ox-LDL对JEG-3细胞系LOX-1和凋亡相关分子表达的调控及意义

目的 检验ox-LDL对滋养细胞中Lox-1和凋亡相关分子表达的调控,探讨ox-LDL和Lox-1与子痫前期发病的关系.方法 JEG-3细胞培养并传代;采用细胞免疫化学方法、RT-PCR和Westem-blot进行IEG-3细胞LOX-1和凋亡相关基因的检测.结果 细胞免疫化学检测到LOX-1和Caspase-3在JEG-3细胞浆及细胞膜中均有表达;加入ox-LDL继续培养24和48 h后,细胞的LOX-1和Caspase-3表达显著增强,同时加入LOX-1抑制剂角叉菜胶后,又逆转上述作用;RT-PCR与Western-blot结果一致,ox-LDL可剂量和时间依赖地诱导JEG-3细胞LOX-1、Caspase-3和Bax蛋白及mRNA的表达,下调Bcl-2蛋白的表达,LOX-1抑制剂角叉菜胶可逆转上述作用.ox-LDL对JEG-3细胞LOX-1表达的调控与Caspase-3和Bax的趋势一致,而与Bcl-2的趋势相反.结论 ox-LDL可诱导滋养细胞LOX-1的表达,并可能导致滋养细胞凋亡增加,为进一步解释子痫前期的发病机制提供了实验基础.     

TGF-β1作用下JEG-3绒癌细胞Smad7蛋白表达的定量分析

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)作用下JEG-3绒癌细胞中Smad7蛋白的表达情况,探讨TGF-β/Smads信号通路在绒癌中的功能作用.方法:分别用0ng/ml、100ng/ml及200ng/ml的TGF-β1处理JEG-3绒癌细胞48h,采用蛋白印迹法定量检测JEG-3细胞Smad7的表达.结果:JEG-3绒癌细胞系可明确表达Smad7;不同浓度TGF-β1作用下JEG-3细胞Smad7蛋白的表达无明显差别(P＞0.05).结论:绒癌细胞系JEG-3中Smad7对于外源性TGF-β1的刺激无应答反应.     

LOX-1及凋亡相关基因在绒毛和胎盘组织中表达的研究

目的通过检测血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)及凋亡相关基因caspase-3、Bax和bcl-2在绒毛及胎盘组织中的表达,探讨其意义。方法以免疫组化、RT-PCR和Westen blot方法检测不同孕周正常孕妇绒毛和胎盘组织中LOX-1和凋亡相关基因caspase-3、Bax及bcl-2表达的时空变化。结果LOX-1和Caspase-3蛋白在早孕绒毛组织中表达于合体滋养细胞的细胞膜及细胞浆、细胞滋养细胞的细胞膜上;在妊娠中、晚期的胎盘组织中,主要表达于合体滋养细胞的细胞膜及细胞浆、细胞滋养细胞的细胞膜和血管内皮细胞上。LOX-1、caspase-3和Bax随着孕周增加,表达逐渐增强,而bcl-2则相反;即LOX-1在胎盘组织表达趋势与caspase-3和Bax一致,而与bcl-2表达趋势相反。结论LOX-1可能通过介导滋养细胞凋亡在妊娠建立和维持中起重要作用。     

人类白细胞抗原G表达与不明原因反复自然流产关系的探讨

目的 通过观察人类白细胞抗原G(HLA-G)在不同滋养细胞中的表达,探讨其与不明原因反复自然流产(RSA)的关系及免疫调节机制.方法用免疫酶细胞化学染色方法检测11例RSA患者滋养细胞的HLA-G表达情况,并以13例正常早孕的滋养细胞和JEG-3绒癌细胞作对照.结果 RSA患者滋养细胞的HLA-G表达水平(1.15±1.56)显著低于正常早孕滋养细胞(8.97 2.76)和JEG-3绒癌细胞(9.56±1.81)(P《0.001).后两种滋养细胞的HLA-G表达水平无显著性差异.RSA组5例表达为弱阳性,6例为阴性.正常早孕组8例表达为强阳性,5例为中等阳性.JEC-3绒癌细胞株表达为强阳性.结论滋养细胞的HLA-G表达与细胞浸润能力有关.RSA滋养细胞的低浸润能力可能与HLA-G的低表达有关.HLA-G表达可能不依赖母体环境,而在细胞内自身调节.     

