地塞米松对哮喘小鼠肺组织中转录因子RORγt mRNA表达的干预作用

目的:初步探讨地塞米松对哮喘小鼠模型肺组织中Th17细胞转录因子维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)mRNA表达的影响.方法:采用卵清蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型,BALB/c小鼠30只随机分为正常对照组、哮喘组、地塞米松治疗组各10只.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)、血清中白细胞介素-17(IL-17)水平;无创肺功能体描仪检测小鼠气道反应性;HE染色评价各组小鼠气道炎症程度;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织IL-17、RORγt mRNA表达水平.结果:哮喘组小鼠肺组织RORγt mRNA、IL-17水平高于对照组(P<0.01),地塞米松治疗组RORγt mRNA、IL-17水平低于哮喘组(P<0.05).结论:地塞米松可抑制哮喘小鼠肺组织RORγt表达,阻止Th17的分化,从而减少IL-17的分泌,减轻哮喘气道炎症反应.     

褪黑素促进哮喘小鼠肺组织STAT4的表达及抑制气道炎症

目的 探讨褪黑素(MT)对哮喘小鼠肺组织信号传导子和转录激活子4(STAT4)表达的影响及其在气道炎症中的作用.方法 最后1次雾化激发后1 h行左肺支气管肺泡灌洗计数炎性细胞;免疫组织化学和实时定量PCR分别检测右肺组织STAT4蛋白及其mRNA的表达;酶联免疫吸附试验检测外周血IL-12水平.结果 (1)模型组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞总数和EOS较对照组明显增多,肺组织STAT4蛋白及其mRNA表达较对照组明显降低;MT组以上指标均得到明显缓解(P<0.01);(2)哮喘小鼠STAT4蛋白及其mRNA的表达均与BALF中EOS呈高度负相关(r=-0.754,r=-0.755;P<0.01),外周血IL-12水平与STAT4蛋白表达呈高度正相关(r=0.742,P<0.01).结论 MT能通过诱导哮喘小鼠肺组织STAT4基因的转录、翻译,促进外周血IL-12产生,抑制EOS等炎性细胞浸润,显著抑制气道炎症.     

胃癌患者外周血单个核细胞RORγt和IL-17 mRNA水平的检测及临床意义

目的 检测胃癌患者外周血中单个核细胞(PBMC)中转录因子RORγt和细胞因子IL-17的表达水平及血浆IL-17的表达,探讨Th17细胞特异性RORγt及IL-17的变化在胃癌临床监测中的意义.方法 收集43例胃癌患者外周血标本,40例健康志愿者标本;实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测患者PBMC中RORγt和IL-17 mRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-17的表达;采用直线相关检验方法对健康人群和胃癌患者转录因子RORγt和IL-17表达水平进行相关性分析.结果 胃癌患者外周血PBMC的RORγt、IL-17 mRNA表达水平均明显高于健康对照组(P＜0.05),且二者呈现明显正相关(P＜0.01);胃癌转移组与未转移组相比,RORγt和IL-17 mRNA明显升高(P＜0.05),此外,血浆IL-17的表达也明显升高(P＜0.01).结论胃癌患者PBMC中RORγt和IL-17 mRNA表达水平及血浆IL-17明显升高,提示Th17细胞与胃癌的发生发展可能存在着一定的关系.     

粘附分子与哮喘气道炎症细胞的迁移

近年研究提出，粘附分子作为前炎症物质在支气管哮喘发病中起重要的作用，本文就粘附分子在哮喘气道炎症细胞的迁移，特别是选择性地介导嗜酸性，嗜碱性粒细胞和Ｔ细胞跨内皮迁移，以及粘附分子在哮喘中的研究进展做一综述。     

气道上皮细胞上哮喘变应性炎症

气道上皮细胞在哮喘变应性炎症发生中作一种效应细胞，参与介导气道内各种炎性细胞的生存、趋化和活化，它主要通过释放各种细胞因子、炎性介质、趋化因子和粘附分子等对地道变应性炎症发生起重要作用，同时气道上皮细胞又是糖皮质激素治疗哮喘的靶细胞，在哮喘治疗中发挥重要作用。     

