右美托咪定对心室肌细胞L型钙通道电流的影响

目的观察右美托咪定(DEX)对大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流(ICa-L)的影响,探讨其对心脏电活动影响的机制。方法取SD大鼠,用酶解法分离获得单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录ICa-L,观察不同浓度的DEX(0.6,1.8,5.4,10,200 ng/ml)以及1μmol/L育亨宾(α2肾上腺素受体拮抗剂)单独使用及与10 ng/ml DEX联合使用对ICa-L的影响。结果 0.6,1.8,5.4,10,200 ng/ml的DEX对峰电流的抑制率分别为8.8%±2.4%、14.6%±3.6%、21.4%±8.4%、25.2%±6.4%和32.1%±6.6%,使I-V曲线上移。小剂量(0.6,1.8,5.4 ng/ml)的DEX对ICa-L激活曲线无明显影响(n=6,P>0.05);大剂量(10和200 ng/ml)的DEX可使ICa-L激活曲线右移。0.6,1.8,5.4,10,200 ng/ml的DEX可使ICa-L失活后恢复时间延长。10 ng/ml的DEX可使ICa-L的峰值抑制约25.2%±6.4%,再向电极外液中加入育亨宾后ICa-L平均增加约15%(n=6,P<0.05)。1μmol/L育亨宾灌流前后ICa-L的峰值无差异(n=6,P>0.05)。结论 DEX对心室肌细胞ICa-L具有浓度依赖性地抑制作用,可能是通过细胞膜上的α2肾上腺素受体介导的。     

胺碘酮对模拟缺氧状态下大鼠心室肌细胞瞬时外向和内向整流钾电流的影响

目的通过观察胺碘酮对模拟缺氧状态下急性分离的大鼠心室肌单细胞复极相中瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(IK1)通道的影响,探讨其在该条件下抗心律失常的作用机制。方法使用酶解法分离获取大鼠单个心室肌细胞,通过持续通以模拟缺氧细胞外液建立体外模拟缺氧模型,采用全细胞膜片钳实验技术研究胺碘酮对该条件下Ito和IK1的作用。结果胺碘酮呈剂量依赖性降低Ito和IK1电流幅值,对Ito抑制效应的起始浓度为1μmol/L,100μmol/L时抑制作用达最大,最大抑制幅度为56.78%±4.27%(23.98±2.18pA/pFvs10.38±4.27pA/pF;测试电压为+70mV;P<0.01;n=5),IC50(半数抑制浓度)为74.35μmol/L,但Ito的I-V曲线趋势并没有发生变化,稳态激活和失活曲线几乎不发生移动。胺碘酮对IK1内向电流部分抑制起始浓度为1μmol/L,外向电流部分抑制效应的起始浓度为2μmol/L,其最大抑制幅度分别为58.77%±10.76%(56.32±7.24pA/pFvs23.22±7.30pA/pF;测试电压为-150mV;P<0.01)和33.29%±2.15%(6.70±0.89pA/pFvs4.46±0.93pA/pF;测试电压为+40mV;P<0.01;n=5)。对内向电流成分的IC50为63.75μmol/L,IK1通道的稳态激活曲线无明显改变。结论在大鼠离体心室肌单细胞模拟缺氧条件下,胺碘酮对Ito和IK1电流幅度呈剂量依赖性抑制,有对抗缺氧本身造成的动作电位时程缩短效应;对I内向电流成分的敏感性高于外向成分。     

神经调节蛋白-1对小鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的观察神经调节蛋白-1(NRG-1)对大鼠心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)的影响。方法 C57小鼠取其心脏,经主动脉逆行插管后行Langendorff灌流,以酶解法分离获得单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,记录NRG-1对L型钙电流(ICa-L)的影响。结果 0.05,0.1,0.2μmol/L NRG-1对ICa-L峰电流的抑制率分别为15.3%±2.2%,32.0%±4.7%,52.6%±6.1%(n=6,P0.05),并使电流-电压曲线上移,激活延迟,失活后恢复时间延长。结论 NRG-1通过延迟钙通道的激活,延长失活后恢复时间,抑制心肌细胞ICa-L。     

