转化生长因子-β在视网膜母细胞瘤中的表达

转化生长因子-β(TGF-β)作为细胞生长的负调控因子,参与了许多肿瘤的发生、进展和转移[1].由于国内外对TGF-β在视网膜母细胞瘤(RB)发病机制上所起作用的研究较少.因此,我们用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP)检测了TGF-β在RB中的表达,探讨其与RB病理分期、组织分型、视神经浸润深度的关系.现将结果报道如下.     

体外培养及诱导胚兔视网膜及脑神经干细胞分化的研究

目的 比较体外不同培养条件对视网膜及脑神经干细胞(NSCs)视紫红质的纯化能力及不同诱导条件对NSCs的诱导分化能力.方法 取胚兔视网膜及大脑皮质制备单细胞悬液,分别在5种不同培养基中进行体外培养并纯化.选取无血清条件下传3代的NSCs,分别在2种培养基中诱导8～10 d.采用免疫荧光法及流式细胞仪检测所获得细胞的神经干细胞和视网膜神经上皮细胞抗原的表达.结果 免疫荧光法显示无血清培养条件下2种组织来源的NSCs均部分表达巢蛋白.流式细胞术显示2种诱导方式均部分细胞表达巢蛋白,较诱导前明显降低,而视紫红质及Thy1.1的表达均较诱导前明显增高.经5%胎牛血清(FBS)诱导的细胞表达视紫红质较联合应用全反式视黄酸(ATRA)时高,差异均有统计学意义(χ2=30.59,6.76;P<0.01).但Thy1.1表达低于后者,差异也有统计学意义(χ2=6.19,22.92;P=0.01).结论 无血清培养基添加N2、EGF、bFGF、LIF 4种因子可以获得最佳纯化效果.2种诱导培养基都能够诱导NSCs的分化,视网膜NSCs分化为视网膜神经上皮细胞的能力高于大脑皮质NSCs.     

玻璃体积血患者玻璃体中转化生长因子-β2的定量分析

为了解玻璃体积血患者玻璃体中转化生长因子 - β2 (trans-forming growth factor- β2 ,TGF- β2 )的变化 ,我们检测了正常人和外伤、糖尿病视网膜病变 (diabetic retinopathy,DR)、视网膜静脉阻塞 (retinal vein occulsion ,RVO)所致的玻璃体积血患者玻璃体中 TGF-β2 的含量 ,现分析报告如下。1　对象与方法临床资料 :本组病例包括外伤、DR、RVO原因所致的玻璃体积血 ,共 2 3例 2 3只眼 ,其中男性 13例 (13只眼 ) ,女性 10例(10只眼 ) ,年龄 2 4～ 73岁 ,平均 5 6 .6岁。2 3只眼术前均因明显玻璃体积血混浊机化 ,眼底看不清。其中…     

冻存复苏后大鼠视网膜干细胞的增生及分化特性

目的研究视网膜干细胞冻存复苏后的成活率及再培养后的增生分化特性。方法对胎龄17 d Long Evans的大鼠眼视网膜干细胞进行分离与体外培养。利用无血清培养基短期体外培养大鼠胚胎来源的视网膜干细胞，将传代三代后的视网膜干细胞以冻存液［体积分数为80%的改良基础培养基（DMEM）/F12，10%牛血清白蛋白（BSA），10%二甲基亚砜（DMSO），碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）20 ng/ml］于液氮中冻存，于1、2、4、8、12、16周分别复苏，计数活细胞比例进行再培养，并进一步诱导分化，采用免疫细胞荧光化学方法检测视网膜干细胞的增生及分化特性。结果不同的冻存时间对冻存后细胞存活率的影响无显著差异(P＞0.05)，再培养生长良好，具有视网膜干细胞特异性标志，并可进一步诱导分化为视网膜各种类型的细胞。结论大鼠视网膜干细胞的冻存复苏并不影响其原有的增生及分化特性。(中华眼底病杂志, 2007, 23: 94-97)     

