MAPK8基因在小鼠源性3T3-Ll脂肪细胞诱导分化中表达水平的变化

[目的]观察小鼠源性3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中MAPK8基因表达水平的变化,探讨MAPK8基因与肥胖发生之间的关系.[方法]体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟的不同时段,采用RT-PCR技术检测脂肪细胞中MAPK8基因的mRNA表达水平.[结果]MAPK8基因高表达于3T3-L1脂肪前体细胞中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐下调.MAPK8基因表达水平除在诱导分化前至第4 d、第2～5 d、第6～10 d时段内差异无显著性外,其余各时段间差异均有显著性(P＜0.05).[结论]MAPK8基因与肥胖发生有关,在3T3-L1细胞分化过程中表达逐渐下调可能有利于脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚.     

MCHR1基因沉默对3T3-L1细胞诱导分化的影响

摘要:目的　运用RNA干扰技术沉默黑色素浓集激素受体1（Melanin-Concentrating Hormone Receptor 1,MCHR1）基因的表达,观察其对3T3-L1细胞诱导分化的影响,为肥胖症的基因治疗提供新思路。方法　用含绿色荧光蛋白的重组载体sh-MCHR1,通过脂质体法转染3T3-L1细胞。细胞诱导分化的同时用黑色素浓集激素（Melanin-Concentrating Hormone,MCH）干预,并在不同时点对脂滴进行油红O染色。采用RT-PCR以及Western blot分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ,PPAR γ）、CCAAT/增强子结合蛋白-α（CCAAT/ Enhancer-Binding Protein α,C/EBPα）和脂肪酸结合蛋白2（adipocyte protein 2,ap2）mRNA和蛋白的表达。结果　重组载体sh-MCHR1成功转染;与阴性转染组相比,sh-MCHR1转染组d 10后,油红O 染液相对OD510值显著下降（P＜0.05）;PPARγ、C/EBPα和ap2 mRNA的表达量分别在d 6、d 8和d 8后显著下降（P＜0.05）;3者蛋白的表达量均在d 8后显著下降（P＜0.05）。结论　shRNA沉默MCHR1基因可减缓3T3-L1细胞诱导分化,其可能通过抑制PPARγ、C/EBPα和ap2的表达而实现。     

沉默PLIN1基因与异丙肾上腺素对3T3-L1脂肪细胞脂解的机制探究

目的 研究沉默PLIN1基因与异丙肾上腺素(ISO)联合作用对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响及机制探讨。方法 sh-PLIN1干扰载体成功转染后,以浓度为10μM的ISO处理3T3-L1脂肪细胞。采用油红O进行脂滴染色,观察脂滴形态;采用酶学方法测定甘油三酯(TG)和甘油含量,了解细胞脂解情况;采用Western-Blot法检测脂肪细胞中围脂滴蛋白A(PLIN1A)、脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)和其磷酸化蛋白(p-HSL)的表达水平;双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞中环磷酸腺苷(cAMP)和蛋白激酶A(PKA)的浓度。结果 与空白组比较,ISO+sh-PLIN1组和ISO组脂滴变小,TG含量降低,甘油含量升高,有统计学意义(P<0.01)。同时,ISO+sh-PLIN1组和 sh-PLIN1组中ATGL 表达量均升高,有统计学意义(P<0.05)。ISO+sh-PLIN1转染组和ISO组中HSL、p-HSL、cAMP及 PKA 的表达量均上调(P<0.05)。结论 ISO促进脂解作用可能是cAMP/PKA通路介导,增加HSL和p-HSL的表达量来实现,而cAMP/PKA信号通路不能介导沉默PLIN1的促脂解作用。     

