异种异体和同种异体半月板移植修复兔膝关节半月板缺失的预后研究

目的:研究同种异体半月板和异种异体半月板移植后,移植物在关节内的转归和移植物对关节软骨的保护作用.方法:切除30只成年新西兰白兔的内侧半月板造成内侧半月板缺失的模型,并将新西兰兔分为A组和B组.A组进行同种异体内侧半月板移植.B组从猪半月板取小块半月板组织,修剪成同兔内侧半月板形态和尺寸相同的异种异体半月板植入物,进行兔内侧半月板的异种异体移植.在术后第6周、第12周、第24周时宰杀动物,观察移植半月板、内侧胫骨平台软骨、股骨内髁负重区软骨和股骨滑车软骨的大体形态学改变和组织病理学改变.结果:同种异体半月板移植后,半月板在关节内的形态良好,与关节囊周围愈合良好,移植24周后,可见关节软骨损伤不明显.异种异体半月板移植后短期半月板和关节软骨情况良好,24周后移植物部分被吸收,关节软骨也出现退变和损伤.结论:用猪的半月板组织塑形后移植替代兔内侧半月板组织,术后24周移植物被溶解吸收,并开始出现关节软骨退变.同种异体内侧半月板移植后,半月板的结构和功能重建良好,而且对关节软骨起到了良好的保护作用.     

兔同种异体新鲜半月板移植后组织学变化

目的:探讨兔同种异体新鲜半月板移植后,移植物形态结构的组织学衍变过程。方法:成年新西兰大白兔12只,分为3组:6周组、12周组和24周组,每组4只。每次2只兔同时接受手术,将2只兔实验侧的内侧半月板互换,进行同种异体新鲜内侧半月板移植。术后6周、12周、24周处死,观察大体半月板愈合情况,并行HE染色、天狼星红染色等组织学检查。结果:术后6周半月板移植物与周围组织愈合情况良好,但存在明显异物反应表现。12周和24周时,每组各有50%的半月板出现肉眼可见的明显皱缩,镜下可见基质松散。HE染色显示3组均存在血管增生、纤维化和淋巴细胞浸润等表现。天狼星红染色显示:6周组75%的标本Ⅲ型胶原占比少于1/3;12周组50%的标本Ⅲ型胶原占比介于1/3和2/3之间;24周组全部标本Ⅲ型胶原占比均超过2/3。6周组有25%出现胶原纤维少量松散;12周组100%出现少量松散,且主要位于中心区;24周组50%出现大量松散,而且这种松散的表现扩展到整个半月板区域。三组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:兔同种异体新鲜半月板移植术后6周愈合良好,但存在明显异物反应表现,12周和24周部分移植物会出现明显肉眼可见的皱缩和镜下可见的基质松散现象。而且随着时间推移,内部胶原纤维从Ⅰ型胶原为主逐渐转变为Ⅲ型胶原为主。这种变化先从中心区开始,范围逐渐扩大,使移植物的结缔组织结构逐渐弱化,可能最终导致移植物的失效。     

异种异体半月板移植延缓关节软骨退行性变的研究

目的:探讨异种异体半月板移植对延缓关节软骨退变的作用。方法:对15只成年新西兰兔的后肢左、右膝均进行内侧半月板全切。在15只兔的左膝进行猪半月板组织成型后所得的异种异体内侧半月板移植,以其已切除内侧半月板的右膝作为对照。分别于术后6周、12周、24周择期处死动物,观察各组兔膝关节软骨的大体病理表现、组织病理Mankin评分改变,并用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原单克隆抗体免疫组织化学染色法观察关节软骨中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原的表达情况。结果:兔内侧半月板全切组膝内侧胫骨平台和内侧股骨髁软骨破坏严重,有大量骨赘形成,呈骨性关节炎表现。异种异体半月板移植在短期内对关节软骨具有明显保护作用,但随着术后24周移植半月板被破坏,关节软骨出现退变,但与同期的半月板切除膝相比,关节软骨退变较轻。结论:异种异体半月板移植短期内对关节软骨有保护作用;异种异体半月板移植可延缓关节软骨退行性变。     

