眼针疗法对IBS模型大鼠结肠组织色氨酸羟化酶1表达的影响

目的:研究肠易激综合征(Irritable bowel syndrome,IBS)模型大鼠远端结肠组织色氨酸羟化酶1(Tryptophan hydroxylase1,TPH1)的表达以及眼针干预的影响。方法:实验动物分成正常对照组、IBS模型组、眼针组,采用束缚刺激与应激刺激相结合的方法建立IBS动物模型并进行眼针干预。各组采用Western-Blot法、RT-PCR法检测远端结肠组织中TPH1的蛋白和mRNA表达。结果:与正常对照组比较,IBS模型组TPH1的蛋白和mRNA表达均上调;与IBS模型组比较,眼针组TPH1表达下调明显。结论:IBS模型大鼠结肠组织TPH1表达上调,提示5-HT合成水平提高,可能是结肠组织5-HT水平升高的重要原因。眼针干预可改善IBS大鼠TPH1表达至正常水平。     

眼针对肠易激综合征模型大鼠结肠组织和血清5-HT、5-HIAA的影响

目的观察肠易激综合征（Irritable bowel syndrome,IBS）模型大鼠远端结肠组织5-羟色胺（5-hydroxytryp-tamine,5-HT）和5-羟吲哚乙酸（5-hydroxyindoleacetic acid,5-HIAA）的表达以及眼针干预的影响。方法实验动物分成正常组、模型组、眼针组,采用束缚刺激与应激刺激相结合的方法建立IBS动物模型并进行眼针干预。各组采用ELISA法检测血清和远端结肠组织中5-HT和5-HIAA水平。结果与正常组比较,模型组5-HT和5-HIAA水平均显著升高,5-HT转化率也显著升高,但5-HT的增加量明显高于5-HIAA的增加量,提示5-HT降解与合成分泌的不相匹配可能是模型组大鼠5-HT水平升高的重要原因;而与模型组比较,眼针组5-HT和5-HIAA水平明显下降,眼针组5-HT转化率显著降低。结论 5-HT降解与合成分泌的不相匹配可能是模型组大鼠5-HT水平升高的重要原因,眼针干预可有效改善IBS大鼠5-HT代谢,使5-HT恢复至正常水平。     

眼针疗法对肠易激综合征模型大鼠结肠组织5-羟色胺4受体表达的影响

目的研究肠易激综合征(IBS)模型大鼠远端结肠组织5-羟色胺4受体(5-HT4R)的表达以及眼针干预的影响。方法实验动物分成正常对照组、IBS模型组、眼针组,采用束缚刺激与应激刺激相结合的方法建立IBS动物模型并进行眼针干预。采用Western-Blot法、RT-PCR法检测各组大鼠远端结肠组织中5-HT4R的蛋白和mRNA表达。结果与正常对照组比较,IBS模型组5-HT4R的蛋白和mRNA表达均下调;而与IBS模型组比较,眼针组5-HT4R表达明显上调。结论 IBS模型大鼠结肠组织5-HT4R水平下调,提示5-HT4R可能是IBS分子生物学基础之一,为IBS的治疗提供了分子靶点。眼针干预可有效改善IBS大鼠5-HT4R表达水平。     