芦丁抑制3T3-L1前脂肪细胞分化并促进米色脂肪细胞形成

  目的  探讨芦丁对米色脂肪细胞形成的影响。  方法  用不同浓度芦丁处理3T3-L1前脂肪细胞;细胞计数盒（CCK8）检测不同浓度芦丁对细胞活性影响,油红O染色观察脂滴大小;Western blot检测过氧化物酶增殖物激活受体 – γ（PPAR-γ）、aP2及解偶联蛋白1（UCP1）表达;RT-qPCR检测UCP1、PRDM16、Dio2表达;细胞免疫荧光检测线粒体变化。  结果  芦丁在0～250 μmol/L范围内对细胞活性无明显影响,且以药物依赖性方式减少脂滴生成;与对照组[aP2（1.12 ± 0.03）]、[PPAR-γ（0.87 ± 0.02）]比较,50、100、250 μmol/L芦丁使aP2[分别为（0.87 ± 0.03）、（0.64 ± 0.01）、（0.64 ± 0.05）]、PPAR-γ[分别为（0.73 ± 0.02）、（0.46 ± 0.02）、（0.43 ± 0.05）]蛋白表达降低,使UCP1蛋白表达[分别为（0.58 ± 0.03）、（0.42 ± 0.02）、（0.34 ± 0.01）]增加;与对照组比较,50 μmol/L芦丁可使UCP1、PRDM16、Dio2表达[分别为（7.02 ± 0.24）、（2.09 ± 0.06）、（10.40 ± 0.93）]升高;细胞免疫荧光显示,3T3-L1前脂肪细胞内线粒体含量增加。  结论  芦丁可减少3T3-L1前脂肪细胞脂滴生成,并促进米色脂肪细胞形成。     

游离脂肪酸对3T3-L1细胞分化及insig2 mRNA表达的影响

目的 观察游离脂肪酸对3T3-L1细胞分化及insig2 mRNA基因表达的影响,进一步了解影响3T3-L1细胞分化成熟及insig2表达的因素,探讨insig2基因在脂肪细胞分化与代谢中的作用.方法 将3T3-L1细胞分为高脂组与对照组,分别置于低糖高脂与低糖环境中分化培养12 d,油红O染色计算染色阳性细胞面积,RT-PCR法测定insig2、ap2 mRNA的表达.结果 分化培养12 d后,油红O染色显示两组细胞均得到明显分化,但高脂组油红O染色阳性细胞面积较对照组明显升高(P<0.05).分化后,两组细胞ap2、insig2表达水平均较分化前明显升高(P>0.05),且高脂组较对照组上调明显(P<0.05). 结论 游离脂肪酸可促进3T3-L1细胞分化成熟与insig2表达;insig2在细胞内的表达水平可能与脂肪细胞成熟及分化程度相关.     

染料木黄酮对3T3-L1前脂肪细胞分化的作用及其机制研究

目的观察染料木黄酮(genistein,GEN)对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,探讨GEN抑制3T3-L1细胞分化的作用及分子机制。方法用含1-甲基-3-异丁基黄嘌呤、地塞米松和胰岛素的培养液(MDI)诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,同时用GEN或p38抑制剂SB203580干预。作用6d后,用油红染色实验观察脂肪形成情况;检测细胞培养液中非酯化脂肪酸(NEFA)、甘油三酯(TG)的含量;用Western blotting技术检测细胞中脂肪酸合酶(FAS)的蛋白表达。用GEN预处理30min后,用胰岛素刺激3T3-L1细胞,检测磷酸化p38MAPK(p-p38)的蛋白表达。结果GEN可以有效抑制3T3-L1细胞的脂肪形成,降低培养液中NEFA、TG的含量。胰岛素刺激后,3T3-L1细胞中p-p38的表达迅速增强,并在5min时达到高峰,GEN可以有效降低p-p38的表达。GEN、SB203580均能降低FAS的蛋白表达。结论染料木黄酮能有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的脂肪分化,其机制是通过p38途径对FAS的抑制发挥作用。     

