92号土豆汤琼脂培养基用于吡嗪酰胺药敏试验的初步研究

本文报道了92号土豆汤琼脂培养基(简称92号培养基)用于吡嗪酰胺(PZA)直接药敏试验和间接药敏试验的方法及其结果。92号培养基 PZA 直接药敏试验可在4周内向临床提洪 PZA药敏试验的结果报告,这比常规方法要快得多。92号培养基用于 PZA 间接药敏试验,结果准确、稳定,报告结果的时间比酸罗氏 PZA 培养基提早6周。本研究还调查了45株临床分离物对 PZA 的敏感性,15株初治分离物中14株对 PZA 高度敏感;30株复治分离物中17株对 PZA 高度敏感。这一结果显示了 PZA 在结核临床上的应用前景。     

56例结核杆菌临床分离株吡嗪酰胺药敏试验结果分析

大多数药敏试验都可在pH中性的常规培养基上顺利进行，但吡嗪酰胺(PZA)药敏试验例外。因其杀菌作用须在pH5．6±0．1的酸性环境中才能充分发挥，因此常用的改良罗氏培养基、小川氏鸡蛋培养基等不能用于PZA药敏。目前国内常规开展PZA药敏的单位不多，有关的报道也较少。我们就匡氏琼脂培养基临床分离结核菌株的吡嗪酰胺药敏情况做了调查和分析，现将结果报告如下。     

三种结核分支杆菌耐药基因的检测方法

目的：建立3种结核分支杆菌耐药基因的检测方法，了解耐药基因突变和耐药水平的关系。方法：108例临床痰标本分离株均做聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）和传统梯度药敏试验。结果：耐SM(rpsL)、RFP(rpoB)、INH(KatG)基因突变率分别为78.5％，68.2％，70.5％，其中，高耐SM，RFP，INH分离株分别为86.5％，89.3％，84.3％；低耐分离株分别为28.5％，16.5％，7.1％。结论：结核分支杆菌耐药基因突变与耐药水平有密切联系，绝大多数结核分支杆菌耐药基因突变发生在高耐药株，少部分在低耐药株发生基因突变。     

结核分支村菌耐药分子机制及快速检测的研究

目的：研究结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药的分子机制，探索快速检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药性的分子生物学方法。方法：应用聚合酶反应－单链构象多态性（PCR-SSCP）检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药株与katG基因、rpoB基因突变。结果：46株结核分支杆菌临床分离株均未发现katG基因序列的缺失，30株异烟肼耐药株中，17株检测到katG基因突变，耐药株中katG基因的突变率为57％；87株结核分支杆菌利福平耐药临床分离株的PCR－SSCP结果显示，所有39株利福平敏感菌无突变检出，48株利福平耐药菌中，36株高度利福平耐药菌和7株低度利福平耐药菌检测量到rpoB基因突变；利福平耐药株中rpoB基因的突变检出率为89．6％。结论：证实katG和rpoB基因突变分别是结核分支杆菌异烟肼和利福平耐的主要分子机制。应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）可快速检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药性。     

29株偶然分支杆菌耐药性观察

目的 了解偶然分支杆菌耐药性。方法 确定的29株偶然分支杆菌临床分离株，进行主要抗结核药物作耐药性测定。结果 对氧氟沙星、左氧氟沙星敏感，对6种抗结核分支杆菌药单一药敏试验均耐药。2-3种药物联合药敏试验显示低浓度耐药，高浓度敏感。结论 建议采用敏感抗生素联合有协同作用的抗结核药进行化疗，可望取得临床治愈效果。     

吡嗪酰胺药物敏感试验初探

本文应用我国新研制的匡氏土豆汤琼脂培养基,以50mg/ml为耐药界限,对第三次全国结核病流行病学调查的河南省26株结核菌进行了PZA药敏试验,其总耐药率为19.2%,未用PZA的21例结核菌株中有3例耐药,占14.3%。本文还结合临床应用对实验方法进行了探讨。     

应用线性探针分析快速检测耐利福平结核分支杆菌的rpoB基因突变

目的：检测上海地区耐利福平结核分支杆菌的rpoB基因突变,评估线性探针分析（LiPA)法快速检测突变位点的意义。方法：对58株结核分支杆菌rpoB基因片段进行PCR扩增及DNA测序,从中选取18株耐药株和10株敏感株并应用LiPA法检测其突变位点,结果：LiPA法准确地检测出18株耐药株中17株的rpoB基因突变,10株敏感株均无突变;LiPA法检测耐药菌的敏感性为94．4％,与药敏结果的符合率为96．4％,结论：LiPA法可用于耐利福平结核分支杆菌rpoB基因的快速检测,而且具有较高的敏感性。     

