肠侵袭性大肠埃希菌血清型菌株侵袭力的鉴定方法

肠侵袭性大肠埃希菌 (EIEC)生物学特性酷似志贺菌 ,传统的主要鉴定依据是细菌生化反应特征和血清型 ,并用动物实验确证其毒力。但细菌血清型结果并不足以鉴定EIEC[1 ] ,而Sereny实验需饲养实验动物 ,应用不便。检测与菌株侵袭力有关的基因则是鉴定EIEC侵袭力的简便方法[2 ] 。本研究对杭州地区分离的属EIEC血清型的大肠埃希菌株 ,应用聚合酶链反应 (PCR)技术检测与侵袭力有关的ipaH基因 ,同时进行菌株生化特性分析和Sereny实验 ,并与志贺菌株的试验结果进行比较 ,以探讨分子技术检测侵袭力基因、Sereny实验检测侵袭力表型、菌株特…     

MRSA对6种消毒剂耐药性及相关抗性基因的比较研究

目的观察医院分离的2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和金黄色葡萄球菌标准株(ATCC 6538)对6种消毒剂的抗性与耐药基因变化。方法选择最小抑菌浓度(MIC)试验、悬液定量杀菌试验和耐消毒剂基因PCR检测。结果 MIC检测,医院分离的2株MRSA,对6种消毒剂的MIC,明显高于标准菌株。只有醋酸氯己定对MRSA-1的MIC值与标准菌株相同。PCR检测,2株MRSA均未携带耐消毒剂基因qacA/B。定量杀菌实验,苯扎氯铵、过氧乙酸、双癸基二甲基氯化铵对MRSA-1菌株的杀灭对数值低于标准菌株;苯扎氯铵、过氧乙酸、有效氯对MRSA-2菌株的杀灭对数值低于标准株。结论医院分离的2株MRSA对消毒剂的抗性普遍高于标准菌株,PCR检测未发现qacA/B基因。     

浙江省台州地区不同来源的大肠埃希菌耐药性分析及产超广谱-内酰胺酶、头孢菌素酶的基因分型

目的 了解浙江省台州地区的分散式供水、食品从业人员粪便及临床标本分离的大肠埃希菌耐药状态、产超广谱-内酰胺酶(ESBLs) 和头孢菌素酶(AmpC)情况及相关耐药基因的类型。 方法 从分散式供水标本、食品从业人员肛拭及临床标本中分离培养的各100株大肠埃希菌进行药敏试验,用ESBLs确证试验、AmpC酶检测试验检测实验菌株的表型,以 PCR扩增和序列分析检测相关的耐药基因。 结果 从食品从业人员肛拭分离到的菌株耐药性高于分散式供水中分离的菌株,而临床标本分离到的菌株耐药性更高;从100株集中式供水分离的菌株中检测出产ESBLs菌6株,基因型为TEM-1合并CTX-M-9。100株食品从业相关人员肛拭分离的菌株中检测出产ESBLs 17株,基因型为TEM-1合并CTX-M-9,CTX-M-9;检出产AmpC酶3株,基因型为MOX-1、DHA-1。100株临床标本中分离出产ESBLs 33株,基因型为TEM-1合并CTX-M-9、CTX-M-9、CTX-M-25;检出产AmpC酶9株,基因型为MOX-1、DHA-1、FOX-1。 结论 在分散式供水及正常食品从业相关人员粪便中检出产ESBLs、AmpC酶的大肠埃希菌与在临床分离的标本中的产ESBLs、AmpC酶的大肠埃希菌携带的基因型有一定的相似性。     

肺炎克雷伯菌脉冲场凝胶电泳分型能力评价

目的 评价脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)技术用于肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的分型能力。 方法 选用220株肺炎克雷伯菌,对PFGE方法的分型力、可重复性、分辨力、流行病学一致性及其与多位点序列分型(MLST)的分型一致性进行评价。挑选全部220株菌株进行实验,评价PFGE的分型力;挑选18株菌株重复2次实验评价PFGE的可重复性;分别挑选3组无流行病关联的碳青霉烯耐药临床株、腹泻患者肠道分离株、食品分离株,使用Simpson差异指数(D)评价PFGE的分辨力;挑选同一次暴发期间分离的34株菌株,评价PFGE的流行病学一致性及其与MLST对暴发菌株分型结果的一致性;挑选64株不同来源的菌株,评价PFGE和MLST分型对流行病学不相关菌株的分型一致性。用BioNumerics软件对所有实验菌株的PFGE图谱进行分析。 结果 220株肺炎克雷伯菌中有216株通过PFGE能够获得有效的图谱,其分型力为98.18%(216/220);18株菌株重复2次实验的图谱完全一致;PFGE对无流行病关联的50株碳青霉烯耐药临床株、34株腹泻患者肠道分离株、48株食品分离株分型的D值分别为0.9910、0.9964、1.0000;针对34株暴发期间分离菌株,PFGE能够很好地甄别出暴发菌株,高度相关菌株和不相关菌株,并且分型结果与菌株分离病区、分离时间具有一致性;针对暴发菌株,PFGE能够将相同MLST型别的菌株聚成一簇;针对流行病学不相关菌株,PFGE不能将相同MLST型别的菌株分成相同或相似的带型或者聚成一簇。 结论 PFGE对肺炎克雷伯菌分型具有很好的分型力、可重复性和分辨力;针对暴发菌株,PFGE能够将相同MLST型别的菌株聚成一簇;针对流行病学不相关菌株,PFGE和MLST分型一致性差。     

