视黄酸联合视网膜细胞培养上清液对胚胎干细胞体外分化的诱导作用

目的：探讨经过初步诱导的拟胚体在视黄酸和视网膜细胞培养上清液作用下的分化特征。方法：将胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)自液氮中复苏、培养，传1代后进行拟胚体(embry-onic bodies,EB)培养。3天半的EB离心重悬后不作消化，使用视黄酸、视黄酸加鼠视网膜胶质细胞和神经细胞培养上清液、视黄酸加人视网膜色素上皮培养上清液、视黄酸加人胎儿视网膜胶质细胞培养上清液(分别记为A、B、C、D组)等进行诱导。观察诱导过程中形态学改变，培养3周时使用免疫细胞化学检测Nestin、GFAP、cytokeratin、MAP-2、rhodopsin等在诱导后细胞中的表达情况。结果：(1)形态学改变：4种条件下的早期改变基本相同，均可见多种形态的细胞；3周后：拟胚体结构基本已散开，A组：见多种形态的细胞，细胞边界欠清，饱满度下降；B组：细胞以透明度较高的圆形细胞为主；C组：拟胚体及拟胚体周围的细胞中出现了含有明显色素的细胞；D组诱导：细胞胞体较大，形态结构较为单一；(2)免疫细胞化学：4种条件下均表现为大部分细胞MAP—2阳性，未见Nestin阳性细胞；此外，A组中，未见GFAP、Cytokeratin、Rhodopsin阳性细胞；B组中，可见GFAP、Cytokeratin、Rhodopsin阳性细胞；C组仅见Cytokeratin阳性细胞；D组仅见GFAP阳性细胞。结论：在KSC的次级诱导中，视黄酸可以诱导大部分细胞成为神经细胞，多种视网膜细胞的上清液在诱导中具有一定的作用，ESC能被诱导形成与上清液来源细胞相关的细胞。眼科学报2003；19：122-125     

SD大鼠视网膜神经细胞培养上清液对胚胎干细胞体外分化的诱导作用

目的 探讨视网膜神经细胞培养的上清液对胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES）体外分化的诱导作用。 方法 收集SD大鼠视网膜神经细胞培养上清液，抽滤后按2∶3比例与DMEM培养液混合，用该混合液进行ES 细胞的诱导分化，每天倒置相差显微镜观察ES细胞的生长及分化情况,对诱导分化后的细胞进行神经丝蛋白(nellcofilament protein，NFP)免疫组织化学检查。 结果 加入了视网膜神经细胞培养上清液的ES细胞生长出类似神经细胞突起样结构，NFP免疫组织化学染色阳性。 结论 SD大鼠视网膜神经细胞培养的上清液具有诱导ES细胞向神经细胞分化的作用。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 134-136)     

视黄酸联合视网膜细胞共培养对胚胎干细胞体外分化的诱导作用

目的 探讨胚胎干细胞(ESC)在视黄酸联合视网膜细胞共培养诱导条件下的分化特征。方法 将ESC自液氮中复苏、培养，传1代后进行拟胚体培养。将部分3．5d拟胚体离心重悬后加入含有视黄酸的24孔板中进行诱导，另一部分加入已经培养有视网膜混合细胞的培养瓶中，培养液中同时也加入视黄酸。视网膜混合细胞中仅加入视黄酸未加拟胚体作为对照。倒置相差显微镜下观察细胞在整个诱导过程中形态学的改变并使用免疫细胞化学检测诱导细胞中巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、广谱细胞角蛋白、微管相关蛋白-2、视紫质蛋白表达情况。结果 (1)形态学改变仅由视黄酸诱导，诱导细胞呈多种形态；在共培养条件下，绝大多数拟胚体分化出来的细胞形态非常单一，呈透明圆形。部分原贴壁的视网膜细胞出现了明显的网状结构。(2)免疫细胞化学显示两种诱导条件均可见大部分诱导细胞MAP-2阳性，并可见Nestin阳性细胞。共培养诱导尚可见GFAP阳性、Cytokeratin阳性和Rhodopsin阳性的细胞。结论 视黄酸可以诱导大部分细胞成为神经细胞，在视黄酸和与视网膜细胞共培养诱导条件下，可以获得更为纯化的形态一致的神经样细胞，部分诱导细胞表达视网膜细胞的特性。     