转化生长因子β与视网膜病变

转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)是一类具有多种生物学功能的多肽生长因子,能调节多种细胞的生长、分化和移行,参与细胞外基质成分的合成和免疫调节,它不仅是正常眼内组织代谢及功能的基本因素,在许多眼内病理过程中它也起着重要作用。文章就TGF-β的结构、功能以及它与视网膜疾病关系作一简要综述。     

体外培养的兔睫状体色素上皮细胞表达转化生长因子-β1

目的研究体外培养条件下兔睫状体色素上皮(ciliarypigmentepithelium,CPE)细胞是否表达转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1),探讨TGFβ1在增殖性玻璃体视网膜病变中的作用。方法体外培养兔眼CPE细胞,取第3代细胞应用免疫组织化学Supervision染色方法检测TGFβ1的表达,用PBS代替第1抗体作为阴性对照。结果与正常活体组织不同,体外培养的兔CPE细胞经免疫组织化学染色,其细胞膜和细胞浆呈棕黄色阳性着色,阴性对照组未见明显棕黄色阳性着色。结论CPE细胞具有合成和表达TGFβ1潜能,为进一步研究增殖性玻璃体视网膜病变、房水形成和睫状体炎症奠定了基础。     

体外培养人眼小梁细胞表达转化生长因子-β_2

目的 :了解体外培养人眼小梁细胞是否会表达转化生长因子 β2 (Transforminggrowthfactor β2 ,TGF β2 ) ,以确定TGF β2 的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关。方法 :一步法提取体外培养人眼的小梁细胞RNA ,利用RT PCR检测TGF β2 的mRNA ,用双链测序鉴定PCR产物 ,并用免疫组化SUPERVISION法检测TGF β2 蛋白的表达。结果 :RT PCR扩增得到的单一产物 ,其序列与己知序列完全一致。TGF β2 免疫组化染色呈阳性。结论 :小梁细胞自身产生的TGF β2 ,是小梁网局部微环境和房水中TGF β2 的来源之一 ;TGF β2 不仅通过旁分泌方式 ,也可通过自分泌方式作用于小梁细胞。小梁细胞产生TGF β2 的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关 ,值得进一步研究。     

兔羊膜成体干细胞培养及体外定向诱导神经细胞分化

目的 观察体外分离、培养的兔羊膜成体干细胞(ADSC)定向诱导神经细胞的分化结果.方法 新西兰雌兔羊膜分离、培养ADSC.实时定量聚合酶链反应(PCR)检测羊膜ADSC的纤连蛋白(Fibronectin)、巢蛋白(Nestin)、波形蛋白(Vimentin) mRNA的表达水平.单克隆形成实验证实羊膜ADSC是否具有自我复制能力.培养成功的ADSC中加入神经分化诱导培养基诱导神经细胞分化.诱导分化5d后,免疫荧光染色检测β-微管蛋白(tubulin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 培养的ADSC在24 h后逐渐从羊膜组织中移行出;72 h可见明显的多角形细胞富集在羊膜组织周边;120 h后多角形细胞致密地分布于羊膜四周.分裂后的子代细胞形态同父代细胞.单克隆形成实验结果证实羊膜ADSC具有自我复制能力.实时定量PCR检测结果显示,羊膜ADSC的Nestin、Vimentin、Fibronectin mRNA分别是脾脏细胞同种分子表达量的15.79、1.91、7.65倍,两者差异有统计学意义(Z=-5.243、-3.972、-2.524,P＜0.05).免疫荧光染色结果显示,β-tubulin在大部分细胞的胞质中表达;GFAP在部分细胞的细胞质中表达.结论 羊膜ADSC具有自我复制能力,在合适条件下能够分化成神经元和神经胶质细胞.     

