分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

为提高弓形虫感染的特异性免疫诊断水平，作者用杂交瘤技术制备抗弓形虫单克隆抗体（McAb）。经有限稀释法克隆3次和2个月的连续传代及液氮保存试验，获得6株能稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株。其培养上清SPA—ELISA效价高者达1:6250，能被特异性抗弓形虫血清所阻断，证明该McAb具有抗弓形虫的特异性。     

鼠疫F1单克隆抗体杂交瘤株建立过程中几个重要因素的探讨

自1975年Koehler及Milstein创建杂交瘤技术以来，使用该技术制备出抗各种抗原的单克隆抗体，品种不下万种，其中数百种已在医学和生物学各个领域得到广泛的应用。尽管杂交瘤技术是一门成熟的技术，但由于涉及细胞培养，其影响因素非常多。课题组就建立分泌抗鼠疫F1抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株过程进行了分析和探讨。总结如下。     

分泌抗弓形早单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

为提高弓形虫感染的特异性免疫诊断水平，作者用杂交瘤技术制备抗弓形虫单克隆抗体。经有限稀释法克隆３次和２个月的连续传代及液氮保存试验，获得６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株 。     

分泌抗重组葡激酶单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

目的 建立分泌抗重组葡激酶（r-SAK)单克隆抗体杂交瘤细胞株。方法 采用3种方法以r-SAK免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞做细胞融合。结果 经筛选和克隆化后获得10株抗r-SAK单克隆抗体杂交瘤细胞。结论 建立的分泌抗r-SAK单克隆抗体杂交瘤细胞株具有高度特异性，在r-SAK的研制中有很高的应用价值。     

B型肉毒毒素单克隆抗体杂交瘤株的建立

[目的]制备、筛选稳定分泌B型肉毒毒素单抗的杂交瘤克隆,为相关研究提供工具。[方法]采用纯化的B型肉毒毒素免疫BALB/c小鼠,用免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选阳性克隆。[结果]得到10株稳定分泌B型肉毒毒素单抗的杂交瘤克隆,1株为IgM,其余9株分泌IgG,亚类为IgG2a。10株单克隆抗体均与B型肉毒毒素呈特异性反应,而与标准A型肉毒毒素无交叉反应,腹水单抗的效价均在105以上。[结论]10株杂交瘤细胞株均能分泌抗B型肉毒毒素单克隆抗体,为B型肉毒毒素的检测和研究提供了工具。     

5株新疆出血热病毒分子流行病学研究

目的 从分子水平揭示中国新疆出血热（XHF）病毒基因结构与功能的关系。寻找传播途径及流行原因。方法 对分离自新疆的5株XHF病毒进行S基因片段的克隆和测序，与其他克里米亚-刚果出血热（CCHF）的S基因序列进行比较和分析。结果 5株病毒S基因全长均为1672个核苷酸，开放阅读框均为1449个核苷酸，编码一个含482个氨基酸的蛋白，新疆分离毒株的S基因核苷酸序列同源性（93.0%-99.5%)明显高于其他国家分离毒株的S基因核苷酸序列。系统发生树状图显示新疆毒株在一个分支之下形成独立的群体，明显区别于来自其他地区的CCHF病毒并且又进一步分为三组。结论 不同毒株的S基因序列差异不完全取决于病毒分离的宿主，地域和时间。     

分泌甲型肝炎单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

1985年以来,我们开展了甲型肝炎单克隆抗体的研究。实验用提纯的粪便甲肝病毒抗原免疫Balb/c鼠,取其免疫脾细胞与SP2/o骨髓瘤细胞融合杂交,然后用固相酶联免疫测定法(ELISA)和间接免疫荧光法(IF)筛选.二次融合试验共筛出6个分泌抗甲型     