TWEAK对THP-1细胞中LOX-1表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导剂(TWEAK)对人单核细胞(THP-1)中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响。方法通过半定量RT-PCR检测不同浓度的TWEAK对THP-1细胞中LOX-1mRNA的表达,通过Western blot检测不同浓度的TWEAK对THP-1细胞中LOX-1蛋白表达的影响。结果发现TWEAK能够上调THP-1细胞中LOX-1mRNA及蛋白的表达,并且具有浓度和时间依赖性。结论 TWEAK可通过诱导单核-巨噬细胞表达LOX-1而具有致动脉粥样硬化的作用。     

厄贝沙坦对巨噬细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)基因及蛋白表达的影响

目的研究不同浓度厄贝沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人单核/巨噬细胞系(THP-1)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)mRNA和蛋白表达的影响,并探讨其可能的机制。方法 THP-1细胞经0.16μmoL/L佛波酯诱导分化后,将细胞分为3组:对照组、AngⅡ组、厄贝沙坦干预组,干预组分别加入不同浓度厄贝沙坦孵育2 h后,再加入AngⅡ1×10-6moL/L孵育24 h,用荧光定量PCR和细胞酶联免疫法检测(LOX-1)mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,Ang II可明显上调THP1细胞(LOX-1)mRNA和蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度厄贝沙坦均能抑制(LOX-1)蛋白表达(P<0.05),并且随着厄贝沙坦浓度降低,抑制作用减低,即两者呈浓度依赖性。结论厄贝沙坦以浓度依赖方式抑制AngⅡ诱导的THP1细胞(LOX-1)mRNA和蛋白表达,减少巨噬细胞通过(LOX-1)途径的氧化低密度脂蛋白(oxLDL)摄入,影响泡沫细胞的发生、发展,发挥其抗动脉粥样硬化(AS)作用。     

LOX-1在ox-LDL诱导人肾小球系膜细胞TGF-β1表达的作用

目的:探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人肾小球系膜细胞(HGMC)表达转化生长因子(TGF-β1)中的作用。方法:体外培养HGMC,在不同时间加入不同浓度的ox-LDL及LOX-1阻滞性抗体JTX92,用半定量RT-PCR法检测细胞LOX-1和TGF-β1mRNA表达,用Westernblot法检测细胞LOX-1蛋白合成,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中TGF-β1浓度。结果:ox-LDL以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1mRNA和蛋白表达的同时,也以时间和浓度依赖的方式增加细胞内TGF-β1mRNA表达和培养液中TGFβ1蛋白的含量,JTX92(10μg/ml)可以明显抑制LOX-1和TGF-β1的表达(P<0.01)。结论:ox-LDL通过激活LOX-1调节HGMCTGF-β1基因表达、蛋白合成与分泌。     

紫杉醇对人绒癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究紫杉醇(Paclitaxel)对绒癌细胞株JEG-3细胞凋亡率和细胞周期的影响.方法 用紫杉醇作用于绒癌细胞株JEG-3细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察紫杉醇对绒癌细胞增殖的影响.通过流式细胞仪分析紫杉醇处理后绒癌细胞凋亡率和细胞周期的改变.结果 紫杉醇对绒癌细胞株JEG-3细胞的增殖具有抑制作用,且随药物浓度的增加和作用时间的延长,抑制作用越明显;紫杉醇对细胞凋亡率和细胞周期均有影响,随药物浓度增加和作用时间的延长,细胞凋亡率增加,G2/M期细胞百分率增加.结论 紫杉醇能有效诱导绒癌JEG-3细胞的凋亡.     

LOX-1介导oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞高通透性反应

目的 探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1（lectin like oxidized low density lipoprotein receptor 1,LOX-1）在氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的血管内皮高通透性反应中的作用。方法 采用Transwell单层细胞模型系统和油红O染色,观察oxLDL或和LOX-1阻断抗体对单层血管内皮细胞LDL通透性的影响以及下室THP-1巨噬细胞内脂质的蓄积情况;用Western blot法和激光扫描共聚焦显微镜检测oxLDL或和LOX-1阻断抗体对桥粒芯糖蛋白1 （DSG1） 在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中表达和分布的改变。结果 oxLDL可以增加单层内皮细胞对LDL的通透性和下室THP-1巨噬细胞脂质的蓄积,同时降低DSG1的表达及其在细胞间分布的连续性,而抑制LOX-1可以减弱内皮细胞的高通透性反应和巨噬细胞脂质蓄积。结论 oxLDL可能是通过降低桥粒蛋白表达使内皮细胞构型改变来诱导内皮高通透性,从而促进内皮下巨噬细胞内的脂质蓄积,其机制可能涉及LOX-1的介导。     

