施药(毒死蜱、10%高效氯氰菊酯有效成份:1 g/m3;50%马拉硫磷有效成份:1、2 g/m3;苏云金杆菌:40ml/m3,天蟾:10ml/m3),并在施药前后用勺捕法进行密度测定,施药后70d内评价效果。结果苏云金杆菌以40ml/m3施于污水沟内,1～7 d密度下降率为39.97%～100%;于苇塘施药后1～38 d达79.66%～100%;天蟾杀蚊幼虫悬浮剂在施药后1～d、6～14 d、24 d密度下降率分别为99.53%,100%,93.01%。毒死蜱、马拉硫磷、高效氯氰菊酯施药量为1 g/m3,对蚊幼毒性高低及持效期的长短依次为:毒死蜱>高效氯氰菊酯>马拉硫磷,毒死蜱在施药后68 d密度下降率仍达95.34%。结论毒死蜱、天蟾杀蚊幼虫悬浮剂杀蚊幼效果及持效期较长,值得推广应用,在实际现场灭蚊幼中可根据环境、特点、水体污染状况等选择适宜的杀虫药剂和使用剂量。     

转基因蓝藻灭蚊幼效果观察

利用分子生物学技术,将球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus 简称B.S)杀虫毒蛋白基因转移至蓝藻中得到表达,并利用转基因蓝藻进行灭蚊,此项技术在山东省寄生虫病防治研究所研究成功,1995年夏天在平阴县城区进行了灭蚊幼现场试验,结果如下:     

球形芽孢杆菌漂浮颗粒剂毒杀蚊幼效能评价

球形芽孢杆菌漂浮颗粒剂,主要由漂浮载体(聚氯乙烯泡沫粉)、粘附剂(榆树粉)和B.s-C_3-41(发酵液)按2∶4∶1(5ml)比例加聚乙烯醇制成。实验结果表明,制剂对致乏库蚊幼虫有较高效的毒效,B.s-C_3-41颗粒剂对Ⅲ龄致乏库蚊幼虫的LC_(90)为0.1473ppm;不同龄期幼虫对B.s制剂敏感性不同,现场试验使用0.5,0.6和0.7g/m~2剂量,处理后48小时致乏库蚊蚊幼密度下降率依次为69%,96%和92%;处理后第8,9,10天幼虫死亡率仍分别维持在97.8%,79%和94%;持效时间为13～15天。     

灭蚊幼芽孢杆菌剂型的研究与应用

目的 针对蚊虫的生态习性和不同孳生地特点，研制具有即效又有持效的灭蚊幼芽孢杆菌剂型。方法 选用漂浮剂锯末粉为载体，加粘附剂和分散剂，按一定比例制成不同剂型进行灭蚊幼试验，并观察不同剂型对哺乳动物、非靶生物的影响。结果 Bti-187颗粒剂，稻田灭中华按蚊幼虫持效为12～16d，块剂在小型孳生地灭致倦库蚊和白纹伊蚊幼虫，持效分别可达17和12d，BS-C3-41颗粒剂、块剂灭致倦库蚊幼虫持效分别可达19和94d。Bti-187和BS-C3-41发泡剂有较好的即效，48h灭蚊幼效果达100％，持效分别可达15和21d。结论 针对不同蚊虫孳生地特点，采用不同剂型配合使用，蚊虫密度平均下降70％～100％。能有效控制成蚊密度，削平成蚊季节高峰。     

转基因蓝藻对不同龄期淡色库蚊幼虫杀灭作用的实验研究

目的：观察３种基因工程杀蚊幼蓝藻对不同龄期淡色库蚊幼虫的杀灭效果。方法：利用不同浓度基因工程藻，分别作用于不同龄期淡色库蚊幼虫，计算死亡率。结果：３种基因工程藻对不同龄期淡色库蚊幼虫杀灭作用相似；在藻细胞浓度低于１０４ｃｅｌｓ／ｍｌ时，杀灭作用由强到弱依次为Ⅰ龄、Ⅱ龄、Ⅲ龄末Ⅳ龄初幼虫；而当藻细胞浓度高于１０５ｃｅｌｓ／ｍｌ时，对该蚊不同龄期幼虫的杀灭作用均高效。结论：应用基因工程藻现场控制蚊幼虫宜尽早喷施，可提高杀灭效果。     

仔猪腹泻基因工程疫苗在环境中稳定性的初步研究

观察不同辐射强度的自然光照射下，对不锈钢表面上的仔猪腹泻基因工程疫苗（ＭＭ３）和大肠杆菌野生株（８０９９）存活的影响．结果表明，在日光总辐射条件下．暴在１０ｍｉｎ，累积辐射０．４７６ＭＪ／ｍ２．ＭＭ３同８０９９的存活率比值为１１３．９；散射条件下．暴露８０ｍｉｎ，累积散射０．８９７ＭＪ／ｍ２，ＭＭ３同８０９９的存活率比值为１：１１．２；黑暗条件下，暴露８０ｍｉｎ，ＭＭ３同８０９９的存活率比值为１：８．０。ｔ检验．无论日光总辐射、散射还是黑暗环境，差别都高度显著（Ｐ＜０．０１）．用含有氯霉素的ＬＢ培养基测定日光总辐射对ＭＭ３质粒稳定性的影响，未发现有质粒丢失．     