RORγt基因启动子的鉴定和特征分析

目的以RORγt转录起始位点5’上游4.8 kb基因序列为研究对象,初步鉴定分析是否存在RORγt单独的启动子,并且探讨β-Catenin/Tcf1信号途经对RORγt启动子转录活性的影响。方法用带有不同长度的5’上游基因的5个报告质粒,与pSV-40-renilla Luc共转染Jurkat、EL-4、NIH 3T3和293T细胞系,与报告质粒的空载相比较,根据荧光强度的相对值的大小确定启动子存在的可能性和所在的位置;利用野生型β-Catenin、激活突变型β-Catenin和Tcf1表达质粒及RORγt启动子报告载体共转染,观察β-Catenin/Tcf1信号途径对RORγt启动子活性的影响。结果不同长度的启动子报告质粒在Jurkat、EL-4、NIH 3T3和293T细胞中均呈现启动子活性,其中所有报告质粒在Juakat和EL-4等T细胞系中的活性均高于其他2个上皮细胞系,而RORγt上游0.5 kb的报告质粒启动子活性在所有的细胞系中均呈最高活性。野生型β-Catenin、激活突变型β-Catenin和Tcf1对RORγt启动子报告有强激活作用。结论 RORγt转录表达由独立启动子控制,β-Catenin/Tcf1信号途径能够增强该启动子的转录活性。     

原癌基因表达与哮喘气道炎症

目的:观察原癌基因表达与气道炎症细胞浸润的关系。方法:卵蛋白致敏豚鼠,复制哮喘模型。Dot-blot\,Northern-blot分子杂交及免疫组织化学技术观察哮喘发作前、后豚鼠气道上皮及肺组织中c-fos\,c-myc\,c-jun和c-sis的表达及其与炎症细胞浸润的关系。结果:正常豚鼠气道及肺组织中c-fos\,c-mycmRNA无或很少表达,极少炎症细胞浸润。哮喘发作后,豚鼠气道上皮及肺组织c-fos\,c-mycmRNA表达明显增加。免疫组织化学研究显示Fos、Myc、Jun及Sis在正常豚鼠气道及肺组织低水平表达,哮喘发作后即刻,4种原癌基因表达产物明显增加,气道内有少量淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞浸润;12-24h,上述细胞浸润加重,粘膜下层及粘膜上皮内以中性粒细胞和嗜酸性粒细胞浸润为主。结论:原癌基因表达与气道炎症在哮喘发病中有密切关系。     

HSP70/CD80嵌合DNA疫苗对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的作用

目的 研究HSP70/CD80嵌合DNA质粒对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的作用,为安全可靠的新型免疫调节性疫苗奠定基础.方法 将40只雌性健康BALB/c小鼠随机分为4组:对照组、哮喘组、pcDNA3.1载体组、HSP70/CD80嵌合DNA疫苗组,每组10只.用HSP70/CD80嵌合疫苗免疫小鼠后,建立鸡卵清蛋白致敏的小鼠哮喘模型,观察其气道阻力变化,支气管肺泡灌洗液中IL-13、IFN-γ含量的变化.取肺组织进行病理组织学分析,观察肺内炎症情况.结果 HSP70/CD80嵌合DNA疫苗免疫小鼠后,能有效减轻气道炎症(P＜0.05),降低气道阻力(P＜0.05),肺泡灌洗液中IFNl的分泌增加(P＜0.05),IL-13降低.结论 HSP70/CD80嵌合DNA疫苗可促进免疫反应向Th1偏移并增加IFN-γ的生成,减轻气道炎症,降低气道阻力,这为过敏性哮喘新型免疫调节性疫苗的机制及应用研究提供了实验资料.     

抗SH2-Bβ抗体可减轻哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性

目的:研究SH2-Bβ在支气管哮喘发病中的作用.方法:SH2-Bβ被阻断后,观察哮喘小鼠肺泡灌洗液中细胞数、应用酶联免疫吸附实验肺泡灌洗液、血清及脾细胞培养液中IgE、IL-4含量变化.应用小鼠肺功能仪检测气道阻力的变化.结果:同哮喘组比,anti-SH2-Bβ组:1)气道阻力明显降低(P＜0.01);2)肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸细胞数明显降低(P＜0.01);3)血清IgE及脾细胞培养液中IgE、IL-4含量明显降低(P＜0.01).结论:SH2-Bβ参与哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的发病机制.阻断SH2-Bβ可能成为治疗过敏性哮喘的有效新方法.     