线粒体介导番茄红素改善LPS诱导的3T3-L1前脂肪细胞胰岛素信号转导紊乱分子机制研究

目的 探究番茄红素是否可以抑制脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的3T3-L1前脂肪细胞炎症反应、氧化应激以及胰岛素信号转导紊乱,明确线粒体在其中的介导机制。方法 利用LPS诱导3T3-L1前脂肪细胞发生炎症反应,并通过番茄红素进行干预,之后采用H2DCFDA染色、JC-1染色以及Western blots分析番茄红素对LPS诱导的细胞炎症、活性氧（reactive oxygen species, ROS）积累、胰岛素信号紊乱以及线粒体损伤的改善作用;之后利用寡霉素预先孵育细胞,以抑制线粒体功能,分析线粒体是否可介导番茄红素改善细胞胰岛素信号。结果与LPS组相比,番茄红素可以显著抑制MAPKs信号通路的激活、下调促炎因子COX-2表达,改善细胞炎症反应;可上调抗氧化酶HO-1及NQO-1表达,抑制LPS诱导的ROS积累;番茄红素还促进了IRS-1 Tyr612位点磷酸化及其下游靶基因AKT、GSK3β磷酸化,改善了细胞胰岛素信号转导;且通过增强线粒体膜电势以及促进线粒体呼吸链复合物I-III表达,改善了线粒体功能;用寡霉素预先孵育细胞,发现番茄红素对IRS-1...     

DHA和EPA调节3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗及糖脂代谢的作用差异

目的 探讨n-3多不饱和脂肪酸DHA和EPA调节3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（insulin resistance,IR及糖脂代谢的剂量反应关系和作用差异。方法：用10ng/mlTNF-α处理分化成熟的3T3-L1脂肪细胞48h,诱导IR。使用Western blot检测胰岛素信号通路,葡萄糖氧化酶法(GOD-POD)法测定糖摄取,验证诱导IR效果。建模成功后,采用25、50、100、200、400μmol/L的DHA或EPA与TNF-α联合干预24h,同时设立对照组。干预后使用GOD-POD检测糖摄取量,油红O染色测定胞内甘油三酯（triglyceride,TG）,PCR测定固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合酶（FAS）、脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)mRNA表达,Western blot检测胰岛素信号通路蛋白表达。结果：TNF-α损伤胰岛素信号通路,降低胰岛素敏感性,IR建模成功。在糖代谢方面,25～400μmol/L的DHA和EPA均能改善TNF-α损伤的糖摄取,其中100和200μmol/L的效果最...     

DHA诱导3T3-L1前脂肪细胞G2/M期阻滞及ERK1/2通路的作用

目的探讨ERK1/2丝裂素活化蛋白激酶信号转导途径在DHA抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖中的作用。方法四唑盐比色法(MTT法)检测DHA处理24h对体外培养的3T3-L1前脂肪细胞活力的影响,流式细胞术检测细胞周期,蛋白免疫印迹法检测ERK1/2、p-ERK1/2、p21水平。结果 MTT结果显示DHA干预24h可剂量依赖性降低3T3-L1前脂肪细胞的活力,抑制增殖,IC50为100μmol/L;流式细胞术结果表明,DHA可将3T3-L1前脂肪细胞阻滞在G2/M期;蛋白免疫印迹发现,DHA可明显升高3T3-L1前脂肪细胞ERK1/2磷酸化水平、增强p21蛋白表达。结论 DHA可能通过活化ERK1/2通路诱导G2/M期阻滞,进而抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖。     

二十二碳六烯酸对3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA的影响及其机制

目的探讨二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响及其机制。方法不同浓度DHA处理体外培养成熟的3T3-L1脂肪细胞,并选取一定浓度DHA加与不加过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)拮抗剂GW-9662处理脂肪细胞,实时荧光定量PCR分析处理前后脂联素基因和PPARγmRNA表达水平的差异。结果与对照组相比,当DHA浓度为50、100 mol/L时,脂联素表达水平分别增加71.89%、106.23%(P<0.05),随着浓度的增加脂联素表达降低,当DHA浓度达到400 mol/L时,脂联素表达水平最低(P<0.05)。当DHA浓度为100 mol/L时,脂肪细胞PPARγmRNA表达增加70.24%(P<0.05)。与对照组相比,DHA中加GW-9662处理组脂联素和PPARγmRNA表达水平分别降低97.32%、90.90%(P<0.05)。结论在一定浓度范围内,DHA对脂联素表达的影响呈剂量依赖关系,推测DHA可能是通过PPARγ途径调控脂肪细胞的脂联素表达。     

Effects of Panicum miliaceum L. extract on adipogenic transcription factors and fatty acid accumulation in 3T3-L1 adipocytes

