重型肝炎患者血清对人类肝癌Bel-7402细胞存活率的影响

目的 观察重型肝炎患者血清对人肝癌Bel-7402细胞生长抑制率的影响.方法 重型肝炎患者血清与Bel-7402细胞共同培养,应用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)检测细胞生长抑制率,并检测细胞培养上清液中ALT、LDH.结果 1、Bel-7402细胞的生长抑制率随添加的重型肝炎患者血清浓度升高而增加.当血清浓度为50%、培养48小时细胞生长抑制率为73%,与对照组比较有显著差异.2、25%血清浓度作用下,各培养时间细胞培养上清液中ALT、LDH水平,实验组与对照组无显著性差异.结论 重型肝炎患者血清中的物质对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用.     

链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人正常肝细胞生长的影响

目的观察链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞生长增生的影响。方法常规培养链球菌,提取细菌全蛋白并通过阴离子交换层析获得蛋白分离组分SpⅠ和SpⅡ。不同浓度链球菌蛋白(10、50、100mg/L)作用于人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞24～72h后,采用MTT法检测两种细胞的增生活性。倒置显微镜下观察50mg/L链球菌全蛋白和SpⅡ对两种细胞的形态学变化。结果MTT结果显示,链球菌全蛋白及SpⅡ能显著抑制Bel-7402细胞的生长,与蛋白剂量和作用时间呈负相关关系;SpⅠ对Bel-7402细胞未显示出明显增生抑制作用。链球菌全蛋白及SpⅡ对人Chang氏正常肝细胞显示出不同程度的刺激生长作用。倒置显微镜下观察,链球菌全蛋白及SpⅡ作用后的Bel-7402细胞,细胞稀疏、脱落、排列紊乱,失去正常形态,而人Chang氏细胞未发现明显的形态学变化。结论链球菌全蛋白及SpⅡ能抑制人肝癌Bel-7402细胞的增生,并且能在一定程度上促进人Chang氏正常肝细胞增生。     

甘草查尔酮类化合物对人肝癌Bel-7402细胞的抗癌活性研究

目的以天然查尔酮类化合物异甘草素(ILG)为先导物进行结构修饰,制备3-甲氧基异甘草素(3-MO-ILG),并研究ILG与3-MO-ILG的体外抗癌活性。方法利用酸催化的羟醛缩合反应制备ILG与3-MO-ILG目标化合物;应用人肝癌Bel-7402细胞为体外模型,用MTT法观察2种化合物对肝癌细胞增殖的抑制活性;用流式细胞仪测定促Bel-7402细胞凋亡能力;用张氏肝细胞(chang liver)测定对正常细胞的毒性。结果化合物ILG和3-MO-ILG对正常肝细胞无明显毒性,而对肝癌Bel-7402细胞的增殖有一定的抑制活性,浓度在5～200μg/mL范围内,对肝癌Bel-7402细胞的抑制率分别为23.28%～80.01%及41.96%～86.10%;2种化合物对肝癌细胞有明显的促进凋亡作用,最高凋亡率分别可达85%和93.5%。结论人肝癌Bel-7402细胞对甘草查尔酮类化合物具有较高的敏感性;ILG衍生物对人肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制活性呈浓度依赖性,而对正常细胞的毒性明显小于对癌细胞的毒性;其抗癌作用机制可能是通过增殖抑制和促进凋亡来产生。本研究为甘草查尔酮类化合物中筛选抗肝癌候选药物奠定一定基础。     

黄酮类化合物Davidigenin的合成及对人肝癌Bel-7402细胞的抗癌活性研究

目的合成黄酮类化合物Davidigenin(二氢异甘草素,DH-ILG),并对体外抗肝癌活性进行研究。方法对2,4-二羟基苯乙酮和对羟基苯甲醛进行羟基的保护,并通过羟醛缩合反应后行脱保护而合成异甘草素(ILG);通过2种催化氢化反应系统对ILG进行还原而制备目标化合物Davidigenin,对于氢化还原试剂进行筛选,用光谱方法对结构进行鉴定;应用人肝癌Bel-7402细胞株为体外模型,用MTT法观察Davidigenin对人肝癌细胞增殖的抑制活性。结果经2种催化氢化还原试剂得到的目标化合物产率分别为20%及91.45%;Davidigenin对人肝癌Bel-7402细胞的增殖有抑制活性,在浓度为25～200μg/mL范围内,其抑制率为2.76%～65.27%,且活性强度低于异甘草素。结论利用二氧化铂对查尔酮类化合物分子侧链中的α-β不饱和双键进行选择性还原反应的效果明显高于钯碳催化还原;人肝癌Bel-7402细胞对Davidigenin的抗癌活性具有一定的敏感性;查尔酮类化合物分子侧链中的α-β不饱和双键是其抗癌活性的必要条件。本研究对甘草查尔酮类化合物的抗癌构效关系研究及抗肝癌候选药物筛选奠定一定基础。     