阿魏酸钠对家兔心室肌细胞钾通道电流的影响

目的:探讨阿魏酸钠对家兔心室肌细胞膜延迟整流钾电流快速与缓慢激活成分(IKr、IKs)、内向整流钾电流(IK1)、瞬时外向钾电流(Ito)的影响.方法:酶解法分离单个家兔心室肌细胞,以经典的Ⅲ类药胺碘酮为对照,采用全细胞膜片钳技术记录浓度为3.0、10.0、30.0,100.0 μmol/L的阿魏酸钠对IKr,IKs、IK1、Ito的作用.结果:阿魏酸钠的作用弱于胺碘酮,二者均可浓度依赖性抑制IKr、ILs时间依赖性外向电流及尾电流(IKr,tail、IKs,tail).不同浓度的阿魏酸钠对IKr,tail的抑制率为:(12.1±2.5)%、(24.1±3.0)%、(47.0±5.8)%及(58.5±8.3)%(n=5,P＜0.05);对IKs,tail的抑制率为:(15.6±6.4)%、(27.1±6.5)%、(45.6±5.8)%及(51.8±6.6)%(n=5,P＜0.05),其对IKr,tail及IKs,tail的半数抑制浓度(IC50)均大于胺碘酮(43.6:3.48 μmol/L,44.9:5.11 μmol/L).30.0、100.0 μmol/L阿魏酸钠及10.0、30.0 μmol/L胺碘酮可使IK1的I-V曲线左移,在-100 mV及-20 mV测试电压下,阿魏酸钠对IK1内向、外向电流抑制率小于胺碘酮(n=5,P＜0.05).阿魏酸钠与胺碘酮均不影响Ito及其I-V曲线.结论:阿魏酸钠复合阻滞复极期多种钾电流,可能是其抗心律失常作用的电生理机制之一.     

伊布利特对兔急性心肌梗死后梗死周边区心外膜心室肌细胞L型钙电流的影响

目的观察伊布利特对急性心肌梗死(AMI)后一周心室肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响。方法兔开胸,左前降支结扎造成AMI,1周后酶解分离梗死周边区心外膜心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录10-6mol/L伊布利特细胞外液(伊布利特组)对梗死周边区心外膜心室肌细胞ICa-L活性的影响,并与正常对照组(对照组)及AMI但未灌流伊布利特组(AMI组)比较。结果①AMI 1周时兔梗死周边区心室肌细胞ICa-L受到抑制,电流密度-电压曲线(I-V)上移,ICa-L电流密度峰值降低[-3.52±0.91 pA/pF(n=10)vs-5.68±1.53 pA/pF(n=10),P<0.05];伊布利特组电流密度峰值为-4.84±1.22 pA/pF(n=8),较AMI组显著增大(P<0.05),与对照组比较,虽有减小,但无差异(P>0.05)。②AMI组、伊布利特组ICa-L失活曲线明显左移,以AMI组左移更加明显,对照组半数失活电压(V0.5)为-32±4 mV(n=10),AMI组V0.5增加为-46±7 mV(n=10,P<0.05),伊布利特组V0.5为-36±6mV(n=8),与对照组比较无差异(P>0.05)。结论AMI后1周梗死周边带心室肌细胞L型钙通道受阻滞,伊布利特对缺血引起的ICa-L的异常有明显改善作用。     

