IFN—γ联合rhTNF—α抑制白血病细胞c—myc原癌基因的表达

将干扰素和肿瘤坏死因子与人白血病细胞株及急性髓细胞白血病病人原代白血病细胞体外液相共育，用细胞总ＲＮＡ样品与＾３２Ｐ标记的ｃ－ｍｙｃＤＮＡ探针打点杂交，我们观察了ＩＦＮ－γ联合ＴＮＦ－α作用ＨＬ－６０细胞，ＴＮＦ作用病人原代白血病细胞对基ｃ－ｍｙｃ癌基因表达的影响。结果发现：１００Ｕ／ｍｌ和５００Ｕ／ｍｌ的ＩＦＮ－γ可明显促进５０Ｕ／ｍｌＴＮＦ－α对ＨＬ－６０细胞ｃ－ｍｙｃ表达的抑制作用；８例ｃ－     

细胞因子对正常甲状腺细胞cAMP生成的调节

目的　本文研究白介素１（ Ｉ Ｌ１） 、干扰素α（ Ｉ Ｆ Ｎα） 和肿瘤坏死因子（ Ｔ Ｎ Ｆ） 对人正常甲状腺细胞环磷酸腺苷（ｃ Ａ Ｍ Ｐ） 生成的影响。方法　运用人甲状腺细胞原代培养技术和放免分析技术，检测不同种类细胞因子刺激甲状腺细胞引起的ｃ Ａ Ｍ Ｐ 释放状况。结果　（１） Ｉ Ｌ１ 、 Ｉ Ｆ Ｎα和 Ｔ Ｎ Ｆ 均可促进甲状腺细胞基础ｃ Ａ Ｍ Ｐ 的释放。（２） Ｉ Ｌ１ 在１０ － ３ ～１０３ Ｕ／ｍｌ 的浓度范围内，可明显增强促甲状腺激素（ Ｔ Ｓ Ｈ） 对甲状腺细胞生成ｃ Ａ Ｍ Ｐ 的刺激效应，其中以１０ － １ Ｕ／ｍｌ 的 Ｉ Ｌ１ 作用最强。（３） Ｉ Ｆ Ｎα对 Ｔ Ｓ Ｈ 刺激甲状腺细胞ｃ Ａ Ｍ Ｐ 的生成具有双向调节作用，１０ － ２ ～１ Ｕ／ ｍｌ 可增加ｃ Ａ Ｍ Ｐ 释放，而１０３ Ｕ／ｍｌ 时则抑制 Ｔ Ｓ Ｈ 的刺激效应。（４）１０ ～１０４ Ｕ／ｍｌ 的 Ｔ Ｎ Ｆ 使 Ｔ Ｓ Ｈ 刺激甲状腺细胞生成ｃ Ａ Ｍ Ｐ 的量显著减少。结论　多种细胞因子参与甲状腺功能的调节，并可能与自身免疫性甲状腺疾病的发生发展过程有一定关联。     

大黄素对SV－40转基因小鼠系膜细胞生长和c－mycmRNA表达的影响

利用从ＳＶ－４０病毒转基因小鼠肾脏分离得到的系膜细胞株（ＳＶ－４０ＭＣ），观察了大黄素对ＳＶ－４０和ＭＣ生长、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）及原癌基因ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达的影响，大黄素可明显抑制ＳＶ－４０ＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ掺入且与剂量呈正相关。经大黄素（５μｇ／ｍｌ）作用的ＳＶ－４０ＭＣ，ＰＣＮＡ阴性细胞数明显高于对照（２８％ｖｓ。５．５％、ｐ＜０．００１）大黄素同样抑制ＳＶ－４０ＭＣ，ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达，且不受蛋白合成抑制剂放线菌酮的影响。结果表明：大黄素对异常增殖状态的系膜细胞生长也有明确抑制作用，细胞分裂周期受抑制、此过程与细胞周期基因ｃ－ｍｙｃ表达受抑有关。     

甲状腺细胞中白细胞介素—6,γ—干扰素和肿瘤坏死因子—α？…

目的 研究白细胞介素－６（ＩＬ－６）、γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）和肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）基因在甲状腺上皮细胞（ＴＥＣ）中的转录。方法 采用原代甲状腺细胞培养技术和逆转录－聚合酶锭反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定性分析方法。结果 正常,Ｇｒａｖｅｓ病（ＧＤ）和多结节笥甲状腺肿（ＭＮＧ）的ＴＥＣ 表达ＩＬ－６ｍＲＮＡ,但在ＴＮＦαｍＲＮＡ仅在ＴＥＣ中表达,而正常和病理甲状腺细胞均未转录ＩＦＮ－γｍＲＮＡ。     

