大鼠周围神经移植修复马尾神经损伤的早期形态学观察

目的：探讨坐骨神经移植修复马尾神经损伤的可行性,观察马尾神经再生情况。方法：将30只雌性Wistar大鼠分为三组,实验组：将20只大鼠马尾在L2水平行半侧切除,将对侧坐骨神经移植到马尾切除侧,近端接马民行断端,移植的坐骨神经远端与马尾切除侧坐骨神经吻合,分别于术后4、6、8周在光镜及电镜下观察马尾再生情况。实验对照组：5只大鼠,仅切除部分马尾。正常对照组：5只大鼠,不做处理。结果：实验对照组坐骨神经的轴突及髓鞘均崩解,无再生轴突形成。实验组术后4周HE及固蓝染色偶见髓鞘及轴突形成,雪旺细胞数目少,有世噬细胞吞噬现象;术后6周较4周再生髓鞘及神经轴突数目增多,雪旺细胞大量增生,巨噬细胞吞噬现象减少;术后8周高倍镜下可见再生的典型形式,即胶质基质中的退变纤维中有大量簇状细小的有髓神经纤维,电镜下可见含较多细的有髓和无髓神经纤维,内含较多线粒体等管状结构,雪旺细胞核大而明显,胞浆丰富,粗面内质网及高尔基体、线粒体增加明显。结论：周围神经移植修复马尾神经是可能的,马尾神经损伤后有再生的可能性。     

细胞外ATP对周围神经导管中再生轴突诱导作用的实验研究

目的 证实细胞对ATP对坐骨神经损伤后再生轴突的吸引性诱导作用。方法 将SD雌性大鼠制成5nm长坐骨神经缺损的模型,用长双臂“Y”形硅胶管桥接神经,硅胶管单臂端与坐骨神经近端作套入缝合,与左侧坐骨神经缝接的硅胶管两端缝合封闭,硅胶管两臂内注入ATP的为实验组,注入生理盐水的为对照组。与右侧坐肌神经缝接的硅胶管远端管中注入ATP的硅胶管与远端坐骨神经缝接。术后4周,8周取材,肉眼观察神经纤维生长情况;并作光镜,电镜观察及病理图像分析,观察再生神经纤维的数目和形成髓鞘的厚度。结果 再生的神经轴突均长入含ATP的硅胶管内,生理盐水对照组内未见任何神经纤维长入。远端与坐骨神经缝合能增强ATP的轴突诱导作用,并具有促进再生神经轴突成熟的作用。结论 细胞外ATP具有很强的再生神经轴突诱导作用,并具有促进再生轴突成熟的作用。     

周围神经移植修复大鼠陈旧性脊髓损伤的实验研究

目的：探讨利用自体周围神经组织游离移植修复大鼠陈旧性脊髓损伤病理机制。方法：利用改良Allen撞击方法建立脊髓打击损伤模型后，将大鼠分为2组，各20只。神经移植组切取后肢腓肠神经，利用显微外科技术去除神经外膜，将其修剪成小段，游离移植于脊髓损伤处，对照组不作处理。分别于术后4、12周，在光镜下观察脊髓损伤段及移植周围神经再生情况，并应用辣根过氧化物酶神经逆行示踪技术进行脊髓神经束的再生评价。分3个时点（1、2、3个月）观察大鼠后肢运动功能恢复情况。结果：对照组脊髓变性，可见瘢痕和空洞，移植组术后12周，损伤区脊髓与周围神经融合良好，可见再生轴突，跨越损伤段脊髓，周围神经无变性。12周时脊髓神经束的再生评价结果提示：神经移植组优于对照组．移植组大鼠后肢运动功能明显恢复。结论：周围神经组织游离移植修复大鼠陈旧性脊髓损伤后，存活良好并可促进大鼠脊髓结构和功能的恢复。     

神经旁路移植的实验研究

目的 探讨并设计神经旁路移植治疗神经瘤性不全损伤的术式及其疗效。方法 SD大鼠20只。实验组：10只大鼠建立神经旁路移植模型。麻醉后显露右侧坐骨神经干，用显微持针钳钳夹其中点10s，于钳夹点近、远端3mm处神经外膜上各开一直径为1．5mm的窗口，取前肢8mm长桡神经与近、远端窗口作端侧缝合。对照组：10只大鼠右侧坐骨神经仅作钳夹。结果 术后8周，实验组的运动神经传导速度(MNCV)、再生有髓神经纤维数及截面积、腓肠肌肌湿重及肌纤维截面积均优于对照组。电镜观察见旁路移植神经中有多量大小不一的再生有髓神经纤维。结论 神经旁路移植具有保留原有神经的功能、不牺牲动力神经的优点，可为临床应用提供实验依据。     

