恩替卡韦治疗后慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面程序性死亡受体1表达与HBeAg血清学转换的关系

目的 动态观察慢性乙型肝炎患者恩替卡韦抗病毒治疗后不同时期外周血T淋巴细胞(简称T细胞)表面程序性死亡受体1(PD-1)表达的变化,并探讨其与HBeAg血清学转换间的关系.方法 对20例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者予以恩替卡韦抗病毒治疗并随访51周,根据HBeAg是否发生血清学转换分为:HBeAg未转换组(14例),HBeAg转换组(6例).分别于治疗前(基线,T0)、治疗2～4周(T1)、治疗5～10周(T2)、治疗11～20周(T3)、治疗21～30周(T4)、治疗31～51周(T5)收集外周血,流式细胞术检测CD4+、CD8+T细胞表面PD-1的表达水平,实时荧光定量PCR检测血清HBV DNA载量,同时检测血清ALT水平.正态分布资料采用独立样本t检验,非正态分布者采用Mann-Whitney U检验比较组间差异,相关性分析采用Pearson相关分析.结果 治疗前两组患者血清HBV DNA载量分别为(7.54±0.67)log10拷贝/ml、(7.30±0.79)log10拷贝/ml(P＞0.05),ALT水平为(187.26±184.15)U/L、(272.17±215.07)U/L(P＞0.05),外周血CD4+T细胞表面PD-1表达水平为6.04%±3.71%6.77%±2.88%(P＞0.05),CD8+T细胞表面PD-1表达水平为6.39%±3.33%、8.88%±2.84%(P＞0.05).恩替卡韦抗病毒治疗后两组患者血清HBV DNA载量、ALT水平的下降与CD4+、CD8+T细胞表面PD-1表达的下调呈显著正相关(r=0.212,P=0.05;r=0.377,P＜0.01;r=0.279,P＜0.05;r=0.347,P＜0.01).在相同的随访时间段内,HBeAg转换组血清HBV DNA载量、ALT水平及外周血CD4+、CD8+T细胞表面PD-1表达的下降率均高于HBeAg未转换组,且两组间△ T0～T1、△T0～T2期HBV DNA的下降率及△T0～T2、△T0～T3期CD8+T细胞表面PD-1表达的下降率差异有统计学意义(分别为49.9%对比37.3%,56.7%对比47.4%,70.1%对比-4.2%,66.9%对比24.5%,P值均＜0.05).结论 HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者经恩替卡韦抗病毒治疗后,外周血CD8+T细胞表面PD-1表达的快速下调与血清HBV DNA相似,可作为预测后期HBeAg血清学转换的指标之一.

Abstract：

Objective To observe longitudinally the expression of Programmed death 1 (PD-1) on peripheral blood T cells in chronic hepatitis B patients underwent antiviral treatment with entecavir (ETV)and to explore the relationship between PD-1 expression and HBeAg seroconversion.Methods Twenty HBeAg positive patients underwent antiviral treatment with ETV were followed up for 51 weels.14 patients remained HBeAg positive and 6 patients achieved HBeAg seroconversion.Peripheral blood was collected at six time points:T0:baseline,T1:2-4week;T2:5-10week;T3:11-20week;T4:21-30week:T5:31-51week.PD-1 expressions on T cells were assessed by flow cytometry.Serum HBV DNA loads were determined by real-time fluorescent quanttative polymerase chain reaction (PCR) and serum ALT levels were examined at the same time.Results At baseline,serum HBV DNA load of patients without HBeAg seroconversion and with HBeAg seroconversion were (7.54 ± 0.67) log10 copies/ml and (7.30 ± 0.79) log10 copies/ml(P ＞ 0.05),the ALT levels were (187.26 ± 184.15) U/L and (272.17 ± 215.07) U/L (P ＞ 0.05),PD-1 exprissions on CD4+ T cells were 6.04% ± 3.71% and 6.77% ± 2.88% (P ＞ 0.05),PD-1 exprissions on CD8+ T cells were 6.39% ± 3.33% and 8.88% ± 2.84% (P ＞ 0.05).After ETV treatment,serum HBV DNA loads and ALT levels both decreased gradually,which was positively correlated with PD-1 expressions on CD4+ and CD8+ T cells (r = 0.212,P = 0.05;r = 0.377,P ＜ 0.01;r = 0.279,P ＜ 0.05;r = 0.347,P ＜ 0.01 ).During the same monitoring period,the HBV DNA loads,ALT levels and PD-1 expressions on T cells of the patients with HBeAg seroconversion decreased significantly as compared with the patients without HBeAg seroconversion.Besides,the decrease of HBV DNA loads during period △ T0-T1 and △ T0-T2 and PD-1 expressions on CD8+ T cells during period △ T0-T2 and △ T0-T3 were significantly different between these two kinds of patients (49.9% vs 37.3%,P ＜ 0.05;56.7% vs 47.4%,P ＜ 0.05;70.1% vs -4.2%,P ＜ 0.05;66.9% vs 24.5%,P ＜ 0.05).Conclusion The rapid decrease of PD-1 expression on peripheral CD8+ T cells after antiviral treatment with ETV is positvely correlated with the decrease of serum HBV DNA loads and may be used as a predictive index for HBeAg seroconversion in HBeAg positive patients.     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞凋亡与HBVDNA及Th1/Th2类细胞因子的关系