关节镜下同种异体半月板移植术后疗效观察以及关节镜二次探查报道

目的:探讨18例关节镜下同种异体半月板移植术后效果,并且对其中6例进行术后二次探查以进一步分析移植术后临床效果。方法:对18例2010年1月至2013月12月间半月板切除术后的患者,在关节镜辅助下实施同种异体半月板移植术,对患者进行了平均18.80±0.51(15~26)个月的随访,采用IKDC、Lysholm和Tegner评分进行评估比较,观察分析其恢复效果。其中6例患者术后行关节镜二次探查。结果:18例半月板移植患者行走功能正常,膝关节活动度良好,术后膝关节疼痛不适明显改善,可以完成日常活动和基本体育运动,各项评估指标如IKDC、Lysholm、Tegner评分均较术前有明显提高。其中6例关节镜二次探查见移植半月板周缘关节囊愈合,形态基本正常,稳定性良好。结论:关节镜下同种异体半月板移植安全,半月板移植可有效缓解半月板切除后出现的关节疼痛、肿胀等症状,可获得较好的近期临床效果,临床未见明显的免疫排斥反应。     

兔同种异体新鲜半月板移植的实验观察

目的:探讨兔同种异体新鲜半月板移植的可行性。方法:成年新西兰大白兔35只,随机分为三组:第一组5只,切除内侧半月板,制成半月板缺失模型,作为对照,观察切除半月板后关节软骨损伤情况;第二组15只,作为半月板移植的受体;第三组15只,作为供体,切取半月板后处死。半月板缺失组和半月板移植组均饲养12个月后处死。半月板缺失组处死后观察内侧胫骨平台和股骨髁关节软骨损伤情况。半月板移植组术后12个月先行MRI检查,观察半月板与关节囊愈合情况以及移植半月板有无信号改变,处死后观察大体半月板愈合情况和关节软骨损伤情况,并行石蜡切片检查。结果:半月板缺失组胫骨平台和股骨髁关节软骨出现磨损。半月板移植组半月板愈合好,外形、质地和弹性均接近正常半月板,胫骨平台和股骨髁软骨无额外磨损。结论:同种异体新鲜半月板移植能够成活,一年后观察时具有正常的结构和功能,防止了膝关节退变。     

同种异体半月板移植和半月板切除术后中期临床效果比较

目的:比较同种异体半月板移植和半月板切除术后中期临床效果。方法:2005年6月至2009年8月,16例半月板切除术后患者接受18个同种异体半月板移植(移植组),其中男12例,女6例,年龄25.7±7.9岁。以同期行半月板切除术的20例患者为对照(切除组),其中男12例,女8例,年龄25.0±7.2岁。采用IKDC评分、Lysholom评分、Tegner评分、VAS评分等比较两组患者临床效果,并通过X线、核磁共振成像(MRI)比较两组患者膝关节退变和软骨损伤进展情况。结果:两组平均随访时间分别为60±20、54.4±6.1个月,术前IKDC评分、Lysholom评分、Tegner评分、VAS评分无显著性差异。术后两组患者的临床评分、单腿跳、关节间隙变化和力线等无显著性差异。切除组Kellgren-Laurence分级术后与术前的差值为1.4(1~2),明显高于移植组的0.3(0~1)(P<0.05)。移植组术后MRI软骨分级和软骨损伤进展程度均明显低于切除组,分别为1.2(0~3)vs 2.0(1~3)(P=0.028),0.7(0~2)vs 1.4(0~2)(P=0.001)。结论:半月板移植术后中期临床效果良好,与半月板切除无明显差异;半月板移植具有保护软骨、减缓关节退变的作用。     

同种异体新鲜半月板移植的实验研究

目的探讨治疗半月板损伤的新途径.方法34只健康家犬随机分成3组26只动物的左膝为A组,右膝为B组,另8只动物的双膝为C组.A组单纯切除内侧半月板;B组切除内侧半月板后,将从另一动物右膝关节取下的内侧半月板植入原位;C组作为正常对照.分别于术后4、8、12周各处死2只动物,移植物进行大体观察,组织学、组织化学及电镜观察.16周时,2只动物行动脉灌注,23只动物标本行生物力学试验.留3只动物以作远期观察.结果移植半月板组织能存活.生物力学试验结果显示植入半月板明显提高了膝关节的力学性能,特别是在负重时.结论初步认定同种异体新鲜半月板能够同宿主良好愈合,并能在移植后短期随访过程中保持正常的结构和功能,从而防止或延缓了膝关节的退变.     

