碳青霉烯类耐药大肠埃希菌耐药基因型检测及同源性分析

目的检测临床分离碳青霉烯类耐药大肠埃希菌的耐药基因型,并对其同源性进行分析,研究其流行情况。方法收集铜陵市人民医院 2012年 9月至 2016年 10月临床分离碳青霉烯类耐药大肠埃希菌,采用 VITEK?2 Compact全自动微生物鉴定仪进行鉴定,改良 Hodge试验检测碳青霉烯酶表型, EDTA双纸片协同试验进行金属酶初筛,聚合酶链反应( PCR)检测碳青霉烯酶基因( blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaNDM和 blaOXA?48)并对阳性扩增产物进行基因测序;同源性分析采用肠杆菌科基因间重复一致序列聚合酶链反应技术( ERIC?PCR)。结果共收,集碳青霉烯类耐药大肠埃希菌 25株, 8株改良 Hodge试验阳性, 13株金属酶初筛试验阳性,其中 4株携带 blaNDM?1基因, 1株携带 blaIMP?4基因, 1株携带 blaKPC?2基因; ERIC?PCR检测分为 10种型别。结论碳青霉烯类耐药大肠埃希菌的耐药机制主要是产金属酶,携带 NDM?1型碳青霉烯酶大肠埃希菌需重点监测;碳青霉烯类耐药大肠埃希菌未在医院引起克隆流行。     

我院肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性分析

目的:为临床合理使用碳青霉烯类抗菌药物提供参考。方法:收集我院2014年1月-2015年12月检出的肠杆菌科细菌,采用半自动微生物测定仪进行菌株培养、鉴定及药敏试验,采用改良Hodge试验和纸片扩散法进行产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)和产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药菌株的确证。结果:我院2014-2015年共检出肠杆菌科细菌1035株,其中大肠埃希菌732株,肺炎克雷伯菌157株、阴沟肠杆菌136株、黏质沙雷菌10株,未检出枸橼酸杆菌。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对阿米卡星和碳青霉烯类抗菌药物的敏感率较高,而对大部分头孢菌素类抗菌药物的敏感率较低。共检出耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌64株(6.18%),其中耐碳青霉烯类大肠埃希菌31株(4.23%)、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌30株(19.11%)、耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌1株(0.74%)、耐碳青霉烯类黏质沙雷菌2株(20.00%);耐药菌株主要来源于痰液和尿液标本,且主要集中于新生儿内科和重症医学科。64株耐药菌株中,产KPC的有59株(92.19%)、产ESBLs的有3株(4.69%)。结论:我院肠杆菌科细菌以大肠埃希菌为主,且耐碳青霉烯类大肠埃希菌和耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的检出数量较多。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性可能与其产KPC和ESBLs有关。临床应遵循用药指征,结合药敏试验结果合理选用碳青霉烯类抗菌药物。     

2019年至2020年碳青霉烯类耐药大肠埃希菌的分子流行病学研究

目的 对碳青霉烯类耐药大肠埃希菌的分子流行病学进行调查。方法 通过微量肉汤稀释法测定中国细菌耐药监测研究(CARST)于2019年至2020年收集的大肠埃希菌的最低抑菌浓度;通过改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)、 EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)检测菌株的碳青霉烯酶表型;通过聚合酶链反应和Sanger测序检测碳青霉烯酶相关耐药基因;通过接合实验验证碳青霉烯酶耐药基因所在质粒的水平传递性;通过多位点序列分型对碳青霉烯类耐药菌株进行同源性分析。结果 36株对美罗培南或亚胺培南或厄他培南不敏感的菌株中22株只对厄他培南耐药。只对厄他培南耐药的22株大肠埃希菌碳青霉烯酶检测均为阴性,对美罗培南或亚胺培南耐药的14株大肠埃希菌碳青霉烯酶检测均为阳性,分别有8株携带bla_NDM-5,3株携带bla_NDM-1,1株携带bla_NDM-7,1株携带bla_NDM-16,1株碳青霉烯酶基因未测得。7株bla_NDM-5阳性菌株、3株bla_NDM-1阳性菌株、1株bla     