病毒性肝炎和肝硬化患者IL－6、TNF－α的变化

为研究白细胞介素－６（ＩＬ－６）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）在肝炎和肝硬化（ＬＣ）患者中的作用。检测了１５例正常人，１８例急性病毒性肝炎（ＡＨ），３７例慢性肝炎（ＣＨ），２０例ＬＣ患者血清及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的ＩＬ－６、ＴＮＦ－α水平。结果以ＣＨ患者ＩＬ－６、ＴＮＦ－α水平最高（血清及ＰＢＭＣ的ＩＬ－６水平分别为７２．１±３２．９４Ｕ／ｍｌ，１４０．７±３３．５Ｕ／ｍｌ；血清及ＰＢＭＣ的ＴＮＦ－α水平为３．９７±１．３８ｎｇ／ｍｌ，６．３５±１．４１ｎｇ／ｍｌ）。恢复期或稳定期ＴＮＦ－α和ＩＬ－６水平明显低于急性期或活动期（Ｐ＜０．０１）。ＣＨ患者肝组织学活动指数（ＨＡＩ）分数与ＰＢＭＣＩＬ－６和ＴＮＦ－α水平呈正相关（γ分别为０．８９，０．６８；Ｐ＜０．０５）。提示ＩＬ－６和ＴＮＦ－α是肝脏损害重要的炎症介质，介导肝细胞损害。     

自体骨髓移植后血清TNF—α,IFN—α活性研究

应用ＴＮＦ－α和ＩＦＮ－α依赖细胞ＭＴＴ比色分析法，研究了５例自体骨髓移植（ＡＢＭＴ）病人血清中ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－α活性，。处于完全缓解期的急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ）血清中ＴＮＦ－α生显著的高于正常成人（ＰＢｓ）组（Ｐ〈０．０５）；ＩＦＮ－α活性明显低于ＰＢｓ组（Ｐ〈０．０１）。ＡＢＭＴ前血清中的ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－α活性显著高于ＡＢＭＴ后９－１０天（Ｐ〈０．０５）和２１天（Ｐ〈０．０５）；与     

脂质体介导c-myc反义核酸对HL-60细胞作用的研究

目的 探讨脂质体介导ｃ－ｍｙｃ反义核酸的抗肿瘤作用。方用 用人工合成互补于ｃ－ｍｙｃ基因５’端转录起始部位的反义－寡核苷酸（ＡＳ－ＯＤＮ）,直接转染ＨＬ－６０细胞,或以脂质体ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ为载体进行基因转染实验,研究ＩＬ－６０细胞的基因后的形态和功能变化。结果 脂质体介导的ｃ－ｍｙｃ反义核酸可抑制约５０％ＨＬ－６０细胞的增殖;促进细胞分化成熟,四唑氮蓝（ＮＢＴ）还原率从空白组２９％上升至５６     

人类HLA—B7可诱导启动子调控IRES连接的人TNFα和IFN？…

目的：为增强肿瘤细胞表面ＭＨＣＩ类分子表达，并调动免疫系统更有效地抑制和杀伤肿瘤细胞，构建在ＨＬＡ－Ｂ７启动子调控下，ＩＲＥＳ连接的人ＴＮＦα和ＩＦＮβ基因的重组逆转录病毒载体，方法与结果：将ＴＮＦαｃＤＮＡ克隆入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｓｋ（＋）中，改换酶切位点后定向克隆入含ＨＬＡ－Ｂ７启动子的质粒中，构建成ｐＧＬ３Ｂ７ＴＮＦ。ＩＦＮβｃＤＮＡ经定向插入ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）改换酶切点切下，定向克     

人基因重组IFN-γ对滑膜细胞分泌TNF-α作用机制的研究

目的：研究ＩＦＮ－γ对滑膜细胞分泌ＴＮＦ－α的影响。方法：滑膜用胶原酶消化分离后获得的原代单个滑膜细胞（ＤＳＳＣ），加入不同剂量的ＩＦＮ－γ观察脂多糖（ＬＰＳ）存在或不存在下，不同时间（２４小时，４８小时，７２小时）滑膜细胞分泌ＴＮＦ－α的情况，并观察了ＩＦＮ－γ对培养的滑膜纤维母细胞样细胞（ＳＦＣ）在４８小时中分泌ＴＮＦ－α的影响，用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法来检测培养细胞上清液中ＴＮＦ－α的含量，     