TGF-β1作用下Smad3蛋白在绒癌细胞中的表达

目的：观察不同浓度的转化生长因子β1（transforming growthfactor-β1,TGF-β1）对绒癌细胞系JEG-3细胞Smad3蛋白表达的影响,探讨TGF—D／Smads信号通路在绒癌中的功能状况。方法：以绒癌细胞系JEG-3为研究对象,分别用0ng／ml、100ng／ml及200ng／ml浓度的TGF-β1处理48h后,采用蛋白印迹法检测JEG-3细胞Smad3蛋白的表达。结果：随着TGF-β1浓度的升高,Smad3蛋白的表达水平逐渐升高,呈一定的量效关系。结论：绒癌细胞系JEG-3中不存在Smad3的缺失,且其对外源性TGF-β1刺激具有良好的反应性。     

阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管中LOX-1和eNOS表达的影响

目的探讨阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管中LOX-1 和eNOS表达的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为4组,即股动脉结扎组（L组）、高胆固醇血症+股动脉结扎组（HL组）、高胆固醇血症+阿托伐他汀+股动脉结扎组（AL组）、高胆固醇血症+生理盐水+股动脉结扎组（NL组）。HL组、AL组和NL组大鼠均喂食可致动脉粥样硬化饲料8周。AL组股动脉结扎后10 mg/kg 阿托伐他汀腹腔注射2 周。采用免疫荧光法观察后肢侧支血管LOX-1 和eNOS的表达。体外实验中,转染LOX-1-siRNA的内皮细胞经oxLDL和阿托伐他汀单独或共同处理后,RT-PCR和Western blotting检测LOX-1和eNOS的表达,Griess法检测NO的产生。结果LOX-1表达于大鼠正常侧支血管中,在高胆固醇血症大鼠中其表达则明显升高,在阿托伐他汀治疗后明显降低。eNOS在正常生长的侧支血管中呈强阳性表达,在高胆固醇血症血管中表达下调,经阿托伐他汀治疗后其表达上调。体外实验中,oxLDL处理使内皮细胞LOX-1 表达升高,eNOS表达降低,而阿托伐他汀处理后细胞中LOX-1 表达下调,eNOS表达上调。此外,在细胞中使用LOX-1 siRNA 干预可消除oxLDL刺激对eNOS表达的影响。结论高胆固醇血症或oxLDL可能通过LOX-1/eNOS通路诱导内皮功能障碍,阿托伐他汀可以改善这一状态,表明阿托伐他汀可作为缺血性疾病诱导侧支血管损害的潜在治疗药物。     

植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体介导氧化型低密度脂蛋白对内皮祖细胞存活和功能的影响

目的 研究植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体（LOX—1）是否介导氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）对内皮祖细胞（EPC）的存活及功能产生影响。方法 分选脐血CD34^＋细胞,培养于内皮细胞生长培养基（EGM-2）中。培养14d后,部分EPC与10、25、50μg/ml的oxLDL孵育48h;部分EPC先与LOX-1单克隆抗体（LOX—1mAb）预处理24h,再与50μg／ml oxLDL孵育48h;对照组不作处理。检测EPC存活率及EPC迁移、黏附和管状结构形成能力,并检测LOX-1的蛋白及mRNA表达。结果oxLDL浓度为25和50μg／ml时,凋亡率分别为（15．8±1．0）％和（18．8±2．0）％,显著高于对照组的（9．0±1．2）％（P〈0．05）;迁移率分别为（5．7±1．0）％和（5．1±0．8）％,显著低于对照组的（9．5±0．8）％,（P〈0．05）;黏附细胞数分别为（33±2）和（30±3）个,显著少于对照组的（37±5）个（P〈0．05）;形成的管状结构分别为（2．9±0．5）和（1．8±0．5）mm,显著短于对照组的（5．0±0．6）mm（P〈0．05）。OxLDL可增加LOX—1mRNA及蛋白的表达,oxLDL浓度为50μg／ml时,LOX—1mRNA表达由100％增加为（174±39）％,蛋白表达由100％增加为（172±8）％。OxLDL的上述作用能被LOX1mAb所阻断。结论OxLDL可降低EPC存活,抑制EPC功能,其作用是由LOX—1介导的。     