柴术宁肠方对肠易激综合征模型大鼠5-羟色胺信号系统的影响

目的:探讨柴术宁肠方对肠易激综合征(IBS)模型大鼠5-羟色胺(5-HT)信号系统的影响。方法:60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、匹维溴铵组(15 mg·kg-1)、柴术宁肠方低、中、高剂量组(2.5,5,10 g·kg-1)。采用复合应激法建立肠易激综合征(IBS)大鼠模型,造模成功后连续灌胃给药1周,每日1次,正常组及模型组给予等体积生理盐水,考察一般状态半定量积分、腹部撤回反射(AWR)评分及最小容量阈值;用酶联免疫法(ELISA)检测大鼠血清5-HT水平,结肠色胺酸羟化酶1(TPH1),5-羟色胺转运体(SERT),5-羟色胺3受体(5-HT3R),5-羟色胺4受体(5-HT4R)水平;RT-PCR法检测结肠TPH1,SERT,5-HT3R,5-HT4R mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组一般状态半定量积分、腹部撤回反射评分及最小容量阈值均有显著性差异(P0.01);模型组血清5-HT和结肠的TPH1,5-HT3R水平及基因表达明显增高和上调(P0.01,P0.05);结肠SERT,5-HT4R水平及基因表达显著降低和下调(P0.05)。与模型组比较,柴术宁肠方血清5-HT和结肠TPH1水平明显下调(P0.05,P0.01);结肠5-HT3R水平及基因表达显著下调(P0.05);结肠SERT,5-HT4R水平及基因表达显著上调(P0.05)。结论:柴术宁肠方可能通过对IBS模型大鼠5-HT信号通路的多靶点调节,降低IBS大鼠内脏敏感性,缓解IBS症状。     

四逆散有效成分对内脏高敏感大鼠5-HT信号通路的多靶点协同调控

目的:研究芍药苷、辛弗林、甘草酸对内脏高敏感大鼠5-羟色胺(5-HT)信号通路的多靶点[色氨酸羟化酶1(TPH1)/5-羟色胺转运体(SERT)/5羟色胺3受体(5-HT3R)/5-HT4RI调控,探讨各成分间的协同交互作用,探索四逆散有效成分干预内脏高敏感状态的潜在机制。方法:SD大鼠随机分为正常组,模型组,匹维溴铵组(15 mg·kg-1),芍药苷组(50 mg·kg-1),辛弗林组(50 mg·kg-1),甘草酸组(50 mg·kg-1),芍药苷+甘草酸组(25 mg·kg-1+25 mg·kg-1),芍药苷+辛弗林组(25 mg·kg-1+25 mg·kg-1),辛弗林+甘草酸组(25 mg·kg-1+25 mg·kg-1),芍药苷+辛弗林+甘草酸组(16.7 mg·kg-1+16.7 mg·kg-1+16.7 mg·kg-1),四逆散组(10 g·kg-1)。采用复合应激法建立肠易激综合征(IBS)内脏高敏感大鼠模型;以大鼠一般状态评分和直肠扩张腹壁撤退反射(AWR)的最小容量阈值评价大鼠肠道敏感性程度;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠结肠组织5-HT,TPH1,SERT,5-HT3R,5-HT4R水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠结肠组织TPH1,5-HT3R,5-HT4R mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠组织TPH1,5-HT3R蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠一般状态评分和最小容量阈值显著下降(P0.01),结肠组织5-HT,TPH1,5-HT3R水平显著升高,SERT,5-HT4R水平明显降低(P0.05,P0.01),TPH1,5-HT3R mRNA及蛋白表达显著升高,5-HT4R mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01)。与模型组比较,芍药苷+辛弗林+甘草酸组结肠5-HT,TPH1,5-HT3R水平明显降低,SERT,5-HT4R水平明显升高,TPH1,5-HT3R mRNA及蛋白表达明显降低,5-HT4R mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01);TPH1,5-HT3R,5-HT4R mRNA多靶点纠偏作用明显,最小容量阈值和一般状态评分明显升高(P0.05,P0.01),组内成分之间存在协同交互作用。结论:芍药苷+辛弗林+甘草酸组合对內脏高敏感大鼠结肠5-HT合成限速酶(TPH1)和相关受体(5-HT3R,5-HT4R)具有协同增效的调控作用,有效成分组合对5-HT通路的多靶点纠偏效应可能是四逆散改善大鼠内脏高敏感状态的重要机制。     

