日本血吸虫未成熟虫卵超微结构和免疫电镜的初步观察

目的 观察日本血吸虫未成熟虫卵发育过程中形态学变化，深入了解抗卵胚免疫作用的效应机制。方法 应用透射电镜及免疫电镜方法，研究日本血吸虫卵及其肉芽肿反应超微结构，并对成熟虫卵及未成熟虫卵进行透射电镜和免疫电镜比较观察。结果 进一步证实日本血吸虫宙表面布满网络状纤丝和微棘状突起。成熟虫行毛微管呈现典型的９＋２结构。肉芽肿瘤细胞形态超微结构显示嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、浆细胞、淋巴细胞和纤维母细胞功能活跃     

日本血吸虫纯净活虫卵的制备

日本血吸虫活虫卵的大量制备和纯化是有关日本血吸虫研究的重要一环,血吸虫虫卵抗原的制备及研究、建立动物的肺或肝脏组织血吸虫卵肉芽肿模型、血吸虫卵体外培养及血吸虫卵的发育过程或其影响因素的研究以及血吸虫卵RNA和DNA提职等都涉及血吸虫卵的分离和纯化。我们参照陈佩惠’“’、Cho。ozynski等“’和曹建平等’”’方法进行改进,建立了分离和纯化日本血吸虫卵的方法,现报道如下。1材料和方法11动物感染不同的动物种类以及不同的实验自的,感染日本血吸虫尾蛐的数量有所不同’“‘。制备虫卵通常用小鼠和家兔,小鼠均是不同品系日本…     

碳酸氢铵体外杀灭日本血吸虫虫卵的实验观察

目的观察碳酸氢铵体外杀灭日本血吸虫虫卵的药效。方法以碳酸氢铵作为实验组,以敌百虫作为阳性对照组,以清水作为空白对照组。在室温下用不同浓度的农用碳酸氢铵,作用于一定数量的含有日本血吸虫虫卵的小鼠粪便和肠道组织。观察不同时间、不同碳酸氢铵浓度下虫卵的孵化情况。结果在室温下农用碳酸氢铵在200mg/L浓度时浸泡含有日本血吸虫虫卵的小鼠粪便和肠道组织,12h、24h日本血吸虫虫卵的孵化率为0。200mg/L的碳酸氢铵体外持效观察7天内均能有效抑制和杀灭虫卵。结论碳酸氢铵体外在200mg/L时有明显抑制和杀灭日本血吸虫虫卵的作用。     

未致敏小鼠实验性日本血吸虫虫卵肉芽肿中淋巴细胞的动态观察

将日本血吸虫虫卵经尾静脉注入正常小鼠,观察沉积在肺血管床形成的虫卵肉芽肿内淋巴细胞的动态变化。结果表明,注卵后第一天即见淋巴细胞浸润,随后,淋巴细胞均数及其所占反应细胞总数的构成比逐渐增加。酯酶染色结果表明,注卵后10天内酯酶染色阳性细胞高于阴性细胞数,第10天后发生逆转;至第35天时更为明显。     

日本血吸虫虫卵在诱导型一氧化氮合酶敲除大鼠中的分布

目的 观察血吸虫虫卯在野生型(WT)大鼠和诱导型一氧化氮合酶敲除(iNOS-/-)大鼠肝肠组织及粪便中的分布情况,分析iNOS在感染大鼠中对日本血吸虫感染及虫卵产生的影响.方法 采用WT大鼠和iNOS-/-大鼠构建日本血吸虫感染实验动物模型.采用碱消化组织虫卵计数法及改良加藤厚涂片法检测日本血吸虫虫卯在大鼠肠组织和粪便...     