培养的胚胎视网膜神经细胞Ca2+分布与Ca2+通道特征

目的 检测分析培养的胚胎早期视网膜神经细胞游离钙（Ca^2 )分布与钙（Ca^2 ）通道特征。方法 体外培养11－15周胎儿视网膜神经细胞，在含Ca^2 与不含Ca^2 的Hepes缓冲液中与钙荧光指示剂Fluo3孵育染色，同时加入或不加入异博定、佩尔地平或地塞米松，共聚焦显微镜观察记录游离Ca^2 分布，以及受不同浓度K^ 刺激后Ca^2 通道开放与Ca^2 转移情况。结果 培养的11－15周胎儿视网膜神经元及神经胶质细胞受K^ 刺激后均出现明显的Ca^2 转移与再分布，在缺乏细胞外Ca^2 的情况下，细胞浆内钙库仍可迅速释放Ca^2 并转移至细胞核内。异博定、佩尔地平及地塞米松能够抑制细胞外Ca^2 进入视网膜神经细胞内。结论 胚胎早期视网膜神经元及神经胶质细胞存在L型Ca^2 通道，并已基本发育成熟。     

去小胶质细胞化对糖尿病小鼠视网膜光感受器细胞的影响

目的　观察去小胶质细胞化对早期糖尿病小鼠视网膜光感受器细胞的影响。方法　选取6~8周龄的SPF级雄性C57BL/6J小鼠作为实验动物,未经处理的5只作为空白对照组（A组）,10只采用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射法成功诱导出糖尿病后的小鼠随机等分为B、C两组。A、B组继续喂养标准实验饲料4周,C组在喂养1周标准实验饲料后添加含290 mg?kg^-1 PLX3397（集落刺激因子1受体拮抗剂）的AIN-76A（标准饮食配制的啮齿类实验动物纯化饲料）3周以去除小胶质细胞。4周后于同一时间点处死各组动物,眼球标本均于处死后即刻获取并固定。制备视网膜石蜡切片,HE染色后光学显微镜下观察视网膜结构;小胶质细胞特异性抗体P2ry12免疫荧光化学法检测小胶质细胞在视网膜上的分布,并测算平均吸光度(D)值以间接代表小胶质细胞的数量;TUNEL法测定光感受器细胞的凋亡情况;将上述观察指标在三组间进行比较。结果　光镜观察视网膜结构显示,与A组相比,B组神经纤维层变水肿,内丛状层、内核层及外核层排列变疏松;C组也出现上述改变,但程度较轻。小胶质细胞的免疫荧光化学检测结果显示:A组可在视网膜内层检测到少量的小胶质细胞;B组的小胶质细胞则分布于视网膜全层,提示其由内层向全层发生迁移;C组在各层均未检测到小胶质细胞。B组视网膜P2ry12的D值均较A组和C组高（t=3.478、8.166,均为P<0.05）,A组也明显高于C组（t=30.409,P<0.001）。光感受器细胞每高倍视野凋亡数A、B、C三组分别为 (0.67±0.87)个、(9.22±1.56)个、(2.22±0.97)个,B组与A组及C组相比差异均有统计学意义（t=14.360、11.408,均为P<0.001）;A组凋亡细胞数较C组少,差异均有统计学意义（t=-3.585,P=0.02）。结论　在糖尿病早期小胶质细胞参与了糖尿病视网膜光感受器细胞的损害过程,通过早期对小胶质细胞进行耗竭化处理可缓解视网膜的水肿和外核层细胞的凋亡。     

BMSCs联合ChABC对视网膜变性大鼠光感受器细胞凋亡的影响

目的：研究骨髓间充质干细胞（ bone mesenchymal stem cells, BMSCs ）联合硫酸软骨素酶（ chondroitinaseABC, ChABC）行视网膜下腔注射对碘酸钠诱导的视网膜变性大鼠光感受器细胞凋亡的影响。
　　方法：选取40只SD大鼠行腹腔注射碘酸钠（ NaIO3,30g／L,100mg／kg）造视网膜变性模型,分为A组不干预组,B组BMSCs注射组,C组BMSCs＋ChABC注射组,D组PBS注射组。造模后28d将ChABC处理或未处理的BMSCs注射入大鼠视网膜下腔,对照组注射PBS液,21 d后处死大鼠并取出眼球,行视网膜HE染色、视网膜细胞凋亡及免疫组化检测。
　　结果：B组凋亡率、外核层细胞数与A组、D组比较,差异均有统计学意义（P＜0．05）。 C组凋亡率、外核层细胞数与A组、D组比较,差异均有统计学意义（ P＜0．05）。 B组凋亡率、外核层细胞数与C组相比,差异无统计学意义（P＞0．05）。免疫组化显示BMSCs在眼内表达GFAP抗原。结论：BMSCs联合ChABC行视网膜下腔注射可缓解视网膜变性大鼠光感受器细胞的凋亡,延缓细胞数目的减少,从而保护视网膜光感受器细胞。     

