姜黄素对肾癌ACHN细胞增殖与凋亡的影响及作用机制

目的 研究姜黄素对肾癌ACHN细胞增殖与凋亡的影响,并探讨其中的作用机制。方法不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L)姜黄素作用于ACHN细胞不同时间(12、24、48 h)后,利用CCK-8检测细胞增殖活性的改变;应用Annexin-V/PI双标染色后上流式细胞仪检测细胞凋亡变化;Real-time PCR测定Notch1基因表达量的变化;免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3和Notch蛋白表达情况。结果CCK-8结果表明,姜黄素作用后ACHN细胞增殖速度减慢（P<0.05）,且抑制作用呈时间及浓度依赖性;流式检测结果显示姜黄素作用后ACHN细胞凋亡增加（P<0.05）;Real-time PCR检测结果显示Notch1基因表达增加,且表达量呈时间及浓度依赖性(P<0.05);Western blot检测发现随着姜黄素浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下降,Bax、Caspase-3、Notch1蛋白表达增加。结论姜黄素能够抑制肾癌ACHN细胞的增殖并诱导其凋亡,其过程可能通过调节Notch1基因的表达,抑制抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达,促进凋亡因子Bax蛋白表达,从而激活促凋亡因子Caspase-3,继而引发凋亡反应。     

NAMPT基因对肾癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)在肾癌中的表达情况及对肾癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:通过TCGA在线数据库ualcan分析NAMPT在肾癌组织和正常肾组织中的表达,通过Kaplan-Meier plotter数据库分析NAMPT对肾癌预后的影响.qPCR检测NAMPT基因在肾癌细胞769P、A704、78...     

川芎嗪对人肾癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 分析不同浓度川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对人肾癌细胞系（786-O）增殖及凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法 体外培养786-O细胞,与不同浓度川芎嗪溶液（0.5mmol/L、5mmol/L）及溶剂组（DMSO组）作用24、48和72h后,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖率;细胞计数法检测药物作用48h后的细胞数量变化;DAPI染色观察药物作用48h后细胞核形态;半定量RT-PCR技术和Western blot法检测药物作用48h后凋亡相关基因在转录和翻译水平的改变。结果 随着川芎嗪药物浓度的增加,786-O细胞增殖率显著降低,凋亡率增加,细胞数量也显著减少,且胞核出现皱缩或肿胀,核裂增多;凋亡相关基因AIF、caspase-3在转录及翻译水平上均显著增强,无论与空白对照组还是溶剂对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 本研究证实TMP可以显著抑制人肾癌细胞系786-O细胞的增殖,促进其凋亡,为中药抗癌方面的研究提供实验室证据。     

Cyclin D1基因沉默诱发肾癌ACHN细胞增殖受抑的研究

目的 证实Cyclin D1基因作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性及发卡环RNA(shRNA)表达载体介导该基因沉默的有效性.方法 设计合成Cyclin D1-shRNA模板片段,与Pgenesil-1-U6载体连接,构建shRNA真核表达载体;将Pgenesil-Cyclin D1-shRNA转入ACHN肾癌细胞株.RT-PCR、Western blot分析Cyclin D1基因mRNA及蛋白表达;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞凋亡率;Transwell小室体外侵袭实验检测细胞侵袭.结果 Pgenesil-Cyclin D1-shRNA构建成功.Cyclin D1-shRNA实验组 Cyclin D1 mRNA抑制效果显著(0.10±0.04),明显高于Pgenesil-NC阴性对照组(0.92±0.03)及ACHN空白对照组(0.94±0.04)(均P<0.05).同样,实验组Cyclin D1蛋白表达明显下调.流式细胞术分析提示,Cyclin D1-shRNA组细胞早期及晚期凋亡细胞均较Pgenesil-NC组和ACHN组显著增高.生长曲线显示Cyclin D1-shRNA组细胞生长明显缓慢(P<0.05).Transwell实验同样发现该组细胞侵袭能力显著下降(P<0.05).结论 Cyclin D1可作为肾癌ACHN细胞生物学行为的评判标准.经载体介导shRNA干扰的高效性为肾癌基因治疗提供了实验依据.     

