Islet-1促MSCs心肌特化过程中Nkx2.5启动子区域DNA甲基化水平变化

目的:研究Islet-1诱导C3H10T1/2细胞定向分化为心肌样细胞过程中表达增加的心肌早期发育相关基因Nkx2.5启动子区域DNA甲基化水平的变化情况。方法:高表达Islet-1基因的慢病毒载体转染间充质干细胞C3H10T1/2,免疫荧光检测Islet-1表达情况,在Nkx2.5表达达高峰的时间点,通过甲基化特异性PCR技术检测其启动子区域DNA甲基化水平,比较C3H10组(空白对照组)、阴性对照组(转染慢病毒空载体)和实验组(转染高表达Islet-1基因的慢病毒载体)上述基因启动子区域的DNA甲基化水平。结果:实验组Nkx2.5基因启动子区域DNA甲基化水平低于其他两组(均P0.05)。结论:高表达Islet-1促C3H10T1/2细胞特异性向心肌细胞方向分化过程中,心肌早期发育相关基因启动子区域DNA甲基化水平降低,促进其表达增加。     

伴恶性心律失常的Brugada综合征SCN1B基因突变分析1例

<正>Brugada综合征是遗传性心律失常疾病,主要由编码传导去极化INa电流的Nav1.5钠离子通道α-亚基的SCN5A基因突变所致的功能丧失引起,其他突变基因包括编码Nav1.5钠离子通道β亚基的SCN1B和SCN3B,编码传导去极化ILCa电流的Cav1.2离子通道α-亚基的CACNA1C基因,基因突变导致钠离子或钙离子内流减少,或钾离子外流[1]。     

心房颤动相关微小RNA4279靶向调控钙通道蛋白

目的采用双荧光素酶报告基因等手段,探讨心房颤动(房颤)相关微小RNA4279(miR-4279)与房颤相关离子通道蛋白的靶向调控关系。方法利用在线数据库Targetscan,miRanda,miRDB预测可能的靶基因后,分别将靶基因的重组荧光素酶报告质粒与miR-4279及阴性对照质粒共转染于人胚胎肾HEK293细胞,实验分为转染组,阴性组和空白组检测各组相对荧光素酶的活性。并将miR-4279模拟体导入大鼠胚胎心肌H9c2细胞,观察其对靶基因的表达调控。结果 CACNA1C基因转染中,与阴性组比较,转染组相对荧光素酶活性降低18%(0.300±0.012 vs 0.366±0.011,P<0.01),转染组CACNA1C基因mRNA表达水平下调31%(0.820±0.058 vs 1.193±0.060,P<0.01),miR-4279模拟体转入H9c2细胞可抑制CACNA1C基因的表达。结论电压门控L型钙通道α亚基CACNA1C基因可能是miR-4279的直接靶基因,miR-4279可能通过抑制CACNA1C表达参与房颤电重构,有可能成为未来房颤干预治疗的靶点。     

人C-kit阳性心脏干细胞离子通道特性

目的研究不同人来源的人左心耳组织培养的c-kit＋（CD117）心脏干细胞（c-kit＋CSCs）的离子通道的表达情况,进一步了解心脏干细胞的电生理特性,为临床干细胞移植的安全性提供参考。方法通过分离筛选培养人c-kit＋CSCs,运用全细胞膜片钳和定量反转录聚合酶连锁反应（qRT-PCR）技术,检测人c-kit＋CSCs的通道电流和MaxiK基因、HNE-Na基因、CACNA1G基因、Kv4.2基因、CACNA1C基因的表达情况。结果在人c-kit＋CSCs上,记录到了人电压依赖性Ca2＋激活K＋电流,检测到MaxiK基因表达相对较高,HNE-Na基因、CACNA1G基因表达尚可,Kv4.2基因通道的表达相对较低,未见CACNA1C基因的表达。结论人c-kit＋CSCs表达多种离子通道的相关基因,能记录到人电压依赖性Ca2＋激活K＋电流,这与其基因的高表达是相一致的。     