伊布利特对兔左室中层细胞L型钙电流的影响

目的观察伊布利特对正常心肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响。方法用全细胞膜片钳技术记录10-6,10-5mol/L伊布利特细胞外液对兔正常左室中层心肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)活性的影响。结果①伊布利特灌流后ICa-LI-V曲线下移,低、高剂量伊布利特灌流后电流密度峰值明显增加(-8.34±2.67,-10.50±3.81pA/pFvs-5.68±1.53pA/pF,P均<0.01),且高剂量较低剂量灌流时增加更明显。②低、高剂量伊布利特灌流后失活曲线右移,且高剂量时右移更明显。高剂量时半数失活电压(V0.5)较低剂量和用药前显著降低,而低剂量与用药前无差异。三种状态的激活曲线无差异。结论伊布利特可能呈浓度依赖性影响心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)活性。     

不同旋体氨氯地平对大鼠心室肌细胞L型钙离子流和细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨不同旋体氨氯地平(Aml)对大鼠心室肌细胞L型钙离子流(ICa-L)及细胞内钙离子浓度的影响。方法采用酶消化法分离大鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术分别记录加入0.1,0.5,1,5和10μmol/L左旋、右旋和混旋Aml后大鼠心室肌细胞ICa-L及通道动力学参数的变化;采用荧光探针Fura-2/AM测定细胞内钙离子浓度,观察加入1,5,10,50和100μmol/L左旋、右旋和混旋Aml后细胞内钙离子浓度的变化。结果加入不同浓度左旋和混旋Aml后,随着浓度增加,ICa-L及峰值电流呈浓度依赖性阻滞、I-V曲线上移、稳态激活曲线和稳态失活曲线左移、失活后恢复时间延长(P<0.05);细胞内钙离子浓度逐渐降低,左旋和混旋Aml对细胞内钙离子浓度影响的半效抑制浓度分别为8.13和16.19μmol/L(P<0.05),但不同浓度右旋Aml对ICa-L、通道动力学参数和细胞内钙离子浓度均无影响(P>0.05)。结论左旋和混旋Aml对ICa-L有阻滞作用,而右旋Aml对ICa-L无阻滞作用。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠单个心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)的影响。方法通过全心灌流酶解法分离大鼠心室肌细胞,利用全细胞膜片钳技术,记录干预前及20 ng/L,200 ng/L AngⅡ干预后心室肌细胞的ICa-L及对失活曲线的影响。结果①AngⅡ可激活ICa-L,20 ng/L及200 ng/L AngⅡ能使心肌细胞ICa-L电流-电压关系曲线明显下移,峰电流密度增加(-7.05±1.35 pA/pF,-9.74±1.52 pA/pF vs-5.49±0.82 pA/pF,n=10,P均<0.05),但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变。②AngⅡ能使ICa-L失活曲线明显右移。结论AngⅡ对ICa-L具有激活作用。这可能是其对心血管作用的重要机制之一。     

卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的研究卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流(ICa,L)的影响,探讨卡维地洛在离子通道水平的药理机制。方法用急性酶解法获得大鼠单个心室肌细胞,用标准全细胞膜片钳技术记录ICa,L,观察不同浓度卡维地洛对ICa,L的影响。结果①卡维地洛呈浓度依赖性抑制ICa,L,1μmol/L卡维地洛能使心肌细胞ICa,L电流-电压关系曲线明显上移,峰电流密度减少(7.80±0.65pA/pFvs4.89±0.52pA/pF,n=10,P<0.05),但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变。②卡维地洛能使ICa,L失活曲线明显左移,但对ICa,L激活和复活曲线无明显影响。③0.1μmol/L卡维地洛对钙电流无明显影响,但可以明显阻断异丙肾上腺素增加钙电流效应。同时,卡维地洛对钙电流的抑制效应不能被哌唑嗪和普奈洛尔阻断。结论卡维地洛呈浓度依赖性地抑制心室肌细胞L型钙通道。     

米诺环素对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的 研究米诺环素对大鼠心室肌细胞L型钙电流（Ica-L）动力学特性的影响.方法 以酶解法分离获得单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,研究米诺环素对Ica-L的影响.结果 10、50、250 μmol/L米诺环素对峰电位的抑制率分别为11%±5.86%,54.79%±6.32%,71.73%±5.29%,使Ica-LI-U曲线上移,激活曲线右移,并延长失活后恢复时间.结论 米诺环素通过延长钙通道的激活及失活后恢复时间,抑制心肌细胞Ica-L,预防钙超载.     

