中药联合褪黑激素对帕金森模型大鼠前脑纹状体细胞凋亡和行为学的影响

目的 观察中药(平颤方)联合褪黑激素(MT)对帕金森病(PD)模型大鼠行为学和前脑纹状体细胞凋亡的影响,探讨中药联合MT治疗PD的作用及其机制. 方法 SD大鼠60只,分5个组:空白对照组、模型对照组、MT组、中药组、中药+MT组.模型对照组和各治疗组大鼠腹腔注射N-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)建立PD模型,用爬杆法和迷宫试验测量大鼠行为学改变和智力状况,Bax/Bcl-2免疫组织化学染色和Tunel法检测前脑纹状体凋亡细胞. 结果 PD大鼠出现不同程度爬杆能力下降和智力减退;与病理对照组相比,用药实验组尤其是中药+MT组大鼠行为学异常可部分或全部改善(P＜0.05),前脑纹状体神经元和胶质细胞Bcl-2蛋白表达明显增强(P＜0.01),Bax基因表达受抑制(P＜0.01),同时前脑黑质纹状体通路细胞凋亡减少(P＜0.01).结论 中药平颤方联合MT通过抗氧化应激途径,激活Bax/Bcl-2系统,调节前脑黑质纹状体通路多巴胺(DA)神经活性,抑制细胞凋亡和改善PD症状.     

针刺血清对胃溃疡大鼠胃黏膜细胞磷脂酶Cγ-1活性的影响

目的:观察针刺胃经穴后的血清对胃溃疡大鼠胃黏膜细胞磷脂酶Cγ-1(PLCγ-1)活性的影响.方法:大鼠60只随机分为溃疡血清组、胃经血清组、胆经血清组、胃经血清 PD153035组和胆经血清 PD153035组,采用水浸束缚法制作胃溃疡模型,利用链霉蛋白酶消化法分离胃黏膜细胞,分别用表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂PD153035和血清孵育胃黏膜细胞,应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测PLCγ-1活性.结果:胃经血清组(13.0±7.5nkat/g)大鼠胃黏膜细胞PLCγ-1活性与溃疡血清组(6.5±0.3nkat/g)比较有显著性差异(P=0.01);胃经血清组大鼠胃黏膜细胞PLCγ-1活性与胆经血清组(7.2±1.8nkat/g)比较有显著性差异(P=0.02);胃经血清组大鼠胃黏膜细胞PLCγ-1活性与胃经血清 PD153035组(7.4±2.7nkat/g)比较有显著性差异(P=0.02).结论:针刺胃经穴后的血清能刺激胃黏膜细胞中PLCγ-1的活化,并且存在经脉-脏腑的特异性联系.     

PD98059对食管癌细胞放射敏感性影响的研究

目的 探讨PD 98059通过抑制丝裂原活化蛋白激酶-细胞外信号调节激酶(MRPK-ERK)信号通路是否改变食管癌细胞的放射敏感性.方法 用食管癌细胞株EC 9706为实验对象,分别接受单纯放射、PD 98059和二者结合处理.通过Western印记法证实PD 98059可下调ERK活性.采用成克隆法定量分析细胞增殖性死亡.通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 单纯PD 98059(10μmoL/L)可抑制ERK的磷酸化,而单纯放射对ERK的活性无明显影响,二者结合可提高对ERK活性的抑制作用.PD 98059(10 μmol/L)在放射前与细胞作用1 h及放射后作用10 d均可提高EC 9706细胞对放射的敏感性.PD 98059结合放射可增加EC 9706细胞增殖性死亡,D0值的放射增敏比为1.69.PD 98059可增加EC 9706细胞放射后诱导的细胞凋亡.结论 PD 98059通过抑制MAPK降低ERK活性,增加EC 9706细胞对放射的敏感性,为筛选放射敏感剂临床实验提供了依据.     

黑质小胶质细胞激活诱导帕金森病的机制

帕金森病(PD)是中老年人常见的以黑质部位的多巴胺能(DA)神经元变性为主要病理特征的中枢神经系统变性疾病.实验证明脂多糖(LPS)可以成功诱导大鼠PD模型.LPS本身对神经元没有直接的毒性损伤作用,离体实验结果已证实LPS单纯与神经元细胞孵育不能产生杀伤作用,仅在加入小胶质细胞后才能对神经元产生毒性作用;在暴露于1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)、鱼藤酮的猴子,可发现Mic被激活,并导致PD进展[1].活化的Mic可以释放多种细胞毒性物质,对DA神经元产生毒性作用,造成DA神经元变性.可见有必要鉴定两种细胞之间相互作用的信息分子,并深入探讨二者之间这种关联的分子机制,为PD的治疗进展提供理论依据.     