研究活化诱导的外周血单核细胞凋亡 (AICD)在乙型肝炎慢性化中的作用以及与HBVDNA和Th1/Th2的关系。分离 2 5例慢性乙型肝炎患者与 10例健康人外周血单个核细胞 (PBMC) ,在PHA的刺激下培养 ,经流式细胞仪检测凋亡 ,ELISA检测细胞因子IFN -γ、IL - 4、IL - 10。经过PHA诱导的PBMC凋亡率乙型肝炎组明显高于正常对照组 (P <0 0 1)。在慢乙肝组中 ,随着HBVDNA的上升 ,凋亡比率升高 ,IL - 4与凋亡成正相关 ,有统计学差异(P <0 0 0 1)。AICD可能在乙型肝炎感染慢性化与形成免疫耐受过程中起到重要作用 ,HBVDNA与AICD有关 ,IL -4促进AICD的发生     

乙型肝炎病毒感染者不同疾病阶段外周血T淋巴细胞表面程序性死亡受体-1及血清细胞因子的表达

目的 探讨HBV感染后不同疾病阶段(免疫耐受期、免疫清除期、非活动携带状态)患者T淋巴细胞表面程序性死亡受体-1(PD-1)和血清细胞因子的表达差异.方法 2011年4月至2011年9月无锡市第五人民医院住院或门诊的HBV感染者105例,HBV感染后免疫耐受期、免疫清除期、非活动携带状态患者各35例,另选20名健康人作为对照组.收集研究对象的外周血,流式细胞术检测CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞表面PD-1的表达水平,ELISA检测血清IL-10、IFN-γ的表达水平.数据处理采用t检验,相关性分析采用Pearson相关分析.结果 HBV感染组CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达水平为(12.35±3.48)％,高于健康对照组的(4.65±1.21)％(t=9.76,P＜0.01);HBV感染组CD4+T淋巴细胞表面PD-1表达水平为(4.95±2.87)％,健康对照组为(4.08±2.14)％,两组比较差异无统计学意义(t=1.29,P＞0.05).免疫耐受组、免疫清除组、非活动携带组CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达水平分别为(15.87±3.18)％、(7.69±3.64)％和(10.12±2.84)％,均高于健康对照组(t值分别为15.12、3.61和8.17,均P＜0.01),免疫耐受组CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达水平高于免疫清除组(t=10.01,P＜0.01).慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达水平与IL-10呈正相关(r=0.377,P＜0.05),与IFN-γ呈负相关(r=-0.620,P＜0.05).结论 慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达上调,PD-1水平与血清Th1细胞因子IFN-γ呈负相关,与血清Th2细胞因子IL-10呈正相关;HBV感染慢性化可能与PD-1高表达有关.     

慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T淋巴细胞表面程序性死亡受体-1表达上调的意义

程序性死亡受体-1(PD-1)主要表达于活化的淋巴细胞和单核细胞,尤其是体内活化的T淋巴细胞表面[1],负性调节其活化、增殖和细胞因子的产生[2-3],使人类免疫缺陷病毒(HIV)[4]、HCC[5]、HBV[6-7]等慢性感染过程中患者的病毒特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)功能受到抑制,从而造成持续性感染状态.     

干扰素α个体化治疗HBeAg阴性慢性乙型肝炎2年随访

目的 了解IFN-α个体化治疗HBeAg阴性慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效.方法 经肝组织穿刺活检证实的HBeAg阴性CHB患者76例,给予IFN-α1b治疗,每次5 MU,每周3次.治疗结束后随访至少24个月.联合应答定义为血清ALT复常,且HBV DNA<3 loglo拷贝/mL.所有资料均行意向性分析(ITT).结果 脱落6例.疗程中位数为8.5(2～24)个月,终点疗程中位数为6.0(2～19)个月,终点疗程第75百分位数为10.0个月.治疗末时联合应答率为46.1%(35/76),随访12个月时为43.3%(33/76),随访24个月时为40.8%(31/76).随访12个月时复发率为20.0%(7/35),随访24个月时为25.7%(9/35).多变量二分类Logistic分析显示,肝组织炎性活动度较高者较易应答(偏回归系数=0.834,P=0.023,OR=2.303,95%可信区间为:1.120,4.735),而性别、年龄、肝组织纤维化程度、ALT、AST、HBV DNA载量等为非疗效影响因素.结论 IFN-α个体化治疗HBeAg阴性CHB患者有一定的持续效应.     