关节镜辅助下的同种异体半月板移植(附4例术后20个月以上随访报告)

目的:介绍同种异体半月板移植并总结4例关节镜辅助下的同种异体半月板移植的初步临床效果。材料和方法:2005年6月～7月,4例半月板切除术后的患者接受关节镜辅助的同种异体半月板移植手术,其中男性3例、女性1例,平均年龄30.78±7.71岁(21.5～38.5岁)。3例内侧半月板移植,1例外侧半月板移植。随访采用症状询问,体征检查,IKDC、Lysholm和Tegner评分及KT2000测量关节稳定性的方法。4例患者均每半年进行一次X线片及MRI检查,分别观察膝关节的关节间隙改变及移植半月板状态。对所得结果,因病例只有4例,故只进行数据描述,不进行统计学分析。结果:对4例患者均进行了平均21.80±0.81(20～22)个月的随访。所有患者随访时关节活动度均正常,均无明显的膝关节疼痛和肿胀,原来长时间活动后被切除半月板的间室不适完全消失。患者可以胜任日常活动和体育锻炼,无并发症出现。IKDC、Lysholm、Tegner评分均较术前明显提高。KT2000测量发现术后膝关节的稳定性有所改善。X线片检查提示术后患者关节间隙无明显变化。每半年一次的MRI检查提示移植半月板术后1年时替代存活已经很好。结论:关节镜辅助下的同种异体半月板移植安全可行,半月板移植可缓解半月板切除后出现的关节疼痛、肿胀等症状,促进关节功能恢复并使膝关节的稳定性有所改善。     

骨性关节炎关节软骨中Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原的分布

目的 :研究成人骨性关节炎关节软骨中的Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原的分布。方法 :分别用抗Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原单克隆抗体对成人骨性关节炎关节软骨切片进行免疫组织化学染色法。结果 :骨性关节炎关节软骨全层无Ⅰ型胶原 ;Ⅹ型胶原分布在深层和钙化层 ;Ⅱ型和Ⅲ型胶原分布相同 ,轻度病变时分布于软骨全层 ,中、重度病变时主要分布于中、深层。结论 :成人骨性关节炎关节软骨中不仅含有Ⅱ型胶原 ,而且含有大量Ⅲ型和Ⅹ型胶原 ,但无Ⅰ型胶原。Ⅹ型胶原和Ⅱ、Ⅲ型胶原的分布有重叠区     

硅橡胶植入对关节软骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的观察植入硅橡胶对兔关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原合成的影响.方法18只成年新西兰大白兔,每只动物右膝为实验组,在膝关节滑车处植入硅橡胶;左膝为对照组,膝关节滑车处造成关节软骨缺损后不植入硅橡胶.分别于术后4周、24周和48周取材,采用原位杂交的方法观察关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,同时运用免疫组织化学的方法观察关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白的合成.结果实验组中关节软骨可见Ⅱ型前胶原mRNA和胶原蛋白的稳定表达.Ⅰ型前胶原mRNA从术后4周起即有表达,且随时间延长而表达增加.但Ⅰ型胶原染色仅在24周时方开始呈现阳性.Ⅲ型前胶原的mRNA则在各期均未探测到,但从24周起Ⅲ型胶原染色呈阳性.对照组关节软骨在术后4周时即可见到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白同时表达,且对照组中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白表达均呈减少趋势.结论(1)前胶原mRNA的表达早于胶原分泌.Ⅰ型前胶原mRNA表达在实验组中比对照组晚,而且实验组中Ⅰ型前胶原mRNA的表达时间较长,容易观察到阳性的表达信号,所以Ⅰ型前胶原mRNA可以成为早期骨关节炎(OA)的分子标志物.(2)Ⅲ型前胶原mRNA由于表达时间可能较短,所以即使在实验组有Ⅲ型胶原蛋白分泌,但不易查到有Ⅲ型前胶原mRNA的表达,因此Ⅲ型前胶原mRNA不是一个合适的早期OA的分子标志物.(3)硅橡胶植入对关节软骨的胶原合成有一定影响,但对关节软骨的影响小于对照组.硅橡胶植入修补关节软骨缺损可延缓骨关节炎的发病过程.     

