Bcl—XL在白血病多药耐药细胞株HL60／VCR中的表达及意义

0引自BCI－X。是新近被证实的bCI－2基因家族成员之一，其结构和功能与bC人2相似，可抑制细胞凋亡D‘．关于它与多药耐药（MDR）关系的研究越来越受到重视［’j．我们采用SABC免疫组化和Westernblot方法检测敏感细胞HL60和耐药细胞HI．60／VCR的Bcl－XL表达，以初步探讨Bcl－X。与白血病MDR形成的关系．回方法1．l细胞林和试剂HL60敏感细胞株为上海细胞生物所提供；HL60／VCR耐药细胞株来源于美国纽约MemorialSloan－Kett，ringCancerCenter，在含200pg／L长春花碱（VCR）的RPMI1640培养液中传代，无VCR培养液培养2Wb…     

HL60/VCR耐药细胞荷瘤鼠模型的建立

目的建立白血病HL60/VCR耐药细胞株移植动物模型方法。方法将生长状态良好的耐药细胞株HL60/VCR1.0×107/0.2ml接种到BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下,定期观察裸鼠生长状况,测量移植瘤大小,留取标本检测不同脏器肿瘤负荷及多药耐药基因MDR1表达情况。结果 2.0×106HL60/VCR细胞皮下接种BALB/c-nu/nu裸小鼠,成瘤率为67.7%,免疫组化检测荷瘤裸鼠肝脏和脾脏均可见巢状分布白血病细胞,PCR检测成瘤组织表达MDR1基因。结论皮下移植可成功建立耐药细胞株荷瘤鼠模型,为研究多药耐药细胞株动物体内生物学行为及逆转多药耐药提供了动物模型。     

蟾酥注射液逆转HL60/阿霉素细胞多药耐药的机制

目的探讨蟾酥注射液(CHS)对人类白细胞多药耐药细胞系HL60/阿霉素细胞的逆转作用机制。方法 MTT法测定CHS预作用后HL60/阿霉素细胞对阿霉素的敏感性;流式细胞术考察CHS对HL60/阿霉素细胞周期的影响;免疫组化考察CHS对HL60/阿霉素细胞NF-κB、MRP、GST-π、iNOS蛋白表达的调节作用。结果 CHS可将阿霉素对HL60/阿霉素细胞的IC50值由34.1971μmol/L降至17.4393μmol/L,逆转倍数为1.9609倍;FCM显示CHS作用后HL60/阿霉素阻滞于G0/G1期、G2/M期,降低进入S期比例,并出现凋亡峰;免疫组化结果显示,CHS能下调HL60/阿霉素细胞中MRP、GST-π表达,上调NF-κB、iNOS的表达。结论蟾蜍注射液逆转HL60/阿霉素细胞的多药耐药性可能是通过下调MRP、GST-π的表达,上调NF-κB、iNOS的表达,促进HL60/阿霉素细胞凋亡,从而增加HL60/阿霉素细胞对药物的敏感性。     

蟾酥注射液逆转HL60/阿霉素细胞多药耐药性机制研究

探讨蟾酥注射液（CHS）对人类白细胞多药耐药细胞系HL60/阿霉素细胞的逆转作用机制。方法 MTT法测定CHS预作用后HL60/阿霉素细胞对阿霉素的敏感性;流式细胞术考察 CHS 对HL60/阿霉素细胞周期的影响;免疫组化考察CHS对HL60/阿霉素细胞 NF-κB、MRP、GST-π、iNOS 蛋白表达的调节作用。结果 CHS 可将阿霉素对 HL60/阿霉素细胞的 IC50值由34.1971 μmol/L降至17.4393 μmol/L,逆转倍数为1.9609倍;FCM显示CHS作用后HL60/阿霉素阻滞于G0/G1期、G2/M期,降低进入S期比例,并出现凋亡峰;免疫组化结果显示,CHS能下调HL60/阿霉素细胞中MRP、GST-π表达,上调NF-κB、iNOS的表达。结论 蟾蜍注射液逆转HL60/阿霉素细胞的多药耐药性可能是通过下调MRP、GST-π的表达,上调NF-κB、iNOS的表达,促进HL60/阿霉素细胞凋亡,从而增加HL60/阿霉素细胞对药物的敏感性。     