桂皮酸诱导Bel-7402人肝癌细胞凋亡的作用及机制

[目的]通过检测不同浓度的桂皮酸对人肝癌Bel-7402细胞生存率及凋亡的影响,明确中药桂皮酸诱导该肿瘤细胞凋亡的作用和机制.[方法]采用MTT法检测0、1、3、5和10 mmol/L桂皮酸对正常肝细胞CL48及人肝癌细胞Bel-7402生存率的影响;采用PI/Annexin V双染法检测O、1、3、5和10 mmol/L桂皮酸对Bel-7402细胞凋亡作用的影响;应用Western-blot技术检测不同浓度桂皮酸对Bel-7402细胞中Bax、cytochrome c、caspase 8、caspase 9及caspase 3的作用.[结果]MTT结果显示桂皮酸能剂量依赖性地抑制Bel-7402细胞的生长,而对正常肝细胞的生存率无影响,P＜0.05.PI/Annexin V双染法,流式细胞仪检测显示空白对照组细胞凋亡率为(5.43±0.57)％,浓度为1、3、5和10mmol/L的桂皮酸处理组细胞凋亡率分别为(7.37±0.74)％、(13.73±1.5)％、(25.67±2.15)％和(52.23±4.18)％.蛋白质印迹法结果显示,桂皮酸能促进Bel-7402细胞caspase 8、caspase 9及caspase 3的切割;促进Bax蛋白转位至线粒体及cytochrome c的释放.[结论]桂皮酸具有抑制肝癌Bel-7402细胞生长及促进其凋亡的作用,可能是通过促进Bax蛋白转位至线粒体,从而刺激cytochrome c释放至胞浆,激活caspase蛋白导致肿瘤细胞凋亡.     

姬松茸多糖诱导Bel-7402细胞凋亡的实验研究

目的研究姬松茸多糖(PAB)对人肝癌细胞Bel-7402凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的PAB与小鼠脾淋巴细胞共同培养制备上清;应用流式细胞术分析各组Bel-7402细胞凋亡情况、细胞内p53蛋白的表达以及肿瘤细胞内Ca2 水平的变化;应用透射电子显微镜观察细胞超微结构变化;应用荧光显微镜观察细胞内p53蛋白表达的变化。结果与阴性对照组相比较,通过流式细胞仪检测,治疗组细胞凋亡率和细胞内Ca2 水平显著升高(P<0.01);通过流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞内p53蛋白的表达无显著差异,透射电子显微镜观察显示出细胞凋亡的典型形态学变化。结论PAB具有诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。     

肝癌中少量侧群细胞的分离、纯化及在体内荷瘤能力

目的从侧群(side population,SP)表型细胞具有干细胞特性的角度出发,对肝癌细胞系中的SP细胞进行检测、分离和评价。方法利用SP细胞能将荧光染料Hoechst33342泵到细胞外的特性,结合流式细胞技术进行分离纯化。结果在肝癌细胞系PLC、Huh7、Hep3B、SMMC7721及1例临床肝癌组织中检测到SP细胞的比例依次为0.8%、0.3%、0.6%、0.3%、0.4%;未在HepG2中检测到SP细胞。NOD-SCID荷瘤实验发现SP细胞较非SP细胞具有更高的成瘤性。结论肝癌细胞系及标本组织含有少量的SP细胞,这些SP细胞比非SP细胞具有更强的成瘤性,为进一步分析SP细胞的肿瘤干细胞特性奠定了基础。     

复方斑蝥含药血清抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖的机制研究

目的 探讨复方斑蝥抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖的作用机制.方法 血清药理学方法制备复方斑蝥血清并处理人肝癌Bel-7402细胞,MTY方法观察其对人肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制作用,RTPCR技术检测其对c-Myc、p53基因表达的影响.结果 复方斑蝥含药血清能够显著抑制Bel-7402细胞的增殖,并下调c...     