实验性肝纤维化肝内Ⅰ、Ⅲ型胶原及PⅢP的免疫组化研究

利用免疫组化ＡＢＣ法研究正常及ＣＣｌ４实验性肝纤维化大鼠肝内，Ⅰ、Ⅲ型胶原及ＰⅢＰ的分布，并对部分切片进行了图像定量分析。结果表明在正常肝脏，Ⅰ、Ⅲ型胶原在分布上一致，ＰⅢＰ在汇管区显著少于Ⅰ、Ⅲ型胶原（Ｐ＜０．００１），在肝窦周围显著多于Ⅰ、Ⅲ型胶原（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），提示汇管区以成熟胶原为主，在肝窦周围以新合成胶原为主。在肝纤维化时，胶原纤维分布于变性、坏死的肝细胞之间，呈“干枝挂果”样，肝窦周围的胶原随着纤维化的进展而减少。纤维隔来源于非实质细胞，肝细胞可能不参与胶原合成。     

大鼠低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因的表达

目的　检测低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因的表达。方法　用RT PCR的方法检测大鼠梗阻性低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因表达的改变。结果　与正常对照组相比 ,低顺应性膀胱组逼尿肌层中Ⅲ型胶原蛋白基因的表达明显上调 ,Ⅰ型胶原蛋白基因的表达上调。结论　膀胱组织肌层内Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因表达上调与梗阻后低顺应性膀胱的形成存在一定的关系。     

兔视网膜氪激光损伤修复中碱性成纤维细胞生长因子和Ⅰ/Ⅲ型胶原基因的表达变化

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF)和I／Ⅲ型胶原基因与视网膜激光损伤后修复的关系。方法：用氪激光致伤有色家兔后极部视网膜，于伤后1，3，7，14d取眼球做冰冻切片，用组织原位杂交法观察bFGF mRNA和Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维mRNA表达的变化。结果：光凝后1－3d，邻近光凝斑的兔视网膜节细胞层和内核层中bFGF mRNA阳性表达明显增加，在相同部位和时相Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维mRNA亦呈上调表达。结论：Ⅰ/Ⅲ型胶原基因与视网膜损伤修复直接相关，bFGF可能起重要的调节作用。     

外源性IGF-I对大鼠急性骨骼肌钝挫伤后骨骼肌IIb型MHC及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的 :观察外源性IGF -I对SD大鼠骨骼肌钝挫伤后修复过程中IIb型肌球蛋白重链(myosinheavychain ,MHC)及Ⅰ、Ⅲ型胶原(collagen-Ⅰ和Ⅲ )mRNA表达的影响。方法 :采用自制的肌肉损伤打击装置对 84只雄性SD大鼠后下肢肌群造成钝挫伤 ,然后将动物随机分为两组 ,分别于损伤局部注射外源性IGF-I及生理盐水 ,然后在损伤后第 1、3、7、1 0、1 4、2 1和 2 8天分别处死大鼠并取损伤处肌肉 ,采用半定量逆转录 -聚合酶链式反应 (semi-quantitativeRT -PCR)分析IIb型MHC、Ⅰ型及Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果 :(1 )急性钝挫伤修复期 ,两组动物骨骼肌IIb型MHC及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA表达量均显著增高 ,第 7～1 0天达到高峰 ,然后呈下降趋势。 (2 )在骨骼肌修复过程中 ,外源性IGF-I治疗组大鼠IIb型MHCmRNA表达水平的升幅显著高于生理盐水对照组 ,且达到峰值的时程早于生理盐水组 3天。 (3 )在骨骼肌修复过程中 ,外源性IGF -I治疗组大鼠Ⅲ型与Ⅰ型胶原mRNA表达水平的改变明显低于生理盐水对照组 ,但峰值时程与生理盐水对照组相同。结论 :(1 )急性骨骼肌钝挫伤修复过程中 ,外源性IGF -I能促进骨骼肌急性钝挫伤后IIb型MHCmRNA表达。 (2 )急性骨骼肌钝挫伤修复期 ,外源性IGF -I能抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达     