110株结核分支杆菌对喹喏酮类药物的药敏试验分析

目的：分析l10株结核分支杆菌对环丙沙星(CPLX)、氧氟沙星(0FLX)、左氧氟沙星(LVFX)、司帕沙星(SPFX)的药敏试验结果。方法：采用2倍稀释法，改良罗氏培养基进行药敏试验。结果：49例初治病人耐药率：CPLX4％，OFLX8％，LVFX2％，SPFX6％；52例耐多药菌株耐药率：CPLX52％，0FLX44％，LVFX22％，SPFXl0％；110株结核分支杆菌总耐药率：CPLX26．2％，0FLX24．7％，LVFXl0．5％，SPFX7．2％。交叉耐药率23．6％。结论：(1)初治结核病人，抗炎治疗尽量避免使用喹喏酮类药物；(2)复治结核病人要选择合理治疗方案，避免假联合用药；(3)应用喹喏酮类药物，剂量要足，疗程要够；(4)建议将喹喏酮类药列入结核分枝杆菌常规药敏试验中。     

BACTEC法检测分支杆菌的临床应用分析

本文对１９９３年４月～１９９４年５月间３００份临床标本的检测结果进行分析。结果：分支杆菌检测阳性率２５．０％，培养阳性平均报告时间为８．４天，两周内报告阳性的病例占８１．４％；污染率为４．０％。在检出的７５株分支杆菌中结核分支杆菌占６８株（９０．７％），非结核分支杆菌７株（９．３％），平均报告时间为４．２天。药敏试验采用最低抑菌浓度法，其平均报告时间为４．６天，本文结果表明ＢＡＣＴＥＣ法快速检测分支杆菌与常规法相比具有初代分离率高、快速、简便、易于操作及质控等特点，是目前分支杆菌快速培养、鉴定和药敏试验的优选方法。     

聚合酶链反应－冷单链构象多态性快速检测结核分支杆菌rpoB基因突变

目的评估ｒｐｏＢ基因突变检测在结核分支杆菌利福平耐药性测定中的应用价值。方法采用聚合酶链反应－冷单链构象多态性（ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ）方法对８７株结核分支杆菌临床分离株及有药敏结果的２２份相应肺结核患者痰标本进行分析。结果ＰＣＲ扩增ｒｐｏＢ基因的敏感性为１００ｐｇＤＮＡ及５０００个菌体，属于分支杆菌特异。所有分离菌的ｒｐｏＢ基因ＰＣＲ扩增均为阳性。采用套式ＰＣＲ可使扩增敏感性提高１００倍。与传统药敏试验方法相比，ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ对８７株结核分支杆菌临床分离菌利福平耐药性的检测敏感性和特异性分别为８９．６％及１００％。２２份涂阳培阳痰标本中套式ＰＣＲ扩增阳性的６份均为高度利福平耐药，其ＳＳＣＰ结果也与相应分离株的药物敏感性试验相符。结论ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ检测结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变快速、简便、易行，适用于结核分支杆菌分离株利福平耐药性的快速测定。如进一步提高引物增特异性及敏感性，该技术可望用于临床标本直接检测     

变性高效液相色谱在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究

目的应用变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测结核分枝杆菌(MTB)对乙胺丁醇(EMB)、吡嗪酰胺(PZA)耐药相关基因embB,pncA的突变情况,探讨DHPLC在MTB耐药性检测中的应用价值。方法取常规药敏检测对EMB耐药的MTB临床分离株27株及对PZA耐药的菌株16株(包括     

耐多药结核病耐药分子机制的研究

目的 研究耐多药结核分支杆菌耐药的分子机理，建立快速检测耐药基因的分子药敏试验方法。方法 通过ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析结构分支杆菌耐多药临床分离株的ｒｐｏＢ、ｒｐｓＬ、ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列。结果 ＰＣＲ分析耐药基因的敏感性为１－０ｐｇＤＮＡ；除ｒｐｏＢ基因引物ＰＣＲ扩增为属特异性外，余耐药基因引物ＰＣＲ扩增都具有较高的的特异性。２０株耐多药分离株中，９０％有２种以上耐药遗传标志改变，     