缬草醛对肠易激综合征模型大鼠结肠CRF,TPH1 mRNA及5-HT表达的影响

该研究旨在通过探讨蜘蛛香环烯醚萜类成分缬草醛对肠易激综合征(IBS)大鼠结肠中促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、色氨酸羟化酶1(TPH1)mRNA表达及5-羟色胺(5-HT)含量的影响,阐释缬草醛通过5-HT通路治疗IBS的作用机制。将54只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、缬草醛高、中、低剂量组、匹维溴铵组,每组9只。采用孤养结合慢-急性不可预见性应激法建立IBS大鼠模型,免疫组化法测定大鼠结肠CRF表达,RT-PCR法测定结肠中TPH1 mRNA表达,高效液相色谱法测定大鼠结肠中5-HT含量。实验结果显示,孤养结合慢-急性不可预见性应激可造成大鼠结肠中CRF,TPH1 mRNA表达以及5-HT含量升高(P0.05),缬草醛各剂量组中CRF,TPH1 mRNA及5-HT含量较模型组明显下降(P0.05)。实验结果表明,肠易激综合征能够导致结肠中CRF,TPH1 mRNA的表达以及5-HT的含量升高,而缬草醛通过降低结肠中CRF,TPH1 mRNA的表达以及5-HT的含量,而改善胃肠道的相关症状。     

眼针对肠易激综合征模型大鼠结肠组织5-羟色胺重摄取转运体表达的影响

目的:观察眼针对肠易激综合征(IBS)模型大鼠结肠组织5一羟色胺重摄取转运体(SERT)表达的影响,探讨眼针治疗IBS的作用机制.方法:雄性Wistar大鼠30只,随机分成对照组、IBS模型组、眼针组,每组10只.采用束缚刺激与应激刺激相结合的方法建立IBS动物模型,选取"下焦区""大肠区""肝区"及"脾区"行眼针干预...     

百合知母汤总皂苷调节5-HT功能治疗抑郁症的作用机制

目的:分析百合知母汤总皂苷(SBZ)调节5-羟色胺(5-HT)功能治疗抑郁症状的作用机制,同时探讨百合知母的药对优势。方法:SD大鼠采用孤养配合慢性不可预见性温和刺激诱发抑郁模型,分为抑郁症模型组,百合总皂苷组(100 mg·kg~(-1)),知母总皂苷组(220 mg·kg~(-1)),SBZ组(240 mg·kg~(-1)),百忧解组(FLU,10 mg·kg~(-1)),另设正常组,每组11只;正常组和抑郁症模型组给予等量0.5%阿拉伯树胶溶液,其他组别给予相应剂量的药物。测量各组大鼠强迫游泳不动时间,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血液、大脑5-HT含量;免疫荧光检测大脑皮层及海马5-HT1a阳性表达。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马5-HT合成基因色氨酸羟化酶1(TPH1),突触囊泡单胺转运体(SLC18A1),突触相关蛋白-25(SNAP25)mRNA水平以及5-HT1a受体信号传导下游调节基因RGS19在血液以及下丘脑的mRNA表达。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测5-HT转运体蛋白(SERT)在海马和下丘脑表达水平。结果:与模型组比较,SBZ明显降低抑郁大鼠强迫游泳不动时间(P0.05),上调血液以及大脑5-HT含量(P0.05),上调大脑皮层以及海马5-HT1a阳性表达(P0.05,P0.01)。SBZ上调海马TPH1,SLC18A1和SNAP25 mRNA表达,同时上调血液、下丘脑组织RGS19 mRNA表达(P0.05,P0.01)。SBZ下调海马和下丘脑SERT蛋白表达(P0.01)。结论:SBZ激活5-HT合成基因TPH1表达,同时下调SERT表达抑制5-HT重摄取,增加中枢5-HT含量;上调5-HT1a受体及其下游RGS19基因表达调节受体功能及其信号传递;同时SBZ通过上调SLC18A1和SNAP25表达改善神经突触递质传递能力,最终达到抗抑郁的效果。SBZ抗抑郁药效与百合总皂苷、知母总皂苷对比具有显著优势。     