耐亚胺培南的肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的表达情况

目的 检测临床分离的耐亚胺培南肺炎克雷伯菌临床分布、耐药情况及碳青霉烯酶的表达情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法 收集徐州3家三级医院微生物室培养出的非重复肺炎克雷伯菌,并根据药敏结果筛选对亚胺培南耐药的菌株,对耐药菌株采用改良Hodge实验检测碳青霉烯酶、IPM/EDTA组合纸片法检测金属酶表现型,采用PCR实验检测耐药菌株中blaKPC-2,blaCTX-M-15,blaVIM-1,blaIMP-4,blaNDM-1和blaOXA-48的表达情况。结果 共收集107株非重复肺炎克雷伯菌,其中26株耐亚胺培南,耐亚胺培南菌株均为多重耐药菌株,对常见抗菌药物均为耐药;表现型结果26株耐亚胺培南菌株有23株改良Hodge实验阳性,阳性率为88.5%;6株组合纸片法阳性,阳性率为23.1%;PCR扩增具有碳青霉烯酶活性的相关基因：26株均检测到KPC-2酶基因,25株检测到CTX-M-15酶基因,8株检测到IMP-4酶基因,1株检测到NDM-1酶基因,1株检测到VIM-1酶基因,暂未扩增出OXA-48酶基因。结论 本地区肺炎克雷伯菌耐亚胺培南形势严峻,产生β-内酰胺酶为其主要的耐药机制,KPC-2、CTX-M-15产生率较高,占主导地位,已经存在产NDM-1菌株,相关部门应注意预防其流行和传播。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的了解医院临床分离产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性现状,为制订临床治疗方案提供依据。方法将从临床标本分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的药物敏感试验结果应用Whonet5.3软件进行统计学分析;产ESBLs菌株采用双纸片协同试验测定并经NCCLS确证试验确认。结果7年间产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别为38.64%和37.33%,2005年的检出率分别为48.65%和47.73%。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌除对亚胺培南、阿米卡星、呋喃妥因敏感率高外,对所监测的其他抗菌药物耐药现象严重,且产ESBLs菌株的耐药率远高于非产ESBLs菌株。结论医院应重视对产ESBLs菌株的检测,按照药物敏感试验结果合理选用抗菌药物治疗感染;碳青霉烯类抗生素治疗产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是首选药物。     

碳青霉烯类是治疗产ESBLs细菌感染的最佳抗生素

目的调查临床标本分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性,证实碳青霉烯类是治疗产ESBLs细菌感染的最佳抗生素。方法按照NCCLS推荐的纸片确证法检测产ESBLs菌株,以K-B纸片扩散法进行药敏试验。结果临床标本分离的产ESBLs菌株,大肠埃希菌335株、肺炎克雷伯菌129株,产酶率分别占45.03%(355/744)、28.86%(129/477)。产ESBLs组细菌对环丙沙星、氨苄西林、头孢唑林、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟等临床常用的抗菌药物的耐药率高达92%~100%;对亚胺培南/西司他丁、美罗培南2种碳青霉烯类抗生素的耐药率均在1%以下。结论本组实验证明,碳青霉烯类抗生素是治疗产ESBLs细菌感染的最佳选择。     

碳青霉烯类是治疗产ESBLs细菌感染的最佳抗生素

目的 调查临床标本分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性，证实碳青霉烯类是治疗产ESBLs细菌感染的最佳抗生素.方法 按照NCCLS推荐的纸片确证法检测产ESBLs菌株，以K-B纸片扩散法进行药敏试验.结果 临床标本分离的产ESBLs菌株，大肠埃希菌335株、肺炎克雷伯菌129株，产酶率分别占45.03%（355/744）、28.86%（129/477）.产ESBLs组细菌对环丙沙星、氨苄西林、头孢唑林、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟等临床常用的抗菌药物的耐药率高达92%～100%;对亚胺培南/西司他丁、美罗培南2种碳青霉烯类抗生素的耐药率均在1%以下.结论 本组实验证明，碳青霉烯类抗生素是治疗产ESBLs细菌感染的最佳选择。     

