RNAi在喉癌治疗中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近几年发展起来的一种新兴的基因沉默技术,它是由双链RNA介导的靶向基因序列特异性转录后沉默机制.目前,RNAi技术已被广泛应用于各种肿瘤研究.本文主要论述RNAi在喉癌治疗方面的应用及进展.     

RNA干扰与呼吸系统疾病的治疗

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。RNAi作为一种强大的基因沉默技术,具有高效性和高特异性等特点,被广泛应用于生物医学等各个研究领域,其在呼吸系统疾病的治疗研究方面也取得了很多突破性的进展,广泛用于病毒感染、肺癌、哮喘等疾病的分子生物学机制的研究与治疗。本文对RNAi技术的发现、作用机制及在呼吸系统疾病治疗上的应用进行了综述。     

RNA干涉技术在临床医学中的研究进展

RNA干涉(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double strand RNA,dsRNA)引起的转录后基因沉默机制,具有序列特异性和高效性,RNAi作为一门新的基因阻断技术,在临床医学研究及基因治疗中具有广阔的应用前景。本文对RNAi作用机制以及在疾病发病机制及治疗方面的研究进展综述如下。     

RNA干扰及其抗病毒作用

RNA干扰 (RNAi)是一种新发现的通过 ds RNA介导的特异同源靶基因沉默途径。 RNAi主要包括两个步骤 :RNase 样核酸酶切割 ds RNA而生成 2 1- 2 3nt的 si RNA和 si RNA引导 RNA诱导的沉默复合体 (RISC)降解同源性靶基因 m RNA。在某些生物体中 RNAi具有放大效应。通过将 - 2 1nt si RNA导入哺乳动物细胞的 RNAi技术不仅可避免非特异干扰素反应 ,更重要的是还可介导序列特异的基因沉默。最近将 RNAi应用于许多病毒性疾病的治疗研究均取得了显著的基因沉默效果 ,预示 RNAi有望成为一种预防、治疗病毒性疾病的新手段。     

RNAi技术及抗HBV治疗研究进展

RNA干扰L(RNA interference,RNAi)是由21个～23个核苷酸组成的双链RNA(dsRNA)所引发的生物细胞内同源基因转录后沉默的现象,是生物体在进化过程中普遍存在的一种基因调控机制。利用RNAi技术的高效性和特异性抵御病毒感染及其它外源性核酸入侵的研究,已取得了很大进展,针对乙肝病毒感染这一全球性的健康问题,RNAi有着广泛的应用前景。     

RNA干扰技术给药途径的研究进展

RNA干扰(RNAi)是序列特异性双链RNA(dsRNA)介导的基因沉默机制,这种机制将有希望成为治疗多种疾病的有力工具。Castanotto和Rossi[1]在新杆状线虫中发现双链RNA有沉默基因表达的能力。Nguyne等[2]详细阐述体外合成的小     

RNA干扰技术在妇科恶性肿瘤中的应用进展

RNA干扰(RNAi)是一种在动植物中广泛存在的通过双链RNA(dsRNA)分子在mRNA水平上诱导特异性序列基因沉默的过程。随着对RNAi研究的不断深入,其作用机制的逐步阐明,RNAi技术也日趋完善和成熟,作为一种新型研究工具已广泛应用于医学领域中,尤其在恶性肿瘤的研究中作用显著,有望成为攻克肿瘤、病毒性疾病及遗传性疾病的新手段。现就RNAi技术应用于妇科肿瘤的研究与治疗进行综述。     

RNA干扰及其在医学研究中应用的进展

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的,序列特异的基因沉默现象。小干扰RNA(siRNA)是RNAi作用中的效应分子。RNAi技术作为新兴的基因阻断技术具有明显优势,已经广泛地应用于基因功能研究、抗病毒感染和抗肿瘤等热门领域。现就RNAi作用机制、siRNA的制备、设计及RNAi技术在医学研究中应用做一综述。     

RNA干扰技术及其在椎间盘退变研究中的进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来发展起来的一种新兴的基因沉默技术,它是由双链RNA介导的靶向基因序列特异性转录后的沉默机制.RNA干扰序列特异性的抑制效应较反义DNA、抗体封闭技术等传统基因调节方法 有着明显的优势.在哺乳动物细胞中,RNAi可由21～25个核苷酸长度的小干扰RNA(sm...     