医院产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的 研究医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌(KPN)的耐药现状,为临床用药提供依据.方法 将医院分离KPN的药敏试验结果应用WHONET 5.5软件进行统计学分析.产ESBLs菌株采用双纸片协同实验测定并经CLSI确证试验确认.结果 13年中KPN和产ESBLs KPN的分离率为18.7%和75.3%,产ESBLs菌株的耐药率远高于非产ESBLs菌株.除亚胺培南、阿米卡星和左氧氟沙星对产ESBLs KPN敏感率高外,其他抗菌药物耐药严重.结论医院应加强对产ESBLs菌株的监控,防止多药耐药菌的传播.碳青霉烯类是治疗产ESBLs KPN最有效的药物.     

鲍曼不动杆菌耐药性与分子分型相关性研究

目的初步研究11株鲍曼不动杆菌临床分离株药敏试验结果与脉冲场电泳分子分型结果之间的相关性。方法利用常规方法对从临床标本中分离的鲍曼不动杆菌进行培养鉴定后进行药敏实验,利用脉冲场电泳方法进行分子分型,并比较二者结果。结果 4株对所有抗菌药物均敏感的菌株带型数为10～13条,而1株对所有抗菌药物全耐药为19条带型,其余6株带型在二者之间。结论分子分型结果初步可以显示耐药情况,相同的分子分型菌株药敏试验结果一致性较高。     

副溶血弧菌在乳鼠肠道内竞争性定殖实验方法的建立及应用

目的 建立评价副溶血弧菌在乳鼠肠道内定殖能力的实验方法,为研究副溶血弧菌的致病机制奠定基础。方法 构建带有霍乱弧菌lacZ基因的副溶血弧菌临床分离株RIMD2210633(WT)的LacZ菌株(WT-lacZ);比较WT菌株与WT-lacZ菌株以及WT-lacZ菌株与环境分离株VP1907在CD-1乳鼠(5日龄)肠道定殖能力的差别。结果 成功构建X-Gal LB平板上显蓝色的副溶血弧菌LacZ菌株。WT-lacZ菌株和WT菌株在乳鼠肠道内定殖能力无差别,这表明可以用WT-lacZ菌株代替WT菌株进行后续的实验;VP1907与WT-lacZ菌株在乳鼠肠道内定殖的竞争系数在0.1左右,表明WT菌株的定殖能力明显高于VP1907菌株。结论 建立了评价副溶血弧菌肠道定殖能力的乳鼠模型,并应用该模型进行了临床分离株与环境分离株肠道定殖能力的比较分析。     

奇异变形杆菌的同一性试验

奇异变形杆菌常引起食物中毒、婴儿腹泻及医源性感染等,由该菌引起的感染是否具有流行病学的意义,应有一种简单快速的方法来确认。我们从变形杆菌众多的同一性试验方法中,选取了Dienes试验、交叉定量凝集试验2种方法,对20株临床分离菌株进行了系统的实验研究,以用于该菌感染的流行病学调查。     

采用NCCLS M27-A方案微量法检测念珠菌对抗真菌药物的敏感性

为了解我国临床分离菌株对常用抗真菌药物的敏感性、观察氟康唑耐药株对伊曲康唑和酮康唑是否存在交叉耐药[1] ,本试验采用美国临床实验室标准化委员会 (ＮＣＣＬＳ)1997年公布的Ｍ2 7 Ａ方案的微量稀释法测定了 6种常用抗真菌药物对 80株念珠菌的ＭＩＣ值。一、材料与方法1.试验菌株 :本试验所采用的菌株及其来源如下 :受试菌株为 80株念珠菌 ,包括 :白念珠菌 (Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ) 4 7株(临床分离株 40株、ＡＴＣＣ模式株 2株和 5株氟康唑耐药株 )、近平滑念珠菌 (Ｃ .ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ) 9株 (临床分离株 7株、ＡＴＣ…     

