早期生长反应基因转染SOSP-9607骨肉瘤细胞的体外生物学特性

目的：研究早期生长反应基因转染ＳＯＳＰ－９６０７骨肉瘤细胞的体外生物学特性。方法：以标准的磷酸钙共沉淀法将pＡchＥＧＲ－１质粒转染骨肉瘤细胞ＳＯＳＰ－９６０７, 经Ｇ４１８筛选至抗笥克隆形成;,采用原位杂交及免疫组织化学染色方法检测ｅｇｒ－１基因转染后表达情况,并观察转染细胞的生长特性。结果：ｅｇｒ－１基因转染ＳＯＳＰ－９６０７细胞后获得稳定表达,转基因细胞形态学表现与未转染细胞相比无明显变化,但转     

人成骨肉瘤及骨纤维结构不良组织p53,p16及Rb表达的意义

目的：探讨人成骨肉瘤组织、成骨肉瘤细胞系（ＯＳ－９９０１）及骨纤维结构不良组织中突变型ｐ５３,ｐ１６及Ｒb基因的表达及意义。方法：采用免疫组织化学ＡＢＣ方法对６ ０例成骨肉瘤标本、一株成骨肉瘤细胞系及１４例骨纤维结构不良组织中ｐ５３,ｐ１６及Ｒb基因的表达进行检测。结果：ｐ５３,ｐ１６及Ｒｂ基因的表达进行检测。结果：ｐ５ ３,ｐ１６及Ｐb基因在上述两各组织中均一阳性率各异。在６０例骨肉瘤标本中的阳性表     

抑癌基因MTS1对卵巢癌细胞增殖的影响

目的：探讨多肿瘤抑制基因１（ＭＴＳ１）对卵巢癌细胞系增殖的影响。方法;绘制细胞生长曲线图,比较卵巢癌细胞系ＨＯ－８９１０（无ｐ１６基因的表达）与８９１０－ｐ１６（转染ｐ１６基因）,８９１０－ｐｃＤＮＡ３（转染空载体ｐｃＤＮＡ３）的生长特性;采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验比较３种细胞的ＤＮＡ合成情况。结果：８９１０－ｐ１６细胞在转染ｐ１６基因后其增殖特性受到抑制,ＤＮＡ８９１０－ｐ１６细胞在转染ｐ１６基     

Rb,p53与p16基因表达的相关性研究

为了检测Ｒｂ，ｐ５３，ｐ１６基因产物在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中的表达特征，采用免疫组化和图像定量相关分析技术比较了Ｒｂ，ｐ５３与ｐ１６的表达情况及相互关系，结果１１例Ｒｂ表达阴性的肿瘤，ｐ１６蛋白表达皆为强阳性，而３０例Ｒｂ表达阳性程度较高（＋＋～＋＋＋）的标本中，２３例显著ｐ１６表达阴性或低水平表达，图像定量相关分析显示Ｒｂ失活与ｐ１６表达之间存在负相关关系，提示ＮＳＣＬＣ发生发展的分子遗传     

P53,P16基因联合抑制人肝癌细胞生长的实验研究

目的;研究Ｐ５３、Ｐ１６基因联合抑制人肝癌细胞生长的效果。方法：利用基因重线的方法构建Ｐ５３、Ｐ１６的融合表达载体ＰｃＤＮＡ１６－５３,利用磷酸钙沉淀法半ＰｃＤＮＡ１６－５３融合表达载体转染到人肝癌细胞系ＳＭＭＣ７７２１细胞中,用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印染、,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印染及Ｗｅｓｔｅｒｎ印地检测Ｐ５３、Ｐ１６基因在人肝癌细胞中的转移、转录及表达,应用ＭＴＴ法检测Ｐ５３、Ｐ１６基因在人肝癌细胞中的     

p16与Rb基因在喉癌中的表达及其临床意义

目的：探讨抑癌基因ｐ１６和Ｒｂ在喉肿瘤中的表达及其相互关系。方法：用免疫组织化学方法观察４０例喉鳞状细胞癌ｐ１６和Ｒｂ基因的表达。结果：喉癌标本中ｐ１６和Ｒｂ阳性表达率分别为４２．５％和５７．５％,其中７例肿瘤组织（１７．５％）ｐ１６和Ｒｂ基因均阳性表达,未见同一肿瘤组织中两者均缺失。在喉癌的临床类型、分期及组织分化程度方面ｐ１６和Ｒｂ基因的阳性表达率差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。结论：ｐ１６和Ｒ     

抑癌基因P16和Rb在肾癌中的表达和意义

为了探讨肾癌抑癌基因Ｐ１６、Ｒｂ与临床病理及预后的关系，采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法对５３例肾癌中Ｐ１６、Ｒｂ进行检测。结果显示：５３例肾癌Ｐ１６表达的阳性率为３７．７％，共阳性表达与肿瘤的病理分极、临床分期及预后均密切相关，差异有差异性（Ｐ〈０．０５），提法Ｐ１６例抑制肾肿瘤的发生、发展中起重要作用，可以作为判定肾癌恶性程度、自然病程及预后的客观指标。应用Ｒｂ基因蛋白抗体检测肾癌（Ｓ－Ｐ法），其阳性     