吲哚胺2,3双加氧酶对人绒毛膜癌JEG-3 细胞增殖及迁移能力的影响

目的 观察吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO)对人绒毛膜癌JEG-3细胞体外增殖、迁移能力的影响。方法 通过IDO抑制剂(1-L-MT)及短发夹RNA基因干扰抑制IDO表达,利用MTS增殖实验、Transwell迁移试验检测对细胞增殖和迁移能力的影响。结果 基因敲减能明显降低IDO表达水平。1-L-MT和基因敲减的JEG-3细胞与对照组相比,细胞的增殖和迁移能力明显下降。结论 抑制IDO能够降低绒癌细胞系JEG-3细胞的增殖和迁移能力。     

黄连素对巨噬细胞清道夫受体表达的影响

目的:探讨黄连素(berberine)对巨噬细胞清道夫受体CD36、LOX-1、CD68等表达的影响.方法:以佛波醇酯(PMA)诱导分化的单核源巨噬细胞为细胞模型,黄连素(50 μmol/L)预处理1h后,加入氧化低密度脂蛋白(oxLDL)刺激,采用流式细胞仪检测巨噬细胞表面清道夫受体的表达.结果:单核细胞分化成巨噬细胞后,CD36表达明显升高,而黄连素预处理显著抑制CD36的表达.oxLDL刺激巨噬细胞24 h后,巨噬细胞表面清道夫受体CD36、LOX-1和CD68表达明显升高(P＜0.01),黄连素预处理后巨噬细胞表面CD36、LOX-1的表达受到抑制,但CD68的表达未受影响(P＞o.05).结论:黄连素抑制巨噬细胞表面清道夫受体CD36、LOX-1的表达,一定程度上可减少巨噬细胞通过清道夫受体途径对脂质oxLDL的吞噬.     

银杏叶提取物对同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞血凝素样

目的: 探讨银杏叶提取物可否拮抗同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达升高。方法：采用含不同浓度（0.001mmol/L、0.01 mmol/L和0.1 mmol/L）同型半胱氨酸的培养液孵育人脐静脉血管内皮细胞，观察同型半胱氨酸对血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达水平的影响；取最能诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达升高的同型半胱氨酸浓度，分别加入银杏叶提取物（0.01mmol/L银杏苦内酯A，0.01mmol/L银杏苦内酯B和0.01mmol/L白果内酯）和B族维生素（0.01mmol/L 叶酸，0.01mmol/L维生素B6，0.01mmol/L维生素B12），观察银杏叶提取物对同型半胱氨酸诱导的血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达升高的作用，并与B族维生素进行比较。结果：随着同型半胱氨酸浓度的增加，血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达增加，0.1mmol/L 的同型半胱氨酸最能诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达；同型半胱氨酸＋银杏叶提取物组和同型半胱氨酸＋B族维生素组血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达较同型半胱氨酸组明显减少（吸光度值0.42±0.03和0.65±0.04 VS 0.83±0.05，P＜0.05），同型半胱氨酸＋银杏叶提取物组降低血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达的幅度较同型半胱氨酸＋B族维生素组更大(吸光度值0.42±0.03 VS 0.65±0.04，P＜0.05)。结论：同型半胱氨酸具有诱导血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 m RNA表达的作用，且呈剂量依赖性。银杏叶提取物可拮抗同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达升高，有望应用于治疗高同型半胱氨酸所致的动脉粥样硬化。     

P21在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中的表达及依那普利对其表达的调节

目的：观察黄花倒水莲皂苷C抑制氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipopprotein，ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体（oxidized low desity lipoprotein receptor-1，LOX-1）表达的作用。方法：培养人脐静脉内皮细胞株（HUVEC-12），随机分为：对照组、ox-LDL（50mg／L）组和氧化型低密度脂蛋白（50mg／L）＋黄花倒水莲皂苷C（1，3，10μmol／L）组，通过RTPCR和Western blot蛋白印迹分析检测LOX-1 mRNA和蛋白的表达。结果：ox-LDL上调LOX-1 mRNA和蛋白的表达，黄花倒水莲皂苷C明显抑制ox-LDL诱导的LOX-1 mRNA和蛋白的表达，且呈浓度依赖性。结论：黄花倒水莲皂苷C明显抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1 mRNA和蛋白的表达。     