以慢病毒构建的GFP阳性卵巢肿瘤细胞中侧群细胞的分离和动物活体内示踪

 目的 通过慢病毒将绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP)基因转入卵巢癌细胞中,研究慢病毒感染对细胞泵出Hoechst 33342能力的影响,追踪GFP(+)侧群（side population,SP）细胞在裸鼠体内的荧光表达和肿瘤成像。方法 选用人卵巢癌细胞株HO-8910PM,以慢病毒感染GFP基因至人卵巢癌细胞株HO-8910PM,摸索以Ubiquitin启动子构建的慢病毒颗粒对该细胞的最佳感染复数（multiplicity of infection,MOI)。以流式细胞仪分选表达GFP的卵巢癌细胞株,获得高纯度的GFP(+)HO-8910PM,检测GFP表达对Hoechst 33342染色的影响。再以流式细胞仪分选GFP(+)SP细胞,将分选的GFP(+)SP细胞注射入裸鼠皮下,观察GFP(+)SP细胞的致瘤能力,并在体内观测GFP(+)SP来源肿瘤的荧光成像。结果 Ubiquitin启动子构建的慢病毒感染不影响卵巢癌细胞拒染Hoechst 33342的能力,分选的GFP(+)SP细胞仍能在裸鼠体内形成表达GFP的肿瘤,成瘤能力和未感染细胞相比无显著变化,GFP阳性肿瘤在成像系统中可见荧光表达。结论 慢病毒感染不影响卵巢癌细胞拒染Hoechst 33342的能力,慢病毒感染后分选的GFP(+)SP细胞仍能在裸鼠体内形成表达GFP的肿瘤,成瘤能力和未感染细胞相比无显著变化,GFP标记可以作为研究卵巢癌细胞在动物活体内生物学行为的示踪标记。     

人肺腺癌细胞系SPCA1边缘细胞亚群的初步分析

目的检测和分选人肺腺癌细胞系SPCA1中的边缘细胞,并对其表面标志进行初步分析。方法用流式细胞仪检测和分选SPCA1中的边缘细胞和主群细胞,并用细胞免疫化学和激光共聚焦检测ABCG2和CD133在SPCA1中的表达。结果边缘细胞亚群占SPCA1细胞的0.7%,维拉帕米阻断后减少至0.0%。细胞免疫化学结果显示ABCG2和CD133在SPCA1的边缘细胞中高表达,而在未分选的SPCA1细胞和主群细胞中则低表达。结论人肺腺癌细胞系SPCA1中存在边缘细胞,提示肺癌干细胞的存在。     

雷公藤甲素对肝细胞癌中侧群细胞的影响

目的 探讨雷公藤甲素(triptolide,TPL)对肝癌侧群细胞是否有影响.方法 给予不同浓度的TPL处理人肝癌细胞SMMC-7721,利用烟酸己可碱33342染色流式细胞术检测肝癌细胞系SMMC-7721中侧群细胞的比例;利用流式细胞术分选出侧群细胞,再分别通过体外细胞球体形成实验及NOD/SCID小鼠体内移植瘤成瘤实验,验证TPL对于肝癌侧群细胞成球及成瘤能力的影响.结果 TPL可减少SMMC-7721细胞中侧群细胞的比例[DMSO组(9.5±0.2)％,TPL 10 nmol/L组(3.4±0.3)％,TPL 25 nmol/L组(1.1±0.1)％,P＜0.01],并且可以抑制肝癌侧群细胞的成球能力[成球数DMSO组(29±4)个,5 nmol/L TPL组(12±2)个,10 nmol/L TPL组(4±1)个,P＜0.01)]及成瘤能力(抑瘤率为76.5％).结论 雷公藤甲素能够减少肝癌中侧群细胞的数量,并能抑制其功能,可能是其抑制肝癌的机制之一.     

乳腺癌MCF-7肿瘤细胞SP亚群初步分析

目的鉴定乳腺癌干细胞系MCF-7中是否包含肿瘤干细胞相关的SP(side popu lation)亚群。方法制备MCF-7细胞悬液,经Hoechst33342和PI染色(其中一组同时加入拮抗剂维拉帕米作为对照),流式细胞仪分析SP亚群。另取贴壁生长的MCF-7细胞,用Hoechst33342和羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)原位染色,荧光显微镜下观察细胞染色情况。结果SP亚群占MCF-7细胞的4%,维拉帕米阻断后减少为0.5%。荧光显微镜下见Hoechst33342阳性细胞约占95%。结论人乳腺癌细胞系MCF-7中存在SP亚群,即提示乳腺癌干细胞的存在;维拉帕米可抑制染料外排而减少SP细胞的比例。     

Side Population Cells from Hepatocellular Carcinoma Cells Have Bilateral Differentiation Ability