6-羟基多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型中14-3-3蛋白表达的研究

目的 应用蛋白质组学技术研究6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)模型中14-3-3蛋白的表达变化.方法 在建立6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞PD模型的基础上,分别提取6-OHDA实验组和对照组孵育24 h的细胞总蛋白,应用荧光差异双向凝胶电泳(DIGE)技术获得蛋白点的差异表达信息,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定出差异蛋白质.结果 DIGE分析发现实验组有一个表达明显上调的差异蛋白质点(P＜0.05),经质谱分析鉴定确认为14-3-3蛋白.结论 6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞的PD模型中14-3-3蛋白表达上调,提示14-3-3蛋白上调可能与PD的发病机制有关.     

大鼠帕金森病发病过程中黑质细胞凋亡及其相关基因表达

目的观察帕金森病(Parkinson disease,PD)发病过程中黑质细胞凋亡变化规律,观察相关黑质细胞凋亡基因p53、Bax、热休克蛋白(HSP)的表达。方法通过脑立体定位注射6-羟基多巴胺(6-0HDA)的方法建立大鼠PD模型,采用TUNEL方法、免疫组织化学、尼氏染色等方法,选择术后1、7、14、21 d为研究时点,观察大鼠PD模型形成过程中尼氏细胞、黑质细胞凋亡的数量及相关基因变化情况,并检测黑质细胞p53、Bax、HSP表达情况。结果用TUNEL法发现黑质细胞存在细胞凋亡,与对照组存在显著性差异(P<0.05),各时点黑质细胞凋亡数逐渐增加,尼氏细胞则逐渐减少,随时间增加而升高,p53和HSP则在1 d为最高,其后很快下降,但都高于对照组(P<0.05),Bax蛋白表达逐渐减少。结论PD发病过程中黑质细胞凋亡参与其中,呈现一定变化规律,并受到p53、Bax和HSP的影响。     

miR-613抑制胶质瘤增殖及侵袭能力

目的 研究miR-613对胶质瘤增殖及侵袭能力的影响及其作用机制。方法 收集正常人和胶质瘤患者脑组织,并测定其miR-613和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)mRNA表达水平。把正常培养传代后的U87MG人脑胶质瘤细胞随机为空白对照组、miR-613 NC组、miR-613模拟物组、miR-613抑制剂组、G6PD组和miR-613模拟物+G6PD组。采用RT-PCR检测mRNA表达水平、Western印迹法检测相关蛋白水平、CCK-8进行细胞增殖检测、Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 RT-PCR结果显示胶质瘤脑组织中的miR-613表达水平显著下降(P<0.05),而G6PD的水平显著上升(P<0.05);RT-PCR结果显示,U87MG人脑胶质瘤细胞在转染miR-613模拟物后,G6PD的平均表达水平显著降低(P<0.05),而miR-613抑制剂转染的U87MG细胞中G6PD表达水平显著上调(P<0.05)。Western印迹分析发现G6PD蛋白的表达在miR-613模拟物处理的细胞中显著降低,但在用miR-613抑制剂转染的细胞中显著上调...     

罗格列酮对帕金森病模型小鼠炎症反应和细胞凋亡的影响

目的观察炎症反应和细胞凋亡在帕金森病发病过程中的作用,探讨罗格列酮对PD多巴胺(DA)能神经元的保护作用。方法采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)制备PD模型,观察各组小鼠行为学变化,免疫组织化学和免疫印迹观察小鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、环氧合酶(COX)-2、前列腺素E2(PGE2)和半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达变化,及给予罗格列酮后对上述变化的影响。结果模型组小鼠出现震颤、步态迟缓等PD样症状,黑质区TH阳性神经元缺失,COX-2、PGE2和caspase-3阳性细胞明显增多,蛋白水平亦升高;经罗格列酮治疗后,上述症状得到改善。结论罗格列酮对PD小鼠DA能神经元保护作用可能与抑制炎症反应和细胞凋亡有关。     

miR-486-5 p靶向TRPM2对帕金森病模型细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)模型细胞凋亡及自噬的影响.方法 用MPP+诱导SK-N-SH细胞建立PD细胞模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western印迹平行检测PD细胞模型中miR-486-5p、瞬时受体...     