聚乙二醇干扰素α－2a 治疗 HBeAg 阴性慢性乙型肝炎的疗效及影响因素

目的：观察聚乙二醇干扰素（PEG －IFN）α－2a 治疗 HBeAg 阴性慢性乙型肝炎（CHB）患者的疗效及其影响因素。方法收集2009年5月－2012年12月在南方医科大学南方医院感染内科就诊的 HBeAg 阴性的 CHB 患者103例,给予 PEG －IFNα－2a 135μg 治疗,平均疗程为13个月,治疗后随访48周,在治疗及随访期间每3个月检查肝功能、HBV DNA 定量。组间频数比较采用χ2检验,均数比较采用 t 检验,采用二分类多元 Logistic 回归法分析疗效的影响因素。结果103例患者治疗结束时,取得联合应答者84例,联合应答率为81．6％。随访过程中复发33例,复发率为39．3％,治疗后随访1年持续应答患者49例,持续应答率47．6％。经单因素和多因素分析,抗－HBe 阳性是唯一的与持续应答相关的独立影响因素（OR ＝3．69,P ＝0．013）,HBV DNA 定量、HBV 基因型、前 C ／BCP 区变异、肝脏病理等其他治疗前基线特征与持续应答无相关性。结论PEG －IFNα－2a 治疗 HBeAg 阴性 CHB 能够取得较好的疗效,但复发率较高;抗－HBe 阳性患者的持续应答率较高。     

阿德福韦对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者Th1和Th2相关细胞因子的影响

目的 观察HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者阿德福韦治疗前后不同时相点血清IFN-γ、L-4的水平、Th1/Th2比值以探讨阿德福韦治疗对机体的免疫功能的影响.方法 采集30例阿德福韦治疗前、治疗16周、52周和132周患者血清,其中完全应答组14例,非完全应答组16例及健康对照组10例,ELISA检测IFN-γ和L-4的水平.结果 完全应答组各时相点IFN-γ水平显著高于部分应答组(P均＜0.05)及正常对照组(P＜0.05),部分应答组与健康对照组相比无差异(P＞0.05);完全应答组IL-4水平在治疗后逐渐下降,部分应答组变化不大;两组Th1/Th2比值均有所上升,但完全应答组升高显著.结论 阿德福韦治疗后慢性乙型肝炎患者细胞免疫应答有一定程度的恢复.     

HBeAg阴性慢性乙型肝炎获得HBsAg清除与血清白细胞介素17水平的关系

目的探讨聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)治疗HBeAg阴性慢性乙型肝炎(CHB)发生HBsAg清除与血清白细胞介素(IL)17水平的关系。方法选择2012年1月-2015年1月于北京佑安医院就诊的HBeAg阴性CHB患者13例,经PEG-IFN治疗24周,其中6例获得HBsAg清除(R组),7例未获得HBsAg清除(NR组)。用Luminex技术检测患者基线、治疗12周和24周血清IL-17水平。同时检测10例健康人和6例急性乙型肝炎(AHB)患者发病时的血清IL-17水平。计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验;计数资料组间比较采用χ~2检验。结果 AHB组基线血清IL-17水平最高,其次是CHB组,健康对照组最低,3组间比较差异有统计学意义(P0.05)。CHB患者经PEG-IFN治疗24周后,IL-17水平较基线明显下降(P=0.044)。R组基线血清IL-17水平高于NR组,而且在PEG-IFN治疗后明显下降;而NR组IL-17升高或降低不明显。结论 PEG-IFN治疗HBeAg阴性CHB患者,IL-17基线高水平和治疗过程中明显降低可能有利于HBsAg清除。     