亚麻酸对心力衰竭人心房肌细胞瞬时外向钾电流的影响

探讨亚麻酸对心力衰竭病人心房肌细胞瞬时外向钾电流 (Ito)的作用。应用膜片钳全细胞记录技术 ,记录细胞外应用亚麻酸 (十八碳二烯酸 )前后人心房肌细胞Ito。结果表明 :①亚麻酸对人心房肌细胞的Ito抑制作用表现为浓度依赖性 ,2 .5 ,5及 10 μmol/L的抑制率分别为 16 %± 4%、2 8%± 6 %和 5 1%± 6 % (P <0 .0 5 ) ,但无频率依赖性。②用药前后Ito的激活曲线几乎重叠 ,5 0 %的通道激活电压分别为 19.5± 1.7和 17.6± 1.4mV(P >0 .0 5 ) ;用药后的电流失活曲线左移 ,V1/2 电压为 - 33.3± 2 .4和 - 44 .4± 3.1mV ,即左移 11.2± 1.2mV(P <0 .0 1)。③Ito恢复 5 0 %的时间延长 ,即从 39.3± 3.4到 85 .1± 5 .8ms(P <0 .0 1)。结论 :亚麻酸对心力衰竭病人心房肌细胞Ito具有抑制作用 ,延长该通道的恢复时间     

兔急性心肌梗死后梗死周边带心肌细胞L-型钙通道的变化

探讨L型钙通道在急性心肌梗死 (AMI)后室性心律失常发生中的作用及其机制。方法 :以开胸冠状动脉结扎法制备兔AMI模型 ,1周后处死动物分离心室肌细胞 ,采用全细胞膜片钳记录技术观察梗死周边缺血带心外膜心室肌细胞L型钙通道电流 (ICa L)的变化 ,以正常心肌ICa L为对照。结果 :AMI 1周时兔梗死周边区心室肌细胞L型钙电流受到抑制 ,其电流峰值由正常状态下的 - 5 .58± 1 .53pA/pF(对照组 ,n =1 0 )降至 - 3 .52± 0 .93pA/pF(AMI组 ,n=6) ,最大峰电流下降 2 9.1 % ,P <0 .0 5 ,I V曲线上移 ;其失活曲线左移 ,半数最大失活电位由 - 1 3 .1± 4 .2mV左移至 - 2 5 .9± 7.0mV ,P <0 .0 5 ,失活速度加快。结论 :AMI后 1周梗死周边带心外膜心室肌细胞L型钙通道受抑制 ,可能为AMI后室性心律失常发生的机制之一。     

缬草单萜氧化物对兔单个心室肌细胞L-型钙电流的影响

利用全细胞膜片钳记录技术研究30μg/L和100μg/L缬草单萜氧化物(VMO)对兔单个心室肌细胞L型钙电流(ICaL)和动作电位的影响。结果:30μg/L和100μg/L的VMO使兔心室肌细胞ICaL峰值由6.04±0.59pA/pF分别减至3.99±0.31pA/pF和2.31±0.24pA/pF(n=8,P<0.01);VMO使ICaL的电流电压曲线上移,但不改变其激活电位、电位峰值和反转电位;VMO还使钙电流失活曲线左移。30μg/LVMO可使动作电位时程(APD)明显缩短,APD50和APD90分别缩短了50.3%和29.6%(n=16,P<0.05),而静息电位和动作电位幅值无明显改变。结论:VMO对LCaL具有浓度依赖性阻滞作用。这可能是其对心血管作用的重要机制之一。     

