晕船易感大鼠与不晕大鼠脑干蛋白质双向电泳图谱的鉴定与分析

目的:观察血红素加氧酶-2基因敲除对Fe2 诱导的脑氧化应激损伤的保护作用.方法:采用立体定向法注射10μl FeCl2(10 mmol/L)至血红素加氧酶-2基因敲除小鼠及野生型小鼠右侧纹状体,制备Fe2 诱导的脑氧化应激损伤模型.测量损伤24 h后损伤区域脑水肿程度.利用MTT法测量损伤72 h后细胞生存率.利用蛋白印迹法检测损伤72 h后细胞脑组织氧化反应性蛋白及脂质氧化蛋白含量.结果:血红素加氧酶-2基因敲除小鼠脑水肿程度显著低于野生型小鼠;损伤区域细胞生存率显著高于野生型小鼠;血红素加氧酶-2基因敲除小鼠损伤区域组织氧化反应性蛋白及脂质氧化蛋白含量显著低于野生型小鼠.结论:血红素加氧酶-2参与了Fe2 诱导的脑氧化应激损伤,基因敲除血红素加氧酶-2对脑氧化应激损伤具有保护作用.     

GSFs细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

目的：建立GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱。方法：用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养GSF细胞，胰酶消化后收集细胞，加入细胞裂解液使细胞充分裂解，离心后取上清液进行第一向等电聚焦电泳和平衡，再进行第二向SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）和银染显色及图像扫描与分析。结果：通过对GSF细胞蛋白提取液进行双向电泳，在17cm pH5～8IPG胶条上可得到重复性及分辨率均较好的蛋白位点。结论：GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立。为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。     

海马注射淀粉样蛋白β大鼠与正常大鼠脑蛋白质组双向电泳图谱比较

目的 比较海马注射淀粉样蛋白β(Aβ)大鼠与正常大鼠脑蛋白质组双向电泳(2-DE)图谱差异,从蛋白质水平初步探索阿尔茨海默病(AD)发病机制。方法 以固相pH梯度等电聚焦为第1向,SDS-PAGE垂直电泳为第2向进行2-DE。以图像分析软件ImageMaster 2D-Elite分析电泳图谱。结果 海马注射Aβ大鼠与正常大鼠脑组织2-DE图谱分别检出496和491个蛋白点。对2张电泳图进行匹配后,发现有11个蛋白点仅在海马注射Aβ大鼠脑蛋白2-DE图谱中表达,而有6个蛋白点只在正常对照大鼠检测到。部分蛋白在2组大鼠脑组织中含量发生了明显变化。结论 初步建立了AD动物模型比较蛋白质组学的技术方法;差异点的发现为深入理解AD发病机制及研发新药提供了有益的线索。     

海马注射淀粉样蛋白β大鼠与正常大鼠脑蛋白质组双向电泳图谱比较

目的 比较海马注射淀粉样蛋白β(Aβ)大鼠与正常大鼠脑蛋白质组双向电泳(2-DE)图谱差异，从蛋白质水平初步探索阿尔茨海默病(AD)发病机制。方法 以固相pH梯度等电聚焦为第1向，SDS-PAGE垂直电泳为第2向进行2-DE。以图像分析软件ImageMaster 2D-Elite分析电泳图谱。结果 海马注射Aβ大鼠与正常大鼠脑组织2-DE图谱分别检出496和491个蛋白点。对2张电泳图进行匹配后，发现有11个蛋白点仅在海马注射Aβ大鼠脑蛋白2-DE图谱中表达．而有6个蛋白点只在正常对照大鼠检测到。部分蛋白在2组大鼠脑组织中含量发生了明显变化。结论 初步建立了AD动物模型比较蛋白质组学的技术方法；差异点的发现为深入理解AD发病机制及研发新药提供了有益的线索。     