第四次全国结核病流调分支杆菌药敏试验的方法学探讨

目的：探讨比例法和绝对浓度法测试分支杆菌耐药性的一致性和可比性，对乙胺丁醇的效价计算方法进行分析探讨。方法：对第四次全国结核病流调分离的453株分支杆菌用比例法和绝对浓度法同时进行4种抗结核药物（INH、SM、RFP、EMB）的耐药性测定，并用二种效价计算方法对乙胺丁醇的耐药性进行对比试验。结果：402株结核分支杆菌用二种方法测试的四种药物的耐药率均无显著性差异（P＞0．05），51株非结核分支杆菌中，除EMB用比例法测试的耐药率明显高于绝对浓度法外（P＜0．01），其余3种药物二种方法测试的耐药率无显著性差异。H、S、R、E二种方法测试结果的一致率分别为96．2％、97．1％、98．7％和96．9％。EMB用二种效价计算方法检测结果的一致率为99．1％。结论：用比例法和绝对浓度法进行结核分支杆菌耐药性测定的一致性较高，药敏试验方法向比例法转轨，不会影响与我国既往资料的连续性和可比性。建议今后工作中对EMB的效价计算方法加以改进。     

用耐药基因检测方法指导老年肺结核病人治疗的临床研究

目的：了解老年肺结核病人的结核分支杆菌耐药情况，评价它们的临床应用价值。方法：采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（PCR－SSCP）检测结核分支杆菌rpoB,katG,rpsL,pncA,embB基因突变和药物敏感试验（比例法），了解117例老年结核病人结核分枝杆菌耐药情况。探讨和比较2种耐药性检测方法的检测效果。结果：1／2上的肺结核病人至少耐2种抗结核药物，对RFP、INH、SM、PZA和EB总耐药率为82．1％、71．7％、63．2％、51．2％和35．0％，耐多药率为67．5％，rpoB,katG,rpsL,PpncA和embB基因突变率分别为72．8％、64．9％、59．8％、41．0％和30．7％，多基因突变株达76．0％，结核杆菌耐药基因突变与耐药水平联系密切，多数结核分支杆菌耐药基因突变易发生在高耐药区，也有少数基因突变发生在低耐药区。根据药敏试验和耐药基因检测，耐多药结核病人6个月治愈率分别达到54．8％和62．8％，治疗效果满意，两种方法没有显著性差异（P＞0．05）。结论：耐药基因检测指寻治疗是一种新探索，PCR－SSCP方法敏感，特异，可以快速检测结核菌rpoB,katG,rpsL,pncA和embB耐药基因突变，可能会成为临床指导用药的好方法。     

结核分支杆菌利福平耐药基因突变的研究

目的了解我国结核分支杆菌耐利福平（ＲＦＰ）分离株ｒｐｏＢ基因突变情况，建立快速检测结核分支杆菌耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ－直接测序法（ＰＣＲ－ＤＳ）分析５０株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｏＢ基因。结果３株结核分支杆菌药物敏感株和２株非ＲＦＰ耐药株中，仅１株ｒｐｏＢＳＳＣＰ图谱异常的药物敏感株出现５３１位密码子ＴＣＧ→ＴＴＧ突变。４５株ＲＦＰ耐药株中，１０株ＳＳＣＰ和ＤＳ分析均未见ｒｐｏＢ突变，３５株ＳＳＣＰ和ＤＳ分析异常，其中１４株为５３１位密码子ＴＣＧ→ＴＴＧ或ＴＧＧ或ＴＡＣ突变，１４株为５２６位ＣＡＣ→ＴＡＣ或ＧＡＣ或ＣＣＣ或ＣＴＣ或ＧＴＣ突变，２株为５１６位ＧＡＣ→ＧＴＣ或ＴＡＣ突变，２株为５１６位和５２６位及５１５位和５１６位密码子双点突变，３株ｒｐｏＢ序列与结核分支杆菌不同。结论大多数结核分支杆菌耐ＲＦＰ是由于其ｒｐｏＢ基因突变所致，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－ＤＳ方法可快速测定结核分支杆菌ＲＦＰ耐药基因型     