转化生长因子-β2对体外培养的小鼠视网膜干细胞的诱导分化作用

目的研究转化生长因子（TGF）-β₂是否能促进体外培养的鼠视网膜干细胞的分化及其作用的强弱。方法小鼠胚胎在解剖显微镜下分离视网膜干细胞并进行培养，传代，nestin和chx-10免疫荧光鉴定；将第六代细胞进行诱导分化，并进行抗胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、抗opsin、抗b-tubulin、抗蛋白激酶C（PKC）免疫荧光染色，鉴定终末细胞。结果培养细胞经TGF-β₂诱导可向成熟细胞分化, 免疫荧光检测显示分化细胞的数量较胎牛血清诱导的分化细胞数量多。结论TGF-β₂能诱导视网膜干细胞分化为视网膜细胞；其诱导分化作用强于单独的血清诱导。(中华眼底病杂志, 2007, 23: 104-107)     

羊膜匀浆治疗实验性孔源性视网膜脱离

目的 观察和探讨羊膜匀浆在封闭视网膜裂孔中的作用及其机制。方法 40只新西兰白兔随机分为A、B、 C、D 4组，其中A、C为治疗组，B、D为对照组，每组各10只兔。每只兔随机取1只眼进行实验。经扁平部玻璃体切割，视网膜造孔，人为造成视网膜脱离，气液交换。治疗组裂孔表面滴加0.1 ml羊膜匀浆，而对照组滴加0.1 ml磷酸盐缓冲液(PBS)；术毕视网膜复位，20% SF6眼内填充。A、B组于手术后14 d处死动物，C、D组于手术后28 d处死动物，进行光学显微镜、电子显微镜和免疫组织化学染色检查。结果 手术后14 d，A组视网膜复位6只眼，占60%，B组视网膜复位2只眼，占20%（P=0.021）。手术后28 d，C组视网膜复位8只眼，占80%， D组视网膜复位3只眼，占30%(P=0.046)。各组之间视网膜复位的比例比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。治疗组手术后出现轻度前节炎症反应，经局部应用糖皮质激素后炎症于3～5 d消退。光学显微镜检查结果显示，治疗组应用羊膜后在视网膜裂孔边缘有多层成纤维细胞样细胞增生，与其下脉络膜和视网膜色素上皮细胞发生粘连。对照组视网膜裂孔边缘细胞增生明显减少，视网膜不能和脉络膜形成粘连。电子显微镜检查与光学显微镜检查结果一致。成纤维细胞样细胞免疫组织化学染色显示胶质纤维酸性蛋白 （GFAP）阳性，提示裂孔边缘增生细胞主要是视网膜胶质细胞。结论 羊膜匀浆有助于封闭视网膜裂孔，通过刺激裂孔边缘视网膜胶质细胞增生，促进视网膜脱离复位。     

静态压力对视网膜米勒细胞表达胶质纤维酸性蛋白和热休克蛋白-70的影响

目的观察静态压力对视网膜Mueller胶质细胞（RMGC）数量和表达胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和热休克蛋白（HSP）70的影响。设计实验性研究。研究对象大鼠RMGC。方法体外培养并鉴定大鼠RMGC，对该细胞施以不同程度的静态压力，分为A（1．33kPa）、B（2．67kPa）、C（5．33kPa）、D（10．67kPa）四组，设立未加压者为正常对照组（NC）。用倒置相差显微镜观察细胞形态结构变化，常规细胞记数方法计算细胞数量，台盼蓝染色计算各组活细胞比例。采用蛋白电泳的方法比较各组细胞中GFAP和HSP70的表达情况。主要指标细胞形态，细胞数量，细胞活性。结果随着压力增加细胞数量降低，C和D组细胞数量低于NC组、A和B组（P〈0．01）。压力导致各组细胞拒染率降低（P〈0．01），C和D组细胞拒染率低于NC组、A和B组（P〈0．01）。C和D组细胞形态结构有明显损伤，随着压力的进一步增加，细胞的损伤程度也进一步加重。NC组RMGC表达GFAP和HSPTO蛋白的水平低于压力组，C和D组GFAP表达略高于A和B组，但各压力组HSPTO表达无明显差异。结论过高的静态压力会直接损伤RMGC，RMGC表达GFAP和HSPTO水平升高，可能是高眼压条件下视网膜损伤反应的标志之一。（眼科，2007,16：44-47）     