For understanding the role and significance of SP cells from hepatocellular carcinoma in hepatocarcinogenesis, development, relapse and metastasis, we chose AFP and CK-19 as the markers of bilateral differentiation, which are markers of hepatoma carcinoma cell and bile duct cell respectively. Using those markers, we observed the differentiation state and ability of SP and non-SP cells in vivo and vitro. We used Flow Cytometry to analyze and sort the SP and non-SP cells in established HCC line--MHCC97. We investigated the expression levels of AFP and CK-19 genes by RT-PCR, Western blotting, Immunofluorescence staining and xenograft transplant experiment on nude mice. It was founded that the percent of SP cells in established HCC line was 0.25%. We found that the expression of AFP in SP was significantly higher than in non-SP cells. But, there was no different between expression of CK-19 in SP and non-SP cells. In xenograft transplant experiment, there were a few cells displayed bilateral positive of AFP and CK-19 in tumor formations. It is seemed that SP cells from hepatocellular carcinoma did display bilateral differentiation markers, AFP and CK-19. And we found that SP cells have bilateral differentiation ability through xenograft transplant experiment. It proved primitive characteristics of SP cells. On the other hand, as AFP and CK-19 being markers of HCC poor prognosis, those dates also implied SP cells from hepatocellular carcinoma may play a important role in HCC pathological procedures, such as hepatocarcinogenesis, development, relapse and metastasis.     

人胆囊癌GBC-SD细胞系中干细胞样SP细胞群的分离及其ABCG2的表达

目的 探索在人胆囊癌GBC-SD细胞系中是否存在具有干细胞特性的SP细胞(side population cells)群.方法 采用荧光激活细胞分选技术(FACS)分选出人胆囊癌SP细胞、非SP细胞.培养3～5周后再次进行FACS,用以检测SP细胞的分化情况.利用流式细胞术检测ABCG2蛋白在SP细胞的表达.结果 SP细胞群在人胆囊癌GBC-SD细胞中占(0.64±0.08)%,分离出的SP细胞在培养3～5周后会产生SP细胞和非SP细胞,而非SP细胞则不具备此特性;并且ABCG2在胆囊癌SP细胞群中呈现出高表达状态[(89.56±3.86)%],在非SP细胞中几乎不表达[(1.32±0.49)%],两者之间的差异具有统计学意义(P<0.01).结论 人胆囊癌GBC-SD细胞系中存在着很少量的干细胞样SP细胞群,并且高表达ABCG2.     

新型钌配合物通过内源性线粒体凋亡通路诱导Bel-7402细胞凋亡的机制

目的 研究钌配合物Ru-HMIP对肝癌细胞Bel-7402的抑制作用及其机制.方法 MTI法检测RuHMIP对Bel-7402细胞的杀伤作用;流式细胞术检测其诱导细胞凋亡情况;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS);Western blot检测细胞凋亡相关蛋白.结果 RuHMIP对Bel-7402细胞有较强的杀伤效果;其对细胞毒性作用是通过诱导细胞凋亡方式;Ru-HMIP在Bel-7402细胞中产生过量ROS,并且这种作用及其细胞毒性都可被还原剂乙酰半胱氨酸(NAC)所阻断.Ru-HMIP可以破坏Bel-7402细胞线粒体膜电位;上调Bax,下调Bcl-2,同时激活Caspase-9及Caspase-3.结论 Ru-HMIP可以在体外有效抑制Bel-7402细胞增殖,其作用机制是在细胞内诱发过量ROS,继而通过内源性线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡.     

三氧化二砷对Bel-7402人肝癌细胞株的促凋亡作用

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3 )在体外是否具有抗肝癌作用 ,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :用不同浓度的As2 O3 处理Bel 740 2人肝癌细胞株及L 0 2正常人肝细胞株 ,应用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法 )观察As2 O3 对细胞生长的影响 ,并用电镜、流式细胞仪、DNA电泳等检测方法研究其作用机制。结果 :MTT法发现As2 O3 0 .5～ 2 .0mg·L-1的浓度均可显著抑制Bel 740 2人肝癌细胞株的生长 ,而对L 0 2正常人肝细胞株的抑制作用较弱。经As2 O3 作用后 ,透射电镜和扫描电镜观察均显示Bel 740 2细胞发生了显著的凋亡形态改变 ;提取细胞DNA行琼脂糖凝胶电泳可见典型的梯形条带 ;流式细胞仪分析可见有亚G1峰出现 ,凋亡率呈时间和剂量双重依赖性特点。结论 :As2 O3 在体外可显著抑制肝癌细胞株生长 ,其作用机制主要是诱导肿瘤细胞凋亡