乙酰胆碱诱发的豚鼠心室肌反跳作用研究

观察乙酰胆碱 (ACh)诱发的豚鼠心室肌肌力及钙电流的反跳作用 ,并探讨其作用机制。采用豚鼠离体左室乳头肌观察 1μmol/LACh单独对心室肌收缩力 (Fc)的影响及在 10nmol/L异丙肾上腺素 (Iso)存在时对Fc的影响 ,并应用膜片钳全细胞记录方法分别观察 1μmol/LACh和 1μmol/LACh +10nmol/LIso及迅速洗脱ACh对豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流 (ICa L)的影响。结果 :1μmol/LACh对心室肌Fc有直接抑制作用 ,抑制率为 30 .8%± 10 .7%(P <0 .0 5 ) ,而快速洗脱ACh后 ,Fc反跳性增强了 2 5 .5 %± 10 .3% (n =7,P <0 .0 1)。而在应用 10nmol/LIso后 1μmol/LACh对Fc有间接的抑制作用 ,快速冲洗ACh后亦引起Fc的反跳性增强 ,与Iso组相比增强了 2 7.1%±13.2 % (n =7,P <0 .0 1)。 1μmol/LACh对心室肌细胞基础峰电流无明显影响 (n =8,P >0 .0 5 ) ;而以基础ICa L峰值(931± 16 1pA)作对照 ,在加入 10nmol/LIso后 ,ICa L峰电流增强到 1889± 331pA(n =7,P <0 .0 1) ;再给予 10nmol/LIso +1μmol/LACh快速灌流 2min ,峰电流降低为 15 12± 2 0 2pA(P <0 .0 1) ,用含 10nmol/LIso的细胞外液快速洗脱ACh ,峰电流增强到 2 10 7± 2 0 5pA ,较Iso组反跳性增强了 15 .8%± 4 .0 % (n =7,P <0 .0 1)。结论 :ACh对豚鼠心室肌收缩     

溴苄基四氢小檗碱对豚鼠心室肌离子通道的影响

探讨溴苄基四氢小檗碱 (CPU86 0 35 )对豚鼠心室肌细胞钾离子通道及L 型钙离子通道的作用 ,探讨其抗心律失常的离子通道机制。取 2 0只健康豚鼠 ,雌雄不拘 ,体重 2 5 0～ 30 0g ,双酶法酶解获取单个豚鼠心室肌细胞 ,采取用药前后自身对照及全细胞膜片钳记录方法观察CPU86 0 35对正常豚鼠心室肌细胞延迟整流钾离子流 (IK)、内向整流钾离子流 (IK1)及L 型钙离子流 (ICa L)的影响。结果 :CPU86 0 35对豚鼠单个心室肌细胞IK 呈浓度依赖性抑制作用 ,半数抑制浓度 (ID50 )为 5 6 μmol/L ;CPU86 0 35对IK1无明显影响。CPU86 0 35呈剂量依赖性抑制ICa L,ID50 为 6 5μmol/L。CPU86 0 35对ICa L的抑制依赖于保持电位 (HP) ,HP =- 4 0mV和 - 80mV时 ,75 μmol/LCPU86 0 35对ICa L的抑制率分别为 0 .4 92 2± 0 .0 2 1和 0 .6 377± 0 .0 36 6。结论 :CPU86 0 35对正常豚鼠心室肌细胞IK、及ICa L均有阻断作用 ,这种多离子通道的阻断剂可有效抗快速心律失常 ,并且不会引起动作电位时程和有效不应期的过度延长 ,从而减少药物的致心律失常作用。     