人参皂苷 Rh2抗白血病多药耐药细胞 K562/VCR作用研究

目的 通过观察人参皂苷 Rh2对人白血病多药耐药 (MDR) 细胞 K562/VCR 生长、凋亡的作用和逆转耐药的情况,探索该药在抗人白血病 MDR 方面的应用价值。方法 将人参皂苷Rh2与 K562、K562/VCR 细胞共培养 48 h 后采用 MTT法分析其对细胞生长的抑制率;将其与 K562/VCR 细胞于 37 ℃ 孵育 30 min 后,采用 Annexin V 和 PI 双染法在流式细胞仪上检测细胞凋亡情况;并观察其对 K562/VCR 细胞摄取柔红霉素 (DNR) 能力及细胞表面 P-糖蛋白 (P-gp) 表达的影响;在 DNR 与 K562/VCR 培养体系中加入不同质量浓度人参皂苷Rh2,孵育 48 h 后观察人参皂苷Rh2对 K562/VCR细胞耐药的逆转情况。结果 人参皂苷Rh2 可明显抑制 K562 和 K562/VCR 细胞的生长,并呈量效关系,人参皂苷Rh2对 K562 和 K562/VCR 的半数抑制浓度 (IC50) 分别为44.5、59.4 μg/mL。K562/VCR 经人参皂苷Rh2 在 37 ℃ 作用 30 min 后,细胞的凋亡明显增加,随人参皂苷Rh2质量浓度的增加,凋亡细胞的比例明显增加［人参皂苷 Rh2 300 μg/mL,Annexin V+ 细胞 (51.5±6.9)%］。K562 细胞经长春新碱 (VCR) 诱导耐药后,P-gp 表达率明显提高 (从 4.28% 到 93.80%),DNR 摄取率减少,25 μg/mL 以上质量浓度的人参皂苷Rh2即可明显提高 K562/VCR 对 DNR 的摄取,但 P-gp 的表达无明显改变。同时,它可明显提高 DNR 对 K562/VCR 的杀伤率,50 μg/mL 人参皂苷 Rh2 可使 K562/VCR 对 DNR 的敏感性提高到原来的 6.30 倍。 结论 人参皂苷 Rh2 能抑制 K562/VCR 细胞生长,诱导其凋亡,还可以逆转 K562/VCR 的耐药,是一种具有广阔开发前景的抗白血病药物。     

解毒化瘀药对白血病HL60/ADR耐药细胞凋亡影响的研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/ADR耐药细胞凋亡的影响.方法:应用流式细胞仪检测解毒化疼药含药血清处理后的各组HL60/ADR细胞凋亡的情况.结果:解毒化瘀药中药复方能促进白血病耐药细胞HL60/ADR早期凋亡率,并呈浓度相关性.结论:解毒化瘀药含药血清能够促进HL60/ADR细胞凋亡.     

补骨脂素对HL60/HT耐药细胞的逆转作用及对细胞内钙离子浓度的影响

目的研究补骨脂素对HL60/HT耐药细胞的逆转作用及对耐药细胞内Ca2 浓度的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用MTT法测定补骨脂素对细胞增殖的抑制作用,高效液相色谱法检测细胞内三尖杉酯碱(HT)的量,激光共聚焦显微镜测定细胞内不同时段和不同时间点的Ca2 浓度。结果补骨脂素在1~20μmol/L能不同程度降低HT对HL60/HT细胞的IC50,并不同程度提高细胞内HT的量;1~20μmol/L补骨脂素作用不同时段(24、48、96h),HL60/HT细胞内Ca2 浓度与作用时间成负相关,10和20μmol/L补骨脂素作用HL60/HT不同时间(5、10、15、20、25min),细胞内Ca2 浓度与作用成负相关性。结论补骨脂素能逆转HL60/HT细胞的多药耐药,其作用机制与影响耐药细胞内Ca2 浓度、增加细胞内HT的量有关。     

急性白血病患者VEGF与多药耐药关系的初步探讨

目的探讨急性白血病(AL)患者VEGF与MDR的关系.方法用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)检测36例化疗后AL患者血浆VEGF含量;同时以免疫组化法检测其骨髓单个核细胞Pgp的表达.结果 17例难治/复发AL患者血浆VEGF含量(76.01±40.18)pg/ml较对照者(33.13±11.97)pg/ml和完全缓解者(42.07±17.75)pg/ml明显升高(P＜0.01);而完全缓解者VEGF含量与正常对照者之间无显著性差异(P＞0.05);难治/复发AL患者骨髓单个核细胞Pgp表达阳性细胞率(20.47±9.96)%,明显高于完全缓解者(6.00±4.17)%, P＜0.01,且VEGF含量与Pgp表达具有一定的相关性(r=0.668,P＜0.01).结论 AL患者血浆VEGF的检测,可作为了解病情、观察疗效、判断预后的指标之一;AL患者血浆VEGF升高与Pgp高表达有一定的一致性,考虑VEGF可能参与急性白血病MDR的发生.     

