曲古菌素A诱导髓系白血病细胞株U937细胞凋亡的分子途径

目的　研究曲古菌素A(TSA)诱导髓系白血病细胞株U937细胞凋亡的分子途径。方法　不同浓度 ( 50、1 0 0、2 0 0、30 0、4 0 0nmol/L)的TSA在不同时间范围 ( 1 2、2 4、36、4 8和 6 0h)作用于U937细胞。用流式细胞仪检测细胞的凋亡率和Fas抗原 (CD95)的表达 ,用Westernblot法检测凋亡蛋白caspase 6、caspase 8和caspase 9的蛋白表达。结果　TSA诱导髓系白血病细胞株U937细胞的凋亡 ,并呈时间、剂量依赖性。在IC5 0 浓度 ( 30 0nmol/L)作用 2 4h凋亡细胞超过 50 % ;1 0 0～ 30 0nmol/LTSA作用 2 4h ,U937细胞Fas抗原表达也明显升高 (P <0. 0 1 )。TSA作用凋亡蛋白caspase 6、caspase 8和caspase 92 4h后 ,蛋白表达明显增高 (P <0 . 0 5)。结论　TSA诱导白血病细胞系U937凋亡涉及死亡受体参与的外源性途径和线粒体参与的内源性途径。     

粒细胞集落刺激因子刺激下急性白血病细胞增殖与其粒细胞集落刺激因子受体表达的研究

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)刺激下急性白血病(AL)细胞增殖与其粒细胞集落刺激因子受体(G-CS-FR)表达的关系。方法选初诊和难治复发的急性髓性白血病(AML)患者30例,急性淋巴细胞白血病(ALL)患者20例,正常对照组20例。化疗前留取骨髓5 m l,制备骨髓单个核细胞(MNC)悬液,并分别加入不同浓度的G-CSF(5,10,15,20,25 ng/m l),培养24h后用流式细胞技术检测其DNA倍体的量。同时选用G-CSFR、CD34的单抗,采用流式细胞技术检测G-CSFR、CD34在AL和正常粒细胞的表达情况。结果骨髓MNC培养24 h后各浓度的DNA倍体量在AML随着G-CSF浓度的增加有上升趋势,在ALL和正常对照无明显变化。G-CSFR、CD34的表达率:AML:(68.59±13.99)%,(45.15±4.22)%;ALL:(1.90±0.93)%,(46.75±3.15)%;正常对照:(70.5±10.8)%,(3.15±0.22)%。AML的G-CSFR表达率与ALL比较差异有统计学意义(P<0.05),与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05);ALL的G-CSFR表达率与正常对照比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论G-CSF可促进AML细胞增殖,不促进ALL细胞和正常粒细胞增殖;G-CSFR主要表达于成熟及恶性粒细胞,不表达于淋巴细胞。此结果在临床治疗白血病的过程中具有指导意义。     

1，25-二羟基维生素D3对K562细胞周期及凋亡的影响

目的观察1，25-二羟基维生素D3[1，25（OH）2D3]对白血病细胞株K562细胞周期及细胞凋亡的作用。方法Western印迹检测维生素D受体（VDR）在K562细胞的表达；四噻唑蓝法（MTT）、AO／EB、流式细胞仪分析细胞生长抑制率、细胞凋亡率及细胞周期。结果（1）K562细胞核阳性表达VDR；（2）0-10^-6mol／L浓度的1，25（OH）2D3呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖，10^-8mol／L 1，25（OH）2D3明显抑制K562细胞增殖，促进凋亡，细胞周期阻滞主要发生在G2期或M早期，凋亡率从4．1％（对照组）增至26．5％（P〈0．01）。结论1，25（OH）2D3可明显抑制K562细胞增殖，促进细胞凋亡。     

重组人粒细胞集落刺激因子对辐射诱发细胞恶性转化的影响

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulatingfactor,G-CSF)对60Coγ射线诱发Wistar大鼠肺成纤维细胞恶性转化过程的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法、软琼脂克隆培养、流式细胞术(FCM)同时观察正常Wistar大鼠肺细胞、60Coγ射线照射细胞、经G-CSF预处理后60Coγ射线照射细胞、60Coγ射线照射后G-CSF持续处理细胞的增殖活性,克隆形成率和细胞周期的变化。结果G-CSF有抑制单纯照射细胞增殖的作用,使软琼脂克隆形成延迟,使进入细胞周期的细胞减少,细胞周期进程减慢。结论G-CSF能减缓细胞的恶性转化过程。     