马钱子碱对人肾癌细胞ACHN抑制作用的研究

目的:探讨马钱子碱对人肾癌细胞ACHN的抑制作用及相关机制。方法:以人肾癌细胞ACHN为研究对象,分别于24 h、48 h、72 h用不同浓度(0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL)的马钱子碱处理,通过MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western免疫印迹法检测相关蛋白的表达水平。结果:马钱子碱可抑制人肾癌细胞ACHN增殖,在一定时间、一定浓度范围内呈时间、浓度依赖性;马钱子碱可促进人肾癌细胞ACHN凋亡,在一定时间、一定浓度范围内呈时间、浓度依赖性;随着药物浓度的增加,人肾癌细胞ACHN内DKK1蛋白表达量逐渐增加,β-catenin、MMP-7和C-myc蛋白表达量逐渐降低。与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:马钱子碱可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导人肾癌细胞ACHN凋亡,从而抑制肾癌细胞的增殖。     

c-Myc小分子抑制剂10058-F4对肾癌786-0细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨c-Myc 小分子抑制剂10058-F4对肾癌786-0细胞增殖、凋亡的影响.方法 采用MTT检测10058-F4对肾癌786-0细胞增殖的影响,FCM检测 10058-F4对细胞周期及凋亡的作用,Western blot法进一步检测10058-F4对c-Myc及其靶基因p21、p27和 Bcl-2蛋白表达改变.结果 10058-F4可抑制786-0细胞增殖且呈浓度、时间依赖性,阻止细胞周期于G0/G1期,且可诱导细胞凋亡,能明显分别下调和上调c-Myc及其靶基因p21、p27及Bcl-2蛋白表达. 结论 c-Myc 小分子抑制剂10058-F4能抑制肾癌786-0细胞增殖并诱导其凋亡,并呈时间依赖性和浓度依赖性.     

长链非编码 RNA HOTAIR 对肾癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨长链非编码 RNA(LncRNA) HOTAIR 对肾癌细胞系786-O 和 ACHN 增殖和凋亡的影响。方法两种细胞系转染针对 HOTAIR 的小干扰 RNA(siRNA),利用qRT-PCR 检测干扰效率,再分别以噻唑蓝(MTT)法、ELISA法和 Hochest 染色法检测 HOTAIR 表达降低后786-O 和ACHN 细胞在增殖和凋亡方面的变化。结果 siRNA 可有效降低 HOTAIR 表达(P <0．05);减少 HOTAIR 含量可显著抑制两种细胞的增殖(P <0．05),同时增加细胞凋亡(P <0．05)。结论 HOTAIR 具有促进肾癌细胞生长的作用。     

骨肉瘤中细胞凋亡和细胞增殖的关系

[目的]探讨骨肉瘤组织中细胞凋亡与细胞增殖的关系。[方法]利用原位末端转移酶法和免疫组织化学技术分别检测骨肉瘤和良性骨肿瘤中凋亡细胞密度和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。[结果]4种亚型骨肉瘤组织中凋亡细胞密度均明显低于良性骨肿瘤组织，而CNA阳性细胞密度明显高于良性骨肿瘤组织；在4种亚型骨肉瘤中凋亡细胞密度和PCNA阳性细胞密度呈明显负相关，而在良性骨肿瘤中两者呈线性正相关。[结论]在骨肉瘤的发生中可能普遍存在细胞凋亡机制的紊乱，可能以低 亡高增殖表现为多，并认为细胞凋亡检测尚难以作为一种独立的预后判断指标。     

苦豆碱对肾癌A498细胞的体外杀伤作用研究

目的 体外实验研究苦豆碱对肾癌A498细胞的杀伤作用。方法 将不同浓度的苦豆碱(0mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L)作用于肾癌A498细胞48h,通过CCK8检测各组细胞存活率,通过倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,通过流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,通过Western blot法检测各组细胞Bax和cleaved caspase-3蛋白表达量的变化。结果 CCK8检测结果显示,苦豆碱0.2mmol/L对肾癌A498细胞增殖表现出抑制作用,苦豆碱0.4mmol/L对A498细胞增殖抑制作用更加明显。倒置显微镜观察结果显示,苦豆碱0.2mmol/L可诱导肾癌A498细胞凋亡,漂浮细胞数量增加;苦豆碱0.4mmol/L组细胞凋亡更加显著,漂浮细胞数量大大增加。流式细胞术检测结果显示,苦豆碱0.2mmol/L和0.4mmol/L使肾癌A498细胞凋亡率明显增加,且呈剂量效应。Western blot法检测结果显示,苦豆碱0.2mmol/L和0.4mmol/L可使肾癌A498细胞Bax和cleaved caspase-3蛋白表达量明显增加,呈剂量效应。结论 苦豆碱可有效抑A498细胞增殖并促进其凋亡,将来有望成为新的抗肾癌药物。     

