IRM-2小鼠cDNA文库的全长cDNA序列分析

目的分析IRM-2小鼠全长cDNA文库的cDNA序列。方法根据IRM-2小鼠的21条EST,从IRM-2小鼠全长cDNA文库测定基于该21条EST序列PCR扩增的全长cDNA序列,通过与GenBank基因库同源序列信息比对,分析全长cDNA序列和性质。结果根据21对引物PCR产物的拼接,获得5条全长cDNA序列,与小鼠已知基因不同源,而且得到了可能编码蛋白质的氨基酸序列和蛋白质的性质。结论 5条全长cDNA序列提示IRM-2小鼠体内可能存在辐射抗性相关基因,为进一步分离和鉴定辐射抗性相关基因奠定了基础。     

IRM-2及其亲本小鼠mRNA差异显示分析

目的利用mRNA差异显示技术分析IRM-2在辐射抗性产生过程中是否有辐射抗性基因或抗性相关基因的表达。方法提取IRM-2小鼠及其亲本615、ICR／JCL小鼠脾细胞总RNA，进行DDRT—PCR，挑选差异表达片段并进行再扩增。结果PCR扩增产物经电泳后，有6条表达差异的带型出现，所有差异表达片段均获得了再扩增。结论某些特异基因的表达参与到了ELM-2小鼠辐射抗性产生这一过程中，推测可能是辐射抗性基因或抗性相关基因。     

小鼠衰老相关新基因Arzc的克隆

目的鉴别和克隆与小鼠衰老相关的新基因.方法采用改进的差异显示反转录聚合酶链反应(DDRT-PCR)技术分析正常老化和年轻BALB/C小鼠大脑皮层mRNA的差异表达,差异显示的新表达序列标签(EST)经Northern杂交验证后,作为出发序列,利用生物信息学方法设计引物,以小鼠大脑皮层总RNA的反转录产物为模板通过PCR克隆全长cDNA.结果差异显示分析共获得表达差异明显的EST 42条,序列同源性分析显示其中29条为已知基因cDNA片段,13条可能为新EST.对新EST进行Northern杂交验证后,对确证在正常老化鼠皮层表达明显下调的1个EST,通过生物信息学方法克隆全长cDNA,得到1个新的1 382 bp的cDNA序列,命名为Arzc,获得GenBank注册号AY344585.该序列含有1个261 bp的开放阅读框,推测的编码多肽包含86个氨基酸残基,与噬菌体编码的重组酶/整合酶的一段氨基酸序列有较高同源性.结论鉴别并克隆到一个可能与小鼠衰老相关的新基因Arzc.     

烟碱诱导基因的差异表达

目的 通过测定分析烟碱诱导出现的差异表达片段的序列,观察与烟碱相关的动脉粥样硬化的致病基因。方法 提取以烟碱处理培养的胎儿脐静脉内皮细胞的RNA,利用mRNA差异显示技术显示差异表达cDNA片段（EST）,经Northern 印迹证明并测序,经基因库比较查询。结果 发现60条EST,Northern 印迹证实23条cDNA确属差异表达片段,测序发现11条未见报道同源序列的EST。结论 确定了11条差异表达片段的序列,为全长cDNA筛选和克隆打下基础。     

以基因芯片技术研究Kkay小鼠2型糖尿病相关基因

目的以基因芯片技术研究Kkay2型糖尿病小鼠的差异表达基因。方法以包含8192条小鼠的cDNA基因表达谱芯片研究Kkay2型糖尿病小鼠肝脏的基因表达谱。结果共筛选出差异表达基因154条,包括全长基因68条,表达序列标识(EST)86条;其中40条基因表达增加,114条表达降低。结论多数已知功能基因的表达异常与以往的研究结论是一致的;cDNA基因芯片技术能够高通量分析糖尿病相关基因。     

