五鹤续断18S rRNA基因序列的分析

目的 研究中药五鹤续断叶18S rRNA基因的序列特征,为五鹤续断分子鉴定提供分子依据.方法 采用PCR直接测序技术测定五鹤续断的18S rRNA基因核苷酸序列,并分析其序列组成.结果 通过对五鹤续断Dipsacus asperoides C.Y.cheng et T.M.Ai 叶的18S rRNA基因序列进行测序,获得了五鹤续断18S rRNA基因序列特征.结论 DNA测序技术可作为五鹤续断基原鉴定准确而有效的分子鉴定方法,也可为五鹤续断分子鉴定提供基础性资料.     

市售鹿茸片基因组DNA提取方法的比较

目的建立一种稳定高效获得鹿茸片DNA基因组的提取方法,为相似形态中药总DNA提取奠定基础,便于应用分子生物学进行药材鉴定。方法将乌鲁木齐市售鹿茸饮片选取3份为材料,通过两种试剂盒和CTAB三种不同方法提取,提取的DNA再进行琼脂糖凝胶电泳法、紫外分光光度法进行浓度和纯度检测。结果 3种方法均可以从市售鹿茸饮片中提取到基因组DNA,但天根组织提取试剂盒得到的基因组DNA的纯度和浓度最高,提取效果最佳;CTAB法提取效果相对最差。结论天根组织提取试剂盒基因组DNA提取方法操作简便、稳定、高效,提取的DNA效果较好,纯度和浓度检查均合格。     

忍冬干叶基因组DNA提取方法的研究

目的：从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取高质量的基因组DNA。方法：分别采用常规CTAB法与改良CTAB法提取干叶的DNA，通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、酶切检测其质量，并与鲜叶的提取效果比较。结果：改良CTAB法所得DNA优于常规CTAB法，电泳条带清晰，完整性好，纯度高，能被EcoRⅠ完全酶切。从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取的DNA质量与鲜叶无明显差异，且产率更高。结论：改良CTAB法适合忍冬干叶基因组DNA的提取。     

中麻黄基因组DNA不同提取方法的比较

目的:比较不同DNA提取方法,选择最适于中麻黄基因组的方法.方法:采用改良CTAB,SDS法、试剂盒法提取中麻黄基因组DNA;用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度法检测所得总DNA的得率和纯度,并进行ISSR-PCR扩增检测.结果:3种方法均可从新鲜中麻黄中提取出产量较高的基因组DNA,但其中改良CTAB法提取的总DNA纯度高,质量好,扩增产物的电泳条带也较明显;SDS法和试剂盒法提取的总DNA质量差,不适用于下游分子生物学实验.结论:改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法为中麻黄基因组DNA提取的最佳方法,该方法提取的基因组DNA适用于中麻黄基因组PCR扩增和其他分子生物学研究.     

道地药材五鹤续断基因组脱氧核糖核酸提取方法的改进

目的 为研究道地药材五鹤续断的遗传多样性、种类鉴定和基因指纹图谱的构建等提供基本保证.方法 以中药材五鹤续断药源植物的鲜嫩叶片为材料,采用CTAB法并加以改进从中提取出基因组脱氧核糖核酸(DNA),并检测其提取效果.结果 使用改进的CTAB法从鲜叶中提取五鹤续断的基因组DNA浓度较高,能满足PCR反应的要求.结论 自行改进的CTAB法提取道地药材五鹤续断基因组DNA效果较好.     