对卵巢恶性肿瘤组织蛋白质双向电泳图谱的初步分析

目的构建卵巢恶性肿瘤组织的蛋白质表达谱,为进行卵巢良、恶性肿瘤组织蛋白质表达的差异分析及临床早期诊断奠定基础。方法取人卵巢恶性肿瘤组织,提取蛋白质,进行双向电泳分离,银染获得其蛋白质电泳分离图谱,利用PDQuest 2D分析软件进行图像分析,结合Swiss-Prot蛋白质数据库对蛋白质斑点进行初步鉴定。结果双向电泳图谱显示2-DE图谱上有212个蛋白质斑点,主要集中在pH 4.75~9.21之间,其中高丰度蛋白有36个点,低丰度的蛋白质斑点有176个,对其中3个高丰度蛋白质斑点初步鉴定可知这些蛋白质为:E2F6I、I2A、EZH1。结论本实验构建了人卵巢恶性肿瘤组织蛋白质的双向电泳图谱,其分离、染色效果好,能满足2-DE专业软件分析的要求,为后续卵巢良、恶性肿瘤组织的蛋白质组研究奠定了基础。     

胃腺癌及正常胃黏膜组织蛋白质组双向电泳图谱分析

目的:对胃腺癌与配对正常胃黏膜双向电泳(2-DE)图谱进行比较分析,筛选差异表达蛋白质.方法:采用2-DE技术分离胃腺癌和正常胃黏膜组织总蛋白.银染后采用magicscan图像获取仪扫描2-DE凝胶图像,采用Imagemaster6.0凝胶图像分析软件进行分析.结果:胃腺癌和正常胃黏膜2-DE图谱上蛋白质斑点主要分布在等电点p14～7、相对分子质量20 000～90 000范围内,共有28个差异表达蛋白质,其中15个在胃腺癌组织中表达上调,13个表达下调.结论:胃腺癌与正常胃黏膜组织蛋白质组表达有差异.     

肺癌与良性胸腔积液蛋白质双向电泳图谱差异分析

目的:建立肺癌与肺良性胸腔积液的双向电泳图谱,分析二者表达蛋白质的差异及特点。方法:利用固相pH梯度双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离肺癌和肺良性胸腔积液中的总蛋白质。凝胶经银染色后用PDQUEST6.2.1电泳分析软件对胸水中的蛋白质谱进行分析,识别差异表达的蛋白质。结果:肺癌与肺良性胸腔积液的蛋白质组分布的基本框架很相似,并可发现二者之间有差异蛋白点;两种胸腔积液电泳图谱平均蛋白质点数分别为326±16和343±12,平均匹配点数为286±14和298±21,匹配率87.7%,86.9%.差异蛋白点82个,其中37个在肺癌胸腔积液中高表达,24个在肺癌胸腔积液中低表达。有17个点仅在良性胸腔积液表达,4个点仅在肺癌胸腔积液表达。结论:用双向电泳法得到了分辨率较高且重复率较好的肺癌与肺良性胸腔积液蛋白质组图谱,二者存在一些表达差异蛋白质。     

大鼠脊神经蛋白质组研究中双向电泳技术的建立

目的探讨双向凝胶电泳技术在大鼠脊神经组织蛋白质组研究中的应用。方法应用高蛋白溶解度裂解液提取正常大鼠脊神经组织蛋白质，以固相pH梯度等电聚焦电泳和垂直板SDS-PAGE电泳结合的方法进行蛋白质的分离，使用银染和考马斯亮蓝两种方法分别对凝胶进行染色。结果正常大鼠脊神经组织样品在18cmpH3～10非线性固相pH梯度干胶条，12．5％的Acr-Bis PAGE的胶上可分离到900个左右蛋白点，不同凝胶间蛋白点平均匹配率为80％。结论实验所采用的高离液剂体系的裂解液，及对第一向和第二向电泳过程中各个因素及环节的把握，是获得大鼠脊神经组织蛋白质双向电泳图谱的关键。     

大鼠胰腺蛋白质组研究中双向电泳技术的初步建立

目的：初步建立大鼠胰腺蛋白质组研究中双向电泳技术，提高其分辨率及重复性。方法：应用大鼠成年和胚胎18天胰腺组织提取的总蛋白，对以载体两性电解质pH梯度为第一向的双向电泳关键因素与环节，如样品处理、凝胶制备、电泳参数等进行一系列的优化。结果：获得了分辨率及重复性均很好的双向电泳图谱。结论：通过对各种条件的优化，初步建立了双向电泳技术，为研究胚胎胰腺不同时期特异性蛋白的表达及分子标志打下基础。     

