人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞时NF-κB的表达及意义

研究表明人巨细胞病毒（HCMV）感染能激活核转录因子NF-κB，该因子在病毒完成复制和生活周期中起重要作用。人胚肺成纤维细胞（human embryonic lung fibroblasts，RELY）是HCMV的容许细胞，HCMV可在该细胞内活化复制。     

TNFα和IL-10在巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞中的作用

目的:研究TNFα和IL-10对人巨细胞病毒(HCMV)感染人胚肺成纤维细胞(HEL)的影响,以及感染细胞产生TNFα的变化,探讨有关细胞因子在HCMV感染免疫中的作用。方法:用不同浓度的TNFα和IL-10作用于HEL,24h后感染病毒,研究TNFα和IL-10对HCMV感染HEL的影响。用HCMV感染HEL,感染后(4、24、48、72、96h)分别收集培养上清液,用ELISA法检测TNFα含量。结果:在病毒感染前,中、高浓度TNFα或低、中浓度IL-10可抑制HCMV在HEL内的增殖。HCMV感染HEL后,细胞产生TNFα的量无明显改变。结论:TNFα和IL-10在HCMV感染免疫过程中起作用。     

人胚肺成纤维细胞突变系Z—HL16的初步研究

人胚肺成纤维细胞突变系Ｚ－ＨＬ１６的初步研究赵素兰彭英焦艳朱庆宣组织培养不仅是一种技术，科学，在现代医学和生物学研究中广泛应用。１９９６年由中国预防医学科学院病毒研究所惠赠第８代人胚肺成纤维细胞１瓶，在我们的培养条件下，当传到１６代时发生了突变。成纤...     

人胚肺成纤维细胞与肺腺癌细胞共同培养时增殖率的变化

用一种新的细胞培养技术，选用人肺腺癌细胞及人胚肺成纤维细胞，将两者这一定顺序定位培养在同一容器内，用原位计数法分别测定两种细胞在１２，３６，６０，８４小时培养的细胞数法计算两种在不同时相的增殖率，观察人肺腺癌细胞和成纤维细胞的相互影响。     

巨细胞病毒感染对人胚肺成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染对宿主细胞增殖及凋亡的影响。方法用HCMV AD169感染人胚肺成纤维细胞（human embryonic lung fibroblast cells,HEL）,倒置显微镜观察不同感染时间细胞病变,采用MTT法检测HCMV感染对HEL细胞增殖的抑制作用,同时采用流式细胞术检测HCMV感染细胞对照组细胞凋亡指数。结果在HCMV感染48h内,细胞增殖及凋亡指数与细胞对照组无明显差异。自HCMV感染72h后,细胞增殖明显受抑制,凋亡指数明显增高,细胞病变逐渐加重。结论在HCMV感染早期,对宿主细胞的增殖及凋亡影响不明显,在感染后期,HCMV通过抑制宿主细胞增殖,加重细胞病变,促进感染细胞的凋亡而发挥致病作用。     

沙利度胺抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞系转分化为肌成纤维细胞

目的 研究沙利度胺(THD)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-F)向肌成纤维细胞(MF)转分化和对已分化MF的作用。方法 体外培养HFL-F,以TGF-β1(5μg/L)诱导HFL-F向MF转分化,通过碱水解法测定羟脯氨酸含量(Hyp),免疫印迹法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,半定量RT-PCR测定α-SMA mRNA和Ⅲ型胶原(COL Ⅲ)mRNA,观察THD(50μg/L)对HFL-F向MF转分化的过程及已分化MF的影响。结果 TGF-β1诱导HFL-F 96h,诱导分化同时加入THD可抑制Hyp含量增高和COL Ⅲ mRNA表达上调(p均<0.05),可抑制α-SMA蛋白表达增加,但对于α-SMA mRNA表达没有影响。TGF-β1诱导HFL-F 96h后再加入THD可抑制COL Ⅲ mRNA的表达(p<0.05),但对Hyp含量、α-SMA蛋白表达量和α-SMA mRNA表达无明显影响。结论 TGF-β1可诱导HFL-F向MF转分化,THD可抑制这一过程中α-SMA蛋白与胶原合成。对TGF-β1诱导下已分化的MF,THD可抑制其COL Ⅲ mRNA的表达。     