乳胶致小鼠气道炎症的研究

目的：以乳胶为致敏原，建立具有哮喘主要特征的小鼠模型，研究乳胶与气道炎症之间的关系。方法：乳胶腹腔注射与滴鼻诱发BALB／C小鼠气道炎症，在激发后2，4小时行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数分类、肺组织病理检查、血清总IgE及乳胶特异性IgE(sIgE)测定并检测IL-5、IFN-γ的表达。结果：乳胶诱发后，实验组小鼠BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞百分比升高；肺组织病理切片示支气管上皮增生、脱落，粘液腺分泌现象，支气管痉挛、收缩，炎症细胞浸润；血清总IgE及乳胶sIgE水平升高；BALF及肺组织局部IFN-γ减少，IL-5增高。结论：用乳胶蛋白作为致敏原，采用腹腔致敏与多次滴鼻激发可使BALB/C小鼠发生气道炎症，具有与变应原诱导的人类哮喘迟发反应相一致的主要特征：气道变应性炎症；外周血IgE浓度升高；肺组织中Th2型CK表达占优势。     

Apyrase减轻过敏性哮喘小鼠气道炎症及气道重塑

目的探讨apyrase(三磷酸腺苷二磷酸水解酶)对过敏性哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的作用。方法采用C57BL/6雌性小鼠建立鸡卵清蛋白(OVA)致敏和激发的过敏性哮喘模型,并给予apyrase处理;以非致敏的同背景雌性小鼠作为对照。于最后1次激发24~48 h,完成小鼠气道高反应性测定、支气管肺泡灌洗及取肺组织。病理学方法评价肺组织气道炎症、杯状细胞及气道重塑,瑞氏吉姆莎染色并计数灌洗液的分类细胞,酶联免疫吸附法测定灌洗液细胞因子,实时定量PCR法测定肺组织转录因子(GATA3)水平。结果 Apyrase减轻哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞炎症,降低气道炎性细胞、Th2相关细胞因子及肺组织GATA3核酸水平;减轻气道上皮杯状细胞增生及胶原沉积。结论 Apyrase可减轻小鼠过敏性哮喘的气道炎症及气道重塑。     

IL-17A抗体抑制变应性鼻炎鼠模型中IL-17A及RORγt并升高Foxp3 mRNA表达

目的：探讨IL-17A抗体对小鼠变应性鼻炎鼻黏膜中IL-17A、RORγt、Foxp3 mRNA水平的影响及意义。方法：以卵清蛋白致敏的Balb/c小鼠变应性鼻炎模型作为实验组,同期以生理盐水替代作为对照组,使用IL-17A抗体治疗作为治疗组。实时定量PCR方法检测三组小鼠鼻黏膜中IL-17A、RORγt、Foxp3mRNA的含量。结果：实验组中RORγt以及IL-17AmRNA水平均较对照组升高(P<0.05),治疗组中RORγt以及IL-17AmRNA的含量均低于实验组(P<0.05)。而实验组中Foxp3 mRNA水平较对照组下降(P<0.05),治疗组中Foxp3 mRNA的含量高于实验组(P<0.05)。结论：IL-17A抗体抑制变应性鼻炎鼠模型中IL-17A及RORγt mRNA水平并升高Foxp3 mRNA表达水平。     

BCG对哮喘小鼠气道炎症反应的影响

目的：探讨卡介苗(BCG)对卯蛋白(OVA)致敏小鼠肺组织中T细胞的在体调节及其对气道炎症的作用。方法：将30只BALB／c小鼠分为3组，第1组吸入雾化的OVA(1次／(1．20min／次，连续10d)，建立致敏模型。第2组(对照)吸入雾化的生理盐水(时间和次数同第1组)；第3组(治疗组)于致敏前10d及14d，各皮内注射BCG 1次，致敏后6d吸入雾化的纯蛋白衍生物(PPD)。用SABC免疫组化法，检测肺组织中CD4^ 、CD8^ 及IFN—γ^ 细胞的变化，以及肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细咆的变化。结果：OVA致敏组小鼠肺组织中CD4^ T细胞增加，CD8^ T细胞无明显变化，主要表现为IFN—γ^-／CD4^ T细胞数的增加，IFN—γ^ ／CD4^ 细胞的比例降低。BCG治疗后，肺组织中CD4^ T细胞减少，CD8^ T细胞数大量增加；IFN—γ^ ／CD4^ 细胞的比例明显增大；BALF中炎性细胞数减少。结论：BCG可在体上调Th1细胞，减轻实验性哮喘动物气道的炎症反应。     

