通脉灵有效单体IH764—3对成纤维细胞增殖和功能的影响

通过观察IH764-3对培养成纤维细胞的生长曲线、3H-TdR参入、钙调素水平、生长周期DNA含量、3H-脯氨酸参入、纤维连结蛋白、血小板凝血酶敏感蛋白含量及超微结构的影响,证明IH764-3对成纤维细胞增殖及其胶原等基质合成与分泌功能有直接的抑制作用,探讨了IH764-3抗纤维化的部份作用机理。     

IH764—3对胶原生物合成中脯氨酰羟化的作用

从13天龄鸡胚胎提取原胶原脯氨酰羟化酶,在FeSO_4、2-酮戊二酸、抗坏血酸、过氧化氢酶等辅助因子存在下,将底物(Pro-Pro-Gly)10·9H_2O中的Pro羟化成羟脯氨酰(HOPro)的羟化反应体系,观察IH764-3对胶原生物合成中脯氨酰羟化作用的影响。结果表明,脯氨酰羟化酶催化的原胶原脯氨酰底物(Pro-Pro-Gly)10·9H_2O的羟基化作用可被IH764-3所抑制。在酶促反应标准条件下,IH764-3为0.24mmol/L时,对脯氨酰羟化的抑制率为50.78±16.03％。本实验还证明,IH764-3不能与脯氨酰羟化酶结合,提示IH764-3对酶促脯氨酰羟化的抑制是由于其同酶反应所需的Fe~(2 )形成络合物所致。平衡移动法表明,IH764-3与Fe~(2 )形成的稳定络合物的Fe(2 ):IH764-3摩尔比为1:3,表现稳定常数Ks=1.04×10~(12)。     

764—3对脑损伤所致认知障碍的改善作用及作用机理

用海人酸损伤大鼠双侧尾核并经多种行为学测定，成功地建立了兴奋毒性损伤所致认知障碍模型；观察到中药单体764－3（8mg／（kg·d），ip）能够明显改善尾核损伤大鼠的学习记忆缺陷，并减轻兴奋毒性所致的尾核神经元缺失。拮抗兴奋毒性所致神经细胞膜Na －K －ATP酶和Ca2 －Mg2 －ATP酶活性下降。可能是764－3的部分作用机理。     

麦门冬汤抗肺纤维化作用机制的网络药理学研究

目的:采用网络药理学方法探讨麦门冬汤治疗肺纤维化的潜在作用机制.方法:通过中药分子机制的生物信息学分析工具(BATMAN-TCM)、中医药百科全书数据库(ETCM)获取麦门冬汤的化学成分和潜在作用靶点;通过治疗靶点数据库(TTD)、人类的非线性孟德尔遗传数据库(OMIM)、DRUGBANK数据库获取肺纤维化相关的作用靶...     

1，25-（OH）2D3 对肺纤维化大鼠中PI3K、 AKT、mTOR 表达的影响及其机制研究

目的 观察1,25-（OH）2D3 对特发性肺纤维化（IPF）大鼠中PI3K、AKT、mTOR 表达的影响,并探 讨其对IPF 的作用机制。方法 90 只雄性SD 大鼠随机分为模型组、治疗组及对照组,每组30 只。模型组和治疗组 按5 mg/kg 的剂量气管内注射博来霉素,复制肺纤维化模型,对照组注入无菌生理盐水（200 μl/ 只）。注射 后第2 天起,治疗组腹腔注射1,25-（OH）2D3（2 μg/kg）,模型组和对照组分别腹腔注射1,25-（OH）2D3 溶剂（200 μl/ 只）和无菌生理盐水（200μl/ 只）,均隔天1 次。各组于第14、21 和28 天分别处死10 只,检测 各组大鼠肺组织中羟脯氨酸的含量,实时聚合酶链反应（real-time PCR）和免疫组织化学方法分别从mRNA 水 平和蛋白质水平检测肺组织中PI3K、AKT、mTOR 的表达。结果 模型组和治疗组大鼠肺组织羟脯氨酸的含 量,P I3K 、AKT 、mTOR 3 种基因的转录表达和蛋白质表达量,在第14、21 和28 天均高于对照组（P <0.05）, 且治疗组中的上述指标,在各时间又均低于模型组（P <0.05）。结论 IPF 的发生发展过程中,PI3KAKT- mTOR 通路具有重要作用,1,25-（OH）2D3 对IPF 有一定的治疗作用,其机制可能是通过抑制PI3K-AKTmTOR 通路发挥其治疗作用。     

