淋病奈瑟菌感染动物模型研究进展

淋病奈瑟菌容易感染人,却难以感染所有常用实验动物,因此长期以来一直缺少合适的实验动物模型,严重限制了淋病奈瑟菌的研究进展。雌激素有一定的抗炎作用,利用雌激素处理小鼠,建立淋病奈瑟菌实验感染模型,有助于淋病奈瑟菌感染机制的研究、疫苗的开发和研制、以及抗淋病药物的筛选与评价。     

利用雌激素构建小鼠淋病奈瑟菌感染模型

目的探讨用雌激素构建淋病奈瑟菌感染小鼠模型的方法。方法淋病奈瑟菌WHO-A接种经皮下注射苯甲酸雌二醇和真皮下埋植尼尔雌醇片（雌三醇）预处理的雌性ICR小鼠，小鼠阴道拭子接种T-M选择培养基培养分离淋病奈瑟菌，取小鼠阴道分泌物涂片染色观察淋病奈瑟菌感染情况，比较两种雌激素对小鼠淋病奈瑟菌感染的差异。结果与对照组相比，苯甲酸雌二醇小鼠体内淋病奈瑟菌有短时间的定植，而尼尔雌醇组与对照组无差异。结论雌激素（尤其是雌二醇）有利于淋病奈瑟菌在小鼠阴道内的定植。     

黄芪甲苷抑制NLRP3/IL-1β轴改善糖尿病小鼠血管炎性病变

目的:探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病(DM)小鼠血管炎性病变的影响。方法:取雄性C57BL/6小鼠,腹腔注射STZ(100 mg/kg)诱导DM模型。取造模成功的小鼠随机分为模型组(高糖高脂饲料)和AS-Ⅳ组(高糖高脂饲料+20 g·kg~(-1)·d~(-1) AS-Ⅳ),每组5只。另设5只正常小鼠作为对照组(普通饲料)。各组给予相应干预,连续8周。干预期间,每周称取小鼠体质量,测定随机血糖。末次给药后,取血,分离主动脉。生化分析仪检测各组小鼠糖化血红蛋白(HbAlc)水平,HE染色后光镜下观察各组小鼠主动脉血管形态学变化,Western blot检测各组小鼠血管组织Nod样受体蛋白3(NLRP3)的蛋白表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠血清白介素-1β(IL-1β)含量。结果:①给药4周后,与对照组相比,模型组和AS-Ⅳ组小鼠体质量增长减缓;各时间点模型组与AS-Ⅳ组小鼠体质量比较,差异均无统计学意义(P0.05)。②与对照组相比,各时间点模型组和AS-Ⅳ组小鼠的血糖浓度均显著升高(P0.01)。干预第3周起,AS-Ⅳ组小鼠血糖浓度较模型组明显降低(P0.05),直至第8周干预结束;治疗8周后,模型组HbAlc水平较对照组显著升高(P0.01),AS-Ⅳ组HbAlc水平较模型组明显降低(P0.05)。③HE染色显示,模型组小鼠主动脉内膜显著增厚,AS-Ⅳ干预可明显减轻模型小鼠血管内膜增厚。④与对照组相比,模型组NLRP3蛋白表达量明显增多(P0.01),血清IL-1β水平明显升高(P0.01);与模型组相比,AS-Ⅳ组NLRP3蛋白表达量明显下降(P0.01),血清IL-1β含量显著降低(P0.01)。结论:AS-Ⅳ可降低DM小鼠的血糖和HbAlc水平,改善血管炎性病变,其作用机制可能与抑制NLRP3/IL-1β轴相关。     

PCR对可疑慢性淋病病人淋病奈瑟菌的检测

①目的明确临床上可疑慢性淋病病人的病原学诊断。②方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对７６例可疑慢性淋病病人的尿道分泌物进行了淋病奈瑟菌检测，并与传统的细菌分离培养法的敏感性进行了比较。③结果聚合酶链反应测出阳性标本２２份（２８．９％），分离培养法测出阳性标本８份（１０．５％）。两种方法敏感性比较，差异有显著性（χ２＝１２．０７，Ｐ＜０．０１）。④结论与细菌培养法相比ＰＣＲ敏感而快速，是明确慢性淋病病原学诊断和指导治疗的好方法。     

