邻苯二甲酸二-(2-乙基)己酯致小鼠隐睾睾丸和附睾的组织病理学改变

目的 :探讨邻苯二甲酸二 (2 乙基 )己酯 (DEHP)引起的小鼠隐睾睾丸和附睾的组织病理学改变。　方法 :妊娠KM小鼠 4 0只 ,随机分成 5组 ,分别为正常对照组 8只、玉米油对照组 8只、己烯雌酚 (DES)组 8只、DEHP低剂量组 [DEHP 10 0mg/ (kg·d) ]9只和DEHP高剂量组 [DEHP 5 0 0mg/ (kg·d) ]7只。自妊娠第 12d开始到分娩后 3d ,分别持续经口给予DEHP 10 0mg/ (kg·d)、5 0 0mg/ (kg·d)和DES 10 0 μg/ (kg·d)及玉米油 ,观察仔代雄小鼠的隐睾发生率及隐睾睾丸和附睾的组织病理学改变。　结果 :DEHP 5 0 0mg/ (kg·d)组染毒小鼠的隐睾发生率显著增高 ,睾丸和附睾的体积明显减小、重量减轻 ;睾丸生精上皮发育明显异常 ,精曲小管变薄、萎缩 ,间质细胞异常增生 ,电镜下其隐睾精曲小管上皮和间质细胞均出现明显的超微结构改变。同时附睾管腔中的精子数显著减少甚至缺乏。　结论 :高剂量 [5 0 0mg/ (kg·d) ]DEHP可能具有与DES类似的作用 ,是一种诱发隐睾的重要因子。小鼠在孕期及哺乳期接触DEHP后可引起雄性仔鼠性分化异常 ,诱导隐睾发生、睾丸生精上皮损害和生精过程障碍 ,从而对雄性仔鼠生育力产生不利影响。以上作用存在明确的量 效关系。     

邻苯二甲酸二乙基己酯对小鼠胚胎Leydig细胞毒性作用研究

目的探讨邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对小鼠胚胎睾丸问质细胞(Leydig细胞)的毒性作用。方法小鼠胚胎Leydig细胞体外原代培养。观察DEHP导致的Leydig细胞形态及超微结构改变,用MTT法和Annexin-V／PI流式细胞术分别检测DEHP在培养基内终浓度为25、510、100和200mg／L时对Leydig细胞活力影响及毒性作用。结果Leydig细胞活力随着DEHP浓度增加和作用时间延长而明显下降。Annexin-V／PI流式细胞术检测提示:死亡细胞比例随DEHP浓度升高和作用时间延长而显著增加,同时细胞增殖速度变慢,甚至增殖停止,伴随一系列细胞形态学及超微结构改变,呈剂量、时间依赖关系。结论DEHP能降低Leydig细胞的活性并促进其死亡,有明显细胞毒性。     

邻苯二甲酸二乙基己酯及代谢产物MEHP对幼鼠睾丸组织TGF-β1表达和端粒酶活性的影响

目的:观察邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯(MEHP)对幼鼠睾丸组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达和端粒酶活性的影响,探讨DEHP和MEHP损害生精功能可能的机制。方法:生后2周龄的Wistar雄性幼鼠96只,随机分8组,每组12只。随机选择1组行生理盐水[0.9%NS0.2 ml/(kg.d),喂养3周]灌胃,作为正常对照组(NC组);再选1组行环磷酰胺[CTX 100 mg/(kg.d),喂养1周]灌胃,作为阳性对照组(PC组);余各组分别用DEHP、MEHP按低剂量[100 mg/(kg.d),喂养3周]、中剂量[200 mg/(kg.d),喂养2周]、高剂量[300 mg/(kg.d),喂养1周]灌胃制作动物模型。观察不同时期、不同剂量下睾丸组织精子形态变化,光镜下计数精子头部及畸形率;应用免疫组化SABC法及RT-PCR法检查睾丸组织TGF-β1的表达,并测定面密度;ELISA法检查睾丸组织中端粒酶活性。结果:①睾丸组织内精子形态变化:用药组精子数量减少,出现精子断头、无钩、双尾等畸形精子;在光镜下精子计数,与NC组比较,用药各组精子头部显著减少(P<0.05),畸形率增加(P<0.05),但高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②睾丸组织TGF-β1的表达变化:NC组低表达,DEHP及代谢产物MEHP染毒各组生精细胞内表达增多,PC组大量表达,阳性细胞呈黄褐色,主要分布于胞膜及胞质。NC组面密度为0.156 0±0.003 5、TGF-β1mRNA为1.51±0.20,PC组面密度为0.534 0±0.003 1、TGF-β1 mRNA为8.43±1.75;用药的DEHP组面密度均值为0.289 0±0.003 6、TGF-β1 mRNA为3.83±1.57,MEHP组面密度均值为0.284 0±0.003 1、TGF-β1 mRNA为3.51±1.41,用药各组与NC组、PC组比较差异有统计学意义(P<0.01),但高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05);③睾丸组织中端粒酶活性:与NC组比较,用药各组睾丸组织中端粒酶活性下降(P<0.05),高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:DEHP及代谢产物MEHP对幼鼠生精功能有明显损害,其损害机制可能与DEHP及代谢产物MEHP诱导睾丸组织TGF-β1的表达水平升高、端粒酶活性降低有关。     

