皖南尖吻蝮蛇蛇毒内纤溶组分的圆二色性及振动光谱研究

本文通过ＣＤ、ＩＲ和Ｒａｍａｎ光谱法系统地研究了皖南尖吻蝮蛇蛇毒中纤溶组分（ＦＰ）的结构。结果表明ＦＰ中含１７．６５％的α－螺旋、３４．０８％β－折叠及４８．２７％的无规卷曲结构；同时对ＦＰ振动光谱的吸收峰进行了初步的指认。     

尖吻蝮蛇蛇毒纤溶因子单克隆抗体的制备

目的：制备从尖吻蝮蛇蛇毒中分离的纤溶因子的单克隆抗体，为克隆基因提供特异性的探针。方法；将纤溶因子免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，筛选稳定分泌抗体的细胞株。     

尖吻蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化及氨基酸序列测定

目的:从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化出高纯度的纤溶酶并对其进行初步性质研究和氨基酸序列分析。方法:采用DEAE-Sepharose FF离子交换和两次Superdex75PG凝胶过滤,从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出可直接溶解纤维蛋白原的蛋白酶。结果:分离到的纤溶酶相对分子质量为25kD,HPLC分析纯度在97%以上,氨基酸序列分析其N末端为MSTEF QRYME IVVNHS MVKKY NGDSD KIKAW。结论:采用此工艺可从尖吻蛇毒中分离出高比活的纤溶酶,为进一步研究其药理作用奠定了基础。     

浙江尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶纯化及促凝活性

采用柱色谱等纯化方法从浙江尖吻蝮蛇凝血酶中提取获得一种类凝血酶（TQ-1）,采用RP-HPLC、MALDI-TOF、SDS-PAGE、等电聚焦电泳、Edman降解法对其进行了结构确证,并对其体内、外凝血活性进行测定。纯化所得TQ-1纯度98.5%,相对分子质量为30 522.95,SDS-PAGE分析其为一种单链蛋白,等电点为4.5,N末端氨基酸序列为VIGGNECDTNEHRFL。体外凝血活性为900U/mg,小鼠体内凝血试验结果表明：TQ-1凝血活性与阳性对照药巴曲亭相似。TQ-1为一种未见报道的尖吻蝮蛇类凝血酶,具有较高的开发价值。     

尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA序列抗原位点分析及免疫保护效果观察

目的采用生物信息学方法分析尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA序列的关键抗原位点,并观察根据这些位点设计合成的新型免疫原的免疫保护效果。方法扩增尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA序列,采用Jameson-Wolf方法和ClustalX软件结合的生物信息学方法分析其抗原位点,人工合成筛选的抗原位点序列,并连接到pIRESneo表达载体,3次(0、2、4周)对BALB/c小鼠进行核酸免疫,ELISA法测定免疫后机体抗体水平,出血中和实验和攻毒实验初步观察其免疫保护效果。结果生物信息学方法分析得到6个关键抗原位点(MPA-1～MPA-6);ELISA法检测抗血清结果表明,抗原位点序列诱导小鼠产生的抗血清相对未免疫的小鼠血清稀释100倍后仍能表现出阳性结果;出血中和实验和攻毒实验表明,将抗原位点序列免疫小鼠可以诱导机体产生免疫反应,使体内产生抗体,能有效中和蛇毒,从而对尖吻蝮蛇蛇毒引起的出血有防护作用。结论用生物信息学方法成功获得尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA序列的6个关键抗原位点,针对这些位点设计合成的新型免疫原展示出初步免疫保护效果。     

尖吻蝮蛇类凝血酶的研究现状

尖吻蝮蛇类凝血酶是我国正在研究的一种新止血药,其结构与以往的类凝血酶完全不同。目前的研究表明,该凝血酶具有良好的止血效果及广阔的临床应用前景。     

中国福建尖吻蝮蛇蛇毒类凝酶止血作用的实验研究

目的：研究中国福建尖吻蝮蛇蛇毒类凝酶止血作用及其作用机制。方法：用断尾法测小鼠出血时间,观察止血剂量对家兔全血凝固时间及纤维蛋白原含量的影响。结果：蛇毒类凝酶在0．0001－0．0100kU/kg可使小鼠出血时间明显缩短,而当剂量增大到3．0000kU/kg时,则显著延长小鼠出血时间。其0．0004－0．0036kU/kg剂量能使家兔全血凝固时间明显缩短,降低纤维蛋白原的含量。结论：中国福建尖吻蝮蛇蛇毒类凝酶在小剂量时可作为止血药,它可能通过适度降低纤维蛋白原的含量,缩短出凝血时间而发挥其止血作用。     