CACNA1A/CACNA1C/CACNA1H基因多态性及其相互作用对老年糖尿病周围神经病变发生与发展的影响

目的探讨钙离子通道基因CACNA1A/CACNA1C/CACNA1H单核苷酸多态性(SNP)与糖尿病周围神经损伤的相关性。方法 2型老年糖尿病患者176例分为糖尿病周围神经病变(DPN)组86例与无糖尿病周围神经病变(对照)组90例。提取外周血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)技术,对CACNA1A/CACNA1C/CACNA1H单核苷酸位点进行基因分型。结果 CACNA1Ars2248069、rs16030、CACNA1Crs216008、rs2239050及CACNA1Hrs3794619、rs7191246与DNP的发生相关(P<0.05)。结论 CACNA1A,CACNA1C和CACNA1H基因中的SNP与DNP相关,并且CACNA1A,CACNA1C和CACNA1H基因多态性与DPN有相互作用。     

人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞的L型钙通道研究

目的:观察人骨髓间充质干细胞(hMSCs)诱导分化为心肌样细胞的电生理特征,L型钙离子通道的电流强度。方法:体外分离培养hMSCs,以5-氮胞苷诱导分化为心肌样细胞。分别以体外分离培养的原代搏动的SD乳鼠心肌细胞(CMs)和同代次的hMSCs为阳性对照和阴性对照,利用膜片钳技术观察诱导分化为心肌样细胞的电生理特征L型钙离子通道的电流强度。结果:在20个心肌样细胞中,有6个细胞可记录到对硝苯地平敏感的内向钙电流,其最大内向峰值电流(ICa-Peak)在0mV为(112.60±8.26)pA;而hMSCs和乳鼠的CMs的ICa-Peak分别为(96.67±13.50)pA和(263.86±39.01)pA(n=6),将诱导的心肌样细胞与未经诱导的hMSCs的ICa-Peak进行比较,P0.05具有统计学意义。结论:hMSCs经5-氮胞苷诱导后,其L型钙离子通道的钙电流增加,在电生理特性上具有向CMs分化的潜能。     

心肌梗死1周后梗死边缘区心室肌细胞快钠通道电流跨壁异质性的变化

目的 探讨心肌梗死1周后梗死边缘区心肌细胞快钠通道电流(INa )跨壁异质性的变化.方法 30只兔随机分为3组,其中两组结扎家兔左前降支建立心肌梗死动物模型,分别为心肌梗死组和假手术对照组,另一组为正常对照组.1周后,用膜片钳技术研究左心室梗死边缘区三层心肌细胞INa 的改变.结果 正常对照组左室三层细胞的钠电流存在异质性, M细胞的峰值INa 是心内膜和心外膜细胞的2倍多;M细胞的INa 失活最快;对照组与假手术组无明显差别.心肌梗死组三层细胞的INa I-V曲线均上移,以 M细胞变化最显著, INa 稳态失活曲线均左移,以心外膜细胞变化最显著.结论 左室心肌细胞的INa 存在跨壁异质性;心肌梗死对INa 的跨壁异质性有明显影响.     

卵泡抑素样蛋白4通过活化T细胞核因子抑制病理性心肌肥厚的发生发展

目的通过应用卵泡抑素样蛋白4(FSTL4)基因敲除小鼠和过表达FSTL4的细胞从体内和体外两方面研究FSTL4在病理性心肌肥厚中的功能和作用机制。方法对8只野生型小鼠和8只FSTL4基因敲除小鼠进行主动脉弓缩窄手术,构建压力超负荷诱导的心肌肥厚模型。术后4周行超声检测评估心脏的结构与功能,并通过组织病理学染色和实时荧光定量聚合酶链式反应评价心肌肥厚和纤维化的程度。在H9C2细胞中过表达FSTL4并以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激,通过免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链式反应和双荧光素酶报告基因检测,探究体外条件下FSTL4对心肌细胞肥大的作用。结果主动脉弓缩窄手术后4周,与野生型小鼠相比,FSTL4基因敲除小鼠的心肌肥厚和心肌纤维化程度加重,心脏功能减退。在H9C2细胞中过表达FSTL4抑制了AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。进一步探索发现FSTL4抑制活化T细胞核因子(NFAT)的转录活性。结论 FSTL4基因缺失促进病理性心肌肥厚、心脏纤维化和心功能的恶化,过表达FSTL4能够抑制NFAT的转录活性,抑制心肌细胞肥大。     