邻苯二甲酸二乙基己酯对新生小鼠睾丸及Leydig细胞影响的实验研究

目的:探讨邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对新生小鼠睾丸及Leyd ig细胞形态结构及功能的影响。方法:DEHP分别以低、中、高3组剂量[100、200、500 mg/(kg.d)]灌胃作用于怀孕12 d到产后3 d(GD12~PND3)的KM母鼠,观察DEHP对新生雄性仔鼠体重、睾丸重量、Leyd ig细胞形态结构和3β-羟基类固醇脱氢酶(3-βHSD)活性、酶反应面积的影响。结果:DEHP作用于母鼠后,其雄性子代幼鼠体重和睾丸重量减轻,睾丸Leyd ig细胞形态、超微结构发生改变;高剂量组Leyd ig细胞数量明显增多;低、中剂量组睾酮合成关键酶3β-HSD酶活性下降,酶反应面积减小,但高剂量组在仔鼠出生后15 d时酶活性降低[(吸光度值(0.154±0.011)vs空白对照组(0.222±0.013),P<0.01],而酶反应面积增大[(6 303.0±745.6)μm2vs空白对照组(5 091.4±214.4)μm2,P<0.01)]。结论:DEHP能影响新生雄性小鼠体重、睾丸重量、Leyd ig细胞的形态结构和3β-HSD活性,具有抗雄激素效应。     

邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯致小鼠睾丸基因组DNA甲基化水平变化分析

目的:探讨增塑剂邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯(DEHP)作用于怀孕小鼠后,其仔代睾丸基因组DNA甲基化水平的改变情况。方法:妊娠KM小鼠随机分为3组:正常对照组、玉米油对照组和DEHP实验组。自妊娠12.5 d到生后第3天分别持续经口予以玉米油和DEHP[500 mg/(kg.d)],于生后第7天取仔代睾丸,应用甲基敏感扩增多态性(MSAP)技术,对仔鼠睾丸组织DNA进行EcoRⅠ/MspⅠ和EcoRⅠ/HpaⅡ两种酶切反应,经ABI 3730DNA自动测序仪电泳及检测后,运用Genescan3.1分析扩增谱带。结果:对CCGG位点,DEHP实验组小鼠仔代睾丸组织DNA甲基化程度明显增高,其甲基化水平为(34.03±3.05)%;而正常对照组和玉米油对照组小鼠仔代睾丸组织基因组DNA甲基化程度分别为(28.37±2.37)%和(28.58±2.45)%。DEHP实验组与正常对照组和玉米油对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:DEHP作用孕鼠后可导致仔代睾丸基因组DNA甲基化水平改变,影响基因组表观遗传修饰改变,可能是导致生殖系统损害的重要毒理机制之一。     

邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯诱导人卵巢颗粒细胞系KGN细胞铁死亡的作用研究

目的 研究邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)是否诱导人卵巢颗粒细胞系KGN细胞铁死亡并影响其增殖。方法 取对数增长期的人卵巢颗粒细胞系KGN细胞,给予不同浓度(0、100、200、400、800、1 600μmol/L)MEHP处理24 h。通过普通光镜观察不同浓度MEHP处理后KGN细胞形态的改变;用CCK-8检测MEHP对细胞活力和增殖能力的影响;采用蛋白免疫印迹(WB)观察铁死亡相关蛋白(ACSL4、GPX4、SLC7A11、FTH1)在KGN细胞中的表达情况;使用细胞铁含量检测试剂盒、丙二醛(MDA)含量检测试剂盒、活性氧(ROS)荧光探针(DCFH-DA)及超氧化物阴离子荧光探针(DHE)分别检测对照组和400μmol/L MEHP处理组细胞的铁含量、MDA、ROS和超氧化物阴离子水平。结果 (1)光镜观察显示,400μmol/L及以上MEHP处理使KGN细胞皱缩变圆,形态异常。(2)CCK-8结果显示400μmol/L及以上MEHP处理抑制细胞增殖,且具有剂量依赖性(P<0.05)。(3)100、200μmol/L MEHP处理组KGN细胞铁死亡相关蛋白表达无...     