痰热清注射液对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的体外联合杀菌活性研究

目的研究痰热清注射液联合亚胺培南对产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的体外联合杀菌活性,探索临床治疗该耐药细菌所致感染的新方案。方法微量肉汤稀释法测定痰热清注射液和亚胺培南对20株产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度,棋盘稀释法测定其对痰热清注射液与亚胺培南的体外联合敏感试验,通过计算分级抑菌浓度指数,判断联合效果。根据联合药敏试验结果,选取其中的2株细菌进行体外联合杀菌试验研究。结果 20株产KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌对亚胺培南的耐药率为100%,其MIC范围为4~256 mg/L,对痰热清注射液的MIC值为15.6~500μl/ml。联合药敏试验结果显示,55%(11/20)的菌株对该两药组合呈协同作用,35%(7/20)的菌株呈相加作用,10%(2/20)的菌株为无关作用,所有菌株联合皆未产生拮抗作用。随后的联合杀菌试验亦证实上述联合药敏试验结果。结论痰热清注射液联合亚胺培南可用于治疗产KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌所致感染。     

产 ESBLs 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析及分布

目的：了解医院临床分离的产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的临床分布特点及耐药状况,为临床合理用药提供参考依据。方法收集2014年医院临床分离的925株大肠埃希菌和363株肺炎克雷伯菌。使用法国生物－梅里埃 ATB 细菌鉴定系统,应用药敏测试仪及配套微生物检测试剂进行细菌鉴定和药敏试验。结果925株大肠埃希菌中分离出产 ESBLs 菌657株（占71．0％）;363株肺炎克雷伯菌中分离出产 ESBLs 菌150株（占41．32％）。产 ESBLs 大肠埃希菌来自尿标本266株（占40．49％）,产 ESBLs 肺炎克雷伯菌来自痰标本89株（占59．33％）。产 ESBLs 株的耐药率均普遍高于 ESBLs 阴性株;与产 ESBLs 肺炎克雷伯菌相比,产 ESBLs 大肠埃希菌对氟喹诺酮类抗生素耐药率较高;且二者对青霉素类、一到三代头孢菌素类抗生素耐药率均较高,而对厄它培南、亚胺培南、美罗培南等药高度敏感。结论某院产 ESBLs 大肠埃希菌主要引起泌尿道感染,产 ESBLs 肺炎克雷伯菌主要引起呼吸道感染。临床应高度重视产 ESBLs 菌的检测和药敏试验,根据药敏结果合理选择抗生素,减缓细菌耐药的发生,尤其要控制 ESBLs 菌的产生和爆发流行。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药机制检测

目的筛查大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因情况,分析其与耐药的关系。方法随机抽取2008—2010年耐3代头孢菌素(头孢他啶)的大肠埃希菌72株和肺炎克雷伯菌57株,56株头孢他啶敏感的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为对照组;三维试验确定细菌头孢菌素β-内酰胺酶(AmpC酶)的产生情况;超广谱β-内酰胺酶(ESBL)确证试验检测细菌产ESBL的情况;多重聚合酶链反应(PCR)扩增AmpC基因和膜孔蛋白ompF、ompk35、ompk36基因;纸片扩散法检测抗菌药物的敏感性。结果 72株大肠埃希菌中,14株产AmpC酶,23株产ESBL,3株膜孔蛋白基因缺失;57株肺炎克雷伯菌中,13株产AmpC酶,19株产ESBL,5株膜孔蛋白缺失,膜孔蛋白缺失株4代头孢均出现耐药。结论我院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢类抗生素的耐药机制主要是产AmpC酶和ESBLs,同时膜孔蛋白基因的缺失会造成耐药程度增高。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学及耐药机制