外泌体对A549细胞增殖、凋亡及迁移功能的影响

目的 观察肺癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响.方法 采用多步超速离心法从肺癌A549细胞的培养液上清中分离出肺癌细胞来源的外泌体,并通过透射电子显微镜观察外泌体形态,利用Western blot 检测其表面跨膜蛋白的表达.采用 MTT 法、ELISA法分别检测外泌体对A549细胞增殖和凋亡的影响;采用Transwell法了解外泌体对A549细胞迁移能力的影响.结果 观察所提取的外泌体大小均匀,形态规则,多为圆形及椭圆形膜性囊泡盘状结构,直径30~100 nm,其外周包被被膜,表面具有丰富的四次跨膜蛋白CD9、CD63等.MTT法提示外泌体对A549细胞具有促增殖作用,且其影响具有时间和剂量依赖特征(P<0.05),ELISA法检测用外泌体共培育后的A549细胞的凋亡情况,结果显示外泌体在一定程度上抑制肿瘤细胞凋亡(F=365.496,P=0.000).Transwell法观察显示,外泌体具有促进A549细胞迁移运动的作用(F=252.005,P=0.000).结论 肺癌细胞来源的外泌体能促进A549细胞增殖、减少其凋亡、增强其迁移运动的能力.     

黄芪甲苷对肾癌细胞系（769-P）增殖、凋亡的影响

目的 探讨黄芪甲苷对肾癌细胞（769-P）增殖、凋亡的作用机制。方法 人源肾癌细胞（769-7）在标准细胞培养条件（37℃,5%CO2）下培养传代,取对数生长期细胞进行实验。使用0、5、10、20、40和80μM浓度黄芪甲苷溶液与肾癌细胞（769-P）共同培育24 h或48 h后,使用CCK-8法检测黄芪甲苷对肾癌细胞的细胞毒性作用。使用活性氧（ROS）探针（DCFH-DA）检测ROS水平,使用Annexin V FITC/PI双染法检测细胞凋亡比例,使用线粒体膜电位探针（JC-1）检测线粒体膜电位,使用分光光度法检测活性胱天蛋白酶3(Caspase 3)和胱天蛋白酶9(Caspase 9)水平。结果5、10、20、40和80μM黄芪甲苷干预48 h后,769-P细胞活性较对照组显著降低[（85.37±4.60）%、（63.73±3.51）%、（42.43±5.65）%、（26.57±2.41）%和（18.47±3.23）%比（100.00±0.00）%,P<0.05或P<0.01]。与对照组比较,黄芪甲苷10、20和40μM处理769-P细胞24 h后,ROS荧光强度明显...     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对人鼻咽癌(NPC)CNE-2细胞增殖及凋亡的影响.方法 不同浓度(0、10、20、40、60 μmol/L)姜黄素处理NPC细胞株CNE-2,利用噻唑蓝(MTT)实验检测CNE-2细胞增殖活性,利用流式细胞仪检测CNE-2细胞周期及凋亡率,利用Hoechest33258荧光染色法观察细胞凋亡情况.结果 姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且随姜黄素浓度增加,CNE-2细胞抑制率呈上升趋势(P＜0.05),姜黄素作用CNE-2细胞24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(23.54±0.36)、(18.31±0.42)、(8.56±0.37)μmol/L,即姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且呈现明显浓度、时间依赖性;流式细胞检测结果显示,0、10、20、40、60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞,凋亡率随着姜黄素浓度增加而上升;荧光染色结果可见,CNE-2细胞未给予姜黄素处理,细胞呈圆形或者椭圆形,细胞核大小均匀一致,染色质分布均匀的淡蓝色荧光;10 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24h后,细胞胞体缩小,细胞核染色质凝聚,呈颗粒状亮蓝色荧光;20 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞出现胞体缩小,细胞核浓缩、染色质不均匀,出现凋亡小体,甚至出现核碎裂;40和60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞凋亡小体数量增多,出现大量核碎裂.结论 姜黄素对NPC细胞株CNE-2细胞增殖具有明显抑制作用,且促进CNE-2细胞凋亡.     