抗病毒治疗过程中慢性乙型肝炎患者外周血辅助性T细胞因子的变化

目的 观察慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血辅助性T细胞因子水平在抗病毒治疗过程中的变化,进一步探讨其与CHB发病的关系.方法 在33例CHB患者采用恩替卡韦抗病毒治疗过程的不同时期,采用ELISA法检测其外周血IL-2、IL-6、IL-10、IFNγ和TNF-α水平,并同时检测患者肝功能.治疗前后细胞因子水平比较采用单因素方差分析,细胞因子水平变化与ALT、HBVDNA水平间行相关性分析.结果 IFNγ水平在治疗前及治疗12、24、48周分别为(5.98±2.77)、(5.95±3.37)、(2.93±2.15)、(9.29±4.65)pg/mL(F=3.845,P＜0.05),与ALT呈正相关(r=0.396,P＜0.05);TNF-α及IL-10治疗前后呈逐渐下降趋势,各时期间差异有统计学意义(F=20.156,16.695;均P＜0.05),与ALT均呈正相关(r=0.354,0.316;均P＜0.05),与HBV DNA也均呈正相关(r=0.382,0.386;均P＜0.05);IL-2、IL-6治疗前后各时期间差异无统计学意义(F=0.010,0.932;均P＞0.05).治疗前及治疗后各时期ALT、HBV DNA水平间差异有统计学意义(F=17.69,198.98;均P＜0.05),均随抗病毒治疗时间的延长逐渐降低,且两者间呈正相关(r=0.581,P＜0.05).结论 IL-10、IFNγ、TNF-α等细胞因子可能参与CHB病理过程,并与肝炎的病情变化密切相关,抗病毒过程中检测其血浆浓度有助于了解机体免疫情况,评价抗病毒药物疗效.     

提高HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者持久免疫控制的治疗策略

HBeAg阳性和阴性慢性乙型肝炎(CHB)是慢性HBV感染的两种临床表现类型.相对于HBeAg阴性CHB,HBeAg阳性CHB患者具有相对年轻、病程短、炎症活动明显(转氨酶水平高)、病毒复制活跃等特点,所以对HBeAg阳性CHB患者不仅需要进行积极的抗病毒治疗,而且如获得免疫控制则具有明确的临床治疗终点,远期预后会明显改善,因此更能体现治疗价值.故本文仅针对HBeAg阳性CHB患者,探讨如何提高持久免疫控制的相关问题.     

乙型肝炎病毒e抗原阴性慢性乙型重型肝炎85例临床特点

中国慢性乙型肝炎防治指南中,已参照欧美诊治指南将慢性乙型肝炎分为HBeAg阳性和阴性两类,两类肝炎的临床特点、疗效以及预后等均有所不同。现将HBeAg阴性与HBeAg阳性的慢性乙型重型肝炎进行比较,分析HBeAg阴性的慢性乙型重型肝炎临床特点与预后。一、资料与方法1.对象:2002年7月至2004年12月在北京地坛医院住院治疗、出院诊断为慢性乙型重型肝炎的204例患者,其中HBeAg阴性85例,HBeAg阳性119例;男169例,女35例;慢性乙型重型肝炎早期53例、中期65例、晚期86例。     

乙型肝炎病毒e抗原阳性慢性乙型肝炎病毒感染者5年随访结果

目的 了解HBeAg阳性慢性HBV感染者的转归情况.方法 对168例HBeAg阳性慢性HBV感染者进行为期5年的临床症状、肝组织活检及血清学检查的动态观察研究,率的比较采用χ~2检验.结果 在5年随访期间.168例HBeAg阳性慢性HBV感染者中有23例出现乙型肝炎活动,占13.7%,其中肝脏病理有明显炎性反应(≥G2)者乙型肝炎活动率为24.1%(21/87例),而原肝组织炎症活动度分级为G0～G1者活动率为2.5%(2/81例),两者比较差异有统计学意义(X~2=14.88,P<0.01).43例感染者行2次肝组织活检,原肝组织正常者几年内相对稳定,病理很少变化,原病理炎性反应较重者不易恢复,但可在小范围内波动.45例发生HBeAg血清转换,HBeAg年转阴率为5.4%.14例HBsAg转阴,年转阴率为1.67%.结论 HBeAg阳性慢性HBV感染者乙型肝炎活动与肝脏炎症活动度分级密切相关.     