四川省新疆出血热血清流行病学研究

1991年月至1992年4月,在本省南坪县、道孚县、西昌市、大邑县和巫溪县等地采集了人和家畜动物血清共677份,用反向被动血凝抑制试验(RPHI)、酶联免疫吸附试验(FLISA)和间接免疫荧光方法(IFAT)检测血清中抗新疆出血热病毒抗体,其中南坪县绵羊阳性1份(1/7,14.28%),道孚县绵羊阳性26份(26/70,37.14%),西昌市山羊阳性3份(8/30,10.00%),奶牛阳性1份(1/60,1.67%),黄牛阳性7份(7/45,15.56%)。鉴于这些牛、羊均为各调查点当地所产,证实南坪县、道孚县和西昌市是新疆出血热自然疫源地。     

分泌登革病毒3型单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

国际流行病学协会第十次科学会议于1984年8月9~25日在加拿大温哥华的British Columbia大学召开。     

米酵菌酸单克隆抗体细胞株的建立

继制备米酵菌酸（ＢＡ）多克隆抗体以后，作者成功地运用免疫杂交瘤技术，获得了能分泌抗米酵菌酸的单克隆抗体细胞株１Ｆ７和２Ｈ９，其腹水效价可达１０－６，对ＢＡ的５０％有效抑制浓度为１０－４，两株细胞分泌抗体的亚型均为ＩｇＧ１型，纯化后获得ＢＡ－ＭｃＡｂ的ＩｇＧ浓度为１１ｇ／Ｌ     

塔里木盆地新疆出血热蜱类及宿主动物感染调查

目的检测塔里木盆地蜱类、啮齿动物和家畜新疆出血热（克里米亚-刚果出血热，CCHF）的感染状况和自然界分布现状。方法将病原材料蜱或啮齿动物脏器或羊血液标本接种1～2日龄乳鼠，取具有典型临床症状的检查材料采用反向血凝（RPHA）和免疫荧光（IFA）方法做免疫学鉴定，并采用RT-PCR技术检测目标材料中CCHFV特异性S基因片段。结果实验室接种采集自环塔里木盆地21个县（市）的蜱类、啮齿动物脏器和羊血液标本422组，获得典型临床症状发病材料49份，其中以巴楚、尉犁、于田和若羌地区的新疆出血热临床典型发病检出率较高。用RPHA鉴定43份，阳性6份，阳性率为1．4％；RPHA阳性材料分布于尉犁、轮台和于田3个地区。用IFA鉴定42份，阳性13份，阳性率为3．1％；IFA阳性材料分布于巴楚、尉犁、民丰、轮台和于田5个地区。用RT-PCR方法检测32份，检测到CCHFV特异性S基因片段（329～548n1）31份，阳性材料分布于阿克苏、阿瓦提、巴楚、洛浦、尉犁、民丰、且末、若羌、轮台和于田10个地区。以亚东璃眼蜱的感染率最高，其次是羊，从子午沙鼠脏器材料中检测到CCHFVS基因片段。结论新疆出血热在新疆南部地区是以河流为依托，分布在环塔里木盆地区的沙漠绿洲胡杨灌木区域内，主要宿主媒介是亚东璃眼蜱，羊、骆驼等家畜和塔里木兔、子午沙鼠和大耳跳鼠可作为新疆出血热的储存宿主。     