淋病奈瑟菌感染动物模型的建立及探讨

目的尝试建立淋球菌感染动物模型,为研究淋球菌致病机制提供良好的动物模型。方法采用野生株淋球菌FA1090接种雌二醇预处理的雌性BALB-c小鼠,小鼠生殖道拭子接种WGC选择培养基培养分离淋球菌,取小鼠阴道分泌物涂片Gram染色观察有无淋球菌,并用瑞氏染色观察小鼠阴道分泌物中多形核白细胞(polymorphonuclearleukocytes,PMN)的数目。结果受试小鼠生殖道中淋球菌平均存活了8d(2×106CFU接种量),阴道分泌物涂片Gram染色可见淋球菌粘附在上皮细胞上,88%的受试小鼠发生了炎症。结论成功建立了淋球菌感染的动物模型,为研究淋球菌的致病机制、毒力及抗菌药物的研究奠定了基础。     

淋病奈瑟菌与支原体感染引起流产的临床观察

目的　探讨淋病奈瑟菌与支原体感染对妊娠及胎儿影响所致的流产。方法　应用PCR技术检测法。对 198例妊娠妇女分为两组 ,即流产组 99例 ,正常妊娠组 99例 ,进行淋病奈瑟菌与支原体检测。结果　流产组淋病奈瑟菌阳性率为5 4 .5 % ,支原体阳性率为 30 .3% ,NG与UU总阳性率 84 .8% ,非病原体感染者为 15 .2 % ;正常妊娠组淋病奈瑟菌阳性率为18.2 % ,支原体阳性率为 12 .1% ,NG与UU总阳性率为 30 .3% ,非病原体感染者为 6 9.7%。两组总阳性率比较 ,差异有极显著性 (P <0 .0 1) ,两组非病原体感染比较 ,差异有极显著性 (P <0 .0 1)。结论　淋病奈瑟菌和支原体的生殖道感染是造成流产的原因之一     

淋病奈瑟氏菌的β-内酰胺酶测定和药敏实验分析

对从临床分离出的４００份淋球菌菌株进行β－内酰胺酶（β－ｌａｅｓ）测定和药敏实验，发现β－ｌａｓｅ阳性率高达６４．５％；β－ｌａｓｅ阳性比β－ｌａｓｅ阴性菌株对不同种类的抗生素的耐药率明显偏高；且β－ｌａｓｅ阳性菌株所占比率有逐年升高趋势，同时发现一些新的耐药株。提示对淋病患者进行细菌培养、药敏实验和β－ｌａｓｅ的检测应作为临床一项常规工作。     

淋病奈瑟菌感染的实验诊断进展

淋病是由淋病奈瑟菌（Neisseria gonorrhoeae,NG）感染引起的一种常见的性传播疾病,全世界每年约有600多万人感染此病。NG慢性感染通常无明显临床症状,特别是女性。如果得不到及时治疗会引起盆腔炎、异位妊娠、不孕不育和前列腺炎等。流行病学资料显示对于合并感染的患者进行抗菌治疗能有效减少HIV的传播。故早期诊断NG感染尤为重要,下面就其实验诊断做一简述。     

中草药治疗产β-内酰胺酶淋病奈瑟菌感染的疗效观察

淋病奈瑟菌是淋病的病原菌 ,淋病是性传播疾病中发病率最高的一种 ,近年来随着广谱抗菌素的广泛使用 ,治疗不规范造成临床大量耐药菌株。所以对细菌耐药性检测 (Beta -内酰胺酶 ) ,以及寻求一种切实可行的治疗方法已是刻不容缓的问题。现将本人几年来临床耐药菌株分离结果 ,并中草药对产Beta -内酰胺酶淋病治疗效果介绍如下。1　临床资料1.1　材料　取菌株自 1998- 0 6起慢性淋病患者 ,共计 2 16例 ,病程 3个月以上。嘱病人停药 1周以后留取标本 ,标本采集应符合细菌培养要求。1.2　试剂　巧克力双抗琼脂即TM琼脂 (10 %绵羊红细胞 ,多粘菌…     