The dietary intake of whole grains is known to reduce the incidence of chronic diseases such as obesity, diabetes, cardiovascular disease, and cancer. To investigate whether there are anti-adipogenic activities in various Korean cereals, we assessed water extracts of nine cereals. The results showed that treatment of 3T3-L1 adipocytes with Sorghum bicolor L. Moench, Setaria italica Beauvois, or Panicum miliaceum L. extract significantly inhibited adipocyte differentiation, as determined by measuring oil red-O staining, triglyceride accumulation, and glycerol 3-phosphate dehydrogenase activity. Among the nine cereals, P. miliaceum L. showed the highest anti-adipogenic activity. The effects of P. miliaceum L. on mRNA expression of peroxisome proliferator-activated receptor-γ, sterol regulatory element-binding protein 1, and the CCAAT/enhancer binding protein-α were evaluated, revealing that the extract significantly decreased the expression of these genes in a dose-dependent manner. Moreover, P. miliaceum L. extract changed the ratio of monounsaturated fatty acids to saturated fatty acids in adipocytes, which is related to biological activity and cell characteristics. These results suggest that some cereals efficiently suppress adipogenesis in 3T3-L1 adipocytes. In particular, the effect of P. miliaceum L. on adipocyte differentiation is associated with the downregulation of adipogenic genes and fatty acid accumulation in adipocytes.     

Expression of eotaxin in 3T3-L1 adipocytes and the effects of weight loss in high-fat diet induced obese mice

Eotaxin is an important inflammatory chemokine in eosinophil chemotaxis and activation and, thus, is implicated in asthma. Recently, obesity was associated with an increased prevalence of asthma, but the relationship between obesity and eotaxin expression has only been partially understood in obese mice and human studies. Therefore, we studied the expression patterns of eotaxin in 3T3-L1 preadipocytes/adipocytes to determine whether eotaxin levels are influenced by body weight gain and/or reduction in diet-induced obese mice. First, we investigated eotaxin expression during differentiation in 3T3-L1 adipocytes. Then, we treated 3T3-L1 preadipocytes/adipocytes with tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), eotaxin, interleukin (IL)-4, IL-5, or leptin. To examine the effects of weight loss in high-fat diet induced obese mice, we fed C57BL/6 mice a high-fat diet or a normal diet for 26 weeks. Then, half of the high-fat diet group were fed a normal diet until 30 weeks to reduce weight. Epididymal adipose tissue, visceral adipose tissue, serum, and bronchoalveolar fluid of mice were examined for eotaxin expression. The results showed that eotaxin expression levels increased with adipocyte differentiation and that more eotaxin was expressed when the cells were stimulated with TNF-α, eotaxin, IL-4, IL-5, or leptin. An in vivo study showed that eotaxin levels were reduced in visceral adipose tissues when high-fat diet fed mice underwent weight loss. Taken together, these results indicate a close relationship between eotaxin expression and obesity as well as weight loss, thus, they indirectly show a relation to asthma.     

姜黄素对脂肪细胞脂联素及抵抗素表达影响

目的 探讨姜黄素对3T3-L1脂肪细胞脂联素和抵抗素mRNA表达的影响。方法 在诱导3T3-L1前脂肪细胞分化过程中加入姜黄素,于第6 d收集细胞,或用姜黄素处理分化成熟3T3-L1脂肪细胞,24 h后收集细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测脂肪细胞中脂联素和抵抗素mRNA水平。结果 在3T3-L1前脂肪细胞分化期间,姜黄素2.5,5,10,15和20μmol/L分别使脂联素mRNA表达增强48.7%,25.6%,89.7%,128.2%和207.7%,抵抗素mRNA表达下降了42.3%,35.4%,31.5%,58.3%,33.9%;20μmol/L姜黄素使成熟脂肪细胞脂联素mRNA表达增强203.3%;5,10,20μmol/L的姜黄素分别使抵抗素mRNA的表达降低15.2%,49.0%和55.6%。结论 姜黄素可增强脂肪细胞脂联素mRNA表达,降低抵抗素mRNA表达。