干燥贮存的基因工程藻杀灭淡色库蚊幼虫的实验研究

目的 :观察干燥贮存的基因工程藻对淡色库蚊幼虫的杀灭效果。方法 :干燥、贮存和毒性测试。结果 :3种转基因工程藻经干燥贮存后仍具有较高杀蚊毒效 ;但随着贮存时间的延长 ,其杀灭作用有所下降。 3种转基因工程藻之间杀蚊幼效果无明显差异。结论 :蓝藻质粒在干燥贮存的工程藻内仍能稳定遗传 ,因而利于现场推广应用     

仔猪腹泻基因工程疫苗PCR检测方法的建立

以仔猪腹泻基因工程疫苗工程质粒中ＬＴＡ－Ｂ＋变构区为模板，设计了用于该产品检测的一对各长为１８ｂＰ的ＰＣＲ引物和寡核苷酸探针。将菌体直接加热裂解后进行ＰＣＲ扩增，ＰＣＲ产物用琼脂糖凝胶电泳法和同位素标记的寡核苷酸探针杂交检测。研究结果表明，ＰＣＲ－琼酯糖凝胶电泳检测对ＬＴ肠毒汞菌株有良好的特异性，但不能区别野生ＬＴ与改构基因工程ＬＴ肠毒素菌株。用对工程菌特异性探针杂交能将工程菌与食野生ＬＴ肠毒素菌株区别出来，对仔猪腹泻基因工程疫苗具有高度的特异性和敏感性，可检出１ＣＦＵ工程菌。该方法的建立为进一步研究这种基因工程产品的生态环境影响提供了方法学基础。     

基因工程微生物的生态安全

该文分析了世界各国向自然环境释放基因工程微生物(genetically engineered microorganisins,GEMs)的情况,介绍了近年来GEMs对环境影响的研究进展,简述了国内外对GEMs生物安全及使用的法律规范。     

球形芽孢杆菌C_(3-41)杀蚊幼制剂对两种按蚊幼虫的毒杀活性

本文报道了BacillussphaericusC_(3－41)杀蚊幼制剂对大劣按蚊和中华按蚊幼虫的毒杀活性。该制剂对Ⅲ～Ⅳ龄大劣按蚊和中华按蚊幼虫的LC_(50)分别为1.212和1.846mg／L。在27±2℃以下，用1.25、2.5、5.0和10.0mg／L浓度，对Ⅲ～Ⅳ龄大劣按蚊幼虫的LT_(50)分别为33.80、16.54、13.76和12.57h。在室内外模拟试验中，15和30mg／L剂量均能在14天内杀死大劣按蚊100％；用15、30、60和120mg／L浓度的野外模拟试验中，药后20天大劣按蚊幼虫分别下降70％、73.3％、90％和95.6％。     

球形芽孢杆菌C_（3－41）地方株制剂控制城市致乏库蚊的现场效果评价

笔者从１９９３年５月始在武汉市水果湖地区应用球形芽孢杆菌Ｃ（３－４１）地方株制剂，进行大面积控制致乏库蚊的现场研究。结果表明，用３ｍｌ／ｍ２球形芽孢杆菌Ｃ（３－４１）乳剂，对大型致乏库蚊孳生地每１０天处理１次，包括水塘、水沟、水槽及水坑；另用３ｇ／ｍ２块剂每月处理１次水缸和小容器等，可使幼虫密度下降３８～９９％，并能有效地控制成蚊密度和削平致乏库蚊成蚊的季节高峰。     

两种剂量重组酵母乙型肝炎疫苗加强免疫后血清抗-HBs观察

为了观察5μg和10μg两种剂量的重组酵母乙型肝炎(乙肝)疫苗加强免疫的效果,将出生时全程接种过血源乙肝疫苗的小学1年级学生随机分成3组,分别加强接种5μg和10μg重组酵母乙肝疫苗.采用放射免疫试验(RIA)检测血清中HBsAg和抗-HBs.加强免疫前3组人群血清抗-HBs阳性(≥10mIU/ml)率均＞70%,说明血源乙肝疫苗具有良好的免疫持久性.用重组酵母乙肝疫苗加强免疫后1个月,5μg剂量的两组血清抗体阳性率分别上升到90%和98.31%,10μg组上升到98.48%,重组酵母乙肝疫苗可用于血源乙肝疫苗基础免疫后的加强接种.