米诺环素对神经病理性疼痛大鼠脊髓星形胶质细胞激活的影响

目的观察米诺环素对CCI大鼠脊髓水平GFAP表达,探讨脊髓星形胶质细胞在神经病理性疼痛中的不同时程作用。方法将110只SD大鼠随机分成5组:A组:对照组(n=15)、B组:假手术组(n=25)、C组:CCI对照组(n=25)、D组:CCI预给药组(n=25)、E组:CCI治疗组(n=25)。分别测定各组在手术前(以第0天表示)以及手术后第1、4、7、11、14天损伤侧后肢50%机械刺激缩足阈值,然后相应分别取每组大鼠L4-6段脊髓,采用免疫组化染色方法测定脊髓背角星形胶质细胞GFAP表达变化情况。结果①坐骨神经结扎后大鼠出现痛觉过敏且持续增强存在。②B组和D组亦可见星形胶质细胞有轻微的激活,C组脊髓背角星形胶质细胞在术后7d发生明显激活,至术后14d星形胶质细胞被强烈的激活;E组星形胶质细胞术后有较明显的激活但无高峰期。结论脊髓水平星形胶质细胞的激活可能对神经病理性疼痛的产生维持发挥重要作用;米诺环素术前给药抑制星形胶质细胞的激活,减轻神经病理性疼痛。     

自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用

目的:探讨自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用。方法:构建PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧模型,采用米诺环素(MC,1、10、100μmol/L)或3-甲基腺嘌呤(3-MA,5mmol/L)进行干预,MTT检测细胞活力,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬泡,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ)、泛素结合蛋白P62/SQSTM l的表达。结果:氧糖剥夺处理后,1μmol/L和10μmol/L的MC能显著提高PC12细胞的存活率,而100μmol/L则会加重细胞的损伤。蛋白LC3Ⅱ和Beclin1的表达与MC的浓度呈正相关性,自噬抑制剂3-MA能够降低LC3Ⅱ和Beclin1,增加P62/SQSTM l的表达逆转MC的保护作用。结论:低剂量(1、10μmol/L)MC能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达,诱导PC12细胞产生自噬从而保护氧糖剥夺-复糖复氧处理后的PC12细胞。     

抑制小胶质细胞激活对骨癌痛小鼠疼痛维持的影响

目的研究鞘内注射小胶质细胞特异性抑制剂米诺环素(minocycline,MC)抑制脊髓小胶质细胞的激活对骨癌痛维持的影响。方法采用小鼠跟骨癌痛模型,♂C3H/He小鼠42只,随机分为3组(n=14),sarcoma+PBS(phosphatebuffered saline)组和sarcoma+MC组行小鼠跟骨癌痛模型制作,跟骨内注射肿瘤细胞;sham+PBS组行假手术,跟骨内注射PBS。造模后11天(post-implantation day11,PID11),每组随机取10只小鼠,sham+PBS组和sarcoma+PBS组单次鞘内注射MC溶媒(PBS 5μl),sarcoma+MC组单次鞘内注射MC(1 nmol,5μl)。各组分别在鞘内注射前、注射后0.5、1、2、4、8、24 h测定机械性痛觉超敏、冷痛觉过敏。各组剩余4只小鼠在PID12鞘内注射后1 h行非伤害性触摸右侧足底90min,分析脊髓背角c-fos蛋白的表达。结果骨癌痛导致小鼠机械性痛阈和冷痛阈降低,脊髓背角c-fos蛋白的表达上调;单次鞘内注射MC能暂时提高小鼠疼痛阈值,并抑制脊髓背角c-fos蛋白的表达。结论小胶质细胞的激活对骨癌痛的维持具有重要作用。     

苯丙胺对星形胶质细胞的影响及星形胶质细胞分泌液在苯丙胺致PC12细胞毒性中的保护作用

目的:探索苯丙胺(amphetamine,AMPH)对星形胶质细胞(astrocyte,AS)的影响以及星形胶质细胞分泌液astrocytic secretory fluid,ASF)在AMPH致PC 12细胞损伤中的作用。方法:观察不同浓度的AMPH对AS数量和形态变化的影响。在PC12细胞中加入AMPH,建立细胞毒性模型,随后加入ASF、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其抗体,观察PC12细胞形态的变化以及存活率的差异。结果:(1)AMPH浓度达到9mM时,AS数量减少,而胞体肥大。(2)ASF和NGF均可起保护受损的PC12细胞,其中ASF效果显著优于NGF(P<0.0001)。加入抗体中和ASF中的NGF后,ASF仍然有较好的保护作用。结论:高剂量的AMPH对AS有损伤作用。ASF对AMPH损伤的PC12细胞的保护作用显著优于NGF。     