胚胎脊髓不同移植方法对损伤后大鼠脊髓轴突再生的作用

[目的]研究胚胎脊髓不同移植方法对损伤后大鼠脊髓轴突再生的作用。[方法]将成年大鼠分为四组，A组：单纯脊髓挫伤和半切洞组；B组：脊髓挫伤和半切洞＋胚胎脊髓移植组；C组：脊髓挫伤和半切洞＋胚胎脊髓移植＋损伤区上下神经根吻合组；D组：脊髓挫伤和半切洞＋胚胎脊髓移植＋带蒂大网膜移植组。移植后6周，应用行为学检查，观察大鼠功能恢复情况，用光、电镜检查计算轴突和观察轴突病理变化，采用计算机图像分析技术，进行定量分析。[结果]作者发现脊髓损伤后6周A组轴突丢失最严重，各组轴突都有不同程度的减少，其减少程度顺序是A组〉B组〉C组〉D组。D组与其它三组比较有显著差异性。残留的轴突数目与神经功能的改善相平行。[结论]大鼠胚胎脊髓和大网膜移植后能增强损伤脊髓轴突再生并能促进大鼠后肢神经功能的恢复。     

延迟植入嗅神经鞘细胞对成鼠胸髓损伤修复的研究

目的 :观察嗅神经鞘细胞 (OECs)对成鼠损伤脊髓轴突再生的作用。方法 :将分离、培养的SD大鼠OECs移植于打击伤后 3d的SD大鼠脊髓组织中 (T1 0 ) ;对照组动物只注入DMEM /F1 2 (1∶1 )培养液 ;移植后 6周通过组织学和免疫组化方法观察OECs对脊髓轴突再生的影响。结果 :实验组OECs与宿主融合良好 ,细胞内及细胞周围有髓鞘碱性蛋白阳性物质存在 ,损伤区可见呈束状排列的再生轴突。对照组轴突变性 ,未见再生轴突。结论 :OECs延迟植入成鼠打击伤后的脊髓后 ,可存活并产生髓鞘样物质 ,促进宿主脊髓轴突再生     

周围神经不同移植方式修复治疗损伤脊髓的实验研究

目的：探讨自体肋间神经不同移植术式对治疗损伤脊髓疗效的影响。方法：采用SD大鼠，经T8、T9平面切除4mm长的半侧脊髓制成脊髓半切伤模型，用6～8条纤细的肋间神经节段按近端白质-远端灰质和近端白质-远端白质两种桥接术式填充缺损处，对照组用明胶海绵填充脊髓半切残腔。饲养4～6周，观察其后肢活动功能、斜板试验及运动功能，光镜下观察植入区的组纵结构。结果：两种术式受试鼠的后肢功能部分恢复，镜下见移植组织存活、充填于缺损处，部分与脊髓组织融合。组织、功能的恢复均明显优于对照组，但两种术式间无明显差别。结论：自体肋间神经的植入对损伤脊髓有一定的疗效，但不同的桥接术式之间无明显差别。     

低温保存嗅神经鞘细胞移植对脊髓轴突再生的影响

目的观察低温保存(-120℃)的嗅神经鞘细胞(OECs)移植对脊髓轴突再生及神经功能恢复的促进作用。方法将分离培养的SD大鼠OECs冻存2周,复温后移植于12只成年SD大鼠T 10水平SCI模型的脊髓两断端,另12只对照组SD大鼠只注入DMEM。分别于移植后6、12周行下肢功能评价、MEP检测、组织学和免疫组织化学检查。结果实验组及对照组动物存活率均为75%。移植后6周,实验组及对照组动物下肢瘫痪,下肢记录不到MEP。组织学检查(每组各2只)见实验组OECs与宿主融合良好,细胞内及细胞周围有髓鞘碱性蛋白阳性物质存在,宿主再生轴突经近侧断端长入断端间组织;对照组远、近断端轴突变性,未见再生轴突。移植后12周,实验组2只动物(2/7)下肢出现肌肉收缩,2只(2/7)髋、膝关节能活动,5只记录到MEP;对照组动物(7/7)下肢功能无改善,记录不到MEP。组织学检查见实验组OECs明显减少,部分再生轴突穿过损伤区组织抵达脊髓远侧断端;对照组瘢痕形成,无轴突再生。结论低温保存的OECs移植后可在脊髓中存活,并产生髓鞘样物质,促进宿主脊髓轴突再生及神经功能部分恢复。     