LPS活化的小胶质细胞对人脐静脉内皮细胞VEGF及ZO-1表达的影响

目的研究活化的小胶质细胞对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和ZO-1表达的影响。方法原代培养视网膜小胶质细胞，纯化鉴定后分为三组：A组，空白对照组；B组，未激活的小胶质细胞组；C组，100ng／mL脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）激活的小胶质细胞组，然后采用Transwell小室与HUVECs共培养。用免疫荧光染色观察各组HUVECs紧密连接蛋白ZO-1的表达，并用Western Blot方法检测各组细胞VEGF和ZO-1的表达。结果细胞免疫荧光染色结果显示，LPS活化的小胶质细胞作用于HUVECs后，HUVECs的ZO-1表达明显低于未活化的小胶质细胞作用组和空白对照组。Western Blot结果亦显示，LPS活化的小胶质细胞作用组ZO-1的表达明显低于未活化的小胶质细胞作用组和空白对照组（P〈0．05），而VEGF表达则高于未活化的小胶质细胞作用组和空白对照组（P〈0．05）。结论活化的小胶质细胞影响血管内皮细胞表达VEGF和ZO-1，可能是导致屏障功能破坏的重要机制之一。     

Neuronal differentiation of hippocampus-derived neural stem cells cultured in conditioned medium of embryonic rat retina

PURPOSE: To investigate whether conditioned medium from embryonic rat retinas can induce differentiation of adult rat hippocampus-derived neural stem cells (AHSCs) into neurons and glia in vitro. METHODS: AHSCs were cultured in 3 types of media: standard culture medium, conditioned medium from embryonic rat retina, and standard culture medium with retinoic acid. Neuronal and glial differentiation of the cultured cells was assessed by cell growth analysis, flow cytometric analysis, immunofluorescent staining, and RT-PCR analysis. RESULTS: Cells cultured in the standard medium showed very little neuronal and glial differentiation. The cells cultured in the conditioned medium and the medium with retinoic acid showed neuronal morphology and growth inhibition. They also expressed mature neuronal markers and glial markers. In addition, the cells cultured in the conditioned medium expressed Thy-1, HPC-1, and calbindin, which were not found in the previous studies with postnatal retinas in vivo. Those cultured in the medium with retinoic acid expressed HPC-1 and calbindin, but not Thy-1. CONCLUSIONS: Conditioned medium from embryonic rat retina contains factors that induce neuronal and glial cell differentiation of AHSCs, and promote up-regulation of some types of retinal cell markers.     

Synthesis of retinoic acid from retinol by cultured rabbit Müller cells.

Previous observations have shown that Müller glial cells of the vertebrate retina contain cellular retinoid-binding proteins, that the retina contains retinoic acid, and that cellular retinoic acid-binding protein is present in amacrine neurons (and, in some species, Müller cells) within the retina. These findings led to the suggestion that Müller cells may synthesize retinoic acid and release it for use by other retinal cells. To test this possibility, we cultured Müller cells from adult rabbit retinas, incubated the cultures with radioactive retinol, and identified and quantified the resultant radioactive retinoids by HPLC. Retinaldehyde was rapidly synthesized from retinol, reaching a plateau of 1-2 pmol mg-1 cell protein by 30 min. Retinoic acid initially accumulated more slowly, but by 30 min constituted most of the synthesized retinoid. While the retinaldehyde remained within the cells, retinoic acid was rapidly released into the medium; extracellular retinoic acid exceeded the intracellular amount after 30 min of incubation. Smaller amounts of retinyl esters were also synthesized and retained by the cells. These results are consistent with the suggestion that Müller glia are a source of retinoic acid in the retina. The synthesis of retinoic acid by these cells, and the presence of retinal neurons that contain cellular retinoic acid-binding protein, raise the possibility that retinoic acid plays a role in the retina, although this role is not presently known. Furthermore, these results may have implications for other parts of the adult nervous system. Adult brain contains retinol- and retinoic acid-binding proteins, and, therefore, may also be a site of retinoic acid metabolism. Because of the relatively simple cellular organization of the retina and its demonstrated capacity to synthesize retinoic acid, the retina may be a system of choice for further studies of the synthesis and function of retinoic acid in adult neural tissue.     