铜绿假单胞菌高突变株检测及耐药分析

目的了解铜绿假单胞菌高突变菌株的分离情况及其耐药性。方法对分离的细菌用API 20NE系统鉴定,药敏试验用K-B法,结果按NCCLS/CLSI规定判断,采用高浓度利福平耐药生长试验检测高突变菌株。结果在100株铜绿假单胞菌中,高突变菌株的分离率为37.0%。高突变菌株对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、阿米卡星和环丙沙星的耐药率以及多重耐药率均显著高于非高突变菌株。结论高突变铜绿假单胞菌主要来源于慢性呼吸道感染,且对多种抗生素高度耐药和多重耐药,应加强监控,防止其在院内流行。     

一株液化沙雷氏菌与志贺氏菌属有交叉血清凝集

1989年5月,我们从一例腹泻患儿的粪便中,分离出一株初步生化和血清学试验均符合福氏志贺氏菌(1C)的菌株,但经系统生化、动物试验和噬菌体裂解试验却证实是一株液化沙雷氏菌。菌株分离鉴定按常规方法进行。粪便直接种子SS和麦康凯平板,两者均长出无色、半透明、圆形、光滑湿润的菌落。接种于克氏双糖管表现为:上     

子宫内膜炎淋球菌基因突变与多重耐药性的关系

目的探究子宫内膜炎淋球菌基因突变与多重耐药性的关系。方法选择本院2014年1月至2014年12月收治的子宫内膜炎患者中分离出50株淋球菌菌株进行药敏试验以及mtr基因测序,记录并统计实验结果。结果不耐药菌株6株,单纯耐药菌株8株,多重耐药的菌株数量为36株。不耐药与单纯耐药的菌株数明显少于多重耐药的菌株数量。与标准菌株相比,不耐药与单纯耐药的菌株未见mtr基因改变,36株多重耐药菌株均可见mtr基因突变。结论淋球菌多重耐药性的发生率较高,淋球菌mtr基因突变在其产生多重耐药性的过程中具有重要作用。     

下呼吸道分泌物中糠秕马拉色菌的分离与鉴定

目的 对痰涂片镜检可疑为马拉色菌的标本进行马拉色菌的分离培养,并对分离菌株进行系统鉴定.方法 收集2010年3月至201 1年9月卫生部北京医院经派克墨水染色镜检可疑为马拉色菌的下呼吸道分泌物标本133份,接种于含1％吐温60的科玛嘉琼脂培养基(即改良念珠菌显色培养基),于35℃大气环境中培养.挑取疑似菌落在含0.5％吐温40和0.5％吐温60的沙保弱平板上进行纯培养.采用传统的表型鉴定方法对分离菌株进行鉴定,包括染色镜检观察菌体形态及染色性、沙保弱培养基生长试验、吐温试验、七叶苷分解试验、过氧化氢试验、吐温沉淀试验和蓖麻油试验,可疑菌株采用18s rRNA基因序列分析方法对分离菌株进行菌种鉴定.结果 镜检可疑的下呼吸道分泌物中马拉色菌分离率为47.4％ (63/133),63株分离菌经传统的表型鉴定方法结合l8srRNA基因序列分析方法均鉴定为糠秕马拉色菌.标本直接涂片,用派克墨水染色镜下可明显区分马拉色菌和念珠菌.结论 糠秕马拉色菌在改良念珠菌显色培养基上的菌落呈粉红色,可明显区别于其他念珠菌菌落,用改良念珠菌显色培养基可提高下呼吸道分泌物中糠秕马拉色菌的分离率.传统的表型鉴定结合基因序列分析可提高马拉色菌鉴定的准确性.     

262株肺炎克雷伯菌感染的临床分析

目的探讨肺炎克雷伯菌的分布特点和耐药情况,并指导临床合理选用抗菌剂。方法对262例肺炎克雷伯菌感染患者的临床资料及药敏试验结果进行分析。结果肺炎克雷伯菌主要分布在呼吸科25.19%、中心监护室(ICU)19.08%,老年科11.45%、神经内科10.69%。临床送检标本中从痰液分离菌株83.21%,从分泌物中分离菌株5.34%,从尿中分离菌株3.82%,从其他中分离菌株7.65%;产超广谱真菌株占23.28%,分离的262株肺炎克雷伯菌对12种抗生素均有不同程度耐药。结论肺炎克雷伯菌感染主要在呼吸道,治疗要根据药敏结果合理使用抗生素。     