全反式维甲酸对白血病HL-60细胞株GPI-PLD基因表达的影响

目的研究用分化诱导剂全反式维甲酸（ATRA）培养HL-60细胞株后GPI-PLD的表达变化,以初步探讨该酶在全反式维甲酸（ATRA）作用下的变化及其与白血病细胞生长增殖的关系。方法用ATRA处理HL-60细胞后,以胎盘碱性磷酸酶为底物,定量检测GPI-PLD活性;RT-PCR法确定GPI-PLD mRNA表达水平;MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期。结果加入全反式维甲酸培养后,HL-60细胞株中GPI-PLD表达量和活性增加。流式细胞仪检测显示细胞阻滞在G2/M期;MTT实验检测显示ATRA处理后HL-60细胞株增殖生长受到抑制。结论加ATRA处理后HL-60细胞株增殖生长受到抑制,可能与GPI-PLD表达量显著增加有关。     

抑癌基因Deleted in Liver Cancer1在人胶质瘤细胞株中的作用及机制

目的探讨抑癌基因DLC1表达的isoform1及isoform2两个亚型在人胶质瘤细胞株中的表达、功能及机制。方法RT—PCR方法检测体外培养的胶质瘤细胞株U87-MG和SHG-44中DLC1 isoform1，2的mRNA水平；10μM5-aza-2’de-oxycytidine（5＇-AZA）或者共含有500nM trichostatinA（TSA）处理细胞36h，检测DLC1 isoform1，2的表达；MTT方法检测转染DLC1 isoform2及没有GAP活性的isoform2突变体DLC1-K714E表达质粒对胶质瘤细胞株U87-MG和SHG-44增殖的影响．结果在U87-MG细胞株中没有检测到DLC1 isoform1；在SHG-44中检测到微量的DLC1 isoform1，5＇-AZA或者共含有TSA处理使其表达上调;DLC1 isoform2在上述细胞株都能检测到，5＇-AZA或者共含有TSA处理细胞未改变其表达水平；过表达DLC1 isoform2及其突变体DCL1—K714E促进U87-MG和SHG-44细胞株增殖。结论DLC1 isoform1在胶质瘤细胞株中不表达或低表达．可能原因是由于不转录或者启动子发生甲基化。DLC1 isoform2有一定的表达水平，高表达的DLC1 isoform2促进胶质瘤细胞增殖．且不依赖GAP活性．     

共刺激分子CD86在急性髓性白血病细胞的表达及其临床意义

目的探讨共刺激分子CD80、CD86在急性髓性白血病细胞中的表达及其临床意义。方法采用细胞培养白血病细胞（HL60,U937,NB4及I（562）及流式细胞仪检测共刺激分子CD80、CD86在急性髓性白血病患者骨髓细胞中的表达及其在急性髓性白血病细胞HL-60细胞、U937细胞、NB4细胞和K562细胞的表达。结果CD80在急性髓性白血病骨髓细胞中的表达很低或不表达,CD86在急性髓性白血病骨髓细胞表达[（27．86±19．65）％]高于对照组[（1．21±0．13）％,t=3．55,P〈0．01]。其中CD86在M4型（48．65±21．92）％、M5型（39．25±18．67）％表达较高,但与对照组单核细胞表达（50．204-20．31）％比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。CD86在HL-60细胞、U937细胞和NB4细胞的培养24h后表达分别为（30．624-5．35）％、（24．12±5．23）％、（21．25±3．78）％,与培养48h后表达[（29．43±4．67）％、（26．564-6．54）％、（23．21±6．98）％]比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。CD80在HL一60细胞、U937细胞和NB4细胞的表达很低或不表达,K562细胞不表达共刺激分子CD80和CD86。结论CD86在HL-60细胞、U937细胞和NB4细胞和急性髓性白血病患者骨髓细胞中表达。     

白细胞介素-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶-2,-9基因表达及肿瘤细胞侵袭转移的影响