RNA干扰与卵巢癌基因治疗

RNA干扰(RNAi)是由外源性或内源性双链RNA诱发的转录后基因沉默机制,能高效特异性抑制突变基因表达,恢复正常基因功能。卵巢癌的发生是多基因参与并经多阶段演进而形成的疾病,RNAi现象的发现为卵巢癌的基因治疗提供了一种新的思路。通过RNAi技术可抑制卵巢癌致癌基因的表达,阻断细胞凋亡与分裂,增强卵巢癌传统化疗药物的敏感性,抑制肿瘤的浸润与转移,RNAi可能成为卵巢癌基因治疗的新策略。本文就RNAi的分子机制、特性以及RNAi技术在卵巢癌基因治疗领域的应用进行综述。     

白血病耐药细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶对P-糖蛋白药物泵出功能的影响

目的探讨人白血病多药耐药细胞株K562/AO2中葡萄糖神经酰胺合酶（GCS）对P-糖蛋白（P-gp）泵出功能的影响,以便进一步研究GCS在白血病细胞耐药形成中的作用机制。方法采用RNA干扰技术分别靶向干扰K562/AO2中的GCS和多药耐药基因1（MDR1）,并通过荧光定量PCR检测小干扰RNA（siRNA）的干扰效果;用流式细胞术检测细胞内罗丹明123（rh123）的滞留量,以rh123的平均荧光强度（MFI）反映P-gp蛋白的泵出功能。结果 GCSsiRNA和MDR1siRNA对各自靶基因的抑制率分别是（68±5.72）%和（75.3±2.62）%;转染siRNA 48 h后,GCS干扰组MFI为255.75±76.1,MDR1干扰组MFI为357.25±41.57,分别是阴性干扰组的3.3倍和4.6倍。结论特异性的沉默GCS基因可以降低P-gp的泵出功能,提示GCS可通过协同P-gp的药物泵出功能参与白血病细胞的耐药形成过程。     

小分子RNA在原发性胆囊癌治疗中的研究进展

RNA干扰现象自从被发现以来,已经在疾病的基因治疗方面取得了极大的成功。RNA激活(RNAa)是最近发现的一种由双链RNA诱导促使目的基因表达上调的现象,与RNA干扰有相似的分子特征和作用特点。虽然RNAa的作用机制尚未完全清楚,但其在肿瘤的治疗中具有显著的应用潜力。该文对RNA干扰和RNA激活在原发性胆囊癌治疗中的应用前景予以概述。     

RNAi逆转肾癌细胞MDR1基因表达导致的替尼泊苷耐药

目的：研究RNA干扰（RNAinterference,RNAi）对肾癌细胞多药耐药基因（MDRl）表达的抑制作用,并分析干扰前后肾癌细胞对替尼泊苷（VM一26）敏感性的变化。方法：根据MDRI基因设计3条小干扰RNA（smalJinterferingRNA,siRNA）序列,在质粒的介导下转染肾癌A498细胞,RT—PCR法分析转染前后MDRlmRNA表达水平,筛选出干扰效率最高的siRNA序列;进而利用慢病毒包装siRNA重组质粒,感染A498细胞,RT—PCR法筛选沉默效果最好的细胞株进行克隆,Westernbolt法检测MDRl蛋白表达水平,MTT法对比干扰前后替尼泊苷对细胞半抑制浓度（ICSO）的变化。结果：3条siRNA序列均能不同程度地抑制细胞MDRl基因的表达,其中siRNA一1序列能更有效地封闭MDRl基因,使MDRlmRNA表达水平下降67％;筛选出的稳转细胞株与未干扰细胞株相比,MDRl蛋白表达量明显下降,并使替尼泊苷对细胞的IC50降低约79．8％,差异具有统计学意义（P〈O．01）。结论：RNAi可抑制肾癌A498细胞MDRl基因的表达从而逆转其对替尼泊苷的耐药,使肾癌细胞化疗耐药逆转成为可能。     