人巨细胞病毒感染对体外培养肺成纤维细胞中明胶酶的影响

目的探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染对体外培养肺成纤维细胞（HEL）中明胶酶活性的影响。方法体外培养HEL细胞感染HCMV，分为低感染复数（MOI）组及高MOI组，每组重复6例。明胶酶谱法检测HEL细胞中MMP-2及MMP-9的明胶酶活性，用半定量RT-PCR检测各组HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的转录水平。结果在低MOI组及高MOI组HEL细胞中MMP-9及MMP-2活性均增强（P〈0．05），高MOI组MMP-9及MMP-2活性较低MOI组显著增加（P〈0．05）。进一步检查MMP-9及TIMP-1的mRNA水平发现，正常对照组HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的mRNA处于一个较低的水平，HCMV感染使HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的mRNA水平均明显升高（P〈0．05），低MOI组和高MOI组差异无统计学意义（P〉0．05）。在低MOI组及高MOI组，HEL细胞MMP-9／TIMP-1的比值和正常对照组相比明显升高（P〈0．05），表明MMP-9升高更为显著。高MOI组和低MOI组中MMP-9／TIMP-1的比值差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HCMV感染可以造成MMP-9和TIMP-1转录和MMP-9／TIMP-1的失衡，同时造成MMP-9及MMP-2明胶酶活性增强，导致肺泡结构的破坏和肺纤维化的发生，这在CMV肺炎的发病机制中起着重要的作用。     

Fas及FasL和Caspase-3在青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡中的表达

背景:青蒿琥酯具有减轻肺纤维化的作用,但相关机制的研究罕见报道。 目的：探讨青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞凋亡的作用及其与Fas,FasL,Caspase-3表达的关系。 方法：用1,10,100 mg/L青蒿琥酯分别干预体外培养的人胚肺成纤维细胞。采用CCK-8法检测青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞增殖的影响,流式细胞术测定细胞凋亡率,RT-PCR法测定Fas,FasL,Caspase-3 的mRNA的表达。 结果与结论：青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制人胚肺成纤维细胞增殖,细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加(P  < 0.05或P  < 0.01),Fas,FasL,Caspase-3 mRNA的表达显著高于对照组(P < 0.05)。结果证实,青蒿琥酯可通过上调Fas,FasL,Caspase-3 mRNA的表达抑制人胚肺成纤维细胞增殖、并促进细胞凋亡,发挥抗肺纤维化作用。     

巨细胞病毒对人胚成纤维细胞β肌动蛋白mRNA及微丝的影响

目的：探讨人巨细胞病毒（CMV）对人胚成纤维细胞（HF）的感染及其对细胞肌动蛋白基因 （β-actin）mRNA表达水平和微丝的影响。方法： 应用细胞形态学、RT-PCR半定量法、透射电镜观察CMV对HF细胞的感染及感染后细胞β-actin mRNA和微丝的变化。结果： 经CMV作用后，HF细胞形态由梭形变粗、变圆甚至脱壁；HF细胞有CMV即刻早期抗原基因(IE)mRNA表达，且随着CMV滴度的增加，IE mRNA相对表达量逐渐升高, 而β-actin mRNA相对表达量逐渐减弱，甘油醛3-磷酸脱氢酶基因 （GAPDH） mRNA表达无明显变化。透射电镜下，在HF细胞核、浆内见到大量CMV病毒颗粒；并有细胞微丝断裂、减少，排列紊乱。结论： CMV能感染HF细胞，并在其中活化复制，且致细胞β-actin mRNA表达水平降低；微丝形态、结构发生改变。     

以转染白血病抑制因子基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞

目的 以转染白血病抑制因子(LIF)基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞,为建立无动物成分污染的人胚胎生殖细胞培养体系奠定基础.方法 将LIF真核表达载体pcDNA3.1( )-LIF转染到人胚肺成纤维细胞中,通过筛选和鉴定获得表达LIF的阳性细胞.将原始生殖细胞(PGCs)种植到转染后细胞制备而成的饲养层上,在不添加外源性LIF的条件下培养,并对PGCs来源的细胞集落进行鉴定.结果 经RT-PCR及Western blotting 鉴定证实,转染pcDNA3.1( )-LIF的人胚肺成纤维细胞表达LIF基因.在转染后人胚肺成纤维细胞上生长的PGCs可形成典型的鸟巢状集落,经检测集落碱性磷酸酶活性呈强阳性,表达胚胎阶段特异性抗原SSEA-1、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81,及未分化标志Oct-4.结论 用转染LIF基因后的人胚肺成纤维细胞作为饲养层能支持PGCs来源人胚胎生殖细胞的生长,维持自我更新.