心肌梗死1周后梗死边缘区心室肌细胞快钠通道电流跨壁异质性的变化

目的探讨心肌梗死1周后梗死边缘区心肌细胞快钠通道电流（INa）跨壁异质性的变化。方法30只兔随机分为3组,其中两组结扎家兔左前降支建立心肌梗死动物模型,分别为心肌梗死组和假手术对照组,另一组为正常对照组。1周后,用膜片钳技术研究左心室梗死边缘区三层心肌细胞INa的改变。结果正常对照组左室三层细胞的钠电流存在异质性,M细胞的峰值INa是心内膜和心外膜细胞的2倍多;M细胞的INa失活最快;对照组与假手术组无明显差别。心肌梗死组三层细胞的INa I—V曲线均上移,以M细胞变化最显著,INa稳态失活曲线均左移,以心外膜细胞变化最显著。结论左室心肌细胞的INa存在跨壁异质性;心肌梗死对INa的跨壁异质性有明显影响。     

Brugada综合征的分子遗传机制和基因研究进展

Brugada综合征（Brugada syndrome,BS）是一种临床上伴有恶性心律失常和猝死风险的心脏疾病,其遗传方式主要为常染色体显性遗传模式。对于临床难以诊断的BS,筛选BS相关突变非常有价值,本文简要介绍8类BS及其致病基因。已报道的BS主要由编码传导去极化INa电流的Nav1.5钠离子通道α-亚基的SCN5A基因的突变所致的功能丧失引起。其他突变基因包括：编码传导去极化IL,Ca电流的Cav1.2离子通道α-亚基的CACNA1C基因,编码Cav1.2离子通道β2亚基的CACNB2,编码包括Kv4.3离子通道在内的传导复极化钾离子Ito电流的一些钾离子通道的辅助抑制性β亚基的KCNE3,编码甘油-3-磷酸脱氢酶1样蛋白的GPD1L基因,在心脏编码Nav1.5钠离子通道β亚基的SCN1B和SCN3B,以及HCN4。     

CACNA1A和CACNA1C基因变异与纵向血压变化及高血压发病率的关系:盐敏感性遗传流行病学协作研究

正该文旨在检测电压依赖性钙离子通道基因CACNA1A和CACNA1C与血压变化和高血压发病率的关系。方法:盐敏感性遗传流行病学协作(genetic epidemiology network of salt sensitivity,GenSalt)随访研究中1768名符合入选条件的汉族人参与本次研究。使用随机零点血压计共获得基线和每次随访时测量的9个血压值。混合效应模型用于评估CACNA1A和CACNA1C基因的176个单核苷酸多态性(single     

三七皂甙诱导骨髓基质细胞分化为心肌样细胞的实验研究

目的探讨三七皂甙对体外定向诱导猪骨髓基质细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的影响。方法用穿刺方法抽取猪骨髓,分离并培养骨髓基质细胞,中药三七皂甙定向诱导分化为心肌样细胞。倒置显微镜下观察细胞形态,免疫细胞化学法鉴定心肌细胞特异性抗原标志物肌钙蛋白T,用RT-PCR对心肌肌球蛋白重链(β-MHC)进行鉴定。取培养的猪心肌细胞作为阳性对照,未经三七皂甙诱导正常培养的骨髓基质细胞作为阴性对照。结果猪MSCs经三七皂甙诱导2h后,大部分MSCs可分化为心肌样细胞,免疫细胞化学检测细胞中的肌钙蛋白T呈阳性,RT-PCR显示能表达β-MHC。结论MSCs是骨髓来源的具有多向分化潜能的干细胞,在三七皂甙的定向诱导下,可以向心肌样细胞分化,有望成为心衰及心肌梗死等心肌损伤时干细胞移植治疗的理想细胞材料。     