酚噻嗪对豚鼠心室肌细胞动作电位时程和跨膜离子电流作用的研究

通过观察酚噻嗪对豚鼠单心室肌细胞动作电位时程 (APD)及动作电位形成过程中主要离子通道的作用 ,探讨其诱发长QT间期 (LQT)综合征及室性心律失常的可能机制。采用膜片钳技术中的Nystatin 破膜法观察酚噻嗪对豚鼠心室肌细胞APD的作用 ,采用全细胞技术研究酚噻嗪对心室肌细胞动作电位形成过程中主要离子电流的作用。结果 :①在 5Hz剌激频率时 ,10 0 μmol/L酚噻嗪使APD90 延长 2 5 .8%± 3.8% (n =10 ,P <0 .0 1) ,作用呈部分可逆性 ;②在分别持续 2 5 0ms和 10 0 0ms至不同膜电位水平去极化的实验中 ,酚噻嗪对延迟整流钾电流 (IK)尾电流有明显的抑制作用 ,在 +6 0mV持续 2 5 0ms的去极化时 ,5 0 .6 4 %± 6 .4 6 %的IK尾电流受抑制 (n =7,P <0 .0 5 ) ,这一抑制作用呈浓度依赖性 ,半抑制浓度 (IC50 ) =2 5 .98μmol/L ,Hill常数为 0 .75。当采用IK快速激活成分 (IKr)的特异性阻断剂E 4 0 31阻断IKr后 ,酚噻嗪对IK尾电流的阻断作用消失。 30 0 μmol/L酚噻嗪对IKr的抑制作用仍弱于 0 .5mmol/LE 4 0 31。在 10 0 0ms,至 +2 0mV去极化的情况下 ,酚噻嗪对IK尾电流的IC50 为 2 5 .98μmol/L ,这一抑制作用可部分洗脱。受酚噻嗪抑制的电流与IK中IKr具有相似的通道动力学特性 ;③未发现酚噻嗪对IK稳态电流、IK?     

胺碘酮对大鼠肥厚心肌细胞急性电生理作用的研究

目的研究胺碘酮对正常心肌与肥厚心肌细胞急性电生理作用的区别,探讨胺碘酮在病态心肌应用中的合理性。方法SPRAGUEDAWLAY(SD)大鼠缩窄腹主动脉,建立左心室肥厚模型。应用膜片钳技术,选用不同浓度胺碘酮灌流正常心肌细胞和肥厚心肌细胞,观察内向电流:钠流(INA)、L型钙流(ICAL)和外向电流:延迟整流性钾流(IK)、瞬间复极钾流(ITO)、内向整流性钾流(IK1)。以多非利特(DOFETILIDE)阻滞延迟整流性钾流的快速成分(IKR),所测IK代表延迟整流性钾流的缓慢成分(IKS)。结果(1)肥厚心肌细胞电重构特征为肥厚心肌INA、ICAL与正常心肌相近,但肥厚心肌的外向电流较正常心肌减小,表现在IK、IKS、ITO和IK1的电流密度降低。(2)胺碘酮50ΜMOL/L抑制正常心肌细胞(59.0±4.4)%的ICAL,对肥厚心肌ICAL的抑制不明显,仅抑制(16.7±8.0)%的ICAL;胺碘酮抑制正常心肌细胞和肥厚心肌细胞INA的半抑制浓度(IC50)分别为9.2ΜMOL/L和5.9ΜMOL/L;胺碘酮50ΜMOL/L阻滞正常心肌细胞和阻滞肥厚心肌细胞ITO分别为(55.9±5.5)%和(23.0±2.8)%;胺碘酮对正常心肌细胞或肥厚心肌细胞IK1的影响较小;胺碘酮对IKS阻滞程度,肥厚心肌大于正常心肌,胺碘酮10ΜMOL/L抑制正常心肌和肥厚心肌IKS分别为(21.6±5.6)%和(42.7±9.2)%。提示胺碘酮阻滞肥厚心肌细胞INA、IKS的敏感性大于正常心肌细胞,阻滞ICAL、ITO、IK1的敏感性又低于正常心肌细胞。结论胺碘酮对电重构的肥厚心肌细胞急性电生理反应,有利于其在抗心律失常中的应用。     