大鼠尾芽胚视杯干细胞的分布与特征

目的探索视杯干细胞在大鼠尾芽胚(第12.5天胚龄)的分布与特征。方法采用免疫组织化学技术，检测视杯干细胞在大鼠尾芽胚(第12.5天胚龄)视杯组织中的分布；分离视杯细胞，体外无血清培养，应用免疫细胞化学技术分析其增生能力以及血清诱导分化前后CHX10和多种成熟视网膜细胞特异性标记蛋白的表达，以了解这一发育时期视杯组织的分化特点。结果大鼠尾芽胚(第12.5天胚龄)的视杯干细胞主要分布在视杯的内外层和边缘层，不表达成熟视网膜细胞特异性标记蛋白。从尾芽胚视杯中分离出的细胞具有单细胞克隆能力，CHX10表达阳性，血清诱导后表达多种成熟视网膜细胞特异性标记蛋白：Thy1.1、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、蛋白激酶C(PKC)α和rhodopsin。结论大鼠尾芽胚(第12.5天胚龄)视杯主要由未分化的细胞组成，视杯干细胞的分布集中在视杯内层和边缘层。体外培养的视杯干细胞增生能力强，经诱导分化后表达多种成熟视网膜细胞特异性标记蛋白。(中华眼底病杂志,2005,21:159-162)     

Retinoblastoma. HLA expression induced by retinoic acid

The full expression of Class 1 antigens of the major histocompatibility complex (HLA A,B,C,) on ocular cell surfaces appears to be developmentally regulated; HLA is undetectable in retina from 16-week-old fetal eyes but is present in adult retina. Cultured retinoblastoma (RB) may serve as a useful model of retinal cell development. SF81 is an undifferentiated subculture of in vitro retinoblastoma with little evidence of spontaneous differentiation and lack of expression of HLA, attesting to the "undifferentiated" character of this cell line. RB SF81 cells were treated with retinoic acid, a known stimulator of differentiation (optimal concentration 5 X 10(-8) M). HLA expression was evaluated with immunofluorescence, immunoperoxidase, and radioimmunoassay, using monoclonal antibodies. RB SF81 treated with retinoic acid showed a significant, persistent increase in HLA levels by 24 hours compared with controls. Thus, retinoic acid has been documented to induce the surface expression of HLA in undifferentiated retinoblastoma. Developmental parallels between embryonic retina and in vitro retinoblastoma treated with retinoic acid exist.     

神经营养因子和生长因子等对培养的成人视网膜神经细胞的影响

目的　探讨成人视网膜神经细胞体外培养条件 ,脑源性神经营养因子 (BDNF)、神经营养素 (NT 4 )、表皮生长因子 (EGF)、成纤维细胞生长因子 (FGF)、诱导分化因子全反式视黄酸 (RA)等对成人视网膜神经细胞生长、增殖、凋亡的影响及调控机制。方法　胰蛋白酶消化结合机械吹打分离成人视网膜神经细胞 ,在培养基中加入或不加入BDNF、NT 4、EGF、FGF、RA。根据细胞形态、生长方式及免疫细胞化学特征确定细胞类型。比较各组中神经元的数目、转录调控因子c fos、c jun及细胞凋亡调控因子Bcl 2、Bax表达水平。结果　与对照组相比 ,BDNF、FGF处理组存活的神经元特异性烯醇酶、Thy1.1抗体和Bcl 2、c fos及c jun表达阳性细胞数也增多 (均P <0 0 1) ,培养的视网膜神经细胞在体外存活时间可长达 8个月 ;RA处理组c fos、c jun阳性细胞数较对照组增多 (均P <0 0 1) ;而NT 4、EGF处理组各项指标与对照组比较 ,差异无显著意义 (均P >0 0 5 )。结论　BDNF、FGF、RA能显著提高体外培养的成人视网膜神经细胞的存活 ,其机制可能涉及上调转录调控因子c fos、c jun及凋亡抑制因子Bcl 2的表达 ,或下调凋亡促进因子Bax的表达。但EGF、NT 4对体外培养的视网膜神经细胞存活状态无明显改善作用。     

Direct identification and enrichment of retinal stem cells/progenitors by Hoechst dye efflux assay