细胞外信号调节激酶1/2通路抑制剂PD98059对体外培养γδT细胞增殖和杀伤功能的影响

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路抑制剂PD98059对体外培养人γδT细胞增殖和杀伤功能的影响。方法从健康人外周血中分离单个核细胞,加入到含有唑来膦酸和白细胞介素2的RPMI 1640完全培养基中诱导培养获得γδT细胞。用ERK1/2特异性抑制剂PD98059阻断γδT细胞ERK1/2信号通路后,用细胞计数仪测定γδT细胞增殖和细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定杀伤能力;采用流式细胞术检测γδT细胞颗粒酶B和穿孔素的表达。计量资料组间比较采用t检验。结果培养10 d后的γδT细胞纯度达到(87.94±2.36)%。PD98059作用后的γδT细胞数低于对照组[(6.74±0.36)×105/ml vs(9.42±0.31)×105/ml],而PD98059作用后γδT细胞颗粒酶B阳性表达率[(48.89±1.31)%vs(41.58±1.58)%]、穿孔素阳性表达率[(65.92±3.29)%vs(33.49±2.83)%]、对肝癌Hep G2细胞的杀伤率[(69.28±4.96)%vs(48.34±3.01)%]均高于对照组,差异均有统计学意义(t值分别为-12.708、7.582、15.478、11.201,P值均0.001)。结论 ERK1/2特异性抑制剂PD98059阻断ERK1/2信号通路能抑制γδT细胞的增殖,但能增强γδT细胞的体外杀伤功能。     

热休克蛋白70减轻帕金森病细胞模型中α-突触核蛋白毒性的作用

目的 探讨HSP70在因α-突触核蛋白过表达或突变所致的帕金森病(PD)细胞模型中的作用及其机制.方法 构建过表达野生型和PD相关突变型(A53T)α-突触核蛋白质粒,转染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞后得PD细胞模型;然后在细胞模型中转染表达HSP70的质粒.采用免疫印迹检测转染HSP70细胞模型中α-突触核蛋白表达量的改变;采用MTT法检测转染HSP70后细胞模型活力的变化.结果 转染HSP70后,细胞模型α-突触核蛋白表达减少,细胞活性增加.结论 HSP70通过降低α-突触核蛋白表达水平对PD细胞模型发挥保护作用.     

MEK/ERK信号通路在RANKL诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移中的作用及机制探讨

目的探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌细胞MCF-7迁移中的作用。方法流式细胞术检测MCF-7细胞表面核因子-κB受体活化因子(RANK)蛋白的表达;Western blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK(p-ERK)及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变。结果 MCF-7细胞表面表达RANK蛋白,RANKL(2μg/mL)显著诱导MCF-7细胞迁移能力增强。RANKL刺激后MCF-7细胞p-ERK表达逐渐升高,MEK抑制剂PD98059显著抑制RANKL诱导的MCF-7细胞迁移。结论 ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞MCF-7迁移。     

波动性葡萄糖对胰岛β细胞INS-1的影响

目的 探讨波动性葡萄糖对培养的胰岛β细胞株INS-1细胞的损伤机制.方法 实验分5组.对照组:葡萄糖浓度为5.5 mmol/L;持续高糖组:葡萄糖浓度为16.7 mmol/L;波动性高糖组:16.7mmo/L葡萄糖培养2 h后更换葡萄糖浓度为5.5 mmo/L,继续培养3 h,每天重复3次,夜间9 h维持在5.5 mmo/L匍萄糖的培养基中;N-乙酰半胱氨酸(NAC,1.0 mmo/L)+高糖组;NAC+波动性高糖组.流式细胞仪检测活性氧簇(ROS)的水平;四氮唑蓝定量检测细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的活性;同时检测还原型辅酶Ⅱ(NADPH)的含量.结果 干预72 h后,对照组、高糖组、波动性高糖组、NAC+高糖组和NAC+波动性高糖组细胞的ROS活性分别为37.77±2.31、86.97±7.97、124.27±10.04、60.92±2.61和51.47±3.36;G6PD活性分别为1.25±0.03、1.09±0.02、1.03±0.01、1.12±0.02和1.21±0.01;NADPH含量分别为(0.123±0.003)mmoVmg prot、(0.112±0.004)mmol/mg prot、(0.099±0.002)mmol/mg prot、(0.116±0.005)mmol/mg prot和(0.120±0.002)mmol/mg prot.波动性高糖组细胞ROS活性较单纯高糖组显著增加(P＜0.01),G6PD活性和NADPH含量较单纯高糖组显著减少(P＜0.01);加NAC共孵育使细胞的变化程度减小.结论 波动性高浓度葡萄糖使培养的INS-1细胞氧化应激水平增高,其机制可能是由于抗氧化酶G6PD活性降低导致了氧化还原的失衡.     