VEGF基因RNA干扰质粒的构建与鉴定

目的构建干扰血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因RNA表达的重组质粒。方法设计3组针对VEGF基因的核糖核酸干扰（RNA interference,RNAi）序列,应用基因重组技术克隆入载体pcDNA3.1中,重组质粒分别命名为pcDNA3.1-VEGF-LH1、pcDNA3.1-VEGF-LH2和pcDNA3.1-VEGF-LH3,用DNA直接测序法和双酶切法鉴定构建的重组质粒。结果 DNA测序证实克隆入载体pcDNA3.1（-）中的序列正确,双酶切证实RNA干扰序列正确插入载体pcDNA3.1（-）。结论成功构建针对VEGF基因的RNAi质粒,为进一步研究该RNAi质粒在脉络膜新生血管形成中的作用奠定了基础。     

RNA干扰技术及其在心脑血管疾病中的应用

RNA干扰（RNAi）是外源和内源性双链RNA在生物体内诱导同源靶基因的mRNA特异性降解,导致转录后基因沉默的现象.RNAi过程分为三个阶段,即起始阶段、效应阶段及扩增阶段.RNAi是一种高效特异性的阻断基因表达的基因阻断技术,不仅在生物学功能方面起到作用,如病毒防御,抑制转座子的转座,保护基因组的稳定性,以及调节基因表达,在医学领域也有着广泛的应用,包括高血压、心肌病变、心力衰竭及脑血管疾病等.     

RNAi在大肠癌基因治疗中的研究现状

RNA干扰（RNAinterference）即转录后基因沉默，是由外源或内源性的双链RNA（doublestandedRNA）导入细胞而引起同源的mRNA降解，进而抑制其相应的基因表达。作为一项新技术，目前广泛地应用于生物体基因功能研究和多种肿瘤的研究。现针对大肠癌有关基因诊疗进行了积极的探索，并取得了突破性的进展。     

PIK3CA基因RNA干扰慢病毒载体的构建和鉴定

目的构建靶向PIK3CA（P110α）基因的RNA干扰慢病毒载体。方法针对PIK3CA—mRNA（NM_006218）设计4个RNA干扰靶点序列和一个阴性对照靶点,构建慢病毒转移质粒pGCL—GFP。构建成功的RNA干扰质粒与PIK3CA表达质粒共转染293T细胞,荧光显微镜下观测转染效果,Western Blot检测PIK3CA蛋白表达,筛选出干扰效果最好的RNA干扰质粒。将该质粒与两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒并检测其滴度。结果4个靶点和阴性对照靶点的RNA干扰质粒均构建成功;通过Westem Blot检测获得最有效干扰靶点,并成功包装成滴度为2×10^8TU／ml的慢病毒。结论成功构建可供感染的PIK3CA基因RNA干扰慢病毒载体,为进一步研究PIK3CA功能和用慢病毒进行卵巢癌基因治疗奠定了基础。     

短发夹RNA及其在头颈肿瘤研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是一种分子生物学上由双链RNA(dsRNA)诱发的特定基因沉默现象。随着该项技术的不断发展,以质粒、病毒为载体表达的短发夹RNA(shRNA)具有更强大的基因沉默作用,可使目的基因在细胞内稳定增殖并获得长效剔除效应。近年来,以shRNA为工具的RNAi技术开始在体内外各项实验中应用并取得突破,包括功能基因组学、药物靶点筛选、细胞信号转导通路分析及疾病治疗等,尤其在肿瘤领域显示出广阔的应用前景。     

高迁移率族蛋白B1在肾间质纤维化中作用

目的：观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在肾小管间质纤维化大鼠模型中的表达,探讨肾炎舒对肾小管间质纤维化的疗效及作用机制。方法：将36只大鼠随机分为假手术组、模型组、肾炎舒治疗组[378mg／（kg·d）],采用单侧输尿管结扎术（UUO）制作肾小管间质纤维化大鼠模型,术后第7天及第14天分别处死各组中6只大鼠。检测各组大鼠肾小管间质损害程度及组织中HMGB1、转化生长因子-B1（TGF．B1）的表达。结果：模型组HMGB1、TGF—β1的表达及肾小管间质损伤指数明显高于同期假手术组（P〈0．05）,肾炎舒治疗组HMGB1、TGF-β1的表达及肾小管间质损伤指数明显低于同期模型组（P〈0．05）。结论：HMGB1可能协同TGF-β1促进肾小管间质纤维化,肾炎舒胶囊可抑制肾组织中HMGB1及TGF-β1的表达,对肾间质纤维化有一定的防治作用。     