日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶在虫卵阶段的定位

目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译;同时用兔肝做免疫组化观察Sj26GST在虫卵内的分布。利用纯化的rSj26GST和日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接ELISA法检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从血吸虫虫卵中扩增670bp的基因片断,Western blotting证明在虫卵阶段Sj26GST的表达;同时免疫组化显示Sj26GST主要分布在虫卵内毛蚴两边的侧腺。rSj26GST检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清的阳性率分别为92%、80%和0;用SEA检测以上标本,阳性率分别为96%、84%和2%。结论Sj26GST是SEA的主要组分之一,能刺激机体产生高滴度的抗体;rSj26GST为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性,具有实用价值。     

日本血吸虫虫卵特异性蛋白的基因克隆及多态性分析

目的日本血吸虫虫卵中可能参与免疫调节的分子的克隆及其多态性分析。方法在NCBI数据库及国家人类基因组南方研究中心（Chinese National HumanGenome Center,CHGC）日本血吸虫基因数据库中筛选出两个类 IPSE（IL-4-inducing principle of S. mansoni eggs）基因（AY812212和AY223149）、一个类蛇毒过敏样蛋白基因（AY812797）和-个类亲环素蛋白基因（AY814078）。用RT—PCR检测表达谱。并从日本血吸虫虫卵cDNA文库中克隆这四个基因。定向克隆入质粒pET28-a,经双酶切鉴定筛选得重组的阳性克隆后测序。所得序列应用生物信息学分析软件VectorNTISuite7．0、Mega4．0和在线软件Rankpep进行初步分析。结果成功构建了4个重组质粒pET28a-223149,pET28a-812212,pET28a-812797和pET28a-814078,并测定和分析了这4个基因。结论日本血吸虫虫卵基因存在基因多态性,可能与免疫逃避有关。     

干扰素对日本血吸虫虫卵肉芽肿小鼠肺模型的免疫调节作用

研究目的探讨干扰素在虫卵肉芽肿病理过程中的作用及血吸虫病的发病机制。方法用纯系NH小鼠感染日本血吸虫虫卵建立小鼠肺部虫卵肉芽肿模型。观察干扰素α对肉芽肿及小鼠免疫反应的影响感染小鼠后分别于第4、8、16、24、32天解剖动物，检测其血清抗体滴度、胸腺T细胞百分比和肉芽肿最大横切面面积。结果干扰素组小鼠抗体滴度、胸腺T细胞百分比在不同时程呈动态变化趋势，其肉芽肿面积在第8天明显增大，以后逐渐缩小。结论干扰素对血吸虫虫卵肉芽肿病变过程具有免疫调节作用。     

日本血吸虫成虫在体外培养中产卵和虫卵发育成熟的影响因素研究

在无血清８４１培养基中分别添加胸腺嘧啶核苷、乌氨酸、强的松龙和胰蛋白胨，可促进日本血吸虫产卵。经１５天的观察证实在８４１培养基中添加上述成份组成的８９１培养基比８４１培养基产量高，畸卵率低和产卵高峰持时间长。成虫最初２４ｈ内产出的虫卵体外培养至第１５天，ＲＰＭＩ１６４０培养基，无血清８４１２基８４１培养基和８９１培养基上成熟期虫卵物百分比依次为１１．６±４．７，１８．７±５．６，２８．４±８３．和     

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS—PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AwA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。     

虫卵可溶性抗原对日本血吸虫卵肉芽肿形成的影响

用日本吸虫卵可溶性抗原(SEA)皮下注入正常小鼠。末次注射第23天从尾静脉注入新鲜日本血吸虫卵。注射虫卵后第18天观察小鼠肺内虫卵肉芽肿反应的增长比。结果用SEA 0.1微克,0.5微克及1.0微克/克体重的三个实验组肺组织内虫卵肉芽肿反应明显减弱。提示对正常小鼠用0.1～1微克/克体重的SEA为诱发免疫调节的适宜剂量。为用SEA诱发宿主对虫卵肉芽肿应答的免疫耐受性研究提供选择依据。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子Dipstick快速诊断模式的初步建立

目的 建立简便的血吸虫病Dipstick快速诊断法。方法 以纯化的日本血吸虫虫卵可溶性抗原（SEA）38kDa分子为诊断抗原,以胶体金标记的鼠抗人IgG为二抗,建立Dipstick快速诊断体系;检测日本血吸虫病血清,急性期37例,慢性期30例,正常人52例,肝吸虫病人血清30例。结果 所测得的阳性率分别为94.6%,86.7%,1.9%,0%。结论 以SEA38kDa纯化分子建立的血吸虫病Dipstick快速诊断法具有较好的敏感性和特异性,且简便快捷,有较好现场应用前景。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的模拟抗原在成虫,虫卵？…