鞘内注射米诺环素减轻大鼠佐剂性关节炎性痛觉过敏

目的研究鞘内注射(it)米诺环素(minocycline,M)对大鼠完全氟氏佐剂(complete Freunds adjunvant,CFA)性关节炎性痛觉过敏的作用。方法蛛网膜下腔置管成功的♂SD大鼠,在右踝关节外侧皮下注射50μlCFA前30min分别it生理盐水(NS)或12.5、25、50μg的米诺环素,it每天1次,持续7d,观察热刺激回缩潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)14d。CFA致炎后2d、6d,it米诺环素50μg,观察24h的PWTL变化;右踝关节外侧皮下注射50μlNS前30minit米诺环素50μg、NS20μl,观察24h的PWTL变化。结果米诺环素it不改变无炎症大鼠的PWTL;CFA致炎后PWTL缩短,米诺环素抑制致炎后PWTL的减少似呈剂量依赖性;预先及CFA致炎后2d米诺环素it可抑制PWTL的减少,d6则无明显影响。结论米诺环素it可减轻炎性痛觉过敏;对已存在的痛觉过敏,早期it作用较强,后期it则无明显作用。     

小胶质细胞在慢性胰腺炎模型大鼠疼痛症状中的作用及机制研究

目的 通过观察慢性胰腺炎模型大鼠的疼痛症状及焦虑状态,探讨小胶质细胞对于慢性胰腺炎模型大鼠中的作用及机制.方法 将40只雄性SD大鼠随机分2组:对照组(A组),米诺环素组(B组).A、B组大鼠均建立慢性胰腺炎模型.B组造模后,胃管灌入米诺环素.A组胃管灌入0.9％氯化钠注射液.造模前、造模后5 d、造模后10 d行大鼠...     

紫外分光光度法测定复方米诺环素过氧化苯甲酰洗剂中米诺环素的含量

目的建立紫外分光光度法测定复方米诺环素过氧化苯甲酰洗剂中米诺环素的含量。方法采用紫外分光光度法,测定波长为352nm。结果米诺环素的检测线性范围为4～24μg/ml,r=0.9999,平均回收率为100.2%。结论本法操作简便,准确性好,适合复方米诺环素过氧化苯甲酰洗剂中米诺环素的含量测定。     

米诺环素诱发急性胃出血1例

1　临床资料患者 ,男 2 7ａ,公司业务员。 1 999年 1 1月1 8日因急性胃出血就诊。患者自述无药物过敏史 ,因患尿道衣原体感染 ,在他人建议下于1 999年 1 1月 1 7日购买并在睡前口服盐酸米诺环素 0 2ｇ(商品名“美侬” ,5 0ｍｇ× 1 0片 ,昆明制药股份有限公司 ,批号 980 90 8)。次日晨起后空腹再次服用该药 0 1ｇ。约 3 0ｍｉｎ后觉上腹疼痛难忍 ,随即呕吐数次 ,呕吐物中带新鲜血液少许。患者有胃、十二指肠溃疡病史 ,长期服用雷尼替丁、氢氧化铝混悬剂等药物 ,并作不定期检查 ,上次内窥镜检查结果为 : ,内窥镜检查诊断为胃溃疡急性出…     

米诺环素搽剂的制备及质控

抗生素是治疗痤疮的一种有效手段,其中四环素类较常用,在四环素类抗生素中米诺环素的抗菌作用最强。因此,我们研制了米诺环素搽剂,直接应用在病损部位,使之充分发挥药物疗效     

米诺环素辅助治疗重度牙周炎的临床研究

目的评价派里奥软膏局部应用辅助治疗重度牙周炎的疗效。方法32例重度牙周炎患者，共192颗患牙，全口洁治和根面平整后，以患者一侧患牙局部应用派里奥软膏为实验组，对侧同名患牙局部应用牙康（甲硝唑棒）为对照组，记录基线、用药后第4周、8周菌斑指数（PLI）、龈沟出血指数（SBI）、牙周探诊深度（PD）、牙周附着水平（AL）．并进行数据分析。结果第4周、8周PLI、SBI、PD、AL较基线时均由改善（P〈0．01）；实验组第8周较第4周除PLI略有反弹外，其余指标皆进一步改善；在两个观察时段实验组较对照组在SBI、PD、AL方面，差异有统计学意义（P〈0．01），但PLI两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论派里奥软膏局部应用辅助治疗重度牙周炎有较好的临床效果，优于牙康。     