邻苯二甲酸单乙基己基酯对原代培养大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)的代谢产物邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对SD大鼠体外培养睾丸间质细胞(Leydigcells)睾酮合成的影响。方法:建立SD大鼠睾丸Leydig细胞体外原代培养模型,MEHP染毒剂量组分为对照(0μmol/L)、62.5、125、250、500、1000μmol/L,通过噻唑蓝(MTT)法观察线粒体活性,放射免疫法测定睾酮浓度,RTPCR法测定Leydig细胞类固醇合成急性调节蛋白(StAR)mRNA表达。结果:MEHP染毒24h后,Leydig细胞线粒体活性在250μmol/L时显著上升,1000μmol/L时显著下降,与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01)。基础状态及人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激状态下,Leydig细胞睾酮合成水平均呈上升趋势,与对照组相比,250、500μmol/L剂量组差异均有显著性(P<0.01)。Leydig细胞StARmRNA的表达在62.5、125、250μmol/L时与对照组相比均未见有显著性改变,在500、1000μmol/L时显著下降(P<0.01)。结论:MEHP直接影响原代培养Leydig细胞线粒体活性及睾酮合成,胆固醇跨膜转运的调节因子StAR与MEHP引起睾酮合成上升的原因可能无关。     

小鼠睾丸引带细胞的培养及己烯雌酚对培养睾丸引带细胞的影响

目的:探讨小鼠睾丸引带细胞体外培养的有效方法,并进行形态学观察。研究经典的外源性雌激素己烯雌酚(DES)体外对小鼠睾丸引带发育的影响。方法:手术放大镜解剖出3日龄雄性昆明小鼠的睾丸引带组织并进行细胞培养。台盼蓝染色检测细胞存活率,HE染色观察细胞形态。传代培养并随机分为空白对照组、溶剂对照组(DMSO组)和实验组(DES 1~4组)共6组。溶剂对照组加入DMSO,实验组分别加入0.01、0.10、1.00以及10.00μg/ml DES。分别于培养12、24、48 h后进行细胞形态学观察,CCK-8法检测睾丸引带细胞的生长情况。结果:培养睾丸引带细胞大部分为成纤维细胞型,有少数的上皮样细胞。原代细胞的存活率为85%~90%。在不同剂量DES作用后的3个不同时间段里,细胞增殖性的检测结果存在时间-剂量效应的显著差异(P<0.01)。结论:睾丸引带细胞可经一定的方法进行体外培养,外源性雌激素对睾丸引带细胞的生长有抑制作用,且呈现一定的时间-剂量效应。对培养睾丸引带细胞影响的研究是外源性雌激素影响生殖系统发育研究的一条有效的睾丸外途径。     

气相色谱法测定食品塑膜包装材料中增塑剂邻苯二甲酯的研究

本文对食品塑膜包装材料中增塑剂邻苯二甲酸二辛酯(DEHP)的气相色谱测定法进行了研究,提出用索氏萃取法以乙醚萃取DEHP或用甲醇沉淀法将塑料基质从试液中除去,分离出DEHP,然后以邻苯二甲酸二戊酯为内标,在交联甲基硅酮毛细管柱上,用FID检测器作气相色谱定量测定。萃取法和沉淀法的平均回收率分别为96.5%和85.3%。两方法的变异系数约为2%,最小检测量约2×10~(-3)μg。沉淀法的回收率略低于萃取法,因此在沉淀过程中,DEHP有被沉淀物包留的可能,若沉淀小心进行,避免产生凝絮状沉淀物则包留现象可获得改善。     

邻苯二甲酸二丁酯诱导尿道下裂大鼠模型的建立及其作用机制

目的用邻苯二甲酸二丁酯(DBP)诱导建立尿道下裂大鼠模型并在分子水平研究其导致尿道下裂的作用机制。方法将孕鼠在怀孕第12～19天用DBP(500mg/kg体重)连续每天灌胃建立仔代雄鼠尿道下裂模型，并将孕鼠在第19天行破宫产取仔代雄鼠的睾丸组织，用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测睾酮合成过程中限速酶细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3p羟基类固醇脱氢酶(3p-HSD)和细胞色素P45017α-羟化酶(P450c17)的mRNA含量水平，与正常对照组进行比较。结果DBP诱导的尿道下裂组胎鼠睾丸组织中P450scc、3β-HSD和P450c17的基因表达水平较正常对照组均有不同程度的下降，两组间差异比较均有统计学意义(P＜0．05)。结论DBP通过在性发育期干扰仔代雄鼠睾丸组织中睾酮的生物合成途径，降低了睾酮水平，导致大鼠出生后尿道下裂的出现。     