重组人促红细胞生成素cDNA在CHO-dhfr-细胞中的高效表达

目的：使重组人促红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）在ＣＨＯ细胞中获得高效表达。方法：利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素ｃＤＮＡ重组表达质粒ｐＥＤ－ＥＰＯ和ｐＥＦ－ＥＰＯ，分别用ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，作瞬时高表达，选ｐＥＦ－ＥＰＯ用磷酸钙共沉淀法转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞，加入氨甲喋呤（ＭＴＸ）扩增、选择，作稳定性高表达。结果：ｐＥＤ－ＥＰＯ和ｐＥＦ－ＥＰＯ转染ＣＯＳ７细胞后７２ｈ表达量分别为１７．８和２１．０ｎｇ／ｍｌ，ｐＥＦ－ＥＰＯ转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞，随着ＭＴＸ浓度的增加，ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＋的克隆数减少，而混合克隆的ＥＰＯ表达量逐渐升高。筛选了一株稳定性高表达ｒｈＥＰＯ的细胞株，其３ｄ表达量为１６μｇ／ｍｌ。结论：ｒｈＥＰＯ在ＣＨＯ细胞中获得了高表达     

应用mRNA差异显示技术克隆人成骨肉瘤转移相关基因

目的：筛选与成骨肉瘤转移抑制相关的基因,探讨成骨肉瘤转移的分子机制。方法：应用改良的mＲＮＡ差异显示,比较成骨肉瘤细胞系ＳＯＳＰ－９６０７及其高转移亚系统ＳＯＳＰ－Ｍ的mＲＮＡ表达差异。克隆差异片断,进行测序。根据测序结果设计牧民性引物,ＲＴ－ＰＣＲ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ证实其表达特异性。结果：从低转移细胞ＳＯＳＰ－９６０７中分离出２条特异性表达的片断ＭＳＰ２和ＭＳＰ３,经ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒ     

抑癌基因MTS1真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系HO-8910中的表达

目的：构建多肿瘤抑制基因１（ＭＴＳ１）的真核表达载体,将其转入人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中,并得到稳定表达,为进一步研究其对卵巢癌细胞的影响奠定实验基础．方法：利用ＢａｍＨⅠ与ＥｃｏＲⅠ从ｐＵＣ１９－ｐ１６质粒上切下ＭＴＳ１ｃＤＮＡ片段并克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３上,构建成ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６;利用脂质体（Ｆｕ－ＧＥＮＥＴＭ６）介导的基因导入法将ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６导入人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中;采用ＡＢＣ法对转染后的不同代数细胞进行免疫细胞化学检测,观察ｐ１６蛋白的表达．结果：成功构建了ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６,并进行酶切鉴定;转染后经Ｇ４１８筛选２ｗｋ出现阳性克隆８９１０－ｐ１６,并检测到其中有ｐ１６蛋白的稳定表达．结论：成功构建ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６,并可在人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中得到稳定表达．     

人参皂甙Rg1、Rb1和维生素E对氧化损伤的牛RPE细胞p53表达的影响

目的：检验氧化损伤的牛RPE细胞是否存在p53基因表达的变化和人参皂甙Rg1、Rb1和维生素E对其的影响,以期进一步研究RPE细胞氧化损害的机理.方法：建立牛RPE细胞氧化损伤模型,原位杂交技术测定RPE细胞p53mRNA的表达,免疫组化技术测定p53蛋白表达.结果：p53蛋白表达阳性的牛RPE细胞的细胞核染成黄色,与次黄嘌吟／黄嘌吟氧化酶（HX／XO）组p53蛋白阳性的细胞数相比较,正常对照组,Rg1（0.1mg.L-1）组及VitE（10mg.L-1）组存在显著性差异（P＜0.05）,而与Rb1（10mg.L-1）组无显著性差异.原位杂交法测定P53mRNA表达,牛RPE细胞P53mRNA表达阳性可在细胞浆内见到位于细胞周边部的蓝紫色絮状物,分别与HX／XO组阳性的细胞相比较,正常对照组,Rg1组及VitE组存在显著性差异（P＜0.05）,而与Rb1组无显著性差异.结论：氧化损伤可导致基因P53mRNA及其蛋白在RPE细胞内的表达明显增加.人参皂甙Rg1和VitE对抗氧自由基对RPE细胞损伤的机制可能是通过清除氧自由基,影响凋亡基困p53的表达,从而有效地抑制氧自由基对RPE细胞的损伤.     