哮喘小鼠气道上皮TSLP表达及激活DCs加重气道炎症的研究

目的 研究支气管哮喘小鼠气道上皮中胸腺间质淋巴细胞生成素(TSLP)表达,探讨其对哮喘小鼠肺部炎症的影响.方法 BALB/c小鼠分为生理盐水对照组、哮喘模型组和TSLP中和抗体干预组.通过气道反应性和肺组织病理学评价哮喘模型;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中IL-4、IL-5和IL13的含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定肺组织中TSLP mRNA的表达;免疫组化及Western blot法测定肺组织中TSLP蛋白的表达;流式细胞术检测BALF中树突状细胞(OCs)表面CD40、CD80、CD86的表达水平.结果 小鼠气道反应性增高和肺组织病理学检查结果均符合哮喘的典型表现证实造模成功;哮喘组BALF中IL-4、IL-5和IL-13的水平显著高于正常组(P<0.05),且TSLP与其成正相关;与正常对照组相比,哮喘组气道上皮TSLPmRNA和蛋白高表达,两组间差异有统计学意义(P<0.05);哮喘组BALF中DCs表面CD40、CD80、CD86表达明显高于正常组(P<0.05).TSLP中和抗体干预后,BALF中DCs表面CD40、CD80、CD86表达明显减低,并进一步减少IL-4、IL-5和IL-13的表达.结论 哮喘气道上皮中TSLP表达增高,TSLP通过上调DCs表面CD40、CD80、CD86的表达,激活DCs诱导CD4~+T细胞向Th2分化发育,与加重哮喘的气道炎症有关;TSLP抗体干预可阻断DCs的活化,减少Th2细胞因子的分泌,这些因素可能与减轻哮喘炎症反应有关,为哮喘治疗途径提供新的思路.     

蚓激酶对哮喘小鼠免疫相关转录因子T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3的影响北大核心CSCD

目的:观察蚓激酶对哮喘小鼠炎症因子IL-6、TGF-β、IL-1β、TNF-α水平和免疫相关转录因子T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白表达的影响。方法:40只BALB/c雄性小鼠随机分为4组:空白对照组(空白组)、哮喘模型组(模型组)、地塞米松组(地米组)和蚓激酶组,每组10只。第1、14天模型组、地米组和蚓激酶组腹腔注射OVA+Al(OH)3致敏,21~27 d雾化吸入5%OVA建立哮喘模型,每次雾化激发1 h后,地米组、蚓激酶组分别灌胃给予地塞米松溶液、蚓激酶溶液治疗7 d,空白组、模型组灌胃等量生理盐水。末次给药24 h后处死取材,HE染色观察肺组织病理学改变,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6、IL-1β、TGF-β、TNF-α水平,RT-PCR检测肺组织T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA水平,Western blot检测肺组织T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3蛋白表达。结果:肺组织病理观察显示,模型组小鼠管腔及周围炎症细胞浸润明显,黏膜水肿增厚,地米组和蚓激酶组小鼠肺部炎症浸润及黏膜增厚水肿均较模型组好转。与空白组相比,模型组IL-6、TGF-β、IL-1β、TNF-α水平显著升高,GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达增加(P<0.01),T-bet、Foxp3 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组相比,地米组和蚓激酶组IL-6、TGF-β、IL-1β、TNF-α水平降低(P<0.05,P<0.01),T-bet、Foxp3 mRNA表达升高(P<0.01),GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达降低(P<0.01)。结论:蚓激酶可降低炎症因子IL-6、TGF-β、IL-1β及TNF-α水平,抑制GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达,诱导T-bet、Foxp3 mRNA及其蛋白表达,且可能通过降低相关前炎症因子水平调节免疫细胞转录因子表达。     

Thl7淋巴细胞在哮喘小鼠气道炎症中的初步研究

目的:初步探索Th17细胞及其分泌的炎症介质在哮喘小鼠气道炎症中的作用机制.方法:20只小鼠随机均分为哮喘组和正常对照组.哮喘组用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型.正常对照组致敏与激发均以生理盐水代替.HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ及IL-17的含量,流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞百分率情况.结果:哮喘组小鼠BALF中细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均显著高于对照组(P<0.05),BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17的水平显著增高(P<0.05),而IFN-γ差异无统计学意义(P>0.05),外周血Th2、Th17细胞明显增高(P<0.05),而Th1细胞无明显变化.结论:Th17细胞及其分泌的炎症介质可促进中性粒细胞及嗜酸性粒细胞在气道内聚集,加重哮喘气道炎症,可能与哮喘气道重塑密切相关.     