破布木果基因组DNA不同提取方法比较研究

目的采用不同方法对维药破布木果基因组DNA进行提取,为破布木果基因组DNA的研究提供参考。方法采用改良CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)法和改良SDS(十二烷基磺酸钠)法提取破布木果基因组DNA,并采用分光光度法和琼脂糖凝胶电泳技术检测提取DNA的纯度和浓度。结果分光光度法检测结果表明,用改良CTAB法提取的基因组DNA纯度优于改良SDS法,无蛋白质和RNA污染。琼脂糖凝胶电泳结果表明,2种方法提取得到的基因组DNA电泳图谱均有明显的主带出现,但改良SDS法提取的基因组DNA降解较多。结论改良CTAB法可以提取相对较高质量的破布木果基因组DNA。     

塞隆骨原动物高原鼢鼠核基因18S rRNA序列测定与分析

目的 :测定仓鼠科动物高原鼢鼠Myospalaxbaileyi的核rDNA基因序列 ,为塞隆骨正品基原检定提供分子依据。方法 :采用PCR直接测序技术测定高原鼢鼠 18SrRNA基因核苷酸序列并作序列特征分析。结果 :高原鼢鼠的 18SrRNA序列长度为 185 1bp。根据排序比较 ,高原鼢鼠与 2种鼠科动物间的DNA序列同源性为 72 .0 4 %～ 72 .18%。结论 :通过基因序列分析 ,DNA测序技术可成为塞隆骨正品基原检定的准确有效手段     

中草药干品和鲜品基因组总DNA提取及质量比较研究

目的 探讨中草药干品和鲜品总DNA的提取方法,并比较干、鲜品总DNA质量之间的差别,为后续研究奠定基础.方法 分别采用SDS法和改良的CTAB法提取6种中草药干品和鲜品总DNA,并对其进行核酸含量测定、电泳检测和酶切反应检测. 结果改良CTAB法提取的DNA质量要高于SDS法,在干品和鲜品样品间,干品提取的DNA质量要高于鲜品.利用CTAB法提取鲜品和干品的各6种DNA样品,进行酶切反应得到了清晰的酶切条带.结论 改良的CTAB法能够获得高质量的中草药总DNA,且该方法得到的干品DNA比鲜品DNA质量更高,酶切验证二者都可以用于进一步的实验分析.     

荭草DNA提取方法实验研究

目的利用不同方法对荭草DNA提取,比较提取质量的差异,为研究药材的遗传多样性、种类鉴定和基因指纹图谱的构建等提供优质基础。方法采用改进的CTAB法和SDS法提取荭草叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法测定样品OD260/OD280的比值,检测所提DNA的纯度和质量。结果采用CTAB法提取的荭草基因组DNA样品的纯度和浓度均高于SDS法,其DNA的OD260/OD280值为1.801～1.993,CTAB法所提的DNA泳带分布较集中,无拖尾现象,其DNA浓度能够满足RAPD、SSR/ISSR扩增模板的需求。结论改良CTAB法是提取荭草基因组DNA的最佳方法。     

改进CTAB法提取红豆杉毛状根DNA

目的:寻求提取高质量红豆杉毛状根基因组DNA的方法。方法:采用改进CTAB法提取发根农杆菌R1000诱导的红豆杉毛状根的基因组DNA,进行紫外分光检测、电泳分析及特异PCR扩增。结果:提取的DNA质量较好,纯度较高,可以满足进一步实验的要求。结论:运用改进CTAB法提取红豆杉毛状根基因组DNA,比传统方法更好地减少了基因组DNA中多糖、酚及次生代谢物的污染,不失为一种较好的提取方法。     

川党参药材质量标准研究

目的：对川党参主要产地的药材样品进行分析研究,建立川党参药材质量标准。方法：HPLC法测定党参炔苷含量,比色法测定党参多糖、川党参总皂苷,原子吸收光谱法测定川党参药材中As、Pb、Hg、Cd、Cu 含量,气相色谱法测定BHC、DDT,其余检查项目参照《中国药典》收录方法测定。结果：川党参药材检查项水分、总灰分、酸不溶灰性分、醇溶性浸出物含量范围与均值分别是6.0%~9.4%、7.82%,2.01%~7.72%、4.62%,0.23%~3.65%、1.52%,51.74%~70.02%、61.03%;党参炔苷、党参多糖和党参总皂苷的含量范围与均值分别是0.44~2.4 mg·g-1、1.121 mg·g-1,13.85%~38.14%、21.67%,7.92~28.76 mg·g-1、11.27 mg·g-1。结论：川党参药材的水分不得高于8.7%,总灰分不得过6.5%,酸不溶性灰分不得过2.5%,醇溶性浸出物（热浸法）不得少于55.0%,党参炔苷不少于0.53 mg·g-1,党参多糖不得少于14.7%,党参总皂苷不得少于7.3 mg·g-1;重金属和有害元素不得超过“药用植物及制剂外经贸绿色行业标准（WM/T2-2004）”,BHC 和DDT 均不得检出。     