嗅神经髓鞘细胞移植促进大鼠横断脊髓轴突再生的研究

目的;观察嗅神经髓鞘细胞（OECs)对脊髓轴突再生的促进作用。方法：将分离,纯化与体外培养2周的SD大鼠OECs,移植于12只成年SD大鼠第10胸椎横断模型的脊髓两断端;8只对照动物注入DMEM／F12培养基,移植后2周和8周进行神经嗜银染色与髓磷脂碱性蛋白（MBP）组织化学和神经生长因子受体（NGFR）免疫组织化学研究。结果：OECs移植组2周后脊髓两端在形态学上呈现初步愈合现象,组织学观察显示,移植OECs与损伤脊髓组织整合良好,再生轴突长入断端组织,8周时再生轴安全检查明显增多,OECs与再生轴突均呈MBP和NGFR阳性表达。对照组两断端液化坏死,未见再生轴突。结论：OECs移植可保护损伤的脊髓并促进宿主脊髓轴突再生。     

壳聚糖管与聚乙醇酸纤维复合移植修复大鼠坐骨神经缺损研究

目的：动态观察壳聚糖管与聚乙醇酸纤维复合移植修复大鼠坐骨神经缺损的过程及结果。方法：用复合移植物辅加“神经再生素”桥接大鼠坐骨神经10mm的缺损，分别于术后不同时间行足迹实验及再生神经的免疫组化、光电镜观察。结果：术后1周移植物表面即可见纤维膜性组织和微血管形成，第4周再生神经到达缺损的远段，第8周部分神经再生通过缺损，随时间延长，有髓神经纤维比例增多，髓鞘增厚。第16周，移植物基本降解，被再生神经组织替代。足迹试验显示术后第8周坐骨神经功能开始恢复，第16周达正常的60％左右。结论：复合移植物可诱导许旺细胞的迁移和再生轴索的生长，有利于神经同再生时各种膜性结构及微血管形成，并在发挥“桥梁”作用后逐渐降解。     

局部应用GDNF对运动神经的保护作用研究

目的研究周围神经损伤后,经蛛网膜下腔置管局部应用外源性胶质细胞源性神经营养因子（glial cellline-derived neurotrophic factor,GDNF）对脊髓前角运动神经元的保护作用。方法成年SD大鼠随机分为两组,即手术加生理盐水组和手术加GDNF组。切断大鼠坐骨神经致相应脊髓前角运动神经元损伤,于L5、6腰椎椎间隙行蛛网膜下腔置管,并注入外源性GDNF（10μg/mL）,分别与术后4、8、12周行神经功能指数检测;于不同时间处死动物并取材,对L4～6节段脊髓标本冰冻切片,行尼氏体染色、光镜检查,并于术后12周取坐骨神经,行电镜检查并采用图象分析仪检测有髓神经纤维数目、髓鞘厚度和轴突直径。结果GDNF组的坐骨神经功能指数、脊髓前角运动神经元的存活率、有髓神经纤维数目、髓鞘厚度和轴突直径均优于对照组,经统计学处理,两组差异有显著性（P〈0.05）。结论通过蛛网膜下腔注入外源性GDNF保护相应的脊髓运动神经元的同时也促进外周神经功能的恢复。     

兔胚胎脊髓移植修复周围神经缺损的实验研究

目的：对用胚胎脊髓移植修复周围神经缺损的可行性进行研究。方法：将36只新西兰家兔制成兔双侧坐骨神经缺损模型。按脊髓桥接长度分为3组,每组两侧神经桥接长度不同。第1组桥接长度为坐骨神经直径的4倍,第2组为8倍,第3组为16倍;左侧选用胎兔脊髓桥接,右侧为自体神经桥接。于术后1、2、3个月任选2只动物行辣根过氧化物酶（HRP)逆行示踪,另外10只取移植段中、远段组织作透射电镜观察。结果：在兔脊髓前角3组均发现被标记的神经元细胞。扫描电镜下见到胚胎脊髓移植段及远段有大量的正常神经纤维,其轴突直径、髓鞘厚度与对照侧相比,差异均无显著性意义（P＞0．05）。结论：用兔胚胎脊髓移植修复周围神经缺损的方法是可行的。     