三种结核分支杆菌耐药基因的检测方法

目的　建立3种结核分支杆菌耐药基因的检测方法,了解耐药基因突变和耐药水平的关系。方法 108例临床痰标本分离株均做聚合酶链反应-单链构象多态性 (PCR-SSCP)和传统梯度药敏试验。结果 耐SM (rpsL)、RFP (rpoB)、INH (KatG)基因突变率分别为78.5%,68.2%,70.5%,其中,高耐SM,RFP,INH分离株分别为86.5%,89.3%,84.3%;低耐分离株分别为28.5%,16.5%,7.1%。结论 结核分支杆菌耐药基因突变与耐药水平有密切联系,绝大多数结核分支杆菌耐药基因突变发生在高耐药株,少部分在低耐药株发生基因突变。     

绝对浓度法和比例法检测465株结核分枝杆菌临床分离析药物敏感性的比较研究

目的 进行绝对浓度法和比例法检测465株结核分支杆菌临床分离株的药物敏感性比较研究。方法 采用绝对浓度法和比例法检测465株结构分支杆菌临床株对4种抗结核药物（INH、SM、RFP、EMB）的敏感性。结果 465析结核分枝杆菌临床株的绝对浓度法和比例法测定的4种抗结核药物总耐药率分别为18．5％和20．9％,无显著性差异,P＞0．05。两种药敏测定法结果符合率为95．3％－97．8％。结论 绝对浓度法和比例法对结核分支杆菌药物敏感性试验无显著性差异。     

DNA序列分析与PCR—SSCP分析结核分支杆菌利福平敏感性的比较

目的 了解DNA序列分析与PCR—SSCP法分析利福平敏感性的价值。方法 应用DNA序列分析与PCR—SSCP法检测利福平敏感的结核分支杆菌临床分离株25株、耐药株41株的利福平耐药相关基因rpoB基因核心区域的突变情况。结果 25株利福平敏感株DNA序列分析未检测到rpoB基因突变，41株耐利福平株中38株发生突变，突变率为92．7％(38／41)；25株利福平敏感的结核分支杆菌菌株PCR—SSCP带型与对照H37Rv株相同，41株耐利福平结核分支杆菌菌株中38株SSCP带型不同于对照株，提示有突变存在。与DNA序列分析相比，PCR—SSCP检测准确率为93．9％(62／66)，敏感度为92．1％(35／38)；特异度是96．4％(27／28)。结论 DNA序列分析对判断结核分支杆菌耐利福平非常有价值；PCR—SSCP可用于利福平耐药结核分支杆菌的初步筛选。     

29株偶然分支杆菌耐药性观察

目的　了解偶然分支杆菌耐药性。方法 确定的 2 9株偶然分支杆菌临床分离株 ,进行主要抗结核药物作耐药性测定。结果 对氧氟沙星、左氧氟沙星敏感 ,对 6种抗结核分支杆菌药单一药敏试验均耐药。 2～ 3种药物联合药敏试验显示低浓度耐药 ,高浓度敏感。结论 建议采用敏感抗生素联合有协同作用的抗结核药进行化疗 ,可望取得临床治愈效果。     

结核分支杆菌五种耐药基因检测的临床应用及评价

目的　检测结核分支杆菌rpoBkatG、rpsL、pncA和embB耐药基因 ,评价其临床应用价值。方法　采用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析和药敏试验 (比例法 ) ,了解 10 9例肺结核患者结核分支杆菌耐药情况 ,并分析、比较临床治疗效果。结果　 1/ 2以上的肺结核患者至少耐两种抗结核药物 ,对RFP、INH、SM、PZA和EB总耐药率分别为 80 7%、71 5 %、78 8%、5 7 7%和48 6%。rpoB、katG、rpsL、pncA和embB基因突变率分别为 76%、68%、71%、5 1%和 3 0 %。结核分支杆菌耐药基因突变率与耐药水平联系密切 ,多数结核分支杆菌耐药基因突变易发生在高耐药株 ,也有少数基因突变发生在低耐药株。根据药敏试验和耐药基因检测结果 ,6个月耐多药结核治愈率分别达到 5 4 8%和 62 8% ,治疗效果满意 ,两种方法差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　耐药基因检测指导治疗是一种新探索 ,PCR SSCP方法敏感、特异 ,可以快速检测结核分支杆菌rpoB、katG、rpsL、pncA和embB耐药基因突变 ,可能会成为临床指导用药的好方法