膝关节股骨外髁髁间侧壁软骨Ⅰ、Ⅲ型胶原和IL-1α、IL-1Ra分布的研究及其临床意义

目的 :观察分析成人股骨外髁髁间侧壁软骨组织IL - 1α、IL - 1Ra和I、Ⅲ型胶原分布特点。方法 :对 14例患者行膝前交叉韧带重建术、髁间窝成形时所取的股骨外髁髁间侧壁软骨标本进行免疫组化染色 ,观察软骨细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及IL - 1α、IL - 1Ra分布。结果 :Ⅰ型胶原见于软骨表层 ,Ⅲ型胶原分布于整个软骨表层和中间层。IL - 1α和IL - 1Ra分布一致 ,仅限于软骨表层。结论 :(1)股骨外髁髁间侧壁软骨与典型的正常负重区透明软骨不同。这可能是此区软骨的特征性表现 ,但不排除退变可能。 (2 )股骨髁间侧壁软骨作为正常软骨的移植来源 ,提供软骨细胞和骨软骨进行自体移植以修复软骨损伤时应该慎重。     

注射活血生肌类中药对大鼠骨骼肌急性钝挫伤后肌肉Ⅱb型MHC及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的 :观察活血生肌类中药对骨骼肌钝挫伤后修复过程中IIb型肌球蛋白重链 (myosinheavychain ;MHC)及Ⅰ、Ⅲ型胶原 (Collagen -Ⅰ和Collagen -Ⅲ )mRNA表达的影响。方法 :采用打击装置造成 12 6只大鼠后肢肌群钝挫伤 ,用半定量逆转录 -聚合酶链式反应 (semi -quantitativeRT-PCR)分析mRNA的表达。结果 :(1)急性钝挫伤后 ,各组大鼠骨骼肌IIb型MHC及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA表达量均显著增高 (P <0 .0 1)。 (2 )修复过程中 ,注射活血生肌类中药治疗组大鼠IIb型MHCmRNA表达水平的升幅显著高于生理盐水对照组 (P <0 .0 1) ,但低于注射IGF -I治疗组 (P <0 .0 5 )。 (3)修复过程中 ,注射活血生肌类中药治疗组大鼠Ⅰ型与Ⅲ型胶原mRNA的表达水平显著低于生理盐水对照组 (P <0 .0 1) ,与注射IGF -Ⅰ治疗组相比无显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :急性骨骼肌钝挫伤修复过程中 ,注射活血生肌类中药能有效地促进Ⅱb型MHCmRNA表达 ,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达 ,并促使Ⅰ型胶原mRNA水平迅速恢复到正常水平     

活血生肌类中药对大鼠急性钝挫伤后骨骼肌Ⅱb型MHC及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的:观察活血生肌类中药对骨骼肌钝挫伤后修复过程中Ⅱb型肌球蛋白重链(myosin heavy chain; MHC)及Ⅰ、Ⅲ型胶原(collagen-Ⅰ和collagen-Ⅲ)蛋白表达的影响.方法:将采用打击装置造成后下肢肌群钝挫伤的108只大鼠随机分为活血生肌类中药治疗组、IGF-Ⅰ治疗组及生理盐水对照组.用免疫组化方法分析骨骼肌钝挫伤后修复过程中肌肉Ⅱb型MHC、Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:(1)急性钝挫伤后各组动物骨骼肌Ⅱb型MHC及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达量均显著降低(P<0.01),随修复过程呈上升趋势并维持在相对恒定的水平.(2)活血生肌类中药组大鼠在骨骼肌修复过程中Ⅱb型MHC 蛋白表达水平的升幅及峰值明显高于生理盐水组(P<0.01),但低于IGF-Ⅰ组(P<0.01).(3)3组大鼠Ⅰ型胶原蛋白表达水平均于损伤后第21天达到高峰,但活血生肌类中药组大鼠该蛋白表达峰值及相对恒定水平明显低于生理盐水组(P<0.01),与IGF-Ⅰ组比较无显著差异(P>0.05).(4)3组大鼠Ⅲ型胶原蛋白表达水平均于损伤后第14天达到峰值,下降至一定水平后基本维持在高于正常的水平.活血生肌类中药组大鼠Ⅲ型胶原蛋白表达的峰值水平及最终相对恒定的水平明显低于生理盐水组(P<0.01),与IGF-Ⅰ组无显著差异(P>0.05). 结论:急性骨骼肌钝挫伤修复过程中,活血生肌类中药能有效地促进Ⅱb型MHC 蛋白表达,阻止Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达过度升高,从而有利于损伤组织修复.