Th17淋巴细胞在哮喘小鼠气道炎症中的初步研究

目的:初步探索Th17细胞及其分泌的炎症介质在哮喘小鼠气道炎症中的作用机制。方法:20只小鼠随机均分为哮喘组和正常对照组。哮喘组用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型。正常对照组致敏与激发均以生理盐水代替。HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ及IL-17的含量,流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞百分率情况。结果:哮喘组小鼠BALF中细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均显著高于对照组(P<0.05),BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17的水平显著增高(P<0.05),而IFN-γ差异无统计学意义(P>0.05),外周血Th2、Th17细胞明显增高(P<0.05),而Th1细胞无明显变化。结论:Th17细胞及其分泌的炎症介质可促进中性粒细胞及嗜酸性粒细胞在气道内聚集,加重哮喘气道炎症,可能与哮喘气道重塑密切相关。     

豚鼠哮喘模型气道中炎症细胞浸润与c—jun表达的关系

观察豚鼠哮喘模型致敏原激发后４，１２，２４ｈ气道中炎症细胞的浸润及炎症细胞内ｃ－ｊｕｎ表达情况。结果表明，激发后４ｈ气道壁有轻度炎症细胞浸润，至１２和２４ｈ气道炎症细胞浸润加重，粘膜上皮及粘膜下层有大量中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，气道结构破坏；各时点炎症细胞内均有ｃ－ｊｕｎ的表达，与对照组比较差异显著     

IL-27对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的研究IL-27对卵白蛋白(OVA)激发哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 24只雌性BALB/c小鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及IL-27组,每组8只。应用OVA建立哮喘模型,IL-27组小鼠应用1μgIL-27(溶于50μlPBS中)滴鼻给药,观察3组小鼠肺组织病理改变,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞;ELISA法测定小鼠BALF中IL-4和IFN-γ浓度,RT-PCR测定肺组织T-bet mRNA的表达量。结果 IL-27组小鼠肺组织炎症反应明显轻于哮喘组小鼠;IL-27组小鼠BALF中嗜酸性粒细胞计数为(2.21±0.33)×107/L明显低于哮喘组的(12.82±2.17)×107/L(P0.01);IL-27组小鼠BALF中IL-4浓度为(20.4±3.2)μg/L,明显低于哮喘组的(61.3±13.1)μg/L(P0.05);IL-27组小鼠BALF中IFN-γ浓度为(50.3±6.3)μg/L,明显高于哮喘组的(11.1±3.3)μg/L(P0.05);IL-27组小鼠肺组织T-bet mRNA表达量(吸光度积分比值)为(0.268±0.048),明显高于哮喘组的(0.130±0.012)(P0.05)。结论 IL-27可能通过增强T-bet mRNA的表达增强Th1反应,减少BALF中嗜酸性粒细胞数量,进而减轻了哮喘小鼠肺组织炎症反应。     

Th17淋巴细胞及相关细胞因子加重哮喘小鼠气道炎症

目的:研究Th17淋巴细胞及其相关的细胞因子在加重哮喘小鼠气道炎症中的作用机制.方法:20只小鼠随机均分为哮喘组和正常对照组.哮喘组用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型.对照组致敏与激发均以生理盐水代替.HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IFN-γ及IL-17的含量,流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4+细胞百分率情况.将外周血各T淋巴细胞亚群与BALF的中性粒细胞数作相关性分析.结果:哮喘组小鼠BALF中细胞数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均显著高于对照组(P＜0.05),BALF上清中IL-4和IL-17的水平显著增高(P＜0.05),而IFN-γ的水平显著降低(P＜0.05),外周血Th2、Th17淋巴细胞占CD4+细胞百分比显著增高(P＜0.05),而Th1淋巴细胞占CD4+细胞百分比显著降低(P＜0.05).相关性分析显示Th1淋巴细胞与BALF的中性粒细胞数呈显著负相关(rThl=-0.446,P＜0.05),Th17淋巴细胞与BALF的中性粒细胞数呈显著正相关(rTh17=0.394,P＜0.05).结论:Th17淋巴细胞可促进中性粒细胞及炎性介质在哮喘小鼠气道内的聚集,加重气道炎症.