几种适合药物筛选的抗氧化实验微孔板测定方法及其稳定性研究

目的：建立一系列适用于药物筛选的微孔板抗氧化实验方法。方法：采用SpectraMax M5连续光谱酶标测试仪,建立抗DPPH氧化活性、清除羟自由基实验方法（邻二氮菲-Fe2＋氧化法）、还原能力测定及抗脂质过氧化微孔板抗氧化实验方法。结果：这四种抗氧化微孔板实验方法具有稳定性好,所需试剂种类少、耗材量少,方法简便及可重复性强等共同特点;相对而言,抗DPPH氧化和还原实验两种实验方法在这几方面更具优势,更适合于作为抗氧化药物的大规模初筛基础试验方法。结论：这四种微孔板抗氧化实验方法,可以广泛应用于药物筛选,特别是高通量药物筛选研究。     

肺炎支原体肺炎儿童血清SP-D、sB7-H3浓度变化及其与疾病严重程度的相关性研究

目的:观察肺炎支原体肺炎(MPP)儿童血清肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)、可溶性B7-H3(sB7-H3)的浓度变化,并分析二者与疾病严重程度的相关性.方法:选取邯郸市第二医院2018年7月至2020年7月收治的MPP患儿104例作为MPP组,选取同期体检的健康体检儿童90例作为对照组.比较两组血清SP-D、sB...     

活性维生素D3抑制UUO模型大鼠肾间质纤维化作用的研究及其对TGF-β1，α—SMA表达的影响

目的：探讨活性维生素D3对单侧输尿管梗阻模型（UUO）大鼠肾小管间质纤维化的抑制作用,研究该病理过程中转化生长因子β1（TGF—β1）,α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）的表达变化。方法：36只雄性Wistar大鼠,随机分为三组,活性维生素D。组、假手术组、模型组,每组12只。造模后活性维生素D。组给予罗盖全（骨化三醇）灌胃（3ng／100g）,假手术组及UUO模型组给予等量生理盐水灌胃。三组大鼠于给药后第14天,28d分批（n=6）处死,留取造模侧肾脏。用HE染色及Masson染色法观察肾小管间质纤维化程度,用免疫组化法测定TGF-β1,α-SMA在各组大鼠造模侧肾脏的表达情况。结果：免疫组织化学显示：UUO模型组大鼠的肾脏组织中TGF—β1及α—SMA的表达显著高于假手术组（P〈0．05）,而在活性维生素D3治疗组中,TGF—β1及的n—SMA表达低于UUO模型组（P〈0．05）,肾脏组织形态学显示：模型组肾间质纤维化程度明显高于假手术组,活性维生素D3组肾间质纤维化程度明显小于模型组（P〈0．05）。结论：活性维生素D3能有效抑制UUo大鼠肾间质中TGF—β1及Ⅱ-SMA的表达,从而减轻UU0大鼠肾间质纤维化程度。     

764—3对大鼠实验性肺纤维化的保护作用

给大鼠气管内一次滴注博莱霉素,观察肺部炎症及其修复形成肺纤维化的过程.滴注后第7、21天,可见肺系数及肺组胺含量显著升高。第21天时还有血清丙二醛含量显著升高,而此时肺羟脯氨酸含量无明显改变。提示为亚急性炎症阶段。第60天时,肺羟脯氨酸含量显著升高,表明有肺纤维化形成。764-3治疗可显著缓解博莱霉素所致的上述指标的变化。提示764-3可防止博莱霉素所致肺炎症及其随后发展成肺纤维化。这一作用除直接与其对抗早期的炎症过程有关外,尚不能排除直接地抗纤维化作用。     

764—3急、慢性给药对大鼠肺动脉压作用的比较

比较764－3慢性皮下注射及右心导管法肺动脉直接给药对大鼠慢性缺氧性动脉高压的影响。结果表明,慢性用药可显著降低肺动脉高压大鼠肺动脉压,而肺动脉直接给药则无效。     

764—3对博莱霉素激活肺泡巨噬细胞的抑制作用

采用离体肺泡巨噬细胞(AM)培养法,观察博莱霉素A6(BLMA6)对AM的直接作用及活血化瘀药物764-3对此作用的影响。结果AM与BLMA6共同孵育后,其培养液中β-葡萄糖醛酸酶和中性粒细胞趋化因子的含量明显升高,AM吞噬酵母多糖引起的活性氧释放也明显增加,同时AM的形态结构也有显著改变;而预先经764-3处理的AM与BLMA6共同培养,则上述变化均被抑制。表明博莱霉素可通过直接激活AM而引起肺损伤;而764-3则能对抗博莱霉素对AM的激活作用,因而对肺损伤具有保护作用。     

抗纤一号对肺纤维化大鼠病理形态学及肺功能影响的实验研究

目的：从形态学及肺功能研究肺纤维化的形成过程，为治疗肺纤维化提供依据。方法：采用博莱霉素复制肺纤维化大鼠模型，对空白对照组、模型组、抗纤一号干预组、抗纤一号治疗组、醋酸泼尼松组进行肺功能检查和肺组织形态学观察。结果：抗纤一号干预组、抗纤一号治疗组和醋酸泼尼松组大鼠肺功能与模型组比较均有不同程度的改善，同时病理结果显示各治疗组肺纤维化改变明显好于模型组。结论：抗纤一号能不同程度地预防及阻隔肺纤维化大鼠的病理形成过程，改善大鼠肺功能。     