Masson染色联合图像半定量分析对肾间质纤维化的诊断及评价研究

背景　肾间质纤维化（RIF）是慢性肾脏病（CKD）发展至终末期肾病（ESRD）的主要病理基础,是影响肾脏病患者预后的重要因素。早期明确诊断、及时治疗有助于改善患者预后。近年来,许多研究发现可以通过检测细胞因子等生化指标,以及超声弹性成像技术等无创检测来反映RIF,但因操作烦琐,价格高昂,临床广泛开展还有困难。目前临床主要应用经皮肾组织穿刺活检后进行Masson染色等特殊染色方法来反映RIF,但在常规的病理诊断中,病理医师只能通过在显微镜下的观察来定性描述间质内的改变,存在主观性,而计算机辅助技术可以自动化分析肾间质内的改变,并进行半定量研究。目的　通过Image-Pro Plus 6.0图像分析仪检测Masson染色的肾脏病理切片的积分光密度,计算平均光密度（MOD）,探讨其对RIF的诊断价值。方法　收集2016年1-9月于西安交通大学第一附属医院肾内科行肾活检、排除继发性肾脏疾病、诊断为慢性间质性肾炎（CIN）及慢性肾小球疾病（CGD）患者149例作为RIF组,其可分为CIN亚组（包括病理诊断为小管间质性炎,伴或不伴系膜增生性肾小球肾炎患者,n=26）、慢性肾小球疾病（CGD）亚组（n=123）。根据CGD常见类型,分为IgA肾病（IgAN,包括伴有肾小球硬化的IgAN患者,n=79）、慢性肾小球肾炎（n=44）;根据LEE氏标准将IgAN分为IgAN Ⅱ级（n=3）、IgAN Ⅲ级（n=35）、IgAN Ⅳ级（n=25）、IgAN Ⅴ级（n=16）,根据慢性肾小球肾炎硬化程度分为局灶硬化性肾小球肾炎（FSGN,n=31）、增生硬化性肾小球肾炎（PSGN,n=10）、硬化性肾小球肾炎（SGN,n=3）。将同期于本院行肾脏穿刺活检明确无RIF的Ⅰ~Ⅱ期膜性肾病患者27例作为对照组。检测研究对象临床指标〔血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）、胱抑素C、血红蛋白（Hb）、血及尿β2微球蛋白（β2-MG）〕。分析各组MOD与临床指标的相关性,绘制MOD诊断各组RIF的受试者工作特征曲线（ROC曲线）,计算最佳截断值、灵敏度和特异度。结果　RIF组的MOD与Scr、血及尿β2-MG呈正相关,与Hb呈负相关（P<0.05）。CGD亚组MOD与胱抑素 C、血及尿β2-MG呈正相关,与Hb呈负相关（P<0.05）。MOD诊断RIF的ROC曲线下面积为0.982〔95%CI（0.961,1.000）〕,最佳截断值为0.012 3,灵敏度为0.886,特异度为0.963。MOD诊断CIN亚组RIF的ROC曲线下面积为0.991〔95%CI（0.975,1.000）〕,最佳截断值为0.011 8,灵敏度为1.000,特异度为0.926。MOD诊断CGD亚组RIF的ROC曲线下面积为0.980〔95%CI（0.958,1.000）〕,最佳截断值为0.008 0,灵敏度为0.992,特异度为0.852。结论　Image-Pro Plus 6.0图像分析仪检测Masson染色的肾脏病理切片的MOD可以反映RIF的程度,预测RIF的最佳截断值为0.012 3,诊断不同类型RIF的灵敏度和特异度均较高。