目的 研究碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌分子流行病学及对碳青霉烯类耐药机制。方法 KB法筛选对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌临床分离株24株,同时采用微量肉汤稀释法测定这些细菌的最低抑菌浓度,改良Hodge实验检测碳青霉烯酶;PCR检测碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaIMP、blaNDM、blaVIM、blaIMI、blaSPM、blaNDMOXA-23、blaNDMOXA-24、blaNDMOXA-48和blaNDMOXA-58)。结果 药敏试验显示碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌具有多重耐药性。PCR扩增碳青霉烯酶基因,blaIMP阳性率为58.3%,经测序为IMP-4,其余均为阴性。结论 肺炎克雷伯菌临床分离株对碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要与产IMP-4金属酶有关。     

中国肺炎克雷伯菌碳青霉烯类抗生素耐药现状和流行病学分析

目的研究中国肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药性及碳青霉烯酶在肺炎克雷伯菌中的分布。方法采用琼脂稀释法进行药敏实验;用PCR扩增和测序检测携带碳青霉烯酶基因的菌株;通过改良霍奇试验(MHT)和亚胺培南/EDTA双纸片协同试验(DDST)进行产碳青霉烯酶表型检测;利用PFGE及MLST对产酶菌株做流行病学分析。结果与结论产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的亚胺培南MIC处于较低水平;KPC-2和IMP-4为本研究发现的主要酶型;肺炎克雷伯菌IMP的遗传背景较为复杂。     

产KPC酶肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物的分子机制研究

摘要：目的 研究临床分离肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物的分子耐药机制,为临床合理用药提供理论及实验依据。方 法 收集2020年1月-2020年12月皖南医学院弋矶山医院临床分离非重复肺炎克雷伯菌株923株,利用全自动微生物分析系统进 行菌种鉴定及药敏分析,并用16S rRNA PCR扩增产物测序验证菌种,K-B法复核碳青霉烯类药物耐药情况;胶体金法对耐碳青 霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia, CRKP)菌株进行碳青霉烯酶的表型检测,并用碳青霉烯酶PCR扩 增结果进行验证;同时利用全自动微生物分析系统对产KPC酶CRKP产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases, ESBLs) 进行检测,并用ESBLs耐药相关基因PCR扩增结果进行验证;多位点序列分型技术(MLST)对产KPC酶CRKP进行序列分型 (ST)。 结果 923株肺炎克雷伯菌中256株(27.74%)为CRKP,其中183株携带blaKPC,ST分型为ST11型和ST12型,产KPC酶CRKP 携带3种ESBLs基因blaTEM-1、blaSHV-11和blaCTX-M-1。结论 CRKP产碳青霉烯酶以KPC酶型为主,blaKPC可合并3种ESBLs的产生。     

碳青霉烯类抗菌药物对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的防突变浓度研究

目的:探索碳青霉烯类抗菌药物对临床分离的100株大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶表型和铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的防突变浓度(MPC)。方法:采用琼脂稀释法测定碳青霉烯类(亚胺培南、美洛培南、厄他培南和多利培南)对临床分离的革兰阴性耐药菌株的最低抑菌浓度(MIC)及MPC并计算MPC/MIC比值。采用WHONET 5.6及SPASS 13.0进行分析。结果:肠杆菌科细菌和鲍曼不动杆菌的MPC/MIC比值为2~4,铜绿假单胞菌为4-≥16。β-内酰胺酶阳性的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌MPC/MIC比值高于β-内酰胺酶阴性菌株(4至 > 16 μg·mL^-1)。结论:基于MPC的碳青霉烯类抗菌药物可以通过MPC/MIC比值调整给药剂量,降低耐药菌株的总体数量和感染负荷,抑制耐药菌突变体的选择性富集扩增。     