胎儿视网膜前体细胞的分离培养

目的建立视网膜前体细胞的培养方法。方法分离8~12周流产胎儿的视网膜神经上皮细胞，采用悬浮和贴壁两种方法分别进行培养和传代，取传代细胞用含5%胎牛血清的、无碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的培养基诱导分化培养14 d，并采用免疫荧光法检测培养细胞诱导分化前后前体细胞和视网膜终末细胞标记物表达的改变。结果悬浮培养的细胞形成神经球并表达神经干细胞的标记物巢蛋白nestin，但无法成功传代扩增；贴壁培养的细胞可连续传代并表达nestin，传代细胞诱导分化后表达视网膜终末细胞的标记物胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、β微管蛋白(β-tubulin)和恢复蛋白recoverin。结论从8～12周的人胚胎视网膜神经上皮分离培养的视网膜前体细胞具有体外扩增和多分化潜能。（中华眼底病杂志，2007，23：98-100）     

人重组表皮生长因子和牛磺酸体外诱导人脐血干细胞分化为神经元样细胞

目的 探讨人重组表皮生长因子(rhEGF)和牛磺酸体外诱导人脐血间充质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞的实验条件和可能机制.方法 用含有105U/L青霉素、100 mg/L链霉素、10%胎牛血清(FBS)、5%自体血浆、4 mmol/L-谷氨酰胺、30 ng/ml rhEGF的Dulbeceo改良Eagle培养基与F12以1:1混合(DMEM/F-12)培养液对人脐血MSC进行原代培养,传至第3代后改用含牛磺酸的培养基进行诱导.流式细胞仪检测细胞表面抗原CD90、CD29、CD34、CD44及CD45的表达.免疫细胞化学方法观察神经元特异性烯醇化酶(NSE)、视紫红质、巢蛋白的阳性细胞表达情况.统计学方法采用两组资料的卡方检验分析NSE、视察红质、巢蛋白的表达.结果 脐血MSC首次培养5～7 d,有间充质样细胞贴壁,3～4周后细胞达80%～90%融合,传代后生长加速;形态学类似骨髓源性MSC.脐血MSC均一稳定地表达MSC的相关抗原CD29、CD44、CD90,不表达CD34、CD45.经牛磺酸体外诱导后的脐血MSC中,3120个细胞中有2515个细胞表达神经元特异性烯醇化酶(NSE),3050个细胞中有903个细胞表达巢蛋白,3175个细胞中有1168个细胞表达视紫红质;未诱导组的2965个脐血MSC中仅有234个细胞表达NSE,其他抗原未见表达.两组间NSE、巢蛋白和视紫红质的表达差异具有统计学意义(χ2=3 242.9,1 073.0,1 444.5;P值均<0.01).结论 人脐血MSC经rhEGF和牛磺酸诱导后能使部分MSC向神经元样细胞或视紫红质阳性细胞分化.     

转化生长因子-β与翼状胬肉

转化生长因子-β(transforminggrowthfactor-beta,TGF-β)具有多种生物学作用,翼状胬肉中也有其异常表达。TGF-β在翼状胬肉发病中的作用主要表现为:①能促进翼状胬肉上皮细胞,成纤维细胞的增殖和新生血管形成。②能促进多种细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)的合成。③对翼状胬肉中的炎症和免疫反应也有介导作用。     

胰岛素对人RPE细胞增殖及转化生长因子-β2分泌的影响

目的:探讨胰岛素对RPE细胞增殖和分泌转化生长因子-β2(TGF-β2)的影响。方法:将不同浓度的胰岛素(0.1～10×103U/mL)加入培养基刺激ARPE-19细胞不同时间(0～48h)。采用MTS法检测RPE细胞的增殖情况;采用ELISA法检测各种处理情况下RPE细胞分泌TGF-β2的情况,Real-time PCR法检测TGF-β2mRNA的表达情况。结果:MTS结果显示,作用12h后,各实验组与对照组比较RPE细胞明显增殖(P<0.05)。ELISA结果表明胰岛素可明显促进RPE细胞分泌TGF-β2,并呈时间及剂量依赖性。Real-time PCR结果显示,胰岛素作用24h后,TGF-β2mRNA表达上调(P<0.01),且10×103U/mL胰岛素组TGF-β2mRNA表达明显高于0.1×103U/mL胰岛素组(P<0.01)。结论:RPE细胞是眼内近视信号因子TGF-β2的重要来源,胰岛素可以通过促进RPE细胞增殖并分泌TGF-β2进行信号传递,促进近视发生。     