IRM-2近交系小鼠对电离辐射抗性的研究

目的观察IRM-2小鼠对电离辐射的耐受性.方法分析测定了IRM-2小鼠对137Csγ射线的LD50及经4.0Gy137Csγ射线照射后不同时间外周血白细胞、骨髓有核细胞总数、骨髓细胞DNA含量和脾结节的变化,并与亲代小鼠ICR和615进行了比较.结果用不同剂量的137Csγ射线照射后,IRM-2小鼠对γ射线的LD50比ICR和615小鼠分别高1.73～1.57Gy和1.44Gy;外周血白细胞数和骨髓有核细胞总数、骨髓细胞DNA含量下降的幅度小且恢复得快;CFU-S的增加也较ICR和615小鼠明显.结论IRM-2小鼠比一般的纯系和杂交品系小鼠具有更强的辐射抗性.     

小鼠胸腺增龄相关性基因的差异表达及其克隆

目的 小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法 利用DDRT－PCR技术对1月龄和10月龄小鼠胸腺mRNA差异表达进行分析,获得差异表达片段（ESTs)。进一步作Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个EST为探针,从小鼠胸腺cDNA文库中克隆基因。结果 对1月龄和10月龄小鼠胸腺mRNA差异表达进行DDRT－PCR分析,发现小鼠胸腺基因存在增龄相关性的表达差异,某些基因在1或10月龄胸腺内有选择性表达,某些基因仅有表达量的变化。共获得108个差异表达的ESTs,其中31个呈Northern印迹阳性,全部测序。经同源性分析,有14个ESTs与已知基因有较高的同源性,17个ESTs为新的cDNA片段。选取其中1个在1月龄鼠胸腺水平表达的EST,从小鼠胸腺cDNA文库中克隆到1个与小鼠的LAF1转酮醇酶高度同源的1480bp片段。结论 小鼠胸腺内存在增龄性基因表达差异。据此差异所获得的胸腺差异表达基因可能参与胸腺衰老与萎缩过程。     

小鼠干扰素γ基因克隆、测序及辐射诱导表达质粒pIRESEgr-IFNγ的构建

目的：克隆小鼠干扰素γ（IFN-γ）编码区cDNA序列并构建含Egr-1启动子的辐射诱导表达质粒pIRESEgr-IFNγ。 方法：利用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法,以小鼠脾细胞mRNA为模板,扩增获得全长IFNγcDNA,与pGEMT载体连接做全自动测序,并利用基因重组技术构建含Egr-1启动子的辐射诱导表达质粒pIRESEgr-IFNγ。 结果：经测序证实获得的小鼠IFNγ cDNA序列与文献报道完全一致,并构建了含Egr-1启动子的辐射诱导表达质粒pIRESEgr-IFNγ。结论：成功克隆了小鼠IFNγ的cDNA序列,构建了辐射诱导表达质粒pIRESEgr-IFNγ。     

抑制差减杂交方法筛选辐射诱导细胞恶性转化模型中的差异表达基因

目的:筛选辐射诱导的支气管上皮细胞恶性转化模型中的差异表达基因.方法:应用抑制差减杂交方法(SSH)构建辐射诱导的细胞转化模型差异表达基因的cDNA文库.对差减文库进行PCR筛选,对得到的差异片段进行测序及BLAST分析;对部分筛选出来的差异表达基因使用荧光定量PCR方法检测并确认其变化;将新的序列表达标签(EST)登录到GenBank上.结果:在80个进行测序的克隆中,得到确定序列的共73个.在转化细胞中表达下降的序列41条,BLAST比较分析结果:得到已知序列6条;未知基因的EST序列20条;空载体序列7条;8条为重复测定序列.在转化细胞中表达上升的序列32条,BLAST分析:已知序列14条;未知基因的EST序列9条;重复测定的序列9条.对其中的部分基因改变进行荧光定量PCR检测,结果表明辐射转化组中MY06、HACE1、ZNF143、HNRPH1的表达量明显增加(与对照组相比,转化组中的mRNA分别增加了3.49、29.38、12.99、5.00倍);而PCBP2、RPL15、TCERG1的表达量下降(与对照组相比,转化组中的mRNA分别减少了1.89、48.77、11.95倍).将得到的29个未知序列登录到GenBank,序列ID:EB643220～EB643248.结论:利用抑制差减杂交方法成功建立了恶性转化细胞模型差异表达cDNA文库,包含大量功能未知的新基因;ZNF143表达增加,其与细胞的增殖与分裂有关,TCERG1作为转录辅助激活因子在mRNA转录和后期的修饰过程中起到重要的作用,PCBP2是一个Polyc连接蛋白,具有蛋白翻译调节功能,这些基因在辐射致癌中尚无研究报道.     