目的 探讨白细胞介素(interleukin,IL)-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶(matric metalloproteinases,MMP)-2,-9基因表达及肿瘤细胞侵袭转移能力的影响.方法 选择对数生长期人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B,在无血清培养基中加入白细胞介素-17终浓度分别为1 ng/mL,10 ng/mL,100 ng/mL和无血清培养(空白对照)进行干扰处理后,分别纳入干扰组(干扰组1、干扰组2、干扰组3)及对照组.采用免疫荧光细胞化学方法检测子宫内膜癌细胞株HEC-1-B是否表达白细胞介素-17特异性受体C (IL-17RC)蛋白.采用逆转录荧光定量PCR法检测不同浓度白细胞介素-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶-2,-9 mRNA基因表达水平的影响.采用transwell小室检测不同浓度白细胞介素-17干预后,子宫内膜癌细胞株HEC-1-B侵袭转移能力的变化.结果 人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B高表达特异性白细胞介素-17受体C.白细胞介素-17各浓度干扰组(干扰组1,干扰组2,干扰组3)与对照组比较,干扰组基质金属蛋白酶-9 mRNA表达增加,差异有显著意义(P＜0.01),且各浓度干扰组表现呈浓度依赖;而干扰组基质金属蛋白酶-2 mRNA表达无明显变化;干扰组穿膜细胞数明显增多,与对照组比较,差异有显著意义(P＜0.01),且各浓度干扰组表现呈浓度依赖;而干扰组2与干扰组3穿膜细胞数较干扰组1增多,差异有显著意义(P＜0.05).结论 白细胞介素-17能增强基质金属蛋白酶-9基因表达,促进子宫内膜癌细胞侵袭转移.     

抑癌基因Deleted in Liver Cancer1在人胶质瘤细胞株中的作用及机制

目的探讨抑癌基因DLC1表达的isoform1及isoform2两个亚型在人胶质瘤细胞株中的表达、功能及机制。方法RT-PCR方法检测体外培养的胶质瘤细胞株U87-MG和SHG-44中DLC1isoform1,2的mRNA水平;10μM5-aza-2'-de-oxycytidine(5'-AZA)或者共含有500nMtrichostatinA(TSA)处理细胞36h,检测DLC1isoform1,2的表达;MTT方法检测转染DLC1isoform2及没有GAP活性的isoform2突变体DLC1-K714E表达质粒对胶质瘤细胞株U87-MG和SHG-44增殖的影响。结果在U87-MG细胞株中没有检测到DLC1isoform1;在SHG-44中检测到微量的DLC1isoform1,5'-AZA或者共含有TSA处理使其表达上调;DLC1isoform2在上述细胞株都能检测到,5'-AZA或者共含有TSA处理细胞未改变其表达水平;过表达DLC1isoform2及其突变体DCL1-K714E促进U87-MG和SHG-44细胞株增殖。结论DLC1isoform1在胶质瘤细胞株中不表达或低表达,可能原因是由于不转录或者启动子发生甲基化。DLC1isoform2有一定的表达水平,高表达的DLC1isoform2促进胶质瘤细胞增殖,且不依赖GAP活性。     

促性腺激素释放激素对人卵巢癌细胞系OVCAR3体外生长调控作用的研究

目的观察GnRH受体在人卵巢癌细胞系OVCAR3中的表达,并研究促性腺激素释放激素激动剂（Triptorelin）对卵巢癌细胞体外生长调控作用。方法采用免疫组化SP法检测卵巢癌细胞系OVCAR3 GnRH I受体的表达;分别应用不同浓度Triptorelin作用于细胞,MTT法检测细胞生长抑制率。结果人卵巢癌细胞系OVCAR3表达GnRH I受体,Triptorelin可明显抑制GnRH I受体阳性的OVCAR3细胞生长。结论促性腺激素释放激素激动剂Triptorelin通过与人卵巢癌OVCAR3细胞株GnRH I受体结合,发挥抗增殖的作用。     

口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白谱差异

目的 探讨人口腔鳞癌体外培养亲本细胞株KB与耐药细胞株KBV200的蛋白质表达差异.方法 在体外培养KB及KBV200细胞株,采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI)及蛋白质芯片技术检测KB及KBV200蛋白质谱.结果 体外培养的口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株的蛋白质存在差异表达,CM-10芯片共捕获102个蛋白,发现差异峰19个,其中15个差异蛋白在KBV200细胞中高表达,4个差异蛋白在KBV200细胞中低表达.结论 SELDI蛋白芯片技术检测口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白质的差异表达方法 简便、敏感、重复性好.     