偏头痛肝阳上亢证大鼠肾上腺蛋白质双向电泳图谱的分析

目的探寻偏头痛肝阳上亢证大鼠相关蛋白。方法将SD大鼠随机分成正常组及偏头痛肝阳上亢证组(简称模型组)。通过对肾上腺组织蛋白质的提取,经双向电泳,Pdquest软件分析,蛋白质点原位酶解及质谱分析。结果发现模型组与正常组大鼠肾上腺总蛋白质的分布模式非常相似,以PI3-8,分子量Mr14.4~75kD范围的蛋白质斑点分布最多。经PDQuest7.0软件分析后得出,在相同条件下识别的蛋白质斑点数分别为正常组(584±25)个,模型组(686±27)个。选取表达有显著差别的12个蛋白质斑点进行酶解和质谱分析,所得结果在网上搜寻,其中有9个点的蛋白质与之匹配。结论表明模型组与正常大鼠肾上腺蛋白质的表达具有差异,经质谱鉴定的9个蛋白质可能与偏头痛肝阳上亢证的形成有关.这为进一步研究偏头痛发病机制打下了基础。     

hNav1.8通道蛋白在三叉神经痛痛支神经超微结构中的表达及意义

目的:利用蛋白组学技术,建立晕船易感及不晕大鼠脑干总蛋白的双向电泳图谱,分析并鉴定差异表达蛋白质.方法:据模拟晕船刺激后异嗜高岭土量的增减将大鼠分为晕船易感组和不晕组,应用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向电泳(two-dimensionaI electrophoresis,2-DE)技术,分离2组大鼠脑干总蛋白,分析并用肽指纹图谱(peptide massfingerprint,pMF)鉴定差异蛋白质.结果:鉴定5个晕船易感相关蛋白质,上调酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白、铁效应元件结合蛋白1,下调硫氧还蛋自过氧化物酶Ⅰ、磷酸甘油酸变位酶B、线粒体电压依赖型阴离子通道1.结论:成功建立分辨率和重复性高的晕船易感和不晕组大鼠2-DE图谱,研究表明差异蛋白质与神经递质合成、氧化损伤、能量代谢、细胞凋亡及铁代谢有关.     

Comparative proteomic analysis of rat juvenile and adult dura

Background It has been widely observed that infants and young children can reossify large calvarial defects when they are younger than 2 years of age; afterwards, they lose this regenerative potential. Previous studies have implicated that the dura mater serves as a key regulator of calvarial regeneration. However, the molecular mechanism of calvarial reossification remains elusive. Methods In order to identify the proteins that may participate in this process, we performed a proteome-wide comparison of the protein expression levels of immature and mature dura using 2D electrophoresis and MALDI-TOF mass spectrometry. The Western blotting was used to verify the results of the 2D electrophoresis/MALDI-TOF mass spectrometry. Results Eleven proteins were found to express with significant differences in the immature and the mature dura. Among them, the emergence of vimentin, tropomyosin, 13-actin and y-actin were further confirmed by the Western blotting analysis. Conclusion The proteins and proteomic profiles provide a better understanding of the molecular mechanism of calvarial regeneration.     

Analysis of Proteomic Components of Sera from Patients with Uremia by Two Dimensional Electrophoresis and Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry

Summary： The different sera proteomic components between uremia patients and normal subjects were studied through two-dimensional gel electrophoresis technique. Immobilized pH gradient two- dimensional polyacrylamide gel electrophoresis （2DE）, silver staining, ImageMaster 2D 5.0 analysis software, matrix assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry （MALDI-TOF-TOF-MS） and IPI human database searching were used to separate and identify the proteome of the sera from the patients with uremia. The results showed that satisfactory 2DE patterns of the serum proteins were obtained. Twenty-six protein spots showed significant difference in quantity in uremia patients, and 20 protein spots were identified by MALDI-TOF-TOF-MS. It was concluded that good reproducibility could be obtained by applying immobilized pH gradient 2DE to separate and identify the proteome in serum, which provided the foundation for the further study on uremia toxins oertaining to orotein.     