基于5-羟色胺信号通路探讨艾灸治疗腹泻型肠易激综合征的机制

目的:观察艾灸对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠内脏敏感性、稀便率、结肠组织中5-羟色胺(5-HT)信号通路相关分子表达的影响,探讨艾灸治疗IBS-D的机制。方法:健康雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组和艾灸组,每组10只。采用慢性束缚联合番泻叶灌胃法建立IBS-D大鼠模型。艾灸组艾灸大鼠"天枢""上巨虚",每天1次,每次30 min,共干预7 d。干预结束后,观察各组大鼠稀便率和直肠扩张所引起腹部回缩反射的最小容量阈值,酶联免疫吸附法检测结肠中5-HT含量,荧光定量PCR法检测结肠组织中色氨酸羟化酶1(TPH1)、5-HT转运体(SERT)和5-羟色胺受体3(5-HT3R)的mRNA表达量,Western blot法检测结肠组织中TPH1、SERT和5-HT3R的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组腹部回缩反射的最小容量阈值明显下降(P0.01),稀便率、结肠中5-HT含量及TPH1、5-HT3R的蛋白和mRNA表达量明显升高(P0.01),SERT的蛋白和mRNA表达量明显降低(P0.01)。与模型组比较,艾灸组腹部回缩反射的最小容量阈值明显升高(P0.01),稀便率、结肠中5-HT含量及结肠组织中TPH1、5-HT3R的蛋白和mRNA表达量均明显降低(P0.01),SERT的蛋白和mRNA表达量明显升高(P0.01)。结论:艾灸"天枢""上巨虚"可能是通过对IBS-D大鼠结肠组织中5-HT信号通路的多靶点协同作用来治疗IBS-D。     

温和灸对IBS小鼠结肠Trp-kyn/5-HT代谢的调控机制研究

目的 观察温和灸干预对肠易激综合征模型小鼠结肠组织Trp-Kyn/5-HT限速酶表达及相关代谢物含量的影响,阐释艾灸治疗相关机制。方法 雄性清洁级C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、1-MT组、PCPA组,采用AWR评价小鼠内脏高敏感状态,采用LC-MS/MS法、免疫组织化学法及Real Time PCR法分别检测小鼠结肠组织Trp-Kyn/5-HT代谢物含量、Trp-Kyn/5-HT代谢限速酶IDO1、TPH1蛋白及m RNA表达。结果 与正常组相比,模型组小鼠30 mm Hg下AWR评分增高（P <0.05）,结肠组织TPH1、IDO1蛋白及m RNA表达显著增高（P <0.05）,5-HT含量及Kyn/Trp比值显著升高（P <0.05）。与模型组相比,艾灸组和1-MT组小鼠结肠组织IDO1蛋白表达明显下调（P <0.05）,艾灸组和PCPA组小鼠结肠组织TPH1蛋白明显下调（P <0.05）;1-MT组小鼠结肠组织IDO1 mRNA表达明显降低（P <0.05）,PCPA组小鼠结肠组织TPH1 mRNA表达明显降低（P <...     

慢性束缚应激对大鼠行为学和杏仁核5-HT、5-HIAA 含量的影响及加味甘麦大枣汤的干预

目的：探讨慢性束缚应激对大鼠在旷场迷宫中的行为学参数和大脑杏仁核部位5-羟色胺（5-HT）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）含量的影响,以及加味甘麦大枣汤的干预作用。方法：采用经典的慢性束缚应激的实验方法,复制大鼠慢性应激的模型,然后记录大鼠在旷场迷宫中的行为学参数;分离大鼠大脑杏仁核部位,采用酶联免疫吸附法测定其中5-HT、5-HIAA 的浓度,进而推算出慢性束缚应激对杏仁核部位5-HIAA/5-HT 比值的影响,并探究加味甘麦大枣汤对其的干预作用。结果：实验结果表明,与空白组相比,模型组大鼠在穿格数、直立次数和理毛次数这三个行为学参数上明显减少（P ＜0．05）,而排便次数这个参数则显著增加（P ＜0．05）;杏仁核部位5-HT、5-HIAA 含量以及5-HIAA/5-HT 比值明显减小（P ＜0．05）。与模型组相比,给药组大鼠在穿格数和理毛次数这两个指标上显著增加（P ＜0．05）,排便次数明显减少（P ＜0．05）;在直立次数这个指标上虽有增加的趋势,但无统计学意义（P ＞0．05）。杏仁核部位5-HT、5-HIAA 的含量显著升高（P ＜0．05）,虽然5-HIAA/5-HT 的比值有升高的趋势,但是无统计学上的差异（P ＞0．05）。结论：慢性束缚应激使大鼠在旷场迷宫中的各行为学参数明显改变,使大鼠杏仁核部位5-HT 和其代谢产物的含量以及5-HT 能神经系统的兴奋性降低。中药复方加味甘麦大枣汤能明显对抗慢性束缚应激对大鼠造成的影响。     