抗尖吻蝮蛇蛇毒金属酶类共同基序IgY抗体的制备与研究

[目的]制备针对尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶类共同基序的IgY抗体,并对其中和蛇毒活性的作用进行研究.[方法]通过分析尖吻蝮蛇蛇毒各类金属蛋白酶类共有序列,设计合成与其酶活性密切相关且高度保守的抗原肽PT1和PT2;偶联复合物KLH-PT1、KLH-PT2免疫母鸡获得IgY抗体.采用ELISA和Western blot等方法对IgY效价及与尖吻蝮蛇蛇毒和短尾蝮蛇蛇毒的交叉反应特性进行初步研究;最后通过抗小鼠皮下出血实验对IgY中和活性进行评价.[结果]ELISA、Western blot结果表明,抗KLH-PT1、抗尖吻蝮蛇蛇毒IgY均可与尖吻蝮蛇蛇毒、短尾蝮蛇蛇毒发生交叉反应且后者显著强于前者;抗KLH-PT2 IgY在体外与尖吻蝮蛇蛇毒、短尾蝮蛇蛇毒无明显交叉反应,在体内抗出血实验中却表现出很强的中和毒性作用,并且显著优于前两者.[结论]通过设计金属蛋白酶共有序列抗原肽,制备了能与多种血循型蛇毒交叉反应的IgY抗体,这为制备特异、高效、低毒性且广谱的抗出血型蛇毒抗体奠定了基础.     

尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin的亚基的拆分和氨基酸残基测序

目的 测定Agacutin两个相近亚基的N端15个氨基酸残基序列,酶分子的2个亚基需拆分以获得亚基单肽链并测序.方法 通过生物化学方法获得高纯化Agacutin,经SDS-PAGE电泳分离、亚基胶条回收及PVDF膜电转移技术等方法制备了可供鉴定和测序的单亚基样品,后者通过Edman降解法,测定了亚基N端15个氨基酸残基序列.结果 大亚基(16 kDa)的序列为:DCSSGWSSYEEHQYY,小亚基(15kDa)序列为DSSGWSSYEGHEYYV.结论 测序结果经NCBI数据库检索发现,Agacutin为新的蛇毒类凝血酶.     

膜蛋白构象改变与膜脂非双层变化

凝集素与细胞膜上蛋白质结合对膜蛋白和膜脂的结构产生影响。本文研究ＣｏｎＡ与人红细胞膜蛋白结合下膜蛋白构象和运动变化及膜脂非双层转变。结果表明膜蛋白的α螺旋减少，膜蛋白分子的运动变化，膜脂分子出现非双层。说明配基与膜蛋白相互作用发生膜蛋白构象改变的同时导致膜脂多型性变化。     

江西蝮蛇蛇毒类凝血酶分离纯化及理化、酶学性质的鉴定

本文采用DEAE—纤维素DE—52离子交换层析及SephadexG—150凝胶过滤法,从江西蝮蛇蛇毒中分离、纯化类凝血酶。该酶为糖蛋白,分子量39,200,pI为4.96,酸性氨基酸含量较高。类凝血酶水解苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)的最适pH为8.0,km为3.57×10~(-4)M,其活性可被二异丙基氟磷酸(DFP)和苯甲基磺酰氟(PMSF)抑制。N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)可迅速抑制该酶的酯酶活性。该酶能直接作用于纤维蛋白原使之转变为纤维蛋白引起凝聚,但其凝固速度较牛凝血酶慢。     

DNA损伤修复与大鼠平阳霉素性白内障的关系

目的：观察平阳霉素诱发的大鼠白内障模型晶体上皮细胞ＤＮＡ损伤及修复的动态过程。方法：单细胞电泳法（Ｓｉｎｇｌｅｃｅｌｌｇｅｌａｓｓａｙ，ＳＣＧ）。结果：首次注射平阳霉素１２ｈ即出现严重的ＤＮＡ单链断裂（ＤＮＡｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋｓ，ＳＳＢ），直至白内障产生，ＳＳＢ仍很严重，该ＤＮＡ损伤较其它模型更严重，其晶体囊内容物在致障过程中出现明显的液化与崩解。结论：平阳霉素性白内障模型在致障过程中有较其它模型更严重的ＤＮＡ单链损伤，且可能有不尽相同的机理存在。     

蝮蛇毒磷酸二酯酶抗原的制备及性质

为研究蛇类毒腺细胞分化过程中磷酸二酯酶的作用,需制备特异性和敏感性较高的该酶单克隆抗体用于免疫组化研究.本文所介绍为浙江蝮蛇蛇毒中磷酸二酯酶抗原的提取纯化过程,为制备单克隆抗体提供条件.作者采用离子交换技术和分子筛过滤法相结合的方法提取抗原,具有步骤少、分离效率高的特点.所得抗原经聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳呈单一条带,测定分子量为20900.     