IL-1β对RAW264.7细胞表达IL-4mRNA,GATA-3mRNA的影响

目的 探讨IL-1β对RAW264.7细胞表达IL-4,GATA-3mRNA的影响.方法 常规培养RAW264.7细胞后进行干预,A组：IL-1β（0mg/L,1mg/L,10mg/L,20mg/L）刺激细胞1h,B组：IL-1β（10mg/L）刺激0h,30min,1h,3h,6h,C组：IL-1β（10mg/L）刺激0h,30min,1h,1.5h,2h,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测IL-4,GATA-3mRNA的表达.结果 IL-Iβ刺激RAW264.7细胞不同浓度、不同时间与空白对照组比较IL-4,GATA-3mRNA的表达增高（P＜0.05）;IL-1β（10mg/L）刺激RAW264.7细胞1h时,IL-4mRNA的表达量最高,1.5h时GATA-3mRNA的表达量最高.结论 IL-1β在RAW264.7细胞中促进IL-4,GATA-3mRNA的表达呈浓度、时间依赖性,提示IL-1β通过促进单核巨噬细胞分泌IL-4,GATA-3,诱导Th2型细胞分化,促进和加重哮喘的慢性炎症.     

抑制NLRP3/IL-1β信号通路对高尿酸血症CKD大鼠肾功能的影响

探讨抑制NLRP3/IL-1β信号通路对高尿酸血症慢性肾脏病（CKD）模型大鼠肾功能的影响及作用机制。方法 将SD大鼠分为对照组、模型组、NLRP3抑制剂组、IL-1β 抑制剂组,每组10只,以肾切除法和氧嗪酸钾灌胃建立高尿酸血症CKD大鼠模型,同时,NLR P3抑制剂组以NLRP3抑制剂MCC950（10 mg/kg）灌胃,IL-1β抑制剂组以IL-1β抑制剂GIBH-130（0.25 mg/kg）灌胃,连续14 d。结束给药24 h后,全自动生化分析仪测定血清中血尿酸（SUA）、血尿素氮（BUN）和血肌酐（Scr）水平,ELISA法检测肾组织上清中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-18（IL-18）水平,HE染色和PAS染色观察肾组织病理形态学变化,透射电子显微镜观察足细胞超微结构变化,免疫组织化学染色检测肾组织内Nephrin与Podocin表达情况,Western blot测定肾组织含NLR家族Pyrin域蛋白3（NLRP3）、IL-1β及胱天蛋白酶-1（Caspase-1）蛋白表达水平,比色法测定肾组织内超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。〖HTH〗结果 相较于模型组大鼠,经过NLRP3抑制剂和IL-1β抑制剂作用的两组高尿酸血症CKD大鼠血清SUA、BUN、Scr水平均显著降低（P＜0.05）,肾组织内IL-1β、TNF-α和IL-18含量均下降（P＜0.05）,大鼠肾组织病理损伤均减轻,形态结构有所恢复,足细胞足突融合或消失现象得到改善,肾组织中Nephrin阳性率与Podocin阳性率均显著增加（P＜0.05）,NLRP3、IL-1β及Caspase-1蛋白相对表达量均显著下调（P＜0.05）,同时,肾组织内SOD活性均显著升高（P＜0.05）,MDA含量均显著减少（P＜0.05）。结论NLRP3/IL-1β信号通路可能参与高尿酸血症CKD大鼠的病理过程,靶向抑制该通路能够抑制炎性介质释放,减轻氧化应激反应,从而对肾功能起到保护作用     