反义c-mycRNA的表达对大鼠血管平滑肌细胞c-mycmRNA和c-Myc蛋白水平的影响

为探讨反义ｃ－ｍｙｃ逆转录病毒载体是否影响血管平滑肌细胞表达ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ和ｃ－Ｍｙｃ蛋白水平，用基因重组方法，将第二外显子及其两侧部分内含子共１．５３ｋｂ序列的ｃ－ｍｙｃ基因片段反向连接于ＰＬＸＳＮ的５’长末端重复序列下游，通过Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将反义ｃ－ｍｙｃ逆转录病毒导入ＰＡ３１７包装细胞系，并经Ｇ４１８筛选获得抗性克隆。反义ｃ－ｍｙｔ逆转录病毒上清液转染的平滑肌细胞经ＤＮＡ印迹杂交和ＥＮＡ印迹杂交及蛋白印迹杂交证实其是否整合于平滑肌细胞基因组中，有无反义ｃ－ｍｙｃＲＮＡ表达及表达的反义ｃ－ｍｙｃＲＮＡ对平滑肌细胞ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ和ｃ－Ｍｙｃ蛋白表达的影响。结果发现，反义ｃ－ｍｙｃ逆转录病毒载体能整合于平滑肌细胞基因组中，ＲＮＡ印迹杂交和蛋白印迹杂交发现反义ｃ－ｍｙｃＲＮＡ显著抑制了平滑肌细胞ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ和ｃ－Ｍｙｃ蛋白的表达，而正义ｃ－ｍｙｃＲＮＡ对其无影响。此实验结果说明反义ｃ－ｍｙｃＲＮＡ是以序列特异性方式抑制ｃ－ｍｙｃ基因表达的有效工具，这为ｃ－ｍｙｃ基因过度表达的疾病的基因治疗提供了一种新的途径。     

原位杂交检测肝癌组织c－myc和HBx基因的表达

应用光敏生物素标记基因探针原位杂交技术（ＤＮＡ－ｍＲＮＡ）检测２３例新鲜肝癌和癌旁组织中的ｃ－ｍｙｃ和ＨＢｘ基因表达状况。结果发现，１１例肝癌和癌旁组织的ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ和ＨＢｘｍＲＮＡ均为阳性，６例均为阴性，５例仅ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ阳性，１例仅ＨＢｘｍＲＮＡ阳性。ｘ~２检验显示肝癌组织ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ和ＨＢｘｍＲＮＡ无明显相关关系（Ｐ＞０．０５），提示ＨＢｘｍＲＮＡ不能直接激话ｃ－ｍｙｃ癌基因。     

非淋巴细胞白血病原代细胞诱导成树突状细胞的研究

目的：用白血病细胞诱导树突状细胞,为白血病的免疫治疗提供新途径。方法：分离人的非淋巴细胞白血病原代细胞,体外流体培养体系中加入ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α及ＩＬ－４,培养１２ｄ后,与培养前的细胞在形态、ＣＤ１ａ、ＨＬＡ－ＤＲ及ＣＤ８０的表达情况进行比较。结果：经１２ｄ诱导,细胞形态表现典型的树突状细胞的特征;ＣＤ１ａ、ＨＬＡ－ＤＲ及ＣＤ８０的表达明显增高。结论：可将非淋巴细胞白血病原代细胞诱导成树突状     

慢性乙型肝炎和肝癌患者ICAM-1表达及细胞因子对其调节作用的观察

目的 研究细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在乙型肝炎（乙肝）病毒清除及肝癌免疫机制中的意义及细胞因子对ＩＣＡＭ－１的调节作用。方法 利用免疫组化技术对ＨＢＶ相关肝病肝组织ＩＣＡＭ－１表达进行检测,同时检测乙肝组织内ＨＢｃＡｇ表达状况。利用细胞酶联免疫技术观察ＩＦＮ－ｒ、ＩＦＮ－α、ＴＮＦ对人肝癌细胞Ｈ７４０２ＩＣＡＭ－２表达的调节作用。结果 在慢性乙肝中,ＩＣＡＭ－１表达愈强,肝内ＨＢｃＡｇ表达     