IRM-2近交系小鼠的遗传监测

目的 观察IRM-2小鼠基因纯合性和遗传质量。方法用电泳法对IRM-2近交系小鼠进行了生化标记基因检测,并做了毛色基因和皮肤移植试验。结果分析测定了第23代小鼠13条染色体上25个基因位点和第38代的13个生化标记基因,所查基因位点全部纯合;同系异体问背部皮肤移植100d后,未见排斥现象,为同系组织遗传性;与BALB／c白化系小鼠交配进行的毛色基因测试,杂交第一代小鼠的毛色与IRM-2小鼠一致,均为浅桂皮色,基因型为AAbbCCDD。结论可以认为,IRM-2小鼠是遗传上高度纯合的近交系小鼠。     

IRM-2近交系小鼠的生殖生长特性

观察复方女贞子对实验性高血糖模型的影响。结果表明：该药对由肾上腺素、葡萄糖引起的小鼠血糖升高有明显的对抗作用;可明显降低四氧嘧啶糖尿病大、小鼠的血糖水平及降低高血糖大鼠并发血清甘油三酯升高的作用。对正常血糖无明显影响。     

IRM-2小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养和生物学特性

目的分离原代培养IRM-2小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）,从本质上揭示IRM-2小鼠的辐射抗性。方法分离IRM-2小鼠MEFs,并进行原代培养和传代培养。观察MEFs生长形态,测定第3代和第5代细胞生长曲线、细胞周期和增殖指数。结果IRM-2小鼠在胎龄14～16d进行原代MEFs分离,MEFs在体外为贴壁生长型细胞,6代前MEFs生长良好。第3代和第5代MEFs在培养至第3天开始进入对数生长期,到第6天时细胞数达到高峰。MEFs增殖活跃,第3代和第5代细胞增殖指数分别为53%和46%。结论成功分离、培养了IRM-2小鼠MEFs,为进一步利用MEFs研究小鼠的辐射抗性机制奠定了基础。     

紫外线作用肿瘤细胞后基因表达谱的变化

目的分析紫外线(UV)对人原发性肝癌细胞株基因表达谱的影响。方法以限制片段差异显示聚合酶链反应(RFDD-PCR)技术分析紫外线照射人原发性肝癌细胞株前后基因表达谱的变化。结果获得表达序列标签共257条。其中差异表达序列标签116条,含开启表达序列标签38条,关闭表达序列标签23条,表达增强序列标签40条,表达降低序列标签15条。结论紫外线可引起人原发性肝癌细胞株基因表达谱发生变化,这些表达发生变化的基因在肿瘤生物学中的作用有待进一步研究。     