PURPOSE: The present study describes a method for isolating neural stem cells/progenitors directly from the freshly dissociated embryonic retina (prospective identification) and compares their characteristics with those enriched from mitogen-exposed embryonic retinal cell culture. METHODS: Cell dissociates from embryonic rat retina and mitogen-exposed embryonic retinal cultures were stained with Hoechst 33342 fluorescent dye. The emission patterns of cells were analyzed in both blue and red wavelength using flow cytometry to enrich cells that retained or excluded the dye. The phenotype characteristics and differentiation potential of enriched cells were analyzed by immunocytochemical, RT-PCR, and electrophysiological analyses. RESULTS: The Hoechst dye efflux assay identified a minor population of cells, called side population (SP) cells, in fresh retinal dissociates. These cells that preferentially excluded the Hoechst 33342 fluorescent dye were proliferative and expressed both neural progenitor and retinal progenitor markers. The retinal SP cells generated functional neurons and glia and possessed the ability to differentiate along lineages of different late-born retinal cell types. Cells of similar phenotypes and potential were observed in the SP obtained from mitogen-exposed retinal culture. CONCLUSIONS: The Hoechst dye efflux assay represents an effective method for direct identification of retinal stem cells/progenitors. These results demonstrate that the prospectively isolated retinal stem cells/progenitors and those enriched as SP cells from mitogen-exposed retinal cell culture may be similar in their properties and potential.     

牵拉力对RPE细胞分泌VEGF影响的实验研究

目的 观察牵拉力诱导下RPE细胞血管内皮生长因子（VEGF）的表达及两者之间的关系。设计 实验研究。研究对象 ARPE-19细胞株。方法 应用Flexcell-5000应力加载系统牵拉3D-RPE模型。根据不同大小牵拉力分为对照组（无牵拉力组）、A组（20% 形变组）、B组（10%形变组）、C组（5%形变组）。各组依照不同的时间点收取样本进行检测。应用实时荧光定量PCR检测各组不同时间点（0、24、48 h）VEGFA mRNA的表达情况， 蛋白印迹法检测（0、24、48 h）VEGFA-165的表达以及ELISA方法检测（0、12、24、36、48 h）细胞上清液中VEGFA的分泌。同时，为了体外定量检测细胞VEGF的促新生血管形成能力，使用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）进行了体外成管实验（24、48h）。主要指标 VEGFA mRNA相对表达量、VEGFA-165相对表达量、细胞上清液VEGFA分泌量、HUVEC成网数。结果 与对照组比较，A、B和C组在24 h（F=7.99，P=0.009）和48 h（F=75.09，P=0.000）的VEGFA mRNA表达均显著高于对照组，且B组VEGFA mRNA相对表达量在任意时间点均高于A组和C组（P均<0.05）。受牵拉力的三组的VEGFA-165蛋白相对表达量在24 h（F=51.62，P=0.000）和48 h（F=91.69，P=0.000）明显高于对照组。其中，B组VEGFA-165蛋白相对表达量在24 h（0.794±0.045）分别是A组的1.3倍（P=0.012）和C组的1.2倍（P=0.043），且在48 h（1.192±0.042）VEGFA-165蛋白相对表达量分别是A组的1.4倍（P=0.0001）和C组的1.3倍（P=0.0001）。随着时间延长，在24 h（F=131.16，P=0.0001）、36h（F=66.56，P=0.0001）和48 h（F=605.19，P=0.0001）A、B和C组细胞上清液VEGFA浓度明显高于对照组。体外成管实验中，48 h受牵拉力各组成网数均显著高于对照组（F=13.13，P=0.002），而24 h仅B组成网数有明显升高（P=0.029）。结论 牵拉力可诱导RPE细胞VEGF过表达，且具有时间效应和潜在的促新生血管形成的功能。     

Development of traction retinal detachments following intravitreal injections of retinal Muller and pigment epithelial cells

We injected varying numbers of retinal Muller glia into the rabbit vitreous in an established model of traction retinal detachment. We used indirect ophthalmoscopy to observe the changes elicited during the following 1 month. Although the severity of the tractional changes increased with increasing numbers of the glial cells, the pathology produced stabilized within the 1st week of injury. Muller glia were less effective at eliciting retinal detachments than retinal pigment epithelial cells (RPE) or mixtures of glia and RPE. Intravitreal tissue membranes derived from the glia differed morphologically from those derived from RPE. The glial membranes had fewer fibroblast-like cells, synthesized less extracellular matrix, and showed lower intravitreal cell proliferation, as determined by³H-thymidine radioautography. Our findings indicate that membranes composed only of Muller glial cells promote less severe retinal pathology than those membranes composed of RPE or mixed cell types.This study was supported in part by National Eye Institute grant EY04799 (J.M.B.), Core Center Grant EY01931 (J.M.B.), an unrestricted grant from Research to Prevent Blindness, Inc., and the Good Samaritan Foundation for Ophthalmic Research (Portland, Oregon)