布洛芬对小鼠肺纤维化的保护作用

  目的 研究布洛芬对博莱霉素诱导的肺纤维化的治疗保护作用。方法 通过气管内滴注博莱霉素复制小鼠肺纤维化模型,实验分为正常对照组、模型组、布洛芬5 mg/kg治疗组、布洛芬10 mg/kg治疗组和布洛芬20 mg/kg治疗组。采集血清行一氧化氮（NO）化学法检测小鼠血清中NO含量;收集肺泡灌洗液行ELISA方法测定肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）含量;留取肺组织行HE染色观察各组小鼠肺组织形态变化,制备肺组织匀浆测定匀浆中丙二醛（MDA）含量;采用RT-PCR和Western blot方法检测肺组织中转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad2和p-Smad2的表达水平。结果 与正常对照组比较,肺纤维化模型组肺组织中发生炎性细胞浸润、肺泡间隔增厚情况,同时血清中NO含量和肺泡灌洗液中炎性因子TNF-α和IL-6含量显著增加,小鼠肺组织中MDA含量也有所增加,TGF-β1和p-Smad2的表达显著升高。经布洛芬给药治疗后,各项生化指标有所下降,同时肺纤维化损伤得以缓解。结论 布洛芬可缓解由博莱霉素诱导的肺纤维化,其作用机制可能与下调NO含量、TNF-α和IL-6等炎性因子含量及调控TGF-β信号通路有关。     

764—3对炎症时肺组织胺含量及成纤维细胞生长的影响

博莱霉素所致肺急性(7d)与亚急性(21d)炎症时,肺内组织胺含量明显升高;而764-3则可使肺组织胺含量下降至接近正常。另外,组织胺对肺成纤维细胞具有时间及剂量依赖性促生长作用,764-3可抑制这一作用。提示组织胺在博莱霉素致肺纤维化中具有一定作用,764-3对这一过程有抑制作用。     

卡托普利对实验性肺间质纤维化的干预作用

目的 :观察血管紧张素转换酶 (ACE)活性在博莱霉素 (BLM)所致大鼠肺间质纤维化过程中的动态变化 ,了解ACE抑制剂卡托普利 (CPT)对大鼠肺纤维化模型的影响。方法 :4 5只SD大鼠随机分为 3组 :对照组、模型组和用药组。模型组和用药组经气管内注入BLM诱导肺纤维化 ,随即分别每日胃管内灌注生理盐水和CPT(6 0mg·kg- 1·d- 1 )进行干预 ;对照组气管和胃管内灌注均以生理盐水代替。各组动物均于气管内灌药后 7,14 ,2 8d分别处死 5只 ,测动物体重及肺湿重 ,取肺组织做HE染色 ,Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化 ,并行图像分析 ;心腔内取血测ACE的活性。结果 :血清ACE活性在气管内灌注BLM后迅速上升 ,第 7d达到高峰 (与对照组比P <0 .0 1) ,随后下降 ,到第2 8d基本恢复正常。CPT能显著降低血清中ACE的活性 ,减少肺内胶原的表达 ,减轻肺泡炎和肺纤维化的程度。结论 :CPT能减轻BLM诱导的大鼠肺泡炎和肺纤维化     

环孢素A对肺纤维化大鼠模型TGF-β1／Smad3表达的影响

目的研究环孢素A（CsA）对大鼠肺纤维化的干预作用及TGF—β1／Smad3信号转导通路的作用机制。方法54只SD大鼠随机分为对照组、模型组和干预组。模型组、干预组经气管内注入博莱霉素（BLM，5mg／kg）诱导肺纤维化模型，干预组次日CsA灌胃进行干预，对照组用生理盐水代替。各组注药后7天、14天和28天3个时间点分别处死6只大鼠。观察肺泡炎及肺纤维化程度；用免疫组织化学法检测转化生长因子β1（TGF-β1）和smad3的表达；TUNEL检测28天各组大鼠肺组织细胞凋亡情况。结果对照组肺泡结构正常，模型组7天时以肺泡炎改变为主，14天时肺泡炎较前有所减轻，28天时以广泛性肺纤维化为主。干预组病理改变与模型组有同一规律，但肺泡炎和肺纤维化程度都轻于模型组。干预组各时间点TGF-β1和smad3表达明显低于模型组（P〈0．05），28天时大鼠肺组织中细胞凋亡指数干预组明显低于模型组。结论环孢素A可下调博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1／Smad3介导的细胞内信号转导途径，减少肺组织上皮细胞的凋亡，最终改善肺间质纤维化。