高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响

目的：观察高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响。方法：体外培养人腹膜间皮细胞株第5～10代［HMrSV5,DMEM/F12培养基含10%（体积分数）胎牛血清］,观察1.5%、2.5%、4.25%（质量分数）葡萄糖腹膜透析液（dextrose）及线粒体呼吸链复合酶Ⅰ抑制剂鱼藤酮（rotenone）,线粒体呼吸链复合酶Ⅱ抑制剂噻吩甲酰三氟丙酮（thenoyltrifluoroacetone,TTFA）,线粒体呼吸链复合酶Ⅲ抑制剂抗霉素A（antimycin A）对细胞IL-1β表达的影响（免疫印迹）;通过小RNA干扰技术下调NLRP3的表达,免疫印迹分析4.25%高糖腹膜透析液作用下细胞IL-1β的表达;通过白藜芦醇（resveratrol,RSV）诱导自噬,3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）、自噬相关蛋白5（autophagy related gene 5,ATG5）siRNA、自噬相关蛋白（Beclin1）siRNA抑制自噬,流式细胞仪分析细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）,免疫印迹分析IL 1β的表达。结果：对照组、1.5%高糖腹膜透析液、2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮（10 μmol/L）、抗霉素A（50 mg/L）、噻吩甲酰三氟丙酮（10 μmol/L）各组细胞上清IL-1β的相对表达依次为0、0.175±0.082、0.418±0.163、2.357±0.288、2.642±0.358、3.271±0.462、0.123±0.091,提示 2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮、抗霉素A作用细胞IL-1β表达明显升高,应用NLRP3 siRNA可阻断上述效应;此外,对照组、阴性对照siRNA（negative control,NC siRNA）、RSV（50 μmol/L,诱导自噬）、3 MA（10 mmol/L,抑制自噬）、ATG5 siRNA（抑制自噬）、Beclin1 siRNA（抑制自噬）各组总线粒体荧光强度分别为1.76±0.42、1.83±0.55、1.85±0.62、7.36±0.92、5.35±0.77、5.06±0.62,超氧化线粒体荧光强度分别为821.68±95.12、868.15±102.82、723.39±92.56、1 660.08±113.65、1 433.01±107.24、1 562.36±112.88,结合免疫印迹结果,提示抑制自噬可增强线粒体ROS产生和提高IL-1β表达,诱导自噬对ROS、IL-1β无明显影响。结论：长期应用高糖腹膜透析液,腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β持续激活,实时启动自噬可能成为干预NLRP3-IL-1β持续激活、延缓腹膜透析腹腔慢性炎症及腹膜纤维化的治疗靶点。     

升降散对流感病毒FM1感染小鼠血清IL-1β、IL-10含量的影响

目的：观察升降散对流感病毒FM1感染小鼠炎症相关因子的影响。方法：复制流感病毒FM1感染小鼠模型,以小鼠血清IL-1β、IL-10含量为指标,用ELISA法测定。结果：升降散可以降低血清IL-1β的含量、提高血清IL-10的含量。结论：升降散调节炎症相关因子的分泌,可能是其对流感病毒FM1感染小鼠起到保护作用的机制之一。     