缺氧/复氧后鼠脑星形胶质细胞基因表达谱的初步分析

目的　该实验利用基因芯片技术研究缺氧 /复氧处理后鼠脑星形胶质细胞基因表达谱的变化 ,以深入认识星形胶质细胞在缺氧 /复氧处理后基因表达变化规律 ,为进一步全面认识神经胶质细胞在缺氧和缺血再灌注等情况下基因变化规律以及神经胶质细胞与神经元在损伤条件下相互依存关系提供实验依据和理论基础。方法　取人鼠脑星形胶质细胞作传代培养 ,传至第四代分组作缺氧 /复氧处理 ;用TRIzol试剂经过多个步骤提取制备好的星形胶质细胞样本总RNA ;利用基因芯片技术获取缺氧 /复氧处理后鼠脑星形胶质细胞的基因表达谱 ;利用GeneOntologyConsortium分析系统、OeneCards数据库和Pubmed检索系统对基因表达谱进行初步分析。结果　①基因表达谱 :在基因芯片测定了 4 0 96个点 ,共有差异表达基因 187个 ,其中 ,差异表达基因 187个 ,己知差异表达基因 4 6个 ,未知差异表达基因 14 1个 (EST片段 )。②已知差异表达基因 :在 4 6个已知差异表达基因中 ,表达下调的基因有 4 1个 ,表达上调的基因有 5个 ,未见报道的与缺氧 /复氧处理相关基因 2 3个 ,己报道的有 18个。③已知差异表达基因功能聚类 :共 10类 ,其中代谢 2 3个、信号传导 9个、细胞生长 3个、结构蛋白 2个、免疫应答 4个、运输 1个、细胞周期 1个、细胞增殖 1个     

大鼠外周血淋巴细胞钟相关基因的筛选和鉴定

目的 探讨外周血淋巴细胞的钟相关基因。方法 采用mRNA差异显示技术比较不同时点基因的差异显示，筛选出大鼠外周血淋巴细胞的钟相关基因，并进一步用RNA干涉技术确定其为钟下游基因。结果 获得10条差异表达的eDNA片段，其中3种与已知基因过氧化氢酶、髓鞘蛋白脂蛋白和组蛋白乙酰化酶同源，4种与已知EST同源，另有3种为未知EST，它们均属Clock基因的下游基因。结论 外周血淋巴细胞中至少存在3种以上钟相关基因，其表达水平接受作为昼夜节律振荡器重要组分的Clock基因的调控。     

缺氧预适应小鼠海马组织差异表达基因的研究

为了研究缺氧预适应的分子机制 ,分离并分析预缺氧预适应小鼠海马组织的差异表达基因 ,运用mRNA差异显示技术 ,共获得 5 6条差异基因片段 ,对其中 1 4条进行纯化、克隆、测序以及BLAST分析 ,其中 9条为已知基因 ,5条可能为未知基因。对这些差异基因的研究将为研究缺氧预适应的分子机制提供新思路     

Differential Gene Expression Profiles in Acute Hepatic Failure Model in Mice Infected with MHV-3 Virus Intervened by Anti-hepatic Failure Compound

Differential gene expression profiles in Balb/cJ mouse model of acute hepatic failure infected with MHV-3 virus intervened by anti-hepatic failure compound(AHFC) and the changes of cytokines regulated by genes were investigated.The Balb/cj mice were divided into AHFC-intervened group and control group randomly.Acute hepatic failure model of Balb/cJ mice infected with MHV-3 virus was established.The survival rate in the two groups was observed.It was found that the survival rate in the AHFC-intervened group and control group was 90% and 50% respectively 48 h after intraperitoneal injection of MHV-3(P<0.05).Before and after the experiment,the cytokines in peripheral blood of the survival mice were determined,and RNA was extracted from survival mouse liver tissue for the analysis of the differential gene expression by a 36 kb mouse oligonuleotide DNA array.In all the genes of microarray there were 332 genes expressed differently in the two groups,in which 234 genes were up-regulated and 78 genes down-regulated.Through clustering analysis,the differential expression of immune related genes,including TNF receptor superfamily,Kctd9,Bcl-2,Fgl2,IL-8,IL-6,IFN-γ,TNF-α etc.might be related with the curative effectiveness of AHFC.It was suggested that AHFC can balance the immune state of mouse model of acute hepatic failure infected with MHV-3 virus mainly through regulating the expression of immune related genes,decrease the immune damage and inhibit liver cell apoptosis of mouse acute hepatic failure model obviously so as to increase the survival rate of mouse models of acute hepatic failure.