慢性肾衰患者血清及尿液γ-干扰素的检测及其意义

采用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法检测７１例慢性肾衰（ＣＲＦ）患者及４０例健康成人血及尿的γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）水平。结果显示：ＣＲＦ患者血清及尿液ＩＦＮ－γ含量分别为（６２６２±２．６８）ｎｇ／Ｌ和（４３．０１±２．５７）ｎｇ／Ｌ，显著低于正常对照组，［（１０５±７．１０）ｎｇ／Ｌ和（７５±６．１４）ｎｇ／Ｌ］（Ｐ＜０００１），但与尿素氮（ＢＵＮ）及血清肌酐（Ｓｃｒ）无显著相关性（血清及尿ＩＦＮ－γ与ＢＵＮ、Ｓｃｒ相关系数分别是ｒ＝０．２４２５、０３０５６、０１５３３和０１７５０，Ｐ＞００５）。结论：ＩＦＮ－γ作为一种细胞因子参与肾脏病发生、发展过程中的网络调节，血清及尿液中ＩＦＮ－γ水平受到机体Ｔ淋巴细胞及ＮＫ细胞数量及功能影响。     

细胞因子对树突状细胞抗肝癌作用的影响

目的研究人血树突状细胞（ＤＣ）和细胞因子ＴＮＦ,ＧＭＣＳＦ或ＩＦＮγ联合ＤＣ对淋巴因子和ＰＨＡ激活的杀伤细胞（ＬＰＡＫ细胞）体外杀伤人肝癌细胞株ＢＥＬ７４０２的影响．方法实验分为Ｌ组（ＬＰＡＫ）,Ｄ组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ）,Ｔ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＴＮＦ５０００ｋＵ／Ｌ）,Ｔ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＴＮＦ５００ｋＵ／Ｌ）,Ｇ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＧＭ－ＣＳＦ５００ｋＵ／Ｌ）,Ｇ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＧＭ－ＣＳＦ１００ｋＵ／Ｌ）,Ｉ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＩＦＮγ５００ｋＵ／Ｌ）和Ｉ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＩＦＮγ１００ｋＵ／Ｌ）．每组效靶细胞比分别采用５∶１和１０∶１两种．培养４８ｈ后用中性红比色法检测细胞毒活性．结果Ｌ,Ｄ,Ｔ２和Ｔ１组的细胞毒活性依次增强,各组间差异有显著性（Ｐ＜００１）．Ｇ１和Ｇ２组均高于Ｄ组（Ｐ＜００１）,但Ｇ１,Ｇ２组间差异无显著性．Ｉ１,Ｉ２组与Ｄ组相比,也无显著性差异．随效靶比增加,各组细胞毒活性均相应增强．结论ＤＣ能增强ＬＰＡＫ细胞对肝癌细胞ＢＥＬ７４０２的细胞毒活性;ＴＮＦ或ＧＭＣＳＦ与ＤＣ联用,两者有协同作用;但与ＩＦＮγ联用,则无进一步增强作用     

单纯疱疹病毒Ⅱ型感染极早期对离体人动脉平滑肌细胞原癌基因c-sis及c-myc表达的影响

目的：观察单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－２）感染极早期对离体人动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）原癌基因ｃ－ｓｉｓ及ｃ－ｍｙｃ表达的影响。方法：采用不同感染剂量的ＨＳＶ－２吸附单层ｈＡＳＭＣ１小时作为病毒感染细胞模型,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法观察上述原癌基因表达。结果：病毒吸附细胞后０分钟、３０分钟、６０分钟,病毒感染组［５感染复数（ＭＯＩ）和１０ＭＯＩ;ＭＯＩ＝空斑形成单位／细胞数（ＰＦＵ／细胞数）］均比对照组的原癌基因ｃ－ｓｉｓ、ｃ－ｍｙｃ表达增加,且基因表达与感染时间也有关。结论：ＨＳＶ－２感染可以诱导ｈＡＳＭＣ原癌基因ｃ－ｓｉｓ、ｃ－ｍｙｃ表达增加,该作用可能是病毒促进ｈＡＳＭＣ异常增殖进而参与动脉粥样硬化或血管成形术后再狭窄形成的分子机制之一。     

TNF-α对IFN-γ抗弓形虫效应中的作用的影响

应用３Ｈ－尿嘧啶（３Ｈ－Ｕ）特异性标记弓形虫在小鼠腹腔巨噬细胞（ＭｏｕｓｅＰｅｒｉｔｏｎｅａｌＭａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＭＰＭ）内的增殖实验，观察了ＴＮＦ－α及ＴＮＦ－α在ＩＦＮ－γ诱导的ＭＰＭ抗弓形虫效应中的作用。结果表明：单独用高浓度ＴＮＦ－α只能诱导ＭＰＭ轻微的抗弓形虫效应（１９％左右），而与亚刺激量的ＩＦＮ－γ相结合几乎可以完全抑制弓形虫的增殖；抗ＴＮＦ－α可消除ＩＦＮ－γ诱导的ＭＰＭ的抗弓形虫的效应，其作用只发生在ＩＦＮ－γ诱导ＭＰＭ的最初阶段     