短穗鱼尾葵花粉总蛋白的双向电泳及分析

目的对短穗鱼尾葵花粉过敏原蛋白质组分进行双向电泳及其结果分析,构建短穗鱼尾葵花粉蛋白双向电泳图谱,明确短穗鱼尾葵花粉的过敏原蛋白组分的分布和构建蛋白质组学数据库。方法提取短穗鱼尾葵花粉的总蛋白,取上清液进行Bradford法定量总蛋白浓度,采用13 cm IPG胶条(p H 3~10)和12%的SDS-PAGE凝胶作为二项分离胶进行双向电泳(2D)分离,银染法分析其总蛋白组成,利用Image Master2D软件对2D胶进行检测和图像分析。结果双向电泳图谱共检测到516个短穗鱼尾葵花粉蛋白点,其蛋白相对分子质量在12~174 k D,主要在10~50 k D;等电点在p H 3~10,主要分布在p H 5~8。含量最多的蛋白质其相对分子质量和等电点分别为13 k D和p H 6.258 37。含量最低的蛋白质其相对分子质量和等电点分别为29 k D和p H 3.615 79。结论成功构建较为完整的短穗鱼尾葵花粉蛋白双向电泳图谱,为建立短穗鱼尾葵花粉蛋白质组学数据库及其过敏的诊断和治疗提供了依据。     

人睾丸胚胎性癌蛋白质组的双向电泳分析及质谱鉴定

目的 应用双向电泳和质谱技术研究人睾丸胚胎性癌蛋白质组.方法 利用固相PH梯度双向凝胶电泳技术进行分离,凝胶经银染显色后,用PDQuest 7.30软件分析2-DE图谱.选择在睾丸胚胎性癌图谱中高表达的3个蛋白点酶解,应用基质辅助激光解析电离飞行时间/飞行时间(MALDI-TOF/TOF)仪器进行串联质谱(MS/MS)鉴定.结果 双向电泳成功有效筛选出差异蛋白点,并成功鉴定3种蛋白质.结论 双向电泳和质谱技术可有效研究睾丸胚胎性癌总蛋白质,为从蛋白质组水平研究睾丸胚胎性癌蛋白质的表达改变提供了新的方法和途径.

Abstract：

Objective To separate and identify human testicular embryonal carcinoma proteomics using two-dimensional electrophoresis (2-DE) and mass spectrometry. Methods Immobilized pH gradient two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis was used to separate the total proteins of the samples. After silver staining, PDQuest 7.30 image analysis software was applied to analyze the 2-DE images. Three of the proteins highly expressed in human testicular embryonal carcinoma were identified by matrix-assisted laser adsorption/ionization-time of flight-tandem mass spectrometry (MALDI-TOF-MS/MS). Results 2-DE effectively screened the differentially expressed proteins in the carcinoma tissues.Three proteins highly expressed in the carcinoma were successfully identified. Conclusion The proteins of human testicular embryonal carcinoma can be effectively separated and analyzed using 2-DE and mass spectrometry. Proteomic analysis offers a new means for further study of this carcinoma.     

应用二维电泳和质谱技术筛选乳腺癌相关差异表达蛋白质的初步研究

目的:通过分离并鉴定乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断的乳腺癌肿瘤标志物.方法:提取人乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择在乳腺癌组织中明显差异表达的蛋白点,行质谱分析.结果:获得了分辨率和重复性均很好的凝胶蛋白图谱.对筛选出的在乳腺癌组织中明显差异表达的20个蛋白点,共有13个蛋白点被成功鉴定,其中在乳腺癌组织巾高表达的为8个,低表达的为5个.结论:乳腺癌组织相对于癌旁、正常乳腺组织蛋白存在明显的差异,过蛋白质组学方法筛选并鉴定出的这些蛋白质可能成为用于早期诊断和评价预后的乳腺癌标志物.     