乙型肝炎e抗原阳性慢性乙型肝炎患者在替比夫定治疗期间外周血Th1/Th2型细胞因子水平的动态变化情况

目的 探讨乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者在用替比夫定(LDT)治疗期间Th1/Th2型细胞因子水平的动态变化情况及其与治疗转归的关系.方法 收集接受LDT治疗的15例HBeAg阳性CHB患者在基线与治疗4、8、12、24、48周时的外周血,用流式细胞仪对其血清白细胞介素(IL)-2、-4、-6、-10,以及肿瘤坏死因子(TNF)α与干扰素(IFN)γ的表达水平进行动态检测;比较完全应答组,部分应答组、无应答组、病毒学突破组及各组在不同治疗时间点的Th1/Th2型细胞因子水平.对数据的统计学分析用重复测量设计方差分析与Spearman相关分析. 结果完全应答组的Th1型细胞因子水平高于部分应答组、无应答组及治疗中病毒学突破组;而Th2型细胞因子水平则低于其他各组,但各组之间的差异无统计学意义(P>0.05).在完全应答组内IL-2、TNF α及IFN γ水平自服用LDT 12周起及其后各时间点较基线时明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);部分应答组内从服药24周起IFN γ水平较基线时升高(P<0.05);无应答组在服药48周时IL-6及IL-10水平较基线时明显升高(P<0.05);在病毒学突破组自服药24周起的IL-4水平及服药12周起的IL-6水平与基线相比,逐渐升高,且差异具有统计学意义(P<0.05).结论 Th1/Th2型细胞因子的活性平衡与LDT治疗HBeAg阳性CHB患者的转归有一定相关性,这可能与LDT治疗对CHB患者的免疫应答有一定程度的恢复作用有关.     

聚乙二醇化干扰素治疗乙型肝炎病毒e抗原阳性慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒表面抗原消失的相关因素

目的 探讨聚乙二醇化干扰素（PEG-IFN α-2a）治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者过程中预测HBsAg消失的相关因素。方法 对72例HBeAg阳性CHB患者,应用PEG-IFN α-2a 180 μg,每周1次,共48周。每3个月检测ALT、AST及HBV DNA、HBeAg和H BsAg定量,对48周治疗结束时HBsAg消失与基线、12周、24周的HBV DNA、HBeAg和HBsAg定量的相关关系进行分析。计数资料行Fisher精确检验及受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果65例HBeAg阳性CHB患者完成本研究,其中7例HBsAg消失。48周时HBsAg的消失与治疗12周时H BeAg水平有关（Fisher确切概率法,P=0.023）,与治疗24周时HBeAg水平高度相关 （Fisher确切概率法,P=0.004）,与12周或24周时HBsAg＜250 IU/mL相关(Fisher确切概率法,P=0.001,P=0.002)。与12周时HBV DNA阴转相关（Fisher确切概率法,P=0.039）,而与24周时HBV DNA是否阴转无关（Fisher确切概率法,P= 0.130）。经ROC曲线分析显示,12周、24周HBsAg及24周HBeAg曲线下面积(AUC)分别为0.8584(P=0.0021)、0.9606(P=0.001)及0.8350(P=0.040)。结论 联合应用24周HBeAg和HBsAg定量水平可能是预测48周疗程结束时是否发生HBsAg消失的有效指标。     

PD-1/PD-L1信号通路与慢性乙型肝炎

目的：程序性死亡分子-1（programmed death-1,PD-1）是近年来发现的属于B7/CD28家族的重要协同刺激分子,与其配体（programmed death -1 ligand,PD-L）结合后在调节T淋巴细胞的活化、分化及增殖功能方面起着重要作用。在慢性HBV感染不同阶段,PD-1表达水平存在差异,且与肝脏炎症程度、ALT及病毒载量等密切相关。通过不同途径阻断PD-1/PD-L1通路可以使耗竭的T淋巴细胞功能得到改善,提示可能是未来抗病毒治疗的方向之一。     

乙型肝炎e抗原阴性和阳性慢性乙型肝炎患者临床转归的回顾性分析

目的 随访HBeAg阴性和HBeAg阳性慢性乙型肝炎的临床转归，为比较两者的预后提供佐证。方法 采用回顾性分析，随访6～18年，平均（11．8±4．1）年，经肝穿刺病理组织学诊断，HBeAg阴性65例、HBeAg阳性118例慢性乙型肝炎患者的临床转归。统计学处理采用t检验和Х^2检验。结果 HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者累计发展为肝硬化7例，占10．8％，肝癌4例，占6．2％，死亡8例，占12．3％；HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者累计发展为肝硬化15例，占12．7％，肝癌8例，占6．8％，死亡12例，占10．2％。两组相比，肝硬化、肝癌和死亡的发生率差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论 HBeAg阴性和HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的远期临床转归差异无统计学意义。     

Clinical significance of hepatitis B e antigen level measurement during long-term lamivudine therapy in chronic hepatitis B patients with e antigen positive

INTRODUCTION Hepatitis B virus (HBV) infection is a serious public health problem worldwide and a major cause of chronic hepatitis, cirrhosis, and hepatocellular carcinoma[1]. Of the approximately 2 billion people who have been infected worldwide, more th…