细胞外信号调节激酶1/2途径参与甲状旁腺素1-34诱导的心肌细胞肥大

目的 观察丝裂素活化蛋白激酶的上游激酶1(MAPKK,MEK1)抑制剂PD98059对大鼠甲状旁腺素1-34(rPTH1-34)诱导的心室肌细胞肥大的影响及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达的变化,分析MEK/ERK途径的可能作用. 方法 体外培养新生大鼠心室肌细胞,10-7mol/LrPTH1-34诱导建立心肌细胞肥大模型,在模型中加入2×10-5mol/L PD98059,Motic Images Advanced 3.0软件测定细胞直径、3H-亮氨酸掺入实验检测细胞蛋白合成速率、RT-PCR半定量测定心房利钠肽mRNA、Western blot方法观察ERK1/2、磷酸化ERK1/2蛋白表达的变化. 结果 与正常组相比,10-7mol/L rPTH1-34孵育24 h可使体外培养的心肌细胞直径增加13.6 μm、细胞蛋白合成速率增加898 cpm/well,使心房利钠肽mRNA表达增加73.9%,p-ERK1/2蛋白表达增加15%(P＜0.05).与PTH组相比,预先给予PD98059可使细胞直径减少7.1 μm,细胞蛋白合成速率减少644 cpm/well,心房利钠肽mRNA表达下降52.2%,磷酸化ERK1/2蛋白表达减少18%(P＜0.05).单独使用PD98059对正常心肌细胞没有影响(P＞0.05). 结论 PD98059通过抑制ERK1/2、磷酸化ERK1/2的表达阻断了心肌细胞肥大反应,MEK/ERK1/2途径的活化参与了rPTH1-34的致肥大作用.     

豨莶草提取液对MPP~+诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨豨莶草提取液对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤的保护作用及机制。方法在生长状态良好的PC12细胞中加入终浓度为400μmol/L的MPP~+,造成帕金森病(PD)的离体实验模型,并观察豨莶草提取液对MPP~+诱导的PC12细胞损伤的保护作用。倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,通过DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果 400μmol/L MPP~+作用PC12细胞能明显抑制细胞生长,造成细胞发生损伤,ROS水平增加。同时给予不同浓度豨莶草提取液,PC12细胞存活率明显增加,ROS水平显著降低。结论豨莶草提取液能有效改善MPP~+诱导的PC12细胞的损伤,其作用机制可能与降低ROS水平有关。     

细胞外信号调节激酶调控乙醛对肝星状细胞的影响

目的 观察PD98059(特异性丝裂原细胞外信号反应激酶阻断剂)调控乙醛刺激大鼠肝星状细胞(HSC)周期，影响细胞增殖、Ⅰ型胶原蛋白分泌及转化生长因子(TGF)β1 mRNA表达。方法 不同浓度PD98059对乙醛刺激的HSC进行处理；流式细胞仪检测细胞周期，MTT法检测细胞增殖变化，ELISA法检测HSC内Ⅰ型胶原蛋白分泌，RT-PCR法检测HSC内TGFβ1 mRNA表达。结果 PD98059能剂量依赖性地影响乙醛刺激的HSC周期，使G0／G1期细胞百分比增高，S期细胞减少，从而抑制乙醛刺激的HSC增殖、HSC内Ⅰ型胶原蛋白分泌及TGFβ2mRNA表达。结论 细胞外信号调节激酶信号通路影响乙醛刺激的大鼠HSC增殖Ⅰ型胶原蛋白分泌及TGFβ1mRNA表达。     