慢性牙周炎患者牙龈卟啉单胞菌感染与NLRP3、IL-1β、IL-18在牙周膜细胞中的表达研究

目的 探讨慢性牙周炎患者牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis,Pg)感染与NLRP3、L-1β及IL-18在牙周膜细胞中的表达。 方法 选取诊治慢性牙周炎需进行拔牙治疗的患者50例及50例牙周健康人群,实时荧光PCR技术检测龈下菌斑Pg,慢性牙周炎患者拔牙后取得牙周膜组织进行牙周膜细胞培养,取部分细胞用Pg标准株感染,部分不做感染处理,采用蛋白印迹法检测NLRPS蛋白表达,以免疫酶联吸附法检测IL-1β及IL-18表达。 结果 慢性牙周炎患者Pg阳性率为84.00%,高于牙周健康者的22.00%,探诊深度5、6、7 mm慢性牙周炎患者Pg浓度分别为4.38±0.81、4.79±0.76、5.47±0.63,高于牙周健康者0.38±0.12、0.46±0.15、0.72±0.20(P<0.05);Pg感染牙周膜细胞中NLRP3及IL-1β、IL-18表达量分别为(1.25±0.12)、(1 820.42±425.57) pg/ml、(311.55±45.70) pg/ml,明显高于未人工Pg感染牙周膜细胞(0.74±0.08)、(1 138.65±350.76) pg/ml、(124.70±42.54) pg/ml (P<0.05)。 结论 慢性牙周炎患者Pg感染率及感染菌量均较高,Pg感染可引起牙周膜细胞中NLRP3、IL-1β、IL-18表达的上调,这可能是Pg引起慢性牙周炎发生的原因之一。      

升降散对流感病毒FM1感染小鼠血清IL-1β、IL-10含量的影响

目的:观察升降散对流感病毒FM1感染小鼠炎症相关因子的影响。方法:复制流感病毒FM1感染小鼠模型,以小鼠血清IL-1β、IL-10含量为指标,用ELISA法测定。结果:升降散可以降低血清IL-1β的含量、提高血清IL-10的含量。结论:升降散调节炎症相关因子的分泌,可能是其对流感病毒FM1感染小鼠起到保护作用的机制之一。     

NLRP3炎性小体和IL-1β在骨癌痛大鼠吗啡耐受形成中的作用

目的评价NLRP3炎性小体和IL—1β在骨癌痛大鼠吗啡耐受形成中的作用及鞘内注射Anti-NLRP3对大鼠痛觉敏化的的影响。方法将鞘内置管成功的大鼠随机分为5组,每组各10例,假手术组(S组)、骨癌痛组(P组)、骨癌痛+吗啡耐受组(PM组)、骨癌痛+吗啡耐受+Ig G组(PMG组)、骨癌痛+吗啡耐受+Anti-NLRP3组(PMA组)。除S组外大鼠接种Walker 256乳腺癌细胞制备骨癌痛模型,接种后的第14 d起,给PM组、PMG组和PMA组大鼠连续7 d皮下注射吗啡,构建吗啡耐受模型。第21 d时,五组大鼠注射吗啡3 mg/kg。造模后第22 d起,连续5 d给PM组大鼠鞘内注射生理盐水10μl,PMG组大鼠注射Ig G 10μl,PMA注射Anti-NLRP3 10μl。选取不同的时间点对大鼠行为学进行测试,所有测定完成后处死大鼠,取脊髓组织,测定NLRP3蛋白和IL-1β的表达。结果与S组和P组比较,PM、PMG和PMA组大鼠产生吗啡耐受后脊髓NLRP3蛋白和IL-1β表达上调(P<0.05)。鞘内注射Anti-NLRP3的PMA组与PM、PMG组相比,大鼠行走痛评分下降,PWMT升高,脊髓NLRP3蛋白和IL-1β表达下调(P<0.05)。结论 NLRP3炎性小体和IL-1β与大鼠骨癌痛-吗啡耐受形成有密切关系。鞘内注射Anti-NLRP3可减轻骨大鼠的痛觉敏化。     