应用免疫组化和免疫电镜技术观察了日本血吸虫单克隆ａｎｔｉ－ａｎｔｉ－ｉｄ ＮＰ３０的模拟抗原在成虫、虫卵的分布和定位。单克隆ａｎｔｉ－ｉｄＮＰ４１作为第一抗体。实验结果表明，ＮＰ３０的模拟抗原定位于成虫的体膜、消化管上皮、子宫内膜上皮及虫卵的卵膜。提示ＮＰ３０的模拟抗原具有其共同抗原的特性，ＮＰ３０具有作为抗病疫苗候选分子的潜能。     

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性.方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原.分别以SDS-PAGE和Western blot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较.结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原.SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr 37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带.AWA-f见15条蛋白带,其中Mr 26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带.AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带.SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带.结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠.该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白.     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的分析

采用免疫沉淀技术和ＥＩＴＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）。结果：能被ＳＩＥＡ免疫血清识别的ＳＩＥＡ带主要于３０．８ＫＵ到４９．６ＫＵ之间，其主要反应带为４９．６ＫＵ，３９．７ＫＵ和３３．７ＫＵ。推测４９．６ＫＵ和３３．７ＫＵ这两怕 诱导宿主产生抗卵或熟过程中可能起着重要作用。     

日本血吸虫卵基因表达文库的构建

日本血吸虫卵基因表达文库的构建陈淑贞吴海玮张兆松（南京医科大学寄生虫学教研室，南京２１００２９）关键词日本血吸虫；虫卵；基因表达；文库作者从人工感染日本血吸虫尾蚴４５天的家兔肝脏分离日本血吸虫卵，液氮中冻存。临用时研磨成粉再加变性液匀浆。按Ｐｒｏｍｅ...     

抗日本血吸虫单克隆抗体制备及其靶抗原性质的研究

为建立两株抗日本血吸虫单克隆抗体－ＣＡ－７、ＣＡ－８，（均为ＩｇＭ型）。用单抗ＤＯＴ－ＥＬＩＳＡ方法可检测出血吸虫感染兔血清中的靶抗原。ＣＡ－７的靶抗原存在于虫卵、尾蚴中；ＣＡ－８的靶抗原存在于虫卵、尾蚴和成虫中。用亲和导析的方法分离纯化了这两株单抗的靶抗原，实验结果表明ＣＡ－７和ＣＡ－８的靶抗原是中性糖含量分别为２３．３％和１４．７％，Ｍｒ为２２０×１０＾３和２００×１０＾３的糖蛋白，这两种抗原     

未成熟日本血吸虫卵的组分蛋白及其免疫学特性的研究

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对日本血吸虫４周、５周和６周－ＳＥＡ进行分析，分别出现２１、１４和２０条组分蛋白带，三者间既有共同组分又存在差异，显著出不同的分子基础。     

经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型的构建与评价

目的 构建经门静脉直接注射日本血吸虫虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型并评价其效果，为血吸虫肝病研究提供新的动物模型。方法 将15只8周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和注射虫卵组，其中对照组5只，注射虫卵组10只。第-14天将5 000个活虫卵注射至小鼠腹腔，第0天麻醉小鼠后剖开腹腔，经门静脉注入5 000个虫卵，对照组注射等体积的磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）。分别于第10天、第30天处死虫卵组小鼠各5只，第10天处死对照组小鼠，收集小鼠血清和肝组织，通过进行苏木素-伊红染色（HE染色）、马松染色（Masson染色），微孔板分光光度计法检测丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase, ALT）、天门氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase, AST）、肝脏羟脯氨酸（hydroxyproline, HYP）含量，以及实时荧光定量PCR(qPCR)法检测肝纤维化相关基因、Th1和Th2型免疫反应相关基因，分析肝损伤、虫卵肉芽肿和纤维化以及适应性免疫反应等指标，评价经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型的效果。结果 经门静脉注射虫卵10 d和30 ...