Caveolin-1与绒毛膜癌侵袭力之间的关系

目的:探讨小窝蛋白-1(caveolin-1,CAV-1)的表达与绒毛膜癌高侵袭力之间的相关性,并了解RNA干扰沉默CAV-1基因对高侵袭力绒毛膜癌JEG-3细胞侵袭力的抑制作用.方法:(1)应用Matrigel体外侵袭试验和噻唑盐比色实验[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumro-mide,MTT]检测绒毛膜癌JEG-3细胞和JAR细胞之间侵袭能力和增殖能力的差异;(2)应用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transeriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测CAV-1 mRNA在人正常早孕绒毛组织、不同侵袭力人绒毛膜癌细胞株JEG-3及JAR表达的差异;(3)将CAV-1小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染至高侵袭力绒毛膜癌JEG-3细胞后,采用RT-PCR检测转染后JEG-3细胞CAV-1 mRNA表达的变化,并应用Matrigel体外侵袭试验和MTT法检测JEG-3细胞侵袭和增殖能力的变化.结果:(1)JEG-3细胞的侵袭能力显著高于JAR细胞(P<0.05),但JEG-3和JAR细胞之间增殖能力的差异无统计学意义(P>0.05);(2)RT-PCR结果显示在人正常早孕绒毛组织、高侵袭性JEG-3细胞以及低侵袭性JAR细胞中均可检测到GAV-1 mRNA,将上述三者中CAV-1 mRNA的表达量进行两两比较,发现人绒毛膜癌细胞株中CAV-1 mRNA的表达明显高于人正常早孕绒毛组织,而具有高侵袭性JEG-3细胞中CAV-1 mRNA的表达明显高于JAR细胞,差异具有统计学意义(P<0.05),相关性分析显示CAV-1表达水平与绒毛膜癌细胞侵袭力呈正相关(r=0.86,P<0.05);(3)CAV-1 siRNA可有效抑制CAV-1 mRNA的表达,并削弱绒毛膜癌细胞的侵袭和增殖能力.结论:CAV-1基因表达可显著增强绒毛膜癌细胞的侵袭潜能,CAV-1 siRNA可抑制绒毛膜癌细胞的侵袭和增殖能力.     

甘糖酯对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的作用

①目的　探讨甘糖酯对氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)损伤的血管内皮细胞的作用。②方法　将VEC 30 4内皮细胞株培养后 ,分为两组 :治疗组先给予oxLDL ,再加入不同浓度的甘糖酯 (2 5、5 0、10 0mg/L) ;保护组先给予不同浓度 (2 5、5 0、10 0mg/L)甘糖酯 ,再与oxLDL作用。培养一定时间后 ,取上清液测定丙二醛 (MDA)和乳酸脱氢酶 (LDH)含量。③结果　治疗组 3种浓度甘糖酯均可以降低oxLDL造成的MDA升高 ,而且随着浓度的增高其作用也有增加的趋势 (F =6 6 .12 ,q =6 .5～ 18.3,P <0 .0 5 ) ;浓度较高 (10 0mg/L)甘糖酯可降低oxLDL造成的LDH升高 (F =15 .99,q=8.9,P <0 .0 5 )。保护组 3种浓度甘糖酯均可使MDA含量降低 ,与对照组比较差异有显著性 (F =5 6 .98,q=16 .7～ 5 5 .2 ,P <0 .0 5 ) ;且不同浓度组间差异有显著性 (q =18.9～ 38.6 ,P <0 .0 5 ) ;较大浓度(10 0mg/L)甘糖酯可使LDH含量降低 ,与对照组比较 ,差异有显著性 (F =19.13,q =9.8,P <0 .0 5 )。 ④结论　甘糖酯对oxLDL造成的血管内皮细胞的过氧化损伤有修复和保护作用     

TGF-β1对绒毛膜癌JEG-3细胞基质金属蛋白酶-9基质金属蛋白酶抑制剂-1蛋白表达的影响

目的：观察转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）对绒毛膜癌JEG-3细胞系基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinases,MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）蛋白表达的影响。方法：体外培养人绒毛膜癌JEG-3细胞,分别给予不同浓度及不同作用时间的TGF-β1进行诱导,Western Blotting法检测MMP-9、TIMP-1蛋白的表达变化。结果：与对照组相比,100、200μg/L TGF-β1作用后,检测各组细胞MMP-9及TIMP-1蛋白的相对表达量均增加（P〈0.01）;与0h比较,12、24、48、72h各组细胞MMP-9及TIMP-1蛋白的相对表达量均增加（P〈0.05）,且各组MMP-9/TIMP-1大于1。结论：绒癌的浸润转移与MMP-9及TIMP-1的表达变化密切相关。