Effects of a novel pesticide-particle conjugate on viability and reactive oxygen species generation in neuronal (PC12) cells

Development of new methods and compounds to eradicate insect vectors are desperately needed. To that end, our team has previously described the synthesis and characterization of a conjugate comprised of a silver nanoparticle core encapsulated by the pyrethroid pesticide, deltamethrin (pesticide encapsulated silver nanoparticle termed “PENS”). For this current work, the PENS conjugate was tested in neuronal cultured cells to compare the cytotoxic responses to the unconjugated pesticide deltamethrin – a known neurotoxic agent and pristine silver nanoparticles. The PC12 (pheochromocytoma of the rat adrenal medulla) cell line was chosen as a model neuronal culture system. Cells were exposed to known concentrations of PENS, deltamethrin or silver nanoparticle suspensions to assess the degree of toxicity in vitro. After 24 hours of incubation, cell viability and intracellular reactive oxygen species (ROS) were measured. Bright field images of high dose exposures to dosing solutions were also acquired to evaluate cell morphology. Exposure to PENS resulted in a 17% decline in viability at the highest concentration of 45?µM while exposure to deltamethrin caused a 47% decrease. These results suggest that cellular viability was less adversely affected by PENS than by the deltamethrin. Also, ROS production following PENS exposure indicated that the newly developed conjugate was responding in a similar manner as that of cells treated with deltamethrin only.     

一条新的可诱导PC12细胞转化为交感神经原表型的小分子肽链

目的根据神经生长因子 (NGF)的氨基酸序列及其晶体构象资料 ,对 β NGF进行限制性酶解 ,从而获得关键的功能区域片段。方法选择溴化氰在 9位Met处 ,Trypsin在Arg或Lys处裂解 β NGF ,用SephadexG 5 0色谱、DE5 2离子交换色谱和反相高效液相色谱进行分离纯化。所得片段用PC12细胞测定活性 ,对活性片段进行氨基酸组成及序列分析。结果从 β NGF裂解片段中获得一可诱导PC12细胞分化的活性片段 ,氨基酸组成及序列分析表明 ,此片段由 16肽GEFSVCDSVSVWVGDK与 14肽HWNSYCTTTHTFVK通过一对二硫键连接而成 ,与 β NGF肽链的10～ 2 5和 75～ 88氨基酸残基序列相对应。生物活性分析表明其最佳作用浓度为 0 .0 0 1～ 0 .1ng/ml。结论此实验获得了 β NGF关键的功能区域片段 ,虽然其空间结构和功能的关系尚需研究探讨 ,但它的成功分离和鉴定为合成或表达高活性小分子神经营养物质奠定了重要的基础     

表没食子儿茶素没食子酸酯对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鱼藤酮诱导的嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法将培养的大鼠PC12细胞分别加入EGCG1,5和10μmol.L-1预处理30 min后加入鱼藤酮250 nmol.L-1继续作用24 h。MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞核形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,JC-1染色检测线粒体膜电位变化。结果与鱼藤酮模型组存活率(77.0±1.3)%相比,EGCG1,5和10μmol.L-1组细胞存活率显著增加(P<0.05),分别为(79.8±2.3)%,(82.4±2.2)%和(88.3±2.0)%。Hoechst33258染色发现,EGCG组细胞核形态明显改善。与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率增加8.2倍;与鱼藤酮模型组比较,EGCG组细胞凋亡率分别下降46%,25%和63%,差异具有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测鱼藤酮组凋亡率为33.8%,EGCG 1,5和10μmo.lL-1组的凋亡率下降至30.6%,14%和15.7%。与模型组相比,EGCG1,5和10μmol.L-1组线粒体膜分别增高了2.48,3.96和4.04倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 EGCG具有抑制鱼藤酮诱导的细胞凋亡作用,其机制可能与其稳定线粒体膜电位有关。     