转化生长因子-β在增生性玻璃体视网膜病变中的作用

增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是孔源性视网膜脱离手术失败的主要原因,其发病机制尚未完全明了。综述了转化生长因子13．(TGF—β1)的生物学特性以及它在PVR发展中的作用。探讨TGF—β1与PVR形成的关系。TGF—β在PVR的形成过程中参与了细胞的增殖、膜的收缩。TGF—β是加速PVR形成的重要生长因子之一。将来也许可以用TGF—β的拮抗剂来预防和治疗PVR。     

转化生长因子-β对角膜伤口愈合的调节

细胞生长因子在机体伤口愈合过程中具有重要的调节作用，由于角膜的特殊结构和功能，其伤口愈合的调节显得至关重要，且被人们所重视。本文叙述了转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）及其受体的结构和作用，ＴＧＦ－β的激活和其在角膜细胞成分中的表达情况，同时讨论了ＴＧＦ－β在角膜伤口愈合过程中的作用。     

Mfn2在TGF-β2诱导的晶状体上皮细胞上皮-间质转化中的作用

目的研究线粒体融合蛋白基因2(mitofusin 2,Mfn2)在转化生长因子β₂(transforming growth factorβ₂,TGF-β₂)诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的表达及作用。方法实时荧光定量PCR检测不同浓度(10 ng·mL^-1、50 ng·mL^-1、100 ng·mL^-1)TGF-β₂处理HLECs 24 h后,各TGF-β₂处理组与对照组(0 ng·mL^-1 TGF-β₂) Mfn2 mRNA表达量差异。选取最佳作用浓度后,免疫荧光细胞化学检测TGF-β₂处理组与对照组的Mfn2蛋白表达变化,实时荧光定量PCR和免疫荧光细胞化学检测分别验证TGF-β     

TGF-β1诱导体外培养角膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达

目的观察转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对体外培养的角膜成纤维细胞结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)的诱导表达作用。方法体外培养的角膜成纤维细胞分实验组和对照组,对照组弃原培养液,加无血清培养液继续培养,实验组用不同浓度的TGFβ1(0.1μg·L-1、1μg·L-1、10μg·L-1)处理24h,用RTPCR方法检测角膜成纤维细胞CTGFmRNA的表达情况。结果1μg·L-1和10μg·L-1TGFβ1处理组CTGF/GAPDH像素比值分别为0.35±0.05和1.25±0.10,均较对照组高(0.13±0.02),差异具有统计学意义,同时CTGF/GAPDH比值随TGFβ1浓度增加而增加。结论TGFβ1可以诱导角膜成纤维细胞CTGF的表达,在角膜成纤维细胞中CTGF也可能是TGFβ1对细胞起作用的下游信号分子。     

转化生长因子-β与葡萄膜黑色素瘤

转化生长因子-β(TGF-β)是一种具有多种生物学功能的多肽类生长因子。TGF-β在肿瘤的发生过程中起着双向调节作用,同时TGF-β对细胞的增殖与分化、细胞外基质的产生、血管的生成及机体免疫系统均起着重要作用。近年研究TGF-β的异常过表达以及信号传导通路的异常与葡萄膜黑色素瘤生长和侵袭转移能力密切相关。就TGF-β的结构、功能以及它在葡萄膜黑色素瘤发生过程中的作用进行综述。     