替加环素和多黏菌素对产KPC酶肺炎克雷伯菌的抗菌效应研究

目的 评价替加环素、多黏菌素对产KPC酶肺炎克雷伯菌的体外抗菌效应研究,指导临床正确选择并合理使用抗菌药物。方法 收集2012—2016年期间分离自温州医科大学附属第三医院临床样本中对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌109株,采用Vitek-2 compact和Vitek MS进行菌种鉴定及药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)法检测菌株的KPC酶耐药基因并采用琼脂稀释法药敏试验分别检测替加环素、多黏菌素等药物的单药最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)值。结果 所分离的109株均为产KPC-2肺炎克雷伯菌,经过Vitek-2 compact和KB法试验可知109株肺炎克雷伯菌对阿米卡星的耐药率为82.57%,对亚胺培南、美罗培南等其他药物的耐药率均为100%。琼脂稀释法药敏结果显示109株肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南耐药率均为100%;对阿米卡星耐药率为89%;对替加环素的敏感率为65.1%,29.4%中介;对多黏菌素的敏感率为100%。结论 产KPC-2型肺炎克雷伯菌对多黏菌素和替加环素较为敏感,可作为临床用药参考。     

2016年齐齐哈尔市第一医院细菌耐药性分析

目的 了解2016年齐齐哈尔市第一医院临床分离菌对常见抗菌药物的敏感性和耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供实验室依据。方法 采用自动化仪器对2016年1月1日-12月31日齐齐哈尔市第一医院临床分离菌进行药敏试验,采用美国临床实验室标准化研究协会(CLSI)2014年版标准判断药敏结果及WHONET 5.6软件进行数据分析。结果 2016年共收集非重复临床分离菌3,505株,其中革兰阴性菌2,450株,占69.9%;革兰阳性菌1,055株,占30.1%。取自下呼吸道标本所占比率最高57.3%,其次为尿液10.5%和血液10.3%。排在前5位的细菌依次为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌,分别占18.43%、15.92%、14.41%、13.92%和7.93%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(methicillin-resistant coagulase-negative Staphylococci,MRCNS)的检出率分别为27.4%和74.2%。未发现对万古霉素和利奈唑胺的葡萄球菌。肠球菌属细菌中粪肠球菌对所测试的抗菌药的耐药率显著低于屎肠球菌,未发现耐万古霉素和利奈唑胺的肠球菌。大肠埃希菌、克雷伯菌属细菌(肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌)和奇异变形菌的ESBLs,检出率分别为43.3%、20.1%和18.4%。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素高度敏感,但是仍有对少数碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(carbapenem resistant Enterobacteriaceae,CRE),以肺炎克雷伯菌居多。对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌和不动杆菌属检出率分别为17.5%和60.4%。肺炎链球菌对红霉素和克林霉素耐药率大于98%,青霉素耐药的肺炎链球菌(PRSP)占2.3%。结论 细菌耐药性仍对临床构成严重威胁,应重视细菌耐药性监测并加强抗菌药物的合理使用。     

Ⅰ类整合子介导大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌耐药机制的初步研究

目的了解临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中I类整合子的分布情况,探讨整合子与细菌耐药之间的关系。方法琼脂平皿稀释法进行药敏试验;双纸片法筛选出产ESBLs的菌株;运用PCR扩增、DNA测序及DNA序列比对等方法对其携带的I类整合子相关耐药基因进行分析。结果 36株大肠埃希菌与46株肺炎克雷伯菌对头孢克肟、头孢克洛、头孢氨苄、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢噻肟钠、阿莫西林纳/舒巴坦钠、氨苄西林钠/舒巴坦钠及头孢哌酮/舒巴坦钠等的耐药率分别为61%、86%、86%、50%、75%、64%、39%、47%、30%与65%、63%、78%、52%、67%、54%、48%、41%、28%;10株细菌检测出产ESBLs,其中大肠埃希菌4株,肺炎克雷伯菌6株,并全部检测出1类整合子,其整合子可变区的耐药基因排列顺序与GenBank登录号为NC010410的菌株达到100%相似,并且皆含有blaVEB-1耐药基因盒。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。