从腹泻病人粪便中分离出一株与痢疾诊断血清发生凝集反应的阴沟杆菌

1991年5月,我们从一长期腹泻病人的粪便中分离到一株生化试验符合阴沟杆菌,但血清学试验可与痢疾诊断血清发生凝集.菌株分离按常规方法进行.粪便直接接种SS 琼     

四种消毒剂对鲍曼不动杆菌杀灭效果的实验研究

目的观察四种常用消毒剂对临床分离的鲍曼不动杆菌的杀灭效果。方法采用悬液定量杀菌试验法,对碘伏等四种消毒剂杀灭目标细菌的效果进行了实验观察。结果用含有效碘125 mg/L的聚维酮碘消毒液、含体积分数50%的乙醇溶液、含2 000 mg/L醋酸氯己定的消毒液、50 mg/L季铵盐的消毒液对临床分离的鲍曼不动杆菌作用1.0 min,杀灭对数值均≥5.00。除乙醇之外,杀灭鲍曼不动杆菌标准株所需消毒剂浓度均低于临床分离菌株。结论除乙醇之外,另外三种常用消毒剂杀灭临床分离的鲍曼不动杆菌所需浓度比标准株更高,提示临床分离菌株可能产生了耐受性。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对3种消毒剂抗性的研究

摘要 目的 调查和分析临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）菌株耐药情况和对3种消毒剂的抗性情况。方法 收集临床分离MRSA菌株16株进行药敏试验,测定其对乙醇、苯扎溴铵、戊二醛的MICs和MBCs,与金黄色葡萄球菌标准菌株（ATCC 6538）相比较,判断对消毒剂的抗性水平。结果 16株试验菌对18种抗菌药物产生耐药现象,呈现出13种耐药谱。分别有25%、31%和6%的MRSA菌株对乙醇、苯扎溴铵、戊二醛的MICs和MBCs高于标准株。结论 临床分离的MRSA菌株对多种抗菌药物有较高耐药性,同时对苯扎溴铵和乙醇呈现抗性趋势;各种来源菌株的耐药性与消毒剂抗力大小无明显相关性。     

H7N9患者感染碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌的同源性分析

目的 探讨H7N9患者感染碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌菌株的同源性及传播机制.方法 收集自H7N9感染患者、同期ICU病房其他患者及环境中分离的多重耐药鲍曼不动杆菌;采用K-B纸片法测定菌株对常规药物的敏感性;脂稀释法测定其对多粘菌素B的MIC;EDTA协同试验测定金属酶表型;采用PCR法测定耐药基因;PFGE法分析菌株的流行病学特征.结果 临床分离株与环境分离株具有相似的药敏谱,均对阿米卡星和多粘菌素B敏感,对其他抗菌药物耐药,包括碳青霉烯类药物;金属酶表型试验为阴性;所有菌株均扩增出OXA-23和OXA-51基因;PFGE电泳分析显示H7N9患者分离株与其他患者分离株及环境分离株为同一克隆.结论 H7N9患者所感染的多重耐药鲍曼不动杆菌为院内感染菌株,对碳青霉烯类药物耐药主要由OXA-23基因介导.     

阴沟肠杆菌临床分离株armA基因分布与分子分型研究

目的调查某医院阴沟肠杆菌临床分离株的耐药性和arm A基因分布情况,探索arm A阳性菌株与耐药性的关系及其分子分型特征。方法采用微量肉汤稀释法对51株临床分离的阴沟肠杆菌进行药敏试验;荧光定量PCR方法检测16S rRNA甲基化基因arm A;脉冲场凝胶电泳试验(PFGE)分析arm A阳性菌株间的亲缘关系。结果阴沟肠杆菌临床分离株对阿米卡星和庆大霉素的耐药率分别为39.2%和54.9%,arm A基因阳性率为23.5%,arm A阳性菌株对阿米卡星和庆大霉素均耐药;12株携带arm A基因菌株主要分为5型,无明显优势菌株。结论产16S rRNA甲基化酶arm A的阴沟肠杆菌菌株对氨基糖苷类药物耐药,应加强对该基因监测,合理指导临床抗生素应用。     

创伤弧菌联合药敏试验比较分析

由于创伤弧菌 (Vibriovulnificus,VV)所致感染发病迅速、进展快 ,因而及时诊断、合理用药显得非常重要。本实验采用 2种药物联合药敏试验 ,用于选择具最佳杀菌效果的抗生素 ,提供临床医生联合用药参考。1　材料与方法1.1　菌株来源　 2 0 0 0年 10月分离自附属第二医院急诊科 1