解毒化瘀药调控白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin通路研究

目的探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin信号基因表达的影响,逆转耐药的机制。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化瘀药含药血清处理后HL60/adr细胞survivin的表达;Western blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达。结果解毒化瘀药含药血清能够降低HL60/adr耐药细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα信号,降低survivin基因的表达。结论解毒化瘀药能够降低HL60/adr细胞NF-κB信号通路,影响NF-κB-survivin途径,逆转耐药。     

Reversal effect of bufalin on multidrug resistance in K562/VCR vincristine-resistant leukemia cell line

ObjectiveTo probe insights into the reversal effect of bufalin on vincristine-acquired multidrug resistance (MDR) in human leukemia cell line K562/VCR.MethodsProliferative inhibition rate and the reversal index (RI) of bufalin were determined by Methyl thiazolyl tetrazolium assay. The uptake of Adriamycin (ADM) in K562/VCR cells, cell cycle and apoptosis rate were determined by flow cytometry (FCM). Cell morphologic changes were observed with Wright-Giemsa staining. The expression of P-glycoprotein (P-gp), multidrug-associated protein-1 (MRP1), Bcl-xL and Bax protein were measured by immunocytochemistry.ResultsThe human leukemia multidrug resistant K562/VCR cells showed no cross-resistance to bufalin. The RIs of bufalin at concentrations of 0.0002, 0.001 and 0.005 μmol/L were 4.85, 6.94 and 14.77, respectively. Preincubation of 0.001 μmol/L bufalin for 2 h could increase intracellular ADM fluorescence intensity to 28.07% (P<0.05) and down-regulate MRP1 expression simultaneously, but no remarkable effect was found on P-gp protein. Cell cycle analysis indicated increased apoptosis rate and apparent decreased G2/M phase proportion after treatment with bufalin. When exposed to 0.01 μmol/L bufalin, typical morphological changes of apoptosis could be observed. Down-regulation of Bcl-xL and up-regulation of Bax expression in K562/VCR cells could be detected by immunocytochemistry.ConclusionBufalin could partly reverse the MDR of K562/VCR cells, with a possible mechanism of down-regulating MRP1 expression and activating apoptosis pathway by altering Bcl-xL/Bax ratio.     

川芎嗪和异博定联合逆转HL60／HT细胞的多药耐药

目的：观察中药钙通道阻滞剂川芎嗪（ＴＭＰ）和异博定（ＶＰ）对白血病ＨＬ６０／ＨＴ耐药细胞系多药耐药（ＭＤＲ）的逆转。     

多柔比星诱导白血病细胞耐药产生的机制研究

目的:观察多柔比星诱导人白血病细胞系K562产生耐药的规律,初步探讨耐药产生的机制.方法:在设定的浓度梯度和作用时间下,用多柔比星处理K562细胞,采用RT-PCR法测定mdr-1基因及其他耐药相关基因的表达;运用流式细胞仪检测mdr-1基因编码的P糖蛋白(P-gp)的表达水平,用免疫荧光染色检测细胞凋亡相关蛋白Survivin的表达.结果:多柔比星在体外能诱导K562细胞产生耐药性,随着多柔比星作用浓度的增加和时间的延长,K562中mdr-1及P-gp的表达逐渐上调,MRP,Topo Ⅱ,YB-1和NF-kappaB基因的表达亦有改变,GST则无明显变化,凋亡相关基因Survivin及其编码的蛋白在耐药产生过程中表达亦上调.结论:多柔比星以剂量和时间依赖性方式诱导K562细胞产生耐药,多种耐药相关基因参与诱导耐药的形成,凋亡相关基因的表达改变亦是其耐药形成机制之一.     