人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞的L型钙通道研究

目的：观察人骨髓间充质干细胞（hMSCs）诱导分化为心肌样细胞的电生理特征,L型钙离子通道的电流强度。方法：体外分离培养hMscs,以5－氮胞苷诱导分化为心肌样细胞。分别以体外分离培养的原代搏动的SD乳鼠心肌细胞（CMs）和同代次的hMSCs为阳性对照和阴性对照,利用膜片钳技术观察诱导分化为心肌样细胞的电生理特征L型钙离子通道的电流强度。结果：在20个心肌样细胞中,有6个细胞可记录到对硝苯地平敏感的内向钙电流,其最大内向峰值电流（ICa-Peak）在0mV为（112．60±8．26）pA;而hMSCs和乳鼠的CMs的ICa-Peak分别为（96．67±13．50）pA和（263．86±39．01）pA（n=6）,将诱导的心肌样细胞与未经诱导的hMSCs的ICa-Peak进行比较,P〈0．05具有统计学意义。结论：hMSCs经5-氮胞苷诱导后,其L型钙离子通道的钙电流增加,在电生理特性上具有向CMs分化的潜能。     

伊布利特对家兔左心室肌细胞快钠通道跨壁异质性的影响

目的 探讨伊布利特(ibutilide)对家兔心室肌细胞快钠通道电流(INa)跨壁异质性的影响.方法 30只兔随机分为3组:正常对照组、10-7mol/L和10-6mol/L伊布利特组.用膜片钳技术研究各组左室3层心肌细胞INa的改变.结果 正常对照组左室3层细胞的INa存在跨壁异质性,中层心肌(M)细胞的峰值INa是心内膜层(Endo)和心外膜层(Epi)的2倍多;M细胞的INa失活最快;两个伊布利特组3层细胞的INa密度下降,以M细胞变化最显著;INa稳态失活曲线均左移,以M细胞变化最显著;失活后恢复曲线均恢复减慢.结论 左室心肌细胞的INa存在跨壁异质性;伊布利特可减弱INa的跨壁异质性.     

IL-1β和TNF-α在小鼠巨细胞病毒性心肌炎组织中的表达及其意义

目的研究IL-1β和TNF-α在巨细胞病毒（MCMV）心肌炎小鼠心肌组织中的表达及在心肌损伤中的作用。方法将60只4周龄BALB／C小鼠随机分为两组,实验组（36只）腹腔注射10-4TCID MCMV,对照组（24只）注射3T3细胞裂解液。观察腹腔注射后3、7、14d心肌组织中IL-1β TNF-α的表达及心肌病理改变。结果实验组心肌组织出现灶性或弥散性炎性细胞浸润、心肌细胞变性和坏死,对照组无病理改变。实验组IL-1β、TNF-α蛋自主要表达在炎性浸润细胞、变性或坏死的心肌细胞,而对照组几乎无表达。结论IL-1β、TNF-α在MCMV心肌炎心肌组织中表达,并可能在其发病中起重要作用。     

lncRNA SLC8 A1-AS1在脓毒症大鼠心肌组织中的表达及其对心肌细胞凋亡和炎症因子分泌的影响

目的 研究lncRNA SLC8A1-AS1在脓毒症大鼠心肌组织中表达及其对心肌细胞凋亡和炎症因子分泌的影响.方法 qRT-聚合酶链反应(PCR)检测脓毒症大鼠心肌组织中SLC8A1-AS1表达水平.心肌H9C2细胞分成Control组(正常培养)、脂多糖(LPS)组(LPS诱导处理)、Vector+LPS组(转染阴性...     

腺苷对心肌梗死兔非梗死区心室细胞快钠通道跨壁异质性的影响及其离子机制

目的 探讨腺苷（Ado）对急性心肌梗死（AMI）后非梗死区心肌细胞快钠通道电流（INa）跨壁异质性的影响.方法 36只兔随机分为4组,其中两组建立AMI动物模型,分别为Ado组和MI组,其余两组为正常对照组和假手术对照组.1个月后,用膜片钳技术研究左室非梗死区3层心肌细胞INa的改变.结果 正常对照组左室3层细胞的钠电流存在异质性,中层心肌（M）细胞的峰值INa是心内膜层（Endo）和心外膜层（Epi）的2倍多;M细胞的INa失活最快;对照组与假手术组无明显差别.MI组3层细胞的INa电流密度下降,以M细胞变化最显著,INa稳态失活曲线均左移,以Epi变化最显著;Ado组3层细胞INa电流密度下降显著,稳态失活曲线左移最明显并趋向一致,失活后恢复曲线均恢复减慢.结论 左室心肌细胞的INa存在跨壁异质性;AMI对INa的跨壁异质性有明显影响;而Ado减弱AMI后INa的跨壁异质性.     