Effects of Peptide Nucleic Acids against Ki-67 Gene on the Proliferation and Apoptosis of Human Renal Carcinoma Cell Line

Ki-67 antigen is a DNA-binding protein which is an absolute requirement for proliferation of tumor cells[1]. Since transformation of malignant cells is frequently associated with high cell proliferation and proliferation is closely associated with the Ki-67 protein labeling index, this protein may serve as a potential target for cancer therapy although a causative involvement of Ki-67 ex-pression has not been conclusively demonstrated so far. PNAs are synthetic structure homologues of antise…     

槲皮素对人肾癌细胞株细胞增殖、侵袭及其VEGF表达的影响

目的研究槲皮素对人肾癌细胞株(ACHN)细胞增殖、侵袭力的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养ACHN细胞,加入不同浓度的槲皮素进行处理后,用MTT比色分析法检测细胞增殖抑制率,采用涂有Matrigel胶的Tr-answell小室模型对传代培养的ACHN细胞进行体外侵袭检测,以Western blot法检测ACHN细胞内血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果不同浓度的槲皮素均能抑制ACHN细胞的增殖,并有明显的浓度和时间依赖性(P<0.05);Tr-answell试验结果显示,与空白对照组比较,槲皮素处理组肾癌细胞侵袭能力明显下降;槲皮素处理组VEGF蛋白表达水平均明显低于空白对照组,且呈浓度依赖性。结论槲皮素可明显抑制ACHN细胞的增殖、侵袭力,其机制可能与下调VEGF表达有关。     

黄连素抑制肾腺癌细胞增殖及其分子机制

目的:观察黄连素对人肾癌细胞ACHN增殖的影响,并探讨其分子机制。方法:用MTT法检测黄连素处理后肾腺癌细胞增殖的变化,RIPA蛋白裂解液裂解肾腺癌细胞后提取总蛋白,BCA比色法测定蛋白浓度,将蛋白煮沸5min使其变性,取等量蛋白进行Western blot分析。结果:10μmol/L和20μmol/L黄连素显著抑制肾腺癌细胞ACHN的增殖。Western blot结果显示,黄连素处理后的肾腺癌细胞c-Fos表达量明显下调。但Western blot结果未见明显的剪切后的caspase 3,说明黄连素并不诱导肾腺癌细胞的凋亡。结论:本研究初步说明,黄连素通过下调c-Fos的表达抑制肾腺癌细胞ACHN的增殖。     

LPS 对肝癌细胞株 HepG2增殖、凋亡及分泌炎症因子的影响

目的：体外观察不同浓度细菌内毒素脂多糖(LPS)对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及分泌炎症因子的影响,并探讨可能的机制。方法按照随机数字法将细胞分为对照组及1、10、50、100μg/ ml LPS 处理组。用 MTT 检测刺激24、48、72和96 h 后细胞的增殖能力;用流式细胞术检测刺激24 h 后细胞的凋亡情况;用 RT-PCR 法检测刺激24 h 后白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8) mRNA 的表达含量;用化学发光法检测刺激24 h 后 IL-6和 IL-8的表达量,最后用 SPSS 19．0对数据进行统计学分析。结果与对照组比较,各处理组刺激24 h 和48 h 后细胞增殖活性明显升高(P <0．05),而在72、96 h 差异无统计学意义(P >0．05);刺激24 h 后,1、10、50和100μg/ ml LPS 处理组以及对照组之间的细胞凋亡率差异无统计学意义(P >0．05);刺激24 h 后,与对照组比较,随着刺激浓度的升高,IL-6和 IL-8的表达量明显升高(P <0．05)。结论 LPS 可以在48 h 内促进 HepG2的增殖,对HepG2细胞的凋亡没有影响,并且 LPS 作用可以上调 IL-6和 IL-8水平。     

蛇葡萄素对肾癌786-O细胞增殖和凋亡的作用

目的 探讨蛇葡萄素(AMP)对人肾癌786-O细胞株增殖与凋亡的作用.方法 将不同浓度的AMP作用于体外培养的肾癌786-O细胞株,采用MTT法检测不同浓度的AMP对肾癌786-O细胞增殖的作用的影响;采用Annexin V/PI双染法检测不同浓度的AMP对肾癌786-O细胞凋亡的作用.结果 MTT结果显示AMP能显著抑制肾癌786-O细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)为17.23 μg/mL;经不同浓度的AMP作用7h后,肾癌786-O细胞凋亡率明显增加,AMP浓度为10 μg/mL和20 μg/mL作用于肾癌786-O细胞后,细胞凋亡率升高(P＜0.05);而AMP浓度为40μg/mL和80 μg/mL作用细胞后,细胞凋亡率显著升高(P＜0.01).结论 AMP在体外能显著抑制肾癌786-O细胞增殖,且能促进肾癌786-O细胞凋亡.