应用EP7-A文件探讨维生素C干扰血糖测定的剂量响应曲线

目的探讨维生素C干扰葡萄糖氧化酶（GOD）法测定血糖的剂量响应曲线，进一步熟悉临床和实验室标准化协会（CLSI）EP7-A文件方法配制5组含不同浓度维生素C的测试混合液，并将每组测试混合液等分成3份，再按一定的顺序用GOD法测定这15份测试混合液的血糖值。以每份测试混合液的维生素C浓度为X轴，其对应的血糖降低值为Y轴绘制维生素C干扰血糖测定的剂量响应曲线。结果随着测试混合液中维生素C浓度的增加，血糖测定值越低，其剂量响应曲线呈线性关系，回归方程为y=-5.95x。结论维生素C干扰血糖测定的剂量响应曲线不受血糖浓度的影响，且血清中含有极低浓度维生素C即可给血糖测定产生临床不可接受的误差。     

应用EP7-A文件探讨维生素C干扰血糖测定的剂量响应曲线

目的探讨维生素C干扰葡萄糖氧化酶（GOD）法测定血糖的剂量响应曲线，进一步熟悉临床和实验室标准化协会（CLSI）EP7-A文件方法配制5组含不同浓度维生素C的测试混合液，并将每组测试混合液等分成3份，再按一定的顺序用GOD法测定这15份测试混合液的血糖值。以每份测试混合液的维生素C浓度为X轴，其对应的血糖降低值为Y轴绘制维生素C干扰血糖测定的剂量响应曲线。结果随着测试混合液中维生素C浓度的增加，血糖测定值越低，其剂量响应曲线呈线性关系，回归方程为y=-5.95x。结论维生素C干扰血糖测定的剂量响应曲线不受血糖浓度的影响，且血清中含有极低浓度维生素C即可给血糖测定产生临床不可接受的误差。     

维生素C对单试剂氧化酶法检测总胆固醇和三酰甘油的干扰分析

目的分析不同维生素C(VC)浓度对单试剂氧化酶法检测总胆固醇(CHOL)和三酰甘油(TG)的干扰影响,确定影响临床应用价值的最低VC干扰浓度。方法收集覆盖CHOL、TG检测线性范围的新鲜血清样本各10份,制备不同浓度梯度的VC干扰管,单试剂氧化酶法测定CHOL和TG,计算加入不同梯度浓度的VC前后CHOL、TG的差值及相对偏差,使用国家卫生行业标准(WS/T403-2012)的允许总误差判断偏差是否具有临床意义,确定不同CHOL、TG浓度对VC影响检测结果不可接受的浓度。结果VC对单试剂酶法检测CHOL、TG的干扰为负干扰,干扰值与VC干扰浓度呈正相关关系,随着干扰浓度的增加,干扰值越大。相关关系方程式为TG:Y=-1.0021 X(r 2=0.9956);CHOL:Y=-0.997 X-0.0213(r 2=0.9976)。结论VC对单试剂氧化酶法检测CHOL和TG产生负干扰,产生具有临床意义的干扰与VC干扰浓度及CHOL、TG值密切相关。     

神经元特异性烯醇化酶测定影响因素的探讨

目的探讨血液标本放置不同时间后分离血清对神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平的影响,以及血清经冰冻后对NSE水平有无影响.方法采用电化学发光法,分别对24例健康体检者的血液标本在室温侣(25℃)放置30min、1h、2h、3h后再分离血清,以及将放置30min后离心的血清标本放-20℃冰箱过夜,将血清标本进行NSE水平测定.结果30min组血清NSE水平为5.29+1.48ng/ml,1h组为5.32+1.41 ng/ml,2h组为7.11±1.96ng/ml,3h组为8.71±2.48 ng/ml,冰冻组为5.27+1.50 ng/ml,1h组、冰冻组同30min组比较,结果均无显著性差异(P＞0.05),2h组、3h组同30min组比较,结果均有极显著差异(P＜0.01).结论血液标本放置时间延长对NSE水平测定有不同程度的影响,血清冰冻后对NSE水平测定无影响.     

亚甲蓝对肌酐酶法(POD系统)测定的影响

目的观察临床急救用药亚甲蓝对肌酐酶法(POD系统)测定的影响.方法采用肌酐酶法(POD系统)试剂在7020全自动生化分析仪上,模拟临床检测标本分别观察不同浓度亚甲蓝对样本空白、肌酐标准液和临床实测标本肌酐检测结果影响.结果亚甲蓝对肌酐酶法(POD系统)测定为负干扰:当亚甲蓝浓度为0.0100(mg/ml)时,样本空白结果开始为负值;当浓度850μmol/L的肌酐标准液中含亚甲蓝的浓度为0.005mg/ml时,其负干扰已经显现(结果下降为826.9μmol/L);对于临床实际检测标本,肌酐结果随着亚甲蓝的浓度增加,标本检测值逐渐下降,甚至达到负值.     