心肌梗死后残存心室肌细胞L型钙通道的改变

目的　探讨L型钙通道在急性心肌梗死 (AMI)后室性心律失常发生中的作用及其机制。方法　开胸冠脉结扎制备兔AMI模型 ,于 1周和 2个月处死动物分离心室肌细胞 ,以膜片钳技术记录梗死及周边区心外膜细胞L -型钙通道电流 (ICa -L)的变化。结果　AMI兔梗死周边区心外膜细胞L型钙电流受到抑制 ,电流密度 -电压关系 (I -V)曲线上移 ,其峰值电流密度在正常对照组、AMI后 1周和 2个月分别为 - ( 5 5 8± 1 5 3) pA /pF(n =10 )、- ( 3 5 2± 0 93) pA/ pF (n =6 ,与对照组比较P <0 0 5 )和 - ( 4 84± 1 4 8)pA/ pF(n =11,与对照组比较P <0 0 5 ) ,但I -V曲线的形态轨迹不变。其失活曲线左移 ,失活速度加快 ,半数最大失活电位 3组分别为 -( 13 1± 4 2 )mV、- ( 2 5 9± 7 0 )mV和 - ( 2 1 3± 5 6 )mV ,P <0 0 5。结论　AMI后梗死周边带心外膜细胞L型钙通道受抑制 ,可能为AMI后室性心律失常发生的机制之一 ;AMI后 2个月钙通道的异常程度减轻 ,有恢复正常的趋势     

心肌缺血再灌注损伤和维拉帕米预处理对大鼠心功能和心肌细胞内钙荧光强度以及L型钙电流的影响

目的 探讨心肌缺血再灌注(I/R)损伤和维拉帕米预处理对大鼠心脏功能和心肌细胞内钙荧光强度和L型钙电流(I_(Ca-L))的影响.为临床认识I/R损伤发生机制和防治措施提供实验依据.方法 利用Langendorff灌流系统建立大鼠离体心脏I/R模型,选取SD大鼠20只分离心脏.正常组(n=6)的心脏由蠕动泵向心脏泵入37℃正常Tyrode液30 min,采集数据完成;I/R组(n=7)的心脏先向心脏泵入37℃正常Tyrode液30min,后停灌30 min,再用正常Tyrode液再灌注心脏30min,完成I/R过程;维拉帕米组(n=7)的心脏先用正常Tyrode液灌流心脏10 min,待各监测指标稳定后,在正常Tyrode液中加入20 μmol/L维拉帕米灌注心脏30 min,然后停灌30 min,再灌注心脏30 min,采集数据.用酶解法分离单个心肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜加Fluo-3/AM荧光染色技术和全细胞膜片钳技术分别观察心肌细胞内Ca~(2+)荧光强度和I_(Ca-L)大小.结果 大鼠心脏经I/R损伤后,收缩无力,舒张顺应性差,心律失常频繁发生,心功能指标明显减弱.单个心肌细胞内Ca~(2+)荧光非常强烈(与正常组相比,P<0.01),细胞产出量明显减少,形态特征发生改变,I_(Ca-L)记录难度大,要求技术高,在电压钳制方式下,I_(Ca-L)的最大电流密度显著减小(与正常组相比,P<0.01),I-V曲线显著上抬.20μmol/L维拉帕米预处理可使心脏收缩和舒张顺应性流畅,心律失常发生明显减少,与I/R相比,左心室发展压恢复明显增加,再灌注痉挛度显著降低(均为P<0.01).心肌细胞内Ca~(2+)荧光强度明显减弱(P<0.01),分出细胞质量好,可供长时间记录I_(Ca-L).维拉帕米预处理能明显抑制I_(Ca-L),最大电流密度发生显著改变(与正常组相比,P<0.01;与I/R组相比,P<0.05),I-V曲线处在中部.结论 I/R损伤能引起心功能下降和心律失常发生,其机制可能与心肌细胞内钙超载有关.维拉帕米预处理通过减少I_(Ca-L)内流,使心脏处在抑顿中和避免Ca~(2+)诱导Ca~(2+)释放造成细胞内钙超载,起到抗I/R损伤作用.