小片段游离胎儿DNA检测Y染色体性别决定区的临床意义

目的研究从早孕妇女外周血中提取小片段游离胎儿DNA检测胎儿Y染色体性别决定区（SRY）的方法,提高PCR检测的特异性和敏感性,评估利用小片段游离胎儿DNA对性连锁遗传病进行无创性产前诊断可行性。方法收集80例孕妇外周血,提取游离的胎儿DNA和提纯小片段游离胎儿DNA,PCR检测SRY基因。结果80例受试者中2种样本敏感性和特异性比较差异有统计学意义。结论可利用孕妇外周血中小片段游离胎儿DNA检测胎儿Y染色体性别决定区,敏感性和特异性优于总游离DNA,可用于孕早期性连锁遗传疾病和单基因突变疾病产前诊断。     

应用聚合酶链反应技术鉴定胎儿性别

应用聚合酶链反应(PCR)技术对Y染色体特异DNA序列进行体外扩增,结果表明可用体外PCR扩增方法检查胎儿绒毛或羊水确定胎儿性别。这种方法快速、准确、简便,对X连锁遗传病的产前诊断具有重要意义。     

用生物素标记Y特异DNA探针进行产前性别诊断

作者以流产绒毛和外周血淋巴细胞DNA为材料,通过Southern印迹杂交和点杂交,考察了用生物素标记Y特异DNA探针PHY2.1和Cos84进行产前性别诊断的可行性。结果表明:PHY2.1可用于Sou-thern或点杂交,而Cos84只可用于Southern杂交进行产前性别诊断。     

DNA的凝胶原位杂交和人类性别鉴定的研究

本文介绍一种经济、简便的凝胶原位 DNA 杂交技术,并应用 Y-特异 DNA 探针作凝胶原位杂交,对3例性分化异常患者进行 DNA 分析,对1例有血友病生育史的孕妇作了胎儿性别鉴定.     

用聚合酶链反应快速诊断胎儿性别

我们用聚合酶链反应(PCR)技术以及Y染色体特异性的引物对绒毛组织的DNA进行基因扩增,用于产前诊断胎儿性别。扩增产物直接用琼脂糖凝胶电泳观察结果,男性胎儿有149bP的特异性扩增带,而女性则无。此种技术较常规的染色体技术简单、快速、准确,临床上可用于性连锁遗传病的辅助诊断。     

孕妇血浆中胎儿DNA的SRY基因检测

目的:探索一种孕期、快速、非创伤性的胎儿性别的产前诊断方法.方法:应用DNA-PCR扩增技术,检测妊娠5～40周的正常孕妇游离在血浆内的无细胞胎儿DNA的SRY基因.结果:90例孕妇血浆中游离DNA检则SRY基因阳性结果32例,其中早孕11例,中孕9例,晚孕12例.最后经绒毛、羊水、脐带血和出生胎儿证实均为男性胎儿,符合率为100%.结论:PCR扩增技术,检测游离在孕妇血浆内的无细胞胎儿DNA能在孕期鉴别胎儿性别,尤其是对早期某些选择性遗传性疾病的非创伤性产前诊断意义重大.     

生物素标记DNA探针测定人性别

白细胞或胎儿绒毛组织染色体DNA经限制酶Hae (?)消化后,用光生物素(photo-biotin)标记人Y染色体特异的3.4 kb DNA片段作探针,进行Southern印迹杂交,并以生物素结合蛋白-碱性磷酸酶体系显示生物素探针杂交信号。结果表明,0.1μg男性DNA可显示清晰的信号,而5μg女性DNA则无信号出现;平行试验证明生物素探针测定人性别的结果与32P标记探针完全一致。提示生物素探针可用于X连锁遗传病、性异常,运动员体检,法医学及异性别骨髓移植方面的性别分析。     

胎儿性别预测Ⅱ——羊水细胞Y染色质和X染色质的观察分析

预测胎儿性别的方法很多,国内鞍钢铁东医院取孕妇绒毛上皮细胞,观察X染色质诊断性别。中国科学院遗传所从孕妇尿液中提取绒毛膜促性腺激素作为抗原,利用微量免疫扩散法预测胎儿性别。夏宏器、浙医组胚教研组、张得雄、李子森等观察孕妇末梢血中性粒细胞突出物“鼓槌”数诊断胎儿性别。国外有取孕妇末梢血培养,观察淋巴细胞核型和Y染色质来鉴定胎儿性别,或直接用孕妇末梢血涂片观察Y染色质     

直接法制备绒毛染色体

产前诊断胎儿染色体的诸方法中,以孕早期绒毛直接法制备染色体较为理想,且已跃为优生学和预防医学的新方向。我室参考《全国绒毛制备染色体技术学习班资料》,于1985年6月12日至10月30日对51例早孕人流绒毛组织取样94份进行方法学探讨和改进,确立两种制备方法。并将10例盲吸绒毛染色体制片行G、C显带制备摸索,亦获得满意带纹。鉴此,产前诊断性别一     

用Y特异DNA探针及简化的DNA凝胶原位杂交技术早期鉴定胎儿性别

胎儿性别的早期鉴定,对X-连锁遗传病的产前诊断具有重要价值。以往沿用细胞遗传学技术鉴定人类性别,性染色体为XY者是男性,XX者是女性。1985年上海市儿童医院医学遗传研究室从国外引进了由人类Y染色体异染色质区重复顺序克隆化的男性特异DNA探针——PY3.4,在上海市长宁区妇产科医院协作下,对16例妊娠8—10周孕妇的胎儿成功地进行了性别鉴定:由孕妇采集绒毛,抽提DNA,用PY     