多药耐药细胞系HL-60/Mx的建立

目的 探讨建立多药耐药（MDR）白血病细胞系的简便方法。方法 HL－60细胞反复暴露于浓度递增的米托蒽醌（Mx）培养液中，暴露间期维持低浓度培养；MTT法检测耐药性改变，并对其P糖蛋白（P－170）、多药耐药相关蛋白（MRP）表达进行免疫组化检测。结果 ①HL－60／Mx细胞系对多种化疗药物产生耐药。②MRP阳性表达率增高。结论 本方法为建立耐药HL－60细胞系的有效方法。     

HL-60/ADM细胞系耐药性检测

目的　检测 HL- 6 0 / ADM细胞化疗药物敏感性及 MRP表达。方法　以 HL- 6 0 / ADM细胞为实验对象 ,对化疗敏感的 HL - 6 0细胞为对照 ,MTT法检测药物敏感性 ,免疫细胞化学法检测 MRP蛋白的表达 ,PT- PCR法检测MRP m RNA表达。结果　两种细胞生长周期基本一致 ;HL - 6 0 / ADM细胞对 ADM、MTZ、VCR、H四种化疗药物 IC50 显著高于 HL- 6 0细胞 (P<0 .0 1) ,RF均在 2 0倍以上 ;HL- 6 0 / ADM表达 MRP m RNA,细胞膜表面 MRP阳性。结论　 HL-6 0 / ADM细胞系适合体外 MDR研究。     

苦参碱逆转人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

[目的] 探讨苦参碱对人白血病K562／ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用。[方法] MTT法测定苦参碱的细胞毒性及其对K562／ADM细胞药敏性的影响,荧光分光光度法检测细胞内药物浓度的改变,流式细胞术检测耐药细胞凋亡百分率的变化。[结果] 苦参碱的非细胞毒性剂量为50μg／mL,低细胞毒性剂量为125μg／mL。50μg／mL苦参碱可增加K562／ADM细胞内阿霉素(ADM)浓度和K562／ADM细胞凋亡百分率,使K562／ADM细胞的IC50由原来的35．2μg／mL降低至15．8μg／mL,其逆转倍数为2．2倍。[结论] 苦参碱可部分逆转人白血病K562／ADM细胞对阿霉素的耐药性,其逆转机制与增加细胞内药物积累有关。     

参麦注射液对白血病细胞多药抗药性逆转作用的实验研究

目的:以多药抗药细胞系k 5 6 2 /Adr为对象,研究参麦注射液无细胞毒性的剂量,能否逆转该细胞对阿霉素(Adr)及长春新碱(Vcr)的抗药性。方法:MTT法验证细胞的多药抗药性(MDR) ;MTT法计算药物对细胞的毒性作用;选用无毒性作用的三个剂量及两个药物与细胞作用的时间点,研究是否具有逆转作用及其与剂量和时间的关系。用流式细胞术检测细胞膜表面p -糖蛋白的表达变化。结果:k 5 6 2 /Adr细胞对阿霉素及长春新碱的抗药倍数分别为14 .37和70 7.88;对细胞的毒性历时4 8小时及72小时无明显变化(P >0 .0 5 ) ;选用4 8小时及72小时两个时间点,分别以0 .2mg/ml、0 .5mg/ml及1mg/ml三个无毒剂量试验,发现注入参麦注射液(SM)的k 5 6 2 /Adr细胞对阿霉素的抗药性具有部分的逆转效果,并且具有一定的剂量依赖性,未见明显的时间依赖性。而对Vcr的抗药性未见明显的逆转效果。其逆转机理与部分下调细胞膜表面p -糖蛋白的高表达有关。     

苦参碱对NK细胞杀伤HL60细胞的影响及其机制研究

目的:探讨苦参碱对NK细胞杀伤急性早幼粒细胞白血病细胞株HL60的影响及作用机制。方法:实时定量PCR(qRT-PCR)检测苦参碱处理前后HL60细胞表面NK细胞活化性受体凝集素样同型二聚体(NKG2D)配体分子MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3表达情况,CFSE染色流式法检测苦参碱作用前后HL60细胞对NK细胞杀伤敏感性的改变。结果:qRTPCR结果表明1.0mg/ml苦参碱处理HL60细胞24h后HL60细胞表面MICA和ULBP2表达水平较正常对照组分别增加2.34倍和2.86倍,而MICB、ULBP1和ULBP3与处理前相比差异无统计学意义(P>0.05);处理48h后HL60细胞表面MICA/B、ULBP1/2/3表达水平较处理前均有不同程度升高,尤以ULBP2和ULBP3升高最明显,较正常对照组分别增加了3.74倍和3.22倍。CFSE染色流式数据显示效靶比例5∶1和10∶1条件下,苦参碱均可加强NK细胞对HL60细胞的杀伤效率。结论:苦参碱可促进HL60细胞对NK细胞杀伤敏感性,其机制与诱导HL60细胞表面NKG2D配体表达上调密切相关。