黄芪甲苷抑制NLRP3/IL-1β轴改善高糖诱导的血管平滑肌细胞炎症反应

目的:探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对高糖诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)炎症反应的作用及机制。方法:①采用不同浓度的葡萄糖(5.5、10、15、25 mmol/L)刺激VSMCs细胞24 h,或高浓度葡萄糖(25 mmol/L)处理VSMCs不同时间(0、6、12、24 h)。Western blot检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达;ELISA检测白介素-1β(IL-1β)含量。②采用不同浓度(0、10、20、40μg/ml)AS-Ⅳ干预VSMCs细胞24 h后,CCK8法检测并计算细胞活力。③将VSMCs细胞分为对照组、高糖组、AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+高糖组。先给予AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+高糖组20μg/ml AS-Ⅳ预孵育2 h后,再向高糖组和AS-Ⅳ+高糖组加入25 mmol/L葡萄糖刺激24 h。Western blot检测NLRP3蛋白表达;ELISA检测IL-1β含量。④构建si-NLRP3 RNA转染的VSMCs细胞。将细胞分为对照组、高糖组、si-NLRP3组和si-NLRP3+高糖组。细胞转染6 h后,高糖组和si-NLRP3+高糖组细胞加入25 mmol/L葡萄糖刺激24 h。PCR检测NLRP3 mRNA表达;ELISA检测IL-1β含量。⑤应用转染技术构建NLRP3过表达的VSMCs细胞。将细胞分为对照组、AS-Ⅳ组、NLRP3过表达组和NLRP3过表达+AS-Ⅳ组。细胞转染6 h后,AS-Ⅳ组和NLRP3过表达+AS-Ⅳ组加入20μg/ml AS-Ⅳ干预24 h。PCR检测NLRP3 mRNA表达;ELISA检测IL-1β含量。结果:①高糖刺激能够上调VSMCs细胞NLRP3和IL-1β蛋白表达(P0.01),且呈一定的浓度/时间依赖性,故选取25 mmol/L葡萄糖作用24 h进行后续研究。②10、20μg/ml AS-Ⅳ作用VSMCs细胞24 h后,细胞活力无显著变化(P0.05),选择20μg/ml浓度进行后续实验。③与对照组相比,AS-Ⅳ组细胞NLRP3蛋白表达量显著下调(P0.05),IL-1β含量显著降低(P0.05);与高糖组相比,AS-Ⅳ+高糖组NLRP3蛋白表达量显著减少(P0.01),IL-1β含量显著降低(P0.01)。④与对照组相比,si-NLRP3组细胞NLRP3 mRNA表达量显著降低(P0.01),IL-1β含量没有明显变化;与高糖组相比,si-NLRP3+高糖组NLRP3 mRNA表达量显著减少(P0.01),IL-1β含量显著降低(P0.01)。⑤与AS-Ⅳ组相比,NLRP3过表达+AS-Ⅳ组NLRP3 mRNA表达量显著增多(P0.01),IL-1β含量显著升高(P0.01)。结论:黄芪甲苷可能通过抑制NLRP3/IL-1β轴改善高糖诱导的VSMCs炎症反应。     

清燥救肺汤对肺炎支原体感染小鼠NLRP3炎性小体相关因子表达的影响

目的探讨清燥救肺汤对肺炎支原体(MP)感染后NLRP3炎性小体相关因子的动态变化,试图进一步明确清燥救肺汤防治肺炎支原体肺炎(MPP)的效应靶点。方法将72只Balb/c小鼠随机分成正常组、模型组、清燥救肺汤组、阿奇霉素组,每组18只。除正常组小鼠外,其余3组采用滴鼻法对实验Balb/c小鼠进行MP感染。造模后,清燥救肺汤组每只给予15 g/kg的对应方剂进行灌胃,1次/d,连续14 d;阿奇霉素组,每只给予阿奇霉素90 mg/kg灌胃,1次/d,连续3 d,停药4 d,2个循环,停药期间蒸馏水灌胃;正常组、模型组每只给予0.3 mL蒸馏水灌胃。在感染后的第3、7、10天进行取材,采用透射电镜观察肺组织超微结构改变,运用免疫组织化学SP法和Western blot法检测肺组织NLRP3、caspase-1蛋白的表达,并采用ELISA法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果 MP感染后,小鼠肺组织出现炎症改变,肺泡壁增厚、肺泡上皮细胞破坏、细胞浸润。MP感染后,小鼠肺组织中的NLRP3、caspase-1的表达明显升高,血清中IL-1β明显上升;与模型组比较,各用药组均可以下调NLRP3、caspase-1及IL-1β的表达(均P<0.05)。结论清燥救肺汤可以有效地下调caspase-1、NLRP3及IL-1β的表达,可能为其治疗MPP的效应靶点。