肠道缺血再灌注时Toll样受体4的作用及ω-3多不饱和脂肪酸的干预

Toll样受体是近年发现的一类识别病源分子的受体超家族。在缺血再灌注中,脂多糖及各种内源性配体,如高迁移率族蛋白B1、硫酸肝素、纤维蛋白素原等与Toll样受体4结合后通过髓样分化蛋白88依赖性和非依赖性两条信号传导途径诱导炎症细胞释放炎症因子从而介导炎症反应引发损伤。ω-3多不饱和脂肪酸能抑制Toll样受体4介导的信号通路的激活和目的基因的表达,影响多种免疫细胞的功能,调控机体炎症反应和免疫功能。本文主要综述Toll样受体4在缺血再灌注损伤中的作用以及ω-3多不饱和脂肪酸的干预作用。     

DNA氧化损伤修复基因HOGG1低表达细胞株的建立及其生物学特性鉴定

目的为研究肺癌发生机制中DNA氧化损伤修复基因HOGG1的可能作用,利用携带有HOGG1特异性锤头状核酶基因的载体与肺腺癌A549细胞株,建立HOGG1低表达细胞株并观察其生物学效应。方法HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体[pcDNA3.1(+)RZ]经脂质体介导转染A549细胞;G418筛选;Neo基因的RTPCR法鉴定阳性克隆细胞;RTPCR半定量检测核酶对HOGG1基因的抑制效应。同时比较转染细胞与正常A549细胞的生长情况、细胞周期、软琼脂克隆形成率以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果转染后G418成功筛选出了阳性转化克隆,经传代形成稳定细胞株。核酶可持续抑制A549细胞HOGG1基因的表达,RTPCR结果显示转染细胞HOGG1mRNA的表达比正常A549细胞低61.5%(P<0.05);转染后,细胞株形态无明显改变;其群体细胞倍增时间为2.05天,稍短于正常A549细胞(2.17d);细胞周期各时相及细胞凋亡率以及细胞增殖指数没有明显改变(P>0.05);软琼脂克隆形成抑制率接近50%(P<0.05);SOD活力比正常A549细胞显著增加(P<0.05)。结论成功建立HOGG1低表达细胞株,所观察的生物学效应多数指标与正常A549细胞无显著差异。     

LXA4对人白血病细胞K562与HL60膜受体ALX表达的影响

目的比较脂氧素A4受体(lipoxin A4 receptor,ALX)在人白血病细胞K562与HL60细胞的表达情况,研究脂氧素A4(Lipoxin A4,LXA4)对K562与HL60膜受体ALX的表达影响,探索LXA4对K562与HL60细胞作用效应强弱不同的可能因素。方法体外培养人白血病细胞K562与HL60,实验分为空白组和LXA4(50、100、200 nmol/L)处理组。采用免疫荧光技术检测K562和HL60细胞是否表达LXA4受体ALX;用不同浓度LXA4作用24 h后,RT-PCR和Western blotting检测并比较各实验组K562与HL60膜受体ALX的表达变化。结果免疫荧光检测显示,K562与HL60胞膜周围及胞浆内有明显绿色荧光,提示二者表达LXA4受体ALX;RT-PCR和Western blotting检测结果表明:随LXA4作用浓度的增高,K562与HL60细胞膜受体ALX的表达呈增高趋势(P<0.05),组间比较,ALX表达差异无统计学意义(P>0.05);K562与HL60空白组比较即从基础水平比较ALX的表达水平无明显差异(P>0.05)。结论 LXA4可上调K562与HL60膜受体ALX的表达,且LXA4对K562与HL60效应强弱的不同并非ALX基础表达水平不同所导致,可能存在其他影响因素。     

Pro-ADM、sTREM-1与未足月胎膜早破新生儿感染

近几年研究发现肾上腺髓质素前体及可溶髓样细胞表达触发受体-1可明确感染诊断,判断感染的严重程度,预测感染预后。本文将就肾上腺髓质素前体、可溶髓样细胞表达触发受体-1及未足月胎膜早破新生儿感染相关问题进行综述。     

构建siRNA慢病毒载体抑制A549细胞株VEGF受体KDR基因的表达

目的构建针对血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR基因的siRNA慢病毒载体,鉴定其对肺癌细胞株A549基因干扰效果。方法设计合成针对KDR编码区的三条siRNA序列及阴性对照序列,克隆到PGCL-GFP载体,构建重组质粒,行PCR鉴定、DNA测序分析;转染人肺癌细胞株A549,Real-Time PCR及Western blot分别检测KDR mRNA、蛋白水平变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期。结果成功构建pGCL/KDR-siRNA重组质粒。A549干扰组KDR mRNA表达率下降,KDR蛋白表达量明显减少,细胞周期改变。结论构建的pGCL/KDR-siRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制A549细胞株KDR基因的表达。     