改良差示PCR技术分离入成骨肉瘤转移基因片段

目的：建立优化的差示ＰＣＲ体系,通过对转移潜能不同的人成骨肉瘤细胞系进行差示比较,获得人成骨肉瘤转移相关基因片段。方法：Ｃ 低转移性人成骨肉瘤细胞系ＳＯＳＰ－９６０７及由此筛选 出的高转移亚系ＳＯＳＰ－Ｍ为研究对象,利用优化的差示ＰＣＲ技术获得两细胞系mＲＮＡ的表达差异,选取差异明显、片段较长的条带回收并克隆后,经点杂 交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交排队假阳性,并进行测序和同源性分析。结果：获得满意的差示     

子宫肌瘤中抑癌基因p53和Rb的表达

目的：探讨抑癌基因p53和Rb在子宫肌瘤发生发展中的作用。方法：用NorthernBlot方法检测14例子宫肌瘤和3例子宫平滑肌肉瘤中p53和Rb基因的mRNA表达。结果：p53和Rb基因在分泌期子宫肌肉中的表达水平明显高于增殖期，在子宫肌瘤中的表达水平明显低于分泌期子宫肌肉组织，在子宫肉瘤中的表达水平低于子宫肌瘤。结论：在子宫肌肉组织中，性激素对p53和Rb基因的表达可能有调节作用。推测性激素促使子宫平滑肌细胞增生的作用途径之一是影响p53和Rb基因的表达。     

抑癌基因联合转染对膀胱癌细胞的生长抑制作用研究

目的　探讨抑癌基因 p5 3和 Rb对膀胱癌细胞的生长抑制作用。方法　利用逆转录病毒和电穿孔法将 p5 3、Rb单独或联合导入膀胱癌细胞株 T2 4中 ,Northern杂交等证实外源目的基因的表达后 ,观测并比较不同转染后细胞的生长、增殖水平和成瘤性等。结果　获得 p5 3、Rb单独和联合转染的 T2 4细胞 ,Northern杂交等证实 T2 4细胞中 p5 3失活而 Rb正常 ,转入的外源野生型 p5 3基因和 Rb基因均被表达。与未转染的对照组 T2 4细胞相比 ,转入 p5 3的细胞其生长速率明显降低 ,细胞增殖受抑制 ,软琼脂克隆形成能力丧失 ;而只转染 Rb的细胞除软琼脂克隆形成能力有所降低外 ,细胞生长和增殖未受明显抑制。结论　外源野生型 p5 3能抑制 T2 4生长并降低其成瘤性 ,增加 Rb的表达对细胞生长无明显抑制作用。p5 3对 T2 4细胞的生长抑制作用与外源 Rb基因导入与否无明显关系 ,Rb表达水平正常的膀胱癌细胞其异常增殖可能与 Rb蛋白磷酸化状态的关系更为密切。     

人乳腺癌MCF-7细胞凋亡过程中p53与bcl-2表达的时序性

研究细胞凋亡过程中p53与bcl－2基因表达变化的时序关系，以探索p53调控bcl－2的可能性。方法：选择具有野生型p53的人乳腺癌MCF-7细胞系，用5－Fu为诱导剂诱导细胞凋亡；用Northern杂交及Western印迹法检测细胞凋亡过程中p53与bcl－2表达变化的时序性。结果：p53表达增高出现在bcl－2表达降低之前。结论：p53在时序上具有作为bcl－2基因负调控转录因子的可能性。     

紫杉醇诱导成骨肉瘤细胞凋亡

目的：探讨紫杉醇对成骨肉瘤细胞的杀伤作用及机制。方法：应用形态学观察，MTT分析法，DNA梯状电泳，流式细胞术检测术，研究紫杉醇对成骨肉瘤细胞系SOSP-9607的细胞毒效应。结果：紫杉醇作用后成骨肉瘤细胞形态改变明显，存活率明显下降。形态学观察，DNA梯状电泳，流式细胞术检测术证实紫杉醇可诱导成骨肉瘤凋亡。结论：紫杉醇在体外对成骨肉瘤细胞株SOSP-9607有较强的杀伤作用，并且这种作用主要是通过诱导凋亡实现的。     

8-Br-cAMP对人视网膜母细胞瘤细胞系癌基因和抑癌基因作用的研究

目的 :为探讨 8 Br cAMP对人视网膜母细胞瘤之HXO Rb44细胞系的生长作用机理 ,我们观察了 8 Br cAMP对该细胞的癌基因和抑癌基因表达的体外效应。方法 :将体外培养的HXO Rb44细胞系等分为两组 ,一组为加 2× 10 5mol/L 8 Br cAMP的实验组 (EG) ,另一组为不加 8 Br cAMP的对照组 (CG)。将两组的细胞悬液滴于硝酸纤维素膜 (NCM) ,应用完整细胞RNA斑点印迹和蛋白质斑点印迹免疫组化技术分别检测c fos ,N mycp2 1ras ,野生型 (w)p5 3 ,突变型 (m)p5 3 ,Rb ,p16的mRNA和PCNA的蛋白表达。结果 :wp5 3 ,Rb ,p16及p2 1waf1的mRNA信号为EG >CG(P <0 0 5～ 0 0 1) ;c fos ,N myc ,p2 1ras的mRNA信号和PCNA IR则为EG 相似文献