抗蝮蛇毒磷酸二酯酶单克隆抗体的制备及鉴定

从蝮蛇毒中提取磷酸二酯酶,用此酶免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Fo融合,以间接ELISA检测杂交瘤细胞培养上清液和小鼠腹水中的特异性抗体,其效价分别为1∶128和1∶51 200.抗原阻断试验结果表明,此抗体对蛇毒磷酸二酯酶具有特异性.该杂交瘤细胞株定为G_8,该株单抗属鼠IgG_(2a)亚型,经体外持续培养6个月,其分泌抗体性能稳定.     

原发性高血压患者贫血小板血浆与血小板中神经肽Y含量的改变

目的：研究神经肽Ｙ（ＮＰＹ）在人血小板与血浆中的分布及其在原发性高血压时的改变。方法：放射免疫分析测定１４２例原发性高血压患者与２３例健康人血小板悬液（ＰＲＳ）与贫血小板血浆（ＰＰＰ）中ＮＰＹ含量。结果：健康人ＰＲＳ与ＰＰＰ中ＮＰＹ含量相同，高血压患者ＰＰＰ中ＮＰＹ含量增高，以女性为著，ＰＲＳ中ＮＰＹ含量在男性患者有增高趋向，而女性患者无改变。结论：原发性高血压患者血浆ＮＰＹ含量的增高在女性患者更为显著，可能与血小板摄取ＮＰＹ障碍有关。     

大肠肿瘤组织印片和切片DNA及AgNOR蛋白定量的对比观察

用Ｆｅｕｌｇｅｎ－ＡｇＮＯＲ结合染色方法对大肠肿瘤组织印片和切片细胞的ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ蛋白进行染色，用图像分析进行同一细胞二者含量同步检测。结果表明，在ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ含量的检测中，印片样品比组织切片样品更能精确、真实地反映ＡｇＮＯＲ与ＤＮＡ含量在大肠癌发生过程中相关性变化。印片样品方法简单、出结果快，并能推广到脱落细胞和穿刺取材细胞的ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ含量的同步测定。     

实验感染的猕猴血清和粪便中HEVRNA动态变化研究

应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测实验感染ＨＥＶ猕猴急性期血清及粪便标本中ＨＥＶＲＮＡ，并与其血清ＡＬＴ异常和抗－ＨＥＶＩｇＧ阳转相比较，以了解猕猴感染ＨＥＶ后上述各项标志的动态变化规律。结果表明，ＨＥＶＲＮＡ血症多出现于ＡＬＴ升高之前，持续约１～２周，当血清抗－ＨＥＶｌｇＧ阳转时ＨＥＶＲＮＡ即转为阴性；粪便ＨＥＶＲＮＡ可与病毒血症同时出现，但持续时间较病毒血症为长，于感染后３～４周仍可检测到。     

超导光消融治疗前列腺增生症临床观察

目的 探讨超导光治疗前列腺增生症的指征、方法及并发症。方法 回顾分析超导光消融治疗的３２例前列腺增生症。结果 ２４例排尿通畅（７５％）,尿道狭窄６例（１８．７５％）,尿失禁２例（６．２５％）。结论 超导光消融治疗前列腺增生症适应症广,痛苦小,住院时间短。     

正常免疫小鼠荷人卵巢癌模型的建立

用肾包膜下移植法将经裸鼠传代的人卵巢癌细胞移植于纯系小鼠Ｃ５７ＢＬ／６和ＢＣＦＩ肾包膜下，观察移植后不同时间移植瘤的大体和病理组织学变化。结果显示：移植瘤体积在术后第６～８天最大，淋巴细胞浸润在８～１２天最严重，瘤细胞在移植后１０天内形态仍完整。同时还比较了两种品系小鼠的差异，为肿瘤免疫学研究提供了一个短期实验的模型。