转化生长因子-β2体外抑制人角膜内皮细胞增殖的作用

目的:研究转化生长因子TGF-β2对体外培养人角膜内皮细胞(HCEC)增殖的影响机制。方法:体外培养经血清饥饿法获得同步化的HCEC,用不同浓度TGF-β2对HCEC进行不同时间的处理,采用细胞计数、MTT染色以及流式细胞仪(FCM)和RealtimePCR检测TGF-β2对HCEC的增殖、细胞周期及细胞中p27kip1和p21cip1表达的影响。结果:TGF-β21～15μg/L对HCEC有显著的增殖抑制作用,具有浓度和时间依赖性,9μg/L是TGF-β2抑制HCEC细胞增殖的峰浓度。9μg/LTGF-β2处理后,处于G1/G0期HCEC数量显著增加,并具有时间依赖性。9μg/LTGF-β2处理24h后,p27kip1表达量显著增加,48h后p27kip1和p21cip1的表达量均显著增加,也具有时间依赖性。结论:TGF-β2对HCEC具有显著的浓度和时间依赖性增殖抑制作用,可能通过先后诱导p27kip1和p21cip1表达量的增加将细胞拘留在G1/G0期来实现的。     

转化生长因子-β2在糖尿病大鼠视网膜中基因表达的研究

目的:糖尿病视网膜病变(diabetic retinophthy,DR)是糖尿病在眼部的主要并发症,为我国四大致盲眼病之一。DR的病理基础是微血管病变,研究其发生、发展的机理对预防和治疗这一疾病具有重要的临床意义。而转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是一类能够调节细胞生长和分化的多肽,具有多种生物学作用。本研究选择转化生长因子-β2(TGF-β2)为研究对象,检测其在不同时相点糖尿病大鼠视网膜中的基因表达情况,观察和分析TGF-β2的动态表达变化,探讨其在糖尿病视网膜病变发生、发展中的作用机制。方法:选10w龄正常雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,用链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠建立糖尿病动物模型,血糖浓度大于16.7mmol/L定为糖尿病模型大鼠,于第4,8,12,16,20,24wk分别分离视网膜,液氮保存,应用RT-PCR检测糖尿病大鼠视网膜中不同时相点TGF-β2的基因表达。结果:(1)制备大鼠视网膜总RNA,甲醛变性凝胶电泳显示RNA样品完好无降解,能够用于基因表达分析。(2)用STZ成功诱导建立了大鼠糖尿病动物模型。(3)与正常对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜中TGF-β2mRNA表达于4wk时升高,但统计学上差异无显著性(P>0.05);8wk时则下降,差异有显著性(P<0.05);12wk时仍下降,差异有显著性(P<0.05),较8wk时已出现上升趋势;16wk时与正常对照组无明显差异(P>0.05);20wk时则开始升高,但差异无显著性(P>0.05);24wk时继续升高,差异有显著性(P<0.05)。结论:TGF-β2的mRNA表达在糖尿病大鼠视网膜中较对照组于第8wk、12wk时明显降低,第24wk时明显升高,可以看出TGF-β2随时间变化呈双相性。一方面说明TGF-β作为一种重要的细胞生长调节因子的双向调控特点,另一方面也说明TGF-β2在DR中可能发挥着重要作用。     

转化生长因子β2诱导人小梁细胞凋亡的体外研究

目的　观察转化生长因子 β2 (transforminggrowthfactor β2 ,TGF β2 )是否能诱导体外培养人眼小梁细胞 (humantrabecularmeshworkcells,HTMC)发生凋亡。方法　将体外培养的第 3～ 5代人眼小梁细胞分为对照组和实验组 ,实验各组分别经 0 .32、1.0 0、3.2μg·L-1TGF β2 作用 4 8h后 ,分别用透射电镜、TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡的诱导情况。结果　透射电镜观察发现凋亡细胞典型的形态学变化———核染色质凝集边集 ,凋亡小体形成等。TUNEL法检出发生DNA片段化的HTMC。经流式细胞术定量分析 ,不同浓度TGF β2 处理的HTMC凋亡细胞百分数分别为 ( 2 .79± 0 .4 4 ) %、( 4 .4 3±1.17) %、( 9.6 0± 2 .0 5 ) % ,其中 1、3.2 μg·L-1TGF β2 处理组与对照组 ( 1.4 1± 0 .34) %相比分别有显著差异和极显著差异。结论　TGF β2 能诱导体外培养HTMC发生凋亡 ,推测其可能参与了原发性开角型青光眼患者和正常人衰老过程中HTMC数目的减少。