氧化型低密度脂蛋白对PC12细胞的毒性作用

目的 :探讨氧化型低密度脂蛋白 (oxLDL)对PC1 2细胞的毒性作用。方法 :通过HE染色、透射电镜、MTT实验、LDH释放实验、TUNEL实验及Caspase 3测定来观察oxLDL对PC1 2细胞形态、存活率、细胞膜通透性、细胞核及Caspase 3活性的影响。结果 :透射电镜及光镜下oxLDL作用的PC1 2细胞以坏死为主并伴少量凋亡细胞。细胞存活率随着ox LDL浓度及作用时间增加而下降 ;LDH释放率、TUNEL阳性细胞数及Caspase 3活性随着浓度增高而增高 ;LDL对上述各项指标无影响。结论 :oxLDL通过Caspase 3途径致PC1 2细胞的毒性作用主要以坏死细胞为主并伴少量凋亡细胞 ,并呈量效与时效关系 ;而LDL无细胞毒性作用     

灵芝孢子多糖LPS3对Lactacystin诱导PC12细胞损伤的影响

目的探讨灵芝孢子多糖LPS3对蛋白酶体抑制剂Lactacystin诱导PC12细胞损伤的影响。方法体外培养PC12细胞,建立Lactacystin诱导PC12细胞损伤的模型,用CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI流式细胞法检测细胞调亡,免疫荧光法检测胞浆中α-synuclein聚集物的生成。结果模型组经20μmol·L-1Lactacystin处理24 h后,PC12细胞活力比空白对照组降低,仅为64.7%;经不同浓度的灵芝孢子多糖LPS3预处理后,细胞活性明显提高,且其细胞活性随多糖浓度升高而升高;Lactacystin可以诱导PC12细胞凋亡,处理24 h后细胞凋亡率为45.40%,经灵芝孢子多糖LPS3预处理后,细胞凋亡率明显降低;PC12细胞经Lactacystin处理后,胞浆内可见明显的颗粒状、小团块状α-synuclein聚集体的生成;而经灵芝孢子多糖LPS3预处理后,胞浆中α-synuclein的聚集体明显减少。结论灵芝孢子多糖LPS3对Lactacystin诱导的PC12细胞损伤有一定的保护作用,其作用机制可能与抑制α-synuclein聚集体的生成有关。     

Effects of tributyltin chloride on L-DOPA-induced cytotoxicity in PC12 cells

Tributyltin chloride (TBTC) at concentrations of 0.5-1.0 microM inhibits dopamine biosynthesis in PC12 cells. In this study, the effects of TBTC on L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA)-induced cytotoxicity in PC12 cells were investigated. TBTC at concentrations up to 1.0 microM neither affected cell viability, nor induced apoptosis after 24 or 48 h in PC12 cells. However, TBTC at concentrations higher than 2.0 microM caused cytotoxicity through an apoptotic process. In addition, exposure of PC12 cells to non-cytotoxic (0.5 and 1.0 microM) or cytotoxic (2.0 microM) concentrations of TBTC in combination with L-DOPA (20, 50 and 100 microM) resulted in a significant increase in cell loss and the percentage of apoptotic cells after 24 or 48 h compared with TBTC or L-DOPA alone. The enhancing effects of TBTC on L-DOPA-induced cytotoxicity were concentration- and treatment time-dependent. These data demonstrate that TBTC enhances L-DOPA-induced cytotoxicity in PC 12 cells.     

异丙酚对PC12细胞和脂质体膜流动性的影响

目的：研究异丙酚对PC12细胞和脂质体膜流动性的影响，探讨其全麻作用机理，方法：以PC12细胞作为神经细胞模型，以脂质体作为生物膜模型，利用荧光偏振技术离体动态地检测30min内异丙酚对PC12细胞各向异性r、荧光偏振度P和微粘度η及脂质体微度η的影响，分析细胞膜流动性的改变。结果：各浓度的异丙酚均可引起PC12细胞膜的各向异性r、荧光偏振度P和微粘度η的显性降低，尤其在5min内r,p,η值下降迅速，5min后各指标下降的趋势渐渐平缓。与PC12细胞相类似，除了1mg.L^-1组外，10、100mg.L^-1的异丙酚均显降低脂质体微粘度η值。结论：异丙酚能显增加PC12细胞和脂质体的膜流动性，提示其全麻作用原理可能是通过改变神经细胞的功能或结构产生。     