适于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术

 【目的】 建立适于人表皮组织的双向电泳技术,并应用质谱技术对人表皮组织蛋白质组进行初步分析?【方法】 利用组织匀浆法制备人表皮组织总蛋白?固相pH 梯度胶条进行双向电泳?PDQuest 7.4软件比较和分析电泳图谱,利用质谱技术鉴定部分蛋白斑点?【结果】 成功建立了适用于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术,获得和比较了人表皮组织双向电泳四种染色图谱?人表皮组织的蛋白质在pH5～8范围内分布均匀,分子量集中在15～100 ku之间?银染图谱获得的蛋白斑点数为586±14;对质谱兼容的几种染色方法进行比较分析,结果表明Neuhoff 胶体考染更适合于人表皮组织蛋白质的双向电泳分析,其在上样量为350 μg时蛋白斑点数达394±9,匹配率为85.53%?利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术成功获得了Neuhoff 胶体考染的两个蛋白斑点的肽质量指纹图谱,并鉴定为Caspase 14 前体和27 ku热激蛋白1?【结论】建立的表皮组织双向电泳技术及其图谱可为皮肤蛋白质组学研究提供参考,为人皮肤蛋白质组学平台的构建奠定良好基础?     

胃腺癌组织蛋白质双向电泳图谱分析

目的　利用蛋白质组学方法建立分辨率高和重复性好的人胃腺癌组织及其正常胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱 ,并分析其差异表达的蛋白质 ,以期用于早期诊断。方法　采用固相pH梯度(immobilizedpHgradient,IPG)双向凝胶电泳 (two -dimensionalgelelectrophoresis ,2 -DE)分离人胃腺癌组织及正常胃黏膜组织的总蛋白质 ,凝胶经银染显色后 ,ImagingMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质。结果　 ( 1 )得到了分辨率较高、重复性较好的人胃腺癌组织和正常胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱 ,癌组织和正常胃黏膜组织凝胶的平均蛋白质点数分别为 1 0 4 9± 67和 1 0 97± 73,平均匹配的点数分别为 835± 48和 95 3± 5 6,匹配率分别为 79.6%和 86.7% ;同一组织凝胶在蛋白质点位置上有较好的重复性 ,不同凝胶间蛋白质点在等电聚焦 (isoelectricfocusing ,IEF)方向的偏差是 0 .873±0 .1 2 5mm ,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (sodiumdodecylsulfate -polyacrylamidegelelectrophore sis ,SDS -PAGE)方向上的偏差为 1 .0 2 5± 0 .2 1 3mm。 ( 2 )通过比较分析 5例胃腺癌组织及正常胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱 ,得到平均匹配蛋白质点数为 769± 45 ,差异表达蛋白质点数为 81 ,其中 1 7个点仅     

两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳分离效果的影响

目的 评价两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)分离效果的影响,建立高分辨率、高重复性的血清2-DE图谱,为鉴定疾病相关血清蛋白质奠定基础.方法 分别用热SDS法和直接溶解法处理大肠癌血清样品,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白质,图像软件分析后,对其中3个差异蛋白质点行基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱鉴定.结果 应用热SDS法处理血清总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人血清双向电泳图谱.对直接溶解和热SDS法处理的蛋白样品进行3次重复性检测,凝胶的平均蛋白质点数为675±46和702±49,平均匹配点数为573±42和623±52,匹配率为85.3%和89.6%,分析3块不同胶间蛋白质点在IEF方向的位置偏差为(0.85±0.30)mm和(0.81±0.28)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.02±0.18)mm和(0.97±0.12)mm.热SDS处理的2-DE胶蛋白质点质谱可获得高质量质谱图,并可以检测到相对低丰度的血清蛋白质.结论 热SDS法是一种更有效的血清蛋白质样品制备方法,我们利用热SDS法处理血清样品建立了分辨率较高且重复性好的人血清蛋白质双向凝胶电泳图谱.     

结直肠癌组织的二维荧光差异凝胶电泳分析

目的 以二维荧光差异凝胶电泳(2-D DIGE)技术分析结直肠癌(CRC)组织及正常结直肠组织的蛋白质表达差异.建立二者间的蛋白质表达差异图谱.方法 6对样品分别取自6例CRC手术切除的新鲜的癌和正常肠黏膜组织,进行2-D DIGE,Typhoon~(TM)多功能扫描仪进行图像扫描,并以DeCyder~(TM) 2-D差异分析软件分析.结果 正常肠黏膜组织和癌组织有统计学差异(P<0.05)的表达蛋白点共有315个,癌组织中表达上调(>1.5倍)的有138个,下调(>1.5倍)的有103个.结论 建立了CRC与正常肠黏膜组织的2-D DIGE图谱,发现并经统计学证实癌组织中有表达上调或下调的蛋白存在.