Implantation of cauda equina nerve roots through a biodegradable scaffold at the conus medullaris in rat

Background contextTraumatic injuries occurring at the conus medullaris of the spinal cord cause permanent damage both to the central nervous system and to the cauda equina nerve roots.PurposeThis proof-of-concept study was to determine whether implanting the nerve roots into a biodegradable scaffold would improve regeneration after injury.MethodsAll experimental works involving rats were performed according to the approved guidelines by the Mayo Clinic Institutional Animal Care and Use Committee. Surgical procedures were performed on 32 Sprague-Dawley rats. Four ventral cauda equina nerve roots were reimplanted either directly into the ventral cord stump or through a poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) scaffold. These experimental groups were compared with a control group in which the nerves were inserted into a muscle fascia barrier that was placed between the spinal cord and the nerve roots. Animals were sacrificed at 4 weeks.ResultsThere was no difference in motor neuron counts in the spinal cord rostral to the injury in all treatment groups, implying equal potential for the regeneration into implanted nerve roots. One-way analysis of variance testing, with Tukey post hoc test, showed a statistically significant improvement in axon regeneration through the injury in the PLGA scaffold treatment group compared with the control (p<.05, scaffold n=11, control n=11).ConclusionsThis pilot study demonstrated that a PLGA scaffold improved regeneration of axons into peripheral nerve roots. However, the number of regenerating axons observed was limited and did not lead to functional recovery. Future experiments will employ a different scaffold material and possible growth factors or enzymes to increase axon populations.     

同种异体神经复合体修复兔坐骨神经缺损的研究

目的 用种植胎兔雪旺细胞的去细胞同种异体神经复合体修复兔缺损的坐骨神经,观察坐骨神经再生及功能恢复.方法 健康成年新西兰白兔48只,体质量1.5-2.0 kg,随机分成2组.两组动物均切除一段坐骨神经,造成2.0 cm长的缺损.实验组:用种植胎兔雪旺细胞的同种异体神经复合体修复坐骨神经.对照组:仅用去细胞同种异体神经修复.术后4、8、16周进行大体观察、标本光镜和电镜观察且进行量化分析、肌湿重检测.结果 手术区局部均未出现明显的排斥反应,实验组足部溃疡愈合情况优于对照组,实验组再生神经纤维数目、有髓神经纤维轴突直径、髓鞘厚度4、8、16周分别为(906.25±30.68,1726.25±51.89,2825.13±22.79)、(5.35±0.62,5.46±0.38,5.59±0.80),(1.65±0.37,1.75±0.41,1.83±0.49)均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).小腿三头肌湿重于术后4周两组间差异无统计学意义(P>0.05),实验组术后8、16周分别为(5.62±0.99,7.38±0.26)恢复优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 种植雪旺细胞的去细胞同种异体神经复合体对神经再生及功能恢复有更好的促进作用.     

完全横断性脊髓损伤后跨神经元变性的实验研究

目的：探讨大鼠完全性脊髓损伤后损伤平面以下下运动神经元轴突参与组成的周围神经的变化及其变化规律，为临床治疗、康复及预后的判断提供相关的理论基础。方法：48只成年雄性Wistar大鼠随机分为假手术组和脊髓损伤组，各组24只，每组均对应分为7d、1个月、2个月、3个月4个时间点，每组每个时间点6只大鼠。完全性脊髓损伤组大鼠制作T10水平完全性脊髓横断模型。在预定取材时间点处死相应动物，自腓总神经入肌点处向近端切取10mm该神经，分别行天青美-蓝染色光镜观察及超微结构观察。结果：各时间点假手术组腓总神经光镜下观察，神经纤维排列均匀；轴突外形正常、染色均匀。超微结构观察，髓鞘外形正常，板层清晰；轴索位置正常，轴索内微丝微管正常。完全性脊髓损伤组光镜观察发现腓总神经髓鞘和轴索出现明显退变，且退变随时间推移逐渐加重，同时出现轴突发芽现象。超微结构观察可见轴索内线粒体肿胀．轴浆内微丝、微管溶解，髓鞘板层结构破坏，雪旺氏细胞增生及空泡变性现象。退变的同时．腓总神经出现大量的新生神经纤维即轴突发芽现象。结论：完全性横断性脊髓损伤后周围神经存在退变现象．且退变程度随时间的延长逐渐加重，说明大鼠完全横断性脊髓损伤可以导致损伤水平以下周围神经发生跨神经元变性。     