川党参药材质量化学成分多指标综合评价研究

目的：探讨建立川党参药材质量的化学成分多指标评价方法。方法：权重分配按客观赋权法计算。TOPSIS评价川党参多指标的质量。结果：四种赋权方法的评价结果基本一致。结论：多指标综合评价与主成分聚类分析、遗传多样性分析和HPLC指纹图谱分析结果一致,并具有可量化的优点。可用于药材质量多指标评价。     

川党参药材质量化学成分多指标综合评价研究

目的：探讨建立川党参药材质量的化学成分多指标评价方法。方法：权重分配按客观赋权法计算。TOPSIS评价川党参多指标的质量。结果：四种赋权方法的评价结果基本一致。结论：多指标综合评价与主成分聚类分析、遗传多样性分析和HPLC指纹图谱分析结果一致,并具有可量化的优点,可用于药材质量多指标评价。     

施肥对川党参产量和质量的影响研究

目的：研究施肥对川党参产量和质量的影响。方法：采用单因素和正交试验进行田间试验,田间统计产量,HPLC测定党参炔苷含量、UV测定党参多糖含量。结果：在单因素试验中,有机肥以5900kg～7900kg/667m2、尿素28.5kg/667m2、磷肥36kg/～47.5kg/667m2、钾肥21kg～28.5kg/667m2,川党参药材产量高;正交试验以处理组合,氮肥24kg/667m2、磷肥40kg/667m2、钾肥16kg/667m2、栽培密度55560株/667m2产量最高,方差分析表明,氮肥、磷肥、钾肥、氮磷互作、氮钾互作及磷钾互作对川党参产量均有显著影响;党参炔苷、党参多糖在施肥水平处理中差异不显著,磷肥能显著提高党参炔苷含量。结论：不同种类肥料之间存在相互作用,合理的配合施肥能提高川党参的产量和质量。     

川党参的高效液相色谱指纹图谱研究

 目的利用HPLC-DAD方法,研究川党参药材的HPLC色谱指纹图谱,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。方法色谱条件Agilent ZORBAX SB-C₁₈色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);乙腈-0.5%醋酸水溶液为流动相进行二元梯度洗脱;柱温30℃;检测波长268nm;流速1mL·min^-1。以党参炔苷为参照物分析了19批不同产地的川党参,采用药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A进行评价,建立了共有模式,并以相关系数评价指纹的相似性。结果19批川党参样品HPLC指纹图谱的相似度都在80%以上,精密度、稳定性、重复性实验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均<3%,可以明显区别川党参跟药典收载其他品种。结论本方法操作简便,结果稳定可靠,该法可以作为川党参药材的鉴别和质量控制。     

不同农艺措施对川党参产量的影响

目的:量化和优化川党参高产的农艺措施。方法:通过川党参大田栽培,设置不同的农艺措施,测定其产量。结果:育苗移栽,冬季移栽,密度20cm×6cm,搭架、打叶、摘花的植株调整方式,FM6施肥方式下川党参的产量最高。结论:农艺措施对川党参产量影响较大,可进一步量化和优化川党参高产的农艺措施。     

Molecular Analysis of edicinally-Used Chinese and Japanese Curcuma Based on 18S rRNA Gene and trnK Gene Sequences