分泌抗霍乱弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和应用

霍乱是一种严重危害人民健康的肠道传染病,发病急,传播快。长期来,人们对本病的控制作了大量工作。     

抗黄曲霉毒素M1的单克隆抗体细胞株的建立

本研究建立了抗黄曲霉素素ＡＦＭ１的单克隆抗体细胞株,用ＡＦＭ１－肟＝朱血清白蛋白（ＡＦＭ１－ｏｘｉｍｅ－ＢＳＡ）ＷＪＭ ＢＵ ＴＲ ＱＫＵＭ本研究建立     

肾综合征出血热病毒PS-6株和JR-C-1株抗原性的比较研究

目的 比较肾综合征出血热（HFRS）汉坦病毒（HV）PS-6株和JR-C-1株的抗原性，选择制备疫苗的毒种，方法 应用空斑减少中和试验（PRNT）和McAb间接免疫荧光试验（IFAT），检测PS-6株和JR-C-1株HFRSHV的抗原性。结果 PS-6和JR-C-1均为Ⅰ型HV。两株病毒的免疫血清对17株国内外不同来源的HV的中和反应和76-118株汉滩病毒（HTHV的免疫血清基本相似。但对一些病毒的中和反应效价两有差异。与多株McAb反应结果显示，两株病毒间存在抗原决定簇的差异。结论 PS-6和JR-C-1的抗原性与76-118株HTHV基本相同，PS-6和JR-C-1之间存在抗原性和抗原决定簇的差异。两合用抗原性会有互补作用。     

新疆出血热病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究

目的:建立新疆出血热病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。方法:分析新疆出血热病毒核酸S片段序列的保守性,设计新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR引物和探针。以体外转录后的RNA作为阳性对照模板,摸索出实时荧光RT-PCR检测的最佳引物浓度、探针浓度和反应体系条件,并进行灵敏度和特异性分析。结果:建立的新疆出血热病毒的实时荧光RT-PCR检测方法最佳反应体系为:正向引物CCHFV-FP终浓度250 nM,反向引物CCHFV-RP终浓度500 nM,探针CCHFV-Probe终浓度500 nM;扩增程序为:50℃10 min,95℃10 min;95℃5 s,57℃20 s 45次循环。该方法最低检测限约为2 copies病毒/反应,与森林脑炎病毒和汉坦病毒无交叉反应。结论:该方法灵敏度高、特异性强,适用于新疆出血热病毒的快速检测。     

抗腐败西瓦菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

目的 制备和鉴定抗腐败西瓦菌单克隆抗体(mAbs),为建立重要海洋细菌快速ELISA检测试剂盒奠定基础.方法 用灭活腐败西瓦菌免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备出抗腐败西瓦菌杂交瘤细胞株,用Giemsa染色对其进行染色体鉴定,并用间接ELISA方法筛选、鉴定其与腐败西瓦菌及其他重要海洋细菌的交叉反应性和效价.结果 共获得4株抗腐败西瓦菌的杂交瘤细胞株(02D6、02H12、03G4、03A7),均符合杂交瘤细胞染色体特点,其培养上清效价为10-1～10-2,具有良好的特异性和免疫反应性.结论 研究制备、筛选出抗腐败西瓦菌的特异性抗体,有助于进一步建立重要海洋细菌快速检测试剂盒.     

药物驱蜱对新疆出血热流行抑制作用的现场实验研究

目的探讨药物驱蜱对新疆出血热（XHF）在家畜中流行的抑制效果。方法采用药物驱蜱方式对塔里木盆地疫区内的羊群进行对比实验研究。结果实验组羔羊在服用驱蜱药物阿维菌素后,羔羊体外寄生蜱的染蜱率为55.0%,蜱指数为1.0,而未服用阿维菌素的对照组感染率为100%,蜱指数为11.2,实验组羔羊体外寄生蜱的感染率和蜱指数分别较对照组低45%和10.2;实验6个月后,实验组克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV）抗体阳性率为22.4%,显著低于对照组（45.9%）,与实验组在实验前的CCHFV抗体阳性率（23.7%）基本一致。结论 XHF流行地区羔羊服用驱蜱药物阿维菌素可阻碍蜱类对羔羊的侵袭,抑制XHF在羔羊中的流行。     

首次从青海省绵羊血清中检出新疆出血热病毒IgG抗体

1988年7～8月,采集青海省海西自治州乌兰县郭里木乡231只改良绵羊血清,用间接免疫荧光方法检出新疆出血热病毒IgG抗体5份;自该县蓄集乡825只改良绵羊血清中检出新疆出血热抗体6份。鉴于这些绵羊均为本地所产,证实海西州乌兰县是新疆出血热自然疫源地。