TRFIA法和ELISA法在HBsAg检测中的方法学评价

目的:对时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)和ELISA两种方法检测HBsAg进行方法学评价.方法:先用TRFIA筛选出HBsAg阳性标本,再用ELISA试剂检测,并分组进行比较 结果:TRFIA法HBsAg(0.21-2.0ng/ml)标本40份中,ELISA法检测阳性24例,阳性符合率60％,差异有统计学意义(P＜0.05);而TRFIA法HBsAg(2.1-10.0ng/ml、10.1-50.0 ng/ml、50.1-100.0 ng/ml、＞100.1 ng/ml)标本分别为33、47、29、47份中,ELISA法检测阳性也分别为33、47、29、47例,阳性符合率100％;TRFIA法HBsAg分为0.21-2.0 ng/ml、2.1-10.0ng/ml、10.1-50.0 ng/ml、50.1-100.0 ng/ml、＞100.1 ng/m组,ELISA法检测S/CO值±s分别为2.9571±3.1833、12.5415±6.1660、22.1553±4.6074、24.8674±4.2402、25.2192±2.9074,前两组比较有统计学意义,而后三组比较无统计学意义 结论:采用TRFIA法定量检测HBsAg灵敏度更高,线性范围更宽,在低浓度标本检测中更具优势,更具有临床意义.     

血清载脂蛋白A5 ELISA的建立及其初步应用

目的建立人血清中载脂蛋白A5(ApoA5)双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并初步观察其在2型糖尿病(T2DM)中的应用价值。方法用棋盘滴定法确定捕获抗体、检测抗体的最佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围、检测限;检测该方法的精密度和特异性,并分别检测T2DM患者及健康人血清中ApoA5水平以及其它生化指标。结果本研究建立的方法测定范围为5-640ng/ml,最低检出量2ng/ml,批内和批间变异系数(CV)分别为5.6%和6.7%。T2DM患者血清中ApoA5水平为(494.2±233.1)ng/ml,显著低于健康对照组(668.2±357.0ng/ml,P=0.001);血清ApoA5浓度与HDL-c呈正相关(r=0.16,P=0.031),与TG呈负相关,但是没有达到统计学差异(r=-0.028,P=0.717)。结论本研究建立的人血清ApoA5双抗体夹心ELISA灵敏度高,特异性好,可应用于临床ApoA5的检测;ApoA5可能是T2DM的独立危险因素,监测ApoA5浓度对于T2DM的预防和干预具有一定临床意义。     

酶联免疫吸附试验显色与样本含量的关系

目的 探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)中的一步夹心法和二步法显色与样本含量的相关性.方法 以一步夹心法和二步法测定乙型肝炎表面抗原(HBsAg)为研究对象,用时间分辨定量后的标本采用阴性混合血清稀释高浓度和低浓度两种不同的实验样本,再用ELISA法测定吸光度(A)值,分别记录和分析结果 (以双波长的A值计算).结果 在样本中HBsAg浓度在40.0 ng/ml较低的浓度范围内,一步夹心法和二步法显色均随样本浓度的升高而增强;在大于20 000.0ng/ml较高的浓度范围内,一步法显色可以产生"钩状效应",二步法随样本浓度的升高仍然维持显色相对稳定.结论 一步夹心法的显色与样本浓度曲线呈抛物线形状;二步法显色与浓度曲线为L形曲线.     

ELISA法测定人血清中apo A Ⅴ浓度

目的 建立测定人血清中apo AⅤ浓度的ELISA双抗体夹心法,并对该法的敏感性、重复性、干扰因素等作评价.方法 测定了该法的apo AⅤ标准曲线,最低检测限,批间、批内变异系数(CV),非特异性脂蛋白的干扰;测定了505例血脂正常人群apo AⅤ的浓度,建立本实验室的参考值.结果 本法的线性范围为(5.86～187.5)ng/ml;最低检测限为2.34 ng/ml;脂蛋白(a)、apo A Ⅰ和apo B用本法检测吸光度值均＜0.3;批内、批间CV均＜10%.结论 该方法灵敏度和特异性均好,为apo AⅤ的临床检测提供了一种可行的方法.     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ化学发光免疫分析方法的建立

目的　建立检测人心肌肌钙蛋白I(cTnI)化学发光免疫分析方法。方法　用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体 ,经DEAE 2 3层析和 (NH4) 2 SO4沉淀纯化后 ,用碳化二亚胺 (EDC)法标记辣根过氧化物酶 ,SephadexG 2 0 0纯化。优化鲁米诺 H2 O2 肉桂酸发光体系 ,建立了cTnI化学发光免疫分析法。用该法检测 138例正常人及病人血清标本 ,确定正常值参考范围 ,并与ELISA法比较。结果　所得抗体的滴度为 1∶80 0 0。优化后的发光体系为 :鲁米诺 (4 .5mmol/L) ,H2 O2 (7.5mmol/L) ,四苯硼钠 (0 .8mmol/L) ,肉桂酸 (0 .4mmol/L) ,比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了 1.19和 1.0 5倍。本法检测灵敏度为0 .2ng/ml,线性范围为 0 .4～ 5 0ng/ml,批内CV平均 9.0 % ,批间CV平均 11.8% ,回收率为 10 4 .2 %。Hb浓度在 0～ 5 0nmol/L ,T Bil在 0～ 15 μmol/L ,TG在 0～ 2 .0mmol/L对测定结果无影响。与ELISA比较 ,两法结果一致 (P >0 0 5 ) ,相关系数r=0 .985 2(P <0 .0 1)。用BioCheck标准品为校正物 ,确定临床诊断参考范围为 <2 .12ng/ml,诊断符合率为 96 .2 %。结论　建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验。