慢性肾功能不全患者血清可溶性Fas及相关因子的变化

目的 研究慢性肾功能不全患者血清可溶性Ｆａｓ／ＡＰＯ－（ｓＦａｓ）及相关因子的变化。方法 采用ＥＬＩＳＡ法检测２０名正常人和６０例慢性肾功能不全患者血清ｓＦａｓ及ＩＬ－６、ＴＮＦ－α水平。结果 肾功能代偿期ｓＦａｓ、ＩＬ－６和ＴＮＦ－α无明显改变;肾功能代偿期ｓＦａｓ开始增高,其升高与血甭ＢＵＮ和Ｃｒ明显相关。ＩＬ－６及ＴＮＦα在肾功能失代偿期明显变化,进入肾功能衰竭期后显著升高。其中ＩＬ－６ 关     

IL-1与IL-2联合激活的骨髓对白血病细胞的净化作用

目的：体外观察白细胞介素－１（ＩＬ－１）对白细胞介素－２（ＩＬ－２）激活骨髓自然杀伤细胞（ＮＫ）和淋巴因子－激活杀伤细胞（ＬＡＫ）活性的影响及两者联合激活的骨髓对白血病细胞的净化作用。方法：标准４ｈ＾５１Ｃｒ释放实验测定激活骨髓的细胞毒作用;集落培养法观察激活骨髓对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的净化作用。结果：１０～２００μｇ／ＬＩＬ－１对正常骨髓的ＮＫ和ＬＡＫ活性无明显影响;ＩＬ－２能够增强骨髓的ＮＫ活性和诱导ＬＡＫ细胞的产生,呈浓度递增趋势;１００μｇ／ＬＩＬ－１能增强１万～１００万Ｕ／ＬＩＬ－２诱导的骨髓ＮＫ及ＬＡＫ活性。在体外净化实验中,１００μｇ／Ｌ ＩＬ－１或１００万Ｕ／Ｌ ＩＬ－２对Ｋ５６２和（或）ＨＬ－６０细胞无直接杀伤,而在掺入１％Ｋ５６２或ＨＬ－６０的正常骨髓中,加入ＩＬ－１和（或）ＩＬ－２,对     

间质性肺疾病支气管肺泡灌洗液中性粒细胞趋化因子和肿瘤坏死因子水平及其临床意义

目的探讨间质性肺疾病（ＩＬＤ）时中性粒细胞趋化因子（ＮＣＦ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）与ＩＬＤ活动性的关系。方法用膜滤过和放射免疫法检测１１例结节病、７例特发性肺间质纤维化（ＩＰＦ）患者和８名健康者血清及支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中ＮＣＦ活性及ＴＮＦα水平。结果７例ＩＰＦ患者ＢＡＬＦ中ＮＣＦ、ＴＮＦα分别为２０３±４４ｃｅｌｓ／１０ＨＰ、１１７±２９ｎｇ／Ｌ，明显高于８名对照组（８３±４５ｃｅｌｓ／１０ＨＰ、６５±１４ｎｇ／Ｌ、Ｐ＜０．０１）；１１例结节病患者ＢＡＬＦ中ＮＣＦ、ＴＮＦα分别为１８６±５０ｃｅｌｓ／１０ＨＰ、１２±３ｎｇ／Ｌ，明显高于８名对照组（Ｐ＜０．０１）。ＩＰＦ组ＢＡＬＦ中ＮＣＦ、ＴＮＦα均与中性粒细胞百分比呈正相关（ＮＣＦ：ｒ＝０．８９，Ｐ＜０．０１，ＴＮＦα：ｒ＝０．８６，Ｐ＜０．０５），结节病组ＢＡＬＦ中ＮＣＦ、ＴＮＦα均与淋巴细胞百分比呈正相关（ＮＣＦ：ｒ＝０．７８，Ｐ＜０．０１；ＴＮＦα：ｒ＝０．７３，Ｐ＜０．０１）。结论ＩＰＦ和结节病患者ＢＡＬＦ中ＮＣＦ、ＴＮＦα水平可做为肺泡炎活动性的标志