咖啡酸对氧化应激诱导的PC12细胞5-脂氧酶激活的抑制作用

目的探讨咖啡酸是否通过抑制氧化应激诱导的5-脂氧酶(5-LOX)激活而减轻细胞损伤。方法稳定转染绿荧光蛋白(GFP)-5-LOX的PC12细胞,预先给予咖啡酸0.001~10μmol.L-1和对照药MK886,30min后观察缺氧缺糖/恢复(OGD/R)及过氧化氢(H2O2)160μmol.L-1处理后的变化。MTT法和碘化丙啶染色法分析细胞存活率和死亡率;荧光显微镜观察OGD 2 h/R2 h和H2O2处理40 min时5-LOX的核膜移位;ELISA法测定OGD 2 h/R 3 h时5-LOX代谢产物的生成;DCF法检测OGD 2 h/R 0.5 h细胞内活性氧(ROS)的产生。结果 OGD 2 h/R 24 h GFP-5-LOX转染和GFP-转染PC12细胞的存活率分别为(63.1±6.6)%和(70.7±6.9)%;H2O2处理24 h细胞存活率分别为(62.5±7.7)%和(75.7±9.5)%。在GFP-5-LOX转染的PC12细胞中,咖啡酸和对照药MK886可使OGD/R细胞存活率从(63.1±6.6)%分别增加到(87.3±2.0)%和(89.9±6.3)%,细胞坏死率从(31.4±1.5)%降低到(10.1±2.0)%和(11.7±1.3)%(P<0.01);使H2O2处理细胞存活率从(62.51±7.65)%增加到(92.59±4.02)%和(75.31±6.60)%;使OGD/R细胞CysLTs的生成从261.1±33.7降低到108.5±16.7和(90.6±19.5)ng.g-1蛋白(P<0.01)。此外,咖啡酸抑制OGD/R诱导PC12细胞的ROS产生,IC50值为8.021μmol.L-1;抑制OGD/R诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.974μmol.L-1;抑制H2O2诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.501μmol.L-1;MK886无上述作用。结论咖啡酸可抑制氧化应激诱导的PC12细胞5-LOX激活,对缺血损伤的PC12细胞具有保护作用。     

Effects of catalpalactone on dopamine biosynthesis and L-DOPA-induced cytotoxicity in PC12 cells

The effects of catalpalactone on dopamine biosynthesis and L-DOPA-induced cytotoxicity in PC12 cells were investigated. Catalpalactone at 5–30 μM decreased intracellular dopamine content with the IC₅₀ value of 22.1 μM. Catalpalactone at 5–20 μM, but not 30 μM, did not alter cell viability. Catalpalactone at 20 μM inhibited tyrosine hydroxylase (TH) and aromatic-l-amino acid decarboxylase (AADC) activities. Catalpalactone also decreased cyclic AMP levels and inhibited TH phosphorylation. In addition, catalpalactone at 20 μM reduced the increases in dopamine levels induced by L-DOPA (20–50 μM). Catalpalactone (5–30 μM) associated with L-DOPA (50–100 μM) enhanced L-DOPA-induced cytotoxicity at 48 h, which was prevented by N-acetyl-l-cysteine. These results suggest that catalpalactone inhibited dopamine biosynthesis by reducing TH and AADC activities and enhanced L-DOPA-induced cytotoxiciy in PC12 cells.     

Protective effect of Xanthoceraside on injuried PC12 cells in vitro

Objective To investigate the protective effect of Xanthoceraside on various injured PC12 cells models and to indicate the mechanism of Xanthoceraside therapying dementia.Methods Four injured PC12 models induced by glutamate,hydrosulfurous sodium,sodium nitroprusside and potassium chloride accordingly were used to assay the effect of Xanthoceraside on PC12 cells by using morphological examination and MTT assay.In addition,in the model of glutamate injury,the Lactate dehydrogenase(LDH)and the lipid peroxidation products malondialdehyde(MDA)were measured by a spectrophotometric method,reactive oxygen species(ROS)generation were measured with flow cytometry.Results It was found that Xanthoceraside could obviously increase the viability of PC12 cells injured by four injury models.Xanthoceraside could also decerase the levels of LDH release,MDA production,and ROS generation induced by glutamate.Conclusions These data indicate that Xanthoceraside may provide a useful therapeutic strategy for the treatment of progressive neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease(AD).