胺碘酮对心肌梗死一月后非梗死区心室肌细胞快钠通道电流跨壁异质性的影响

探讨胺碘酮对心肌梗死 (MI)后非梗死区心肌细胞快钠通道电流 (INa)跨壁异质性的影响。 36只兔随机分为4组 ,其中两组建立急性MI动物模型 ,分别为胺碘酮组和MI组 ,其余两组为正常对照组和假手术对照组。 1个月后 ,用膜片钳技术研究左室非梗死区三层心肌细胞INa的改变。结果 :正常对照组左室三层细胞的钠电流存在异质性 ,M细胞的峰值INa是心内膜 (Endo)和心外膜层 (Epi)的 2倍多 ;M细胞的INa失活最快 ;对照组与假手术组无明显差别。MI组三层细胞的INa电流密度下降 ,以M细胞变化最显著 ,INa稳态失活曲线均左移 ,以Epi变化最显著 ;胺碘酮组三层细胞INa电流密度下降显著 ,稳态失活曲线左移最明显并趋向一致 ,灭活后恢复曲线均恢复减慢。结论 :左室心肌细胞的INa存在跨壁异质性 ;MI对INa的跨壁异质性有明显影响 ;而胺碘酮减弱MI后INa的跨壁异质性。     

microRNA-1和microRNA-133参与小鼠诱导多能干细胞向心肌的分化

目的 研究microRNA-1（miRNA-1）和microRNA-133（miRNA-133）对小鼠诱导多能干细胞（miPSCs）向心肌分化的影响。方法 RT-PCR分析miPSC分化过程中microRNA-1和microRNA-133的表达变化；microRNA-1和micro-133反义寡核苷酸转染miPSCs，增强miRNA-1和miRNA-133表达；并按照转染分子的不同，将细胞分为对照组（添加miRNA-U6）、miRNA-1组、miRNA-133组和miRNA-1+miRNA-133组。RT-PCR、q-PCR和免疫荧光化学染色检测miRNA转染并诱导miPSCs分化后，各组细胞内miRNA-1和miRNA-133的表达变化以及心肌细胞相关特异性基因和蛋白的变化。结果 miPSCs心肌分化过程中miRNA-1，miRNA-133的表达具有差异性，均在后期有显著增高（P<0.01）；在分化过程中单独过表达miRNA-1 和miRNA-133对心肌的分化并未有促进作用，但共表达miRNA-1 和miRNA-133后，却显著增加心肌细胞的搏动数量和心肌基因的表达，并且促进了心肌细胞成熟。结论 miRNA-1和miRNA-133通过协同作用促进miPSCs体外分化为心肌细胞，显著提高 miPSC 向心肌细胞定向分化效率。     

心肌营养素-1诱导小鼠诱导性多能干细胞心肌细胞定向分化的实验研究

目的:观察心肌营养素-1(CT-1)对小鼠诱导性多能干细胞(miPSCs)心肌细胞定向分化的诱导作用。方法:实验分为对照组与CT-1处理组。miPSCs经悬滴法诱导形成拟胚体,第3天培养基中加入1μmol/ml CT-1(CT-1组),对照组采用普通培养基。于第4、7、10和14天,收取细胞样本,采用实时PCR检测心脏特异标志物基因的表达。用免疫荧光染色及流式细胞术检测干细胞标志物Oct4和心肌特异性分化标志物肌钙蛋白I(cTnI)的表达。用透射电镜观察心肌样细胞的超微结构。结果:CT-1组第10天,样本中心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)基因表达的水平为同期对照组的1.75倍,有显著性差异(P<0.05)。免疫荧光染色法检测显示,两组均有cTnI表达。流式细胞术鉴定的结果显示,对照组与CT-1组cTnI的阳性率分别为28.5%和56.4%,有显著性差异(P<0.05)。电镜观察显示,CT-1组肌原纤维及胞内线粒体明显增多,肌纤维排列规则,可见细胞间桥粒连接和缝隙连接。结论:CT-1可显著提高miPSC向心肌细胞定向分化的效率。