A Comparative Study of the Effects of Non-Union of Testis and Epididymis and Cryptorchidism on Testicular Development and Spermatogenesis in the Rat

Malunion of testis and epididymis is a congenital anomaly of human undescended testicles which may be of considerable clinical importance. In an experimental model in rat the effects of early disconnection of testis and epididymis (16 days) on testicular development have been testis and puberty. The results are compared with corresponding effects of cryptorchidism and sham-operation. The testes were weighed, and the relative proportions of haploid, diploid and tetraploid cells were quantified by DNA flow cytometry. The histology was evaluated by light and electron microscopy. The non-union operated testes showed a close to normal weight development until about 40 days of age, whereafter a decline occurred. The progression of the maturation division was only slightly reduced at 30 and 37 days of age, but later the spermatogenesis was significantly inhibited. At 58 days of age the maturation division had practically ceased in non-union operated testes. In cryptorchid animals the onset and progression of maturation divisions were almost totally depressed, and only traces of haploid cells were seen in some specimens. The transient increase in tetraploid cells, reflecting primary spermatocytes seen at about 30 days during normal testicular development, was neither depressed in non-union operated nor in cryptorchid animals. This indicates that the major block in spermatogenesis in both situations is at the stage of the primary spermatocytes. At 58 days of age the testicular histology was similar in non-union operated and cryptorchid testicles with many tubular sections showing only Sertoli cells. Scattered and partly degenerated germinal cells were seen in some sections. No histological signs of increased intratubular fluid pressure were detected, suggesting that pressure atrophy is not decisive for the reduced spermatogenesis in non-union operated gonads.     

Effects of exposure of pre-pubertal boars to di(2-ethylhexyl) phthalate on their frozen-thawed sperm viability post-puberty

Late effects of pre-pubertal oral exposure to di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP), a plastic softener used in, for example, polyvinyl chloride-products, on semen quality in young boars have not been clear-cut. The aim of this study was to determine whether stress imposed on spermatozoa would reveal such effects. Semen was collected from post-pubertal boars (8-9 months of age), which had been exposed to 300 mg kg(-1) body weight of DEHP per os three times a week from 3 to 7 weeks of age and from control siblings given placebo (water). The semen was cryopreserved and examined for plasma membrane integrity post-thaw using the short hypo-osmotic swelling test and flow cytometry (propidium iodide /SYBR-14). Sperm motility was assessed by computer-assisted sperm analysis. No significant difference in plasma membrane integrity could be found between the groups. The DEHP-exposed group had a significantly lower percentage of linearly motile spermatozoa at 30 min (P < 0.05) and 120 min (P < 0.001) after thawing, and a larger amplitude of lateral displacement of the head 120 min after thawing (P < 0.05), compared with controls. In summary, spermatozoa from boars pre-pubertally exposed to low doses of DEHP, showed kinematic deviations post-thaw that could be related to DEHP exposure.     

右旋2-丙氨酸，5-亮氨酸脑腓肽诱导的心肌冬眠对离体兔心缺血-再灌注损伤的保护作用

目的观察δ阿片受体激动剂——右旋2-丙氨酸,5-亮氨酸脑腓肽（DADLE）是否具有保护成年兔离体心肌少受或免受缺血-再灌注损伤的作用,以探讨新的心肌保护方法和机制。方法30只兔制作Langendorff离体灌注模型,随机分成3组,每组10只,对照组：采用标准心脏停搏液灌注;组1：标准心脏停搏液＋DADLE（1mg／kg）灌注;组2：标准心脏停搏液＋纳洛酮（3mg／kg）灌注。3组心脏停搏后分别进行再灌注。检测3组缺血前、后左心室发展压（LVDP）、乳酸脱氢酶（LDH）的变化,在电子显微镜下观察心肌细胞超微结构,应用流式细胞仪检测心肌细胞的凋亡情况。结果缺血后3组间LVDP和LDH比较差异有统计学意义（P〈0．05）;组1 LVDP高于组2和对照组（69．8±5．8mmHg vs．23．4±3．9mmHg;69．8±5．8mmHg vs．37．9±4．7mmHg;P〈0．05）,而LDH低于组2和对照组（1272．6±59．1U／L vs．2764．4±27．7U／L,1272．6±59．1U／L vs．1884．4±37．5U／L;P〈0．05）。组1心肌细胞凋亡率低于组2和对照组。心肌超微结构显示：组1线粒体结构基本正常;组2线粒体结构损伤严重;对照组线粒体轻度损伤。结论应用DADLE灌注心肌可诱导心肌细胞冬眠,对缺血-再灌注损伤的心肌具有保护作用。