ＧｅｎｕｓＣｕｒｃｕｍａｏｆｔｈｅｆａｍｉｌｙＺｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆａｂｏｕｔ 70ｓｐｅｃｉｅｓｉｎｔｈｅｗｏｒｌｄ ,ｏｆｗｈｉｃｈｍｏｒｅｔｈａｎｔｅｎａｒｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｏｒｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｉｎＣｈｉｎａ[1] ａｎｄＪａｐａｎ[2 ] .ＳｅｖｅｒａｌｈｅｒｂａｌｄｒｕｇｓｕｓｅｄｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙａｒｅｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｔｈｅＣｕｒｃｕｍａｓｐｅｃｉｅｓ.ＩｎＣｈｉｎａ ,“Ｊｉａｎｇｈｕａｎｇ”ｆｒｏｍｔｈｅｒｈｉ ｚｏｍｅｏｆＣｕｒｃｕｍａｌｏｎｇａ ,“Ｐｉａｎｊｉａｎｇｈｕａｎｇ”ｆｒｏｍｔｈｅｓｌｉｃｅｄｒｈｉｚｏｍｅｏｆＣ .ｗｅｎｙｕｊｉｎ ,“Ｅｚｈｕ”ｆｒｏｍｔｈｅｒｈｉｚｏｍｅｓｏｆＣ .ｐｈａｅｏｃａｕｌｉｓ,Ｃ .ｗｅｎｙｕｊｉｎｏｒＣ .ｋｗａｎｇｓｉｅｎｓｉｓ,ａｎｄ“Ｙｕｊｉｎ”ｆｒｏｍｔｈｅｔｕｂｅｒｓｏｆＣ .ｗｅｎｙｕｊｉｎ ,Ｃ .ｌｏｎｇａ ,Ｃ .ｋｗａｎｇｓｉｅｎｓｉｓｏｒＣ .ｐｈａｅｏｃａｕｌｉｓａｒｅｉｎｕｓｅ .[3] ＩｎＪａｐａｎ ,“Ｇａｊｕｔｓｕ”ｆｒｏｍｔｈｅｒｈｉｚｏｍｅｏｆＣ .ｚｅｄｏａｒ...     

改良CTAB法提取新疆一枝蒿干叶基因组DNA

目的:从自然干燥的新疆一枝蒿中提取高质量的基因组DNA,为该药材的分子生物学研究提供参考。方法:采用2种改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法与常规CTAB法提取新疆一枝蒿中基因组DNA,通过加适量聚乙烯吡咯烷酮(PVP)研磨样本,在核裂解前用细胞核裂解液(STE)洗涤多酚类和多糖类物质,利用95%乙醇室温沉淀DNA等措施。改良CTAB法2与1相比不用液氮研磨样本。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和相关序列扩增多态性(SRAP)检测提取DNA的质量。结果:2种改良CTAB法所得DNA质量均优于常规CTAB法,DNA完整性较好,A260 nm/A280 nm在1.8~2.0,多糖类杂质去除较为干净。SRAP检验条带清晰、多态性良好。结论:2种改良CTAB法均适用于高质量新疆一枝蒿干叶基因组DNA的提取,得到的DNA纯度和完整性均较理想,可为后续分子生物学研究提供良好模版。     

中药三七根核糖体18S rRNA基因的序列分析

目的：研究中药三七根核糖体18SrRNA基因的序列特征。方法：根据模式植物拟南芥的18SrRNA的基因序列设计引物,对三七根的18SrRNA基因序列进行基因克隆、测序,并与模式植物拟南芥Arabidopsis thaliana以及人参属植物喜马拉雅人参Panax pseudoginseng Wall subsp.himalaicus var.angustifolius的相应序列进行比较。结果：通过对产于广西靖西的三七Panax pseudoginseng Wall.var.notoginseng(Bukill)Hoo et Tseng根的18SrRNA基因进行克隆测序,获得了三七根的18SrRNA基因的部分序列特征。结论：利用已完成全基因组序列测定的模式植物拟南芥的分子生物学信息来研究中药植物基源的基因组序列,将有助于加快中药植物基源的分子生物学研究进程。