异种神经基膜管桥接周围神经缺损的初步研究

目的探索经化学萃取的去细胞神经基膜管支架用于异种移植桥接周围神经缺损的可行性.方法 SD大鼠 30只,随机分为5组,分别制作预溃变2周(溃变支架桥接组)和新鲜的兔胫神经进行化学萃取,形成去细胞神经基膜管支架(异体支架桥接组),兔新鲜胫神经束(异种神经移植组);切取自体神经15 mm原位移植(自体神经移植组),修复大鼠坐骨神经长15mm 的缺损.坐骨神经切断后不作移植修复,为对照组.术后6个月行坐骨神经功能指数(SFI)测定和疼痛试验,用美蓝染色、免疫组织化学、透射电镜等方法对吻合口、移植体中央和远侧神经段的再生神经纤维进行形态学观察,并对再生有髓纤维的数量、直径及髓鞘厚度等进行量化分析.结果术后3个月,仅有溃变支架桥接组、支架桥接组和自体神经移植组动物患肢行走逐渐恢复.6个月时,针刺患足可引起背部肌肉收缩和下肢屈曲反应;术后6个月行SFI检测,溃变支架桥接组为-36.2%±9.7%,支架桥接组为-30.7%±6.8 %,自体神经移植组为-33.9%±11.3%,各组间比较无统计学意义(P>0.05).组织学观察见溃变支架桥接组与支架桥接组移植体中央横切面再生神经呈微束状分布.透射电镜观察见再生神经纤维具有正常的形态和结构.图像分析结果显示溃变支架桥接组再生有髓纤维的数量和直径均达到自体神经移植组的水平(P>0.05);但溃变支架桥接组再生纤维的髓鞘厚度明显小于自体神经移植组(P<0.05).结论用化学方法萃取的兔神经基膜管支架能移植于大鼠,成功桥接周围神经缺损,为应用动物神经修复人体周围神经缺损提供了实验依据.     

Stem cell transplantation and other novel techniques for promoting recovery from spinal cord injury

A number of potential approaches aim to optimize functional recovery after spinal cord injury. They include minimizing the progression of secondary injury, manipulating the neuroinhibitory environment of the spinal cord, replacing lost tissue with transplanted cells or peripheral nerve grafts, remyelinating denuded axons, and maximizing the intrinsic regenerative potential of endogenous progenitor cells. We review the application of stem cell transplantation to the spinal cord, emphasizing the use of embryonic stem cells for remyelinating damaged axons. We speculate that harnessing the potential of endogenously born stem cells already present in the spinal cord represents an important therapeutic target. We also discuss the potential application of peripheral nervous system reconstruction to recovery from spinal cord injury. The principles of peripheral nerve regeneration and concepts of nerve grafting are reviewed. Particular attention is given to peripheral nerve allotransplantation for repairing extensively injured tissue when autologous donor nerve material is scarce. The potential role of nerve transfers for reconstructing the injured spinal cord, particularly the cauda equina and lumbosacral plexus, are also described.     

急性重度犬马尾压迫模型诱导脑源性神经营养因子的合成

目的研究实验性犬急性重度马尾神经压迫48h的相关脊髓和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)内脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)蛋白表达水平。方法成年雄性杂种犬(n=8),随机分为实验组和对照组。实验组(n=4)行多重马尾压缢,其中第1根束缢线使整个马尾束缢了50%~75%,另3根束缢线使马尾束缢了25%~50%。对照组(n=4)仅行马尾暴露而未行马尾束缢。于术后48h取相应脊髓及DRG行HE染色、BDNF的免疫组织化学分析。结果多重马尾束缢后48h可在相应下腰骶髓和DRG神经元群体内诱导出显著的BDNF增量调节;而脊髓、DRG和神经纤维内相关结构亦见BDNF阳性表达。结论多重马尾束缢犬模型形成急性重度马尾综合征(cauda equine syndrome,CES)时,BDNF可能有神经保护作用和炎性痛、神经痛的作用。