TGF-β1通过抑制小胶质细胞活化对帕金森病大鼠神经保护作用及机制

目的探究转化生长因子(TGF)-β1通过抑制小胶质细胞活化对帕金森病(PD)大鼠的神经保护作用及机制。方法将大鼠分为对照(Control)组、PD组、TGF-β1 25 ng/μl组、TGF-β1 50 ng/μl组、TGF-β1 100 ng/μl组,阿扑吗啡(APO)旋转诱导实验评估大鼠行为学变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、一氧化氮合酶(iNOS)水平;免疫组化检测黑质部络氨酸羟化酶(TH)、CD11b表达;蛋白免疫印迹(WB)检测TGF-β1、Smad3蛋白表达。体外培养新生乳鼠小胶质细胞,脂多糖(LPS)诱导活化,分为空白组、LPS组、TGF-β1 2 ng/μl组、TGF-β1 5 ng/μl组、TGF-β1 10 ng/μl组;噻唑蓝(MTT)法检测小胶质细胞活性;免疫荧光法检测小胶质细胞形态变化;WB检测细胞中TGF-β1、Smad3蛋白表达。结果与Control组相比,PD组APO诱导圈数显著升高,血清中TNF-α、iNOS水平显著升高,黑质部神经元数量显著减少,小胶质细胞数显著升高,黑质部TGF-β1、Smad3蛋白表达显著降低(均P0.05);与PD组相比,TGF-β1 25、50、100 ng/μl组APO诱导圈数显著降低,血清中TNF-α、iNOS水平降低,黑质部神经元数量显著增加,小胶质细胞数显著减少,黑质部TGF-β1、Smad3蛋白表达显著增加(均P0.05)。与空白组相比,LPS组小胶质细胞抑制率显著降低,TGF-β1、Smad3蛋白表达显著降低,CD11b蛋白表达显著升高(均P0.05)。与LPS组相比,TGF-β1 2、5、10 ng/μl组小胶质细胞抑制率显著升高,TGF-β1、Smad3蛋白表达显著升高,CD11b蛋白表达显著降低(均P0.05)。结论外源TGF-β1可抑制PD大鼠小胶质细胞活化,进而发挥对神经的保护作用,其机制可能与激活TGF-β1/Smad3信号通路有关。     

羊膜上皮细胞移植治疗帕金森病大鼠的实验研究

目的 探讨羊膜上皮细胞纹状体内移植对帕金森病（PD）大鼠的治疗作用。方法 采用RT-PCR方法检测入羊膜上皮细胞株FL表达脑源性神经营养因子（BDNF）、神经营养因子-3（NT-3）mRNA;Hoechest33342标记后微移植方法将其移入PD大鼠模型纹状体内，免疫荧光技术检测移植细胞表达BDNF、NT-3状况。结果 羊膜上皮细胞能够表达BDNF、NT-3，植入纹状体内能够存活，并在第2周内明显改善PD大鼠的行为学症状。结论 羊膜上皮细胞可作为表达神经营养因子治疗PD的移植细胞。     

神经胶质细胞在帕金森病中的作用

帕金森病(PD)是一种常见的神经退行性疾病，其主要特征：静止性震颤、行动迟缓、强直和体态不稳，与多巴胺(DA)能细胞明显减少有关。在PD患者和动物模型的黑质致密部(SNpc)均有胶质细胞反应，这些也是多种退行性神经系统疾病的病理特征。多年来，一直认为神经胶质细胞唯一的作用是清除细胞碎片，新的研究发现胶质细胞对神     

立体定向放射治疗配合化疗治疗非小细胞肺癌

目的观察立体定向放射治疗配合化疗治疗非小细胞肺癌的近期疗效。方法31例非小细胞肺癌患者均行NP方案(N：去甲长春花碱25mg／m^2第1．8天给予；P:顺铂60-80mg／m^2分2-3d给予；21d为1个周期)化疗加立体定向同步治疗。结果31例全部完成治疗计划，肺原发灶完全缓解(CR)占19．3％，部分缓解(PR)占74、2％，无变化和进展(NR PD)占6．5％，总有效(CR PR)率93．5％；纵隔淋巴结完全缓解(CR)占34、2％，部分缓解率为65．8％，无变化和进展(NR PR)占0％，总有效率(CR PR)为100％，白细胞下降率为96．8％，其中3．4级白细胞下降45.2％，放射性食管炎和放射性肺炎的发生率分别为54．8％和12．9％，均为1、2级。结论立体定向放射治疗配合化疗治疗非小细胞肺癌有较好的近期疗效。