A representative prescription for emotional disease,Ding-Zhi-Xiao-Wan restores 5-HT system deficit through interfering the synthesis and transshipment in chronic mild stress-induced depressive rats

Ethnopharmacological relevance

Ding-Zhi-Xiao-Wan (DZ, also known as Kai-Xin-San) is a famous traditional Chinese medicine used for the treatment of emotional disease. Previously, we have found that in a variety of animal models of depression (such as tail suspension model, model of chronic fatigue and forced swimming model) DZ demonstrated significant antidepressant behavior and promoted the production of 5-hydroxytryptamine (5-HT). However, the mechanisms of 5-HT regulation are still unclear. Therefore, the current study is designed to further investigate the antidepressant effect of DZ by observing its influence on 5-HT synthesis, metabolism, transport and other key links, so as to clarify the molecular mechanism of its 5-HT regulation.

Materials and methods

Solitary rising combined with the chronic unpredictable mild stress (CMS) was used to establish the rat model of depression. The rats were given DZ for 3 weeks, the behavior change and the following items in hippocampus and prefrontal cortex were detected simultaneously: 5-HT, 5-hydroxyindoleacetic acid (5-HIAA), tryptophan hydroxylase (TPH), aromatic amino acid decarboxylase (AADC), monoamine oxidase (MAO) and 5-HT transporter (5-HTT) were observed.

Results

Our results showed that treatment with the DZ significantly improved the behavior and simultaneously increased the 5-HT level in the hippocampus, prefrontal cortex tissues and hippocampus extracellular of depressive rats. In future studies revealed that DZ could significantly increase the protein and mRNA expression of the key enzymes TPH during the 5-HT synthesis process in the hippocampus and prefrontal cortex of the depressed rats, and suppress the expression of 5-HTT protein and mRNA at the same time. But it had no effects on MAO-A and MAO-B activities.

Conclusion

We believe that antidepressant effect of DZ is caused by the increase of 5-HT synthesis and reduction of 5-HT re-uptake, and eventually increase the content of 5-HT in the brain and the synaptic gaps.     

疏肝调神针法针刺对睡眠剥夺模型大鼠神经递质的影响

目的:探讨疏肝调神针法针刺对睡眠剥夺大鼠神经递质的影响。方法:采用改良小平台水环境间断剥夺睡眠法复制失眠大鼠模型。将Wistar大鼠分为正常组、模型组、针刺组、西药组,针刺组分别针刺相应穴位,每次20 min,每日1次,共治疗7 d。西药组腹腔注射地西泮。观察各组大鼠一般状况,检测各组大鼠脑组织5-羟色胺(5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、氨基丁酸(GABA)的含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠的皮质、丘脑内的5-HT 5-HIAA、GABA含量显著降低,DA、NE含量上升,与正常组相比差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,针刺组和西药组大鼠的脑组织5-HT、5-HIAA及GABA含量上升,NE含量降低,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:疏肝调神针法针刺可能是通过增加了脑内的5-HT合成及代谢水平,增加GABA的含量,降低NE含量,从而改善睡眠剥夺大鼠失眠症状。     

针刺镇痛中α和β受体的作用及其对脑内5—羟色胺代谢的影响

<正> 据报道,针刺镇痛时脑内去甲肾上腺素(NE)的含量明显降低;损毁 NE 能神经元胞体密集分布的蓝斑或上行途径,或者用双硫醒等抑制 NE 合成以降低脑内 NE 含量,均可增强针刺镇痛;刺激蓝斑或注射 NE 前体二羟基苯丝氨酸使脑内 NE 含量增加时,可对抗针刺