人正常早孕滋养细胞体外培养株的系统鉴定

目的 建立人早孕滋养细胞株（HPT-8）的系统鉴定方法。方法 通过光镜、扫描电镜、透射电镜、免疫组化和免疫荧光激光共聚焦的方法对体外培养出的HPT-8进行系统鉴定评价。结果 电镜下可见细胞表面微绒毛丰富；胞质丰富；内质网扩张明显，细胞间紧密的桥粒样结构连接；检测细胞胞浆中角蛋白18和波形蛋白均为阳性，细胞胞浆中角蛋白7为阳性，细胞膜上移动相关蛋白为阳性。表皮生长因子受体、滋养细胞趋化因子和胎盘碱性磷酸酶结果均阳性，而人绒毛促性腺激素和胎盘催乳素结果均为阴性。结论 通过多种方法对HPT-8进行形态、超微结构、蛋白骨架和功能指标的综合评价，可以较全面的确定体外传至72代的细胞株HPT-8为具有部分内分泌功能的滋养细胞株，为进一步开展实验研究建立细胞模型。     

苦参碱联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞株中TSLC1基因表达的影响研究

目的:探究苦参碱联合顺铂对宫颈癌Si Ha细胞株、肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)基因的表达及Si Ha细胞株对顺铂敏感性的影响,为宫颈癌的临床治疗提供根据。方法:采取四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度苦参碱组、顺铂组以及联合组干预Si Ha细胞株48 h后的抑制率;采取实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测TSLC1 mRNA表达程度的变化。结果:苦参碱及顺铂对Si Ha细胞株的抑制率均呈剂量依赖关系,随着各组浓度的增高,TSLC 1mRNA的表达上调(P<0.05),不同浓度联合组对Si Ha细胞株的抑制率分别为40.13%、62.88%、67.35%、71.33%和75.11%,TSLC1 mRNA的表达量分别为8.61±0.02、14.29±0.01、27.52±0.06、62.19±0.01和93.12±0.01,与不同浓度苦参碱组及不同浓度顺铂组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参碱联合顺铂可抑制宫颈癌Si Ha细胞株的生成和发展,此机制可能和TSLC1 mRNA的表达上调有关,且苦参碱可以增强Si Ha细胞株对顺铂的敏感性。     

三羟异黄酮拮抗表皮生长因子促乳腺癌细胞增殖

目的通过体外细胞，观察三羟异黄酮(genistein)和表皮生长因子(EGF)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。方法用不同剂量genistein、不同剂量EGF、固定剂量genistein和EGF的混合液，作用于体外培养的雌激素受体阳性(ER^ )人乳腺癌细胞株MCF-7，作用不同时间后，用噻唑蓝(MTT)法测定细胞生长情况。结果genistein剂量超过25μmol／L以后对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖均有抑制作用，而且随剂量增大和作用时间延长其抑制作用逐渐增强，其中50μmol／L为最适宜浓度，EGF剂量超过4．15nmol／L以后对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增有明显的促进作用，而且随剂量增大和作用时间延长其作用逐渐增强，其中8．30nmol／LEGF联合作用于MCF-7细胞，则可显示出两者有交互作用，EGF对细胞的促增殖作用可以被genistein的作用逆转。结论genistein可抑制EGF诱导的人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的增殖。     

镰刀菌T-2毒素对人急性早幼粒白血病细胞HL60增殖与凋亡的影响

目的研究镰刀菌属真菌产生的倍半萜烯类化合物T-2毒素对体外培养急性早幼粒白血病细胞HL60生长抑制与凋亡诱导的作用。方法体外培养的HL60细胞经0、4、8、16和32μg/ml的T-2毒素处理48h,以MTT法检测T-2毒素对HL60细胞的生长抑制作用;吉姆萨染色观察细胞凋亡形态;流式细胞术(FCM)检测凋亡率;FCM及Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达情况。结果 MTT显示T-2毒素对HL60细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。形态学观察显示早幼粒白血病细胞出现明显凋亡形态特征。FCM定量检测表明,T-2毒素各处理组细胞凋亡率均高于对照组,并随T-2毒素浓度升高而增加。FCM和Western blot结果显示,T-2毒素处理后HL60细胞Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降。结论T-2毒素可剂量依赖地抑制体外培养的HL60细胞增殖并诱导凋亡。