中国地鼠基因组微卫星富集文库的构建与分析

目的筛选中国地鼠微卫星位点,为中国地鼠种质资源的分类、进化等遗传研究奠定基础。方法中国地鼠基因组DNA经超声打碎,用2%琼脂糖凝胶电泳回收500～1000 bp的DNA片段,与SNX连接头连接,连接产物与生物素标记的14种微卫星探针变性及退火,再通过链亲和素偶联磁珠亲和捕捉,经吸附、洗涤及洗脱,然后以洗脱产物为模板,通过PCR扩增,与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌DH10B,构建中国地鼠微卫星DNA富集文库。结果测序结果发现,微卫星DNA序列的阳性克隆占70.3%。结论中国地鼠微卫星文库的建立和微卫星的筛选将为下一步进行中国地鼠遗传连锁图谱的构建、分子进化和系统发育研究提供大量的微卫星标记。     

应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

目的 利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别.方法 根据已有报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD.采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增.通过分析PCR扩增产物凝胶电泳后的条带数判定禽类性别.结果 PCR扩增产物经琼脂糖电泳分析后,雌性鸭样品扩增出CHD 1-Z和CHD1-W,而雄性鸭样品只出现CHD1-Z.结论 本文建立的方法可作为禽类性别的有效鉴定方法.     

Determination of fetal sex by amplification of Y-chromosome-specific DNA

This paper describes a rapid and highly sensitive method for determination of fetal sex. Y-chromosome-specific sequences as well as Alu-specific sequences were amplified with polymerase chain reaction (PCR). Then fetal sex was determined by comparison of the two amplified DNA sequences. Polymerase chain reaction can be performed on lysed amniotic fluid cells or chorionic villus samples or dried blood spots on filter paper blot without prior DNA extraction. The analysis of the amplified DNA was performed immediately by agarose gel electrophoresis without DNA hybridization with radioactive probe. By using this method, determination of sex was performed on 3 fetuses at risk for DMD, and on 2 fetuses at risk for hemophilia, prenatal detection was confirmed by examination of the neonates.     

早期钩体病患者血清钩体DNA聚合酶链反应和地...

We have detected and analysed the leptospiral DNA in serum of patients with early Leptospirosis from the epidemic area of China by PCR and DNA hybridization with Digoxigenin (Dig)-3-(2'-Spiroadamantane)-4-methoxy-4-(3"-phosphoryloxy)- phenyl-1,2-dioxetane (AMPPD) to develop a sensitive, specific and reliable technique for the early diagnosis of leptospirosis, and full satisfactory results have obtained. Fourteen serum specimens from patients with leptospirosis proven by blood culture and serological test were prepared according to Boom's methods for PCR test, and oligonucleotide primers, named G1 G2, were obtained from a genomic library of leptospira interrogans. PCR amplification with serum specimens was performed. Each cycle of amplification consisted of denaturation at 94 degrees C for 1 min, annealing at 55 degrees C for 1 min and elongation at 72 degrees C for 2 min. Each sample was subjected to 32 cycles. The amplified DNA were separated by electrophoresis with 2% agarose gel and hybridized with the homologous DNA probe labelling with Dig-AMPPD by means of Southern blotting. All of 14 samples revealed the presence of leptospira and the strong signals were visualized with homologous DNA probe hybridization by Southern blotting. Negative and positive controls appeared correctly. The DNA fragment generated from PCR amplification homologically hybridized with the DNA of 16 strains which are from Yasudas' genomic species and represent the different genomic groups of leptospires. The single recognized band (about 400 bps) from 6 out of the 16 strains has come out which are representative of the principal strains in Sichuan, China.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

线粒体脑肌病中线粒体DNA的部分缺失

在2例Kearns－Sayre综合征（KSS）和2例慢性进行性眼外肌麻痹（CPEO）患者的骨骼肌线粒体DNA（mtDNA）中发现存在单一的大片段缺失突变。缺失的长度2．5～5．5kb，突变只发生在部分线粒体DNA中，突变型mtDNA占全部mtDNA的60．5％～84．6％。在10例其它的线粒体脑肌病患者骨骼肌标本和外周血标本及数例正常骨骼肌和胎肝标本的mtDNA中均未发现缺失突变。上述发现支持mtDNA的缺失突变为KSS和CPEO主要病因的观点。     

DNA检测中琼脂糖凝胶重复使用效果

目的：摸索在DNA检测中琼脂糖凝胶多次重复使用的效果。方法：按常规制备琼脂糖凝胶,胶不离框,上样、电泳,电泳后胶连框一起放于饭盒内,盖好盒盖,于4℃冰箱保存。下次使用时保证电泳方向与前次相反,即把胶调转方向加样、电泳。结果：重复使用6~7次,DNA条带仍清晰可见。结论：这是一种简便易行、效率高、节省实验经费并易于推广的好方法。     

固原地区结核分子流行病学的特点

目的　探讨宁夏固原地区结核分子流行病学的特点。方法　提取结核分枝杆菌基因组DNA ,经限制性内切酶PvuⅡ切割、琼脂糖凝胶电泳和Southern转印后 ,用荧光标记的IS6 110DNA序列中 2 45bp探针杂交 ,以核酸化学发光试剂盒探测荧光信号 ,比较各菌株指纹的IS6 110拷贝数和带型 ,分析流行菌株的特点。结果　固原地区流行结核分枝杆菌临床分离株DNA指纹图谱带型相似 ,IS6 110拷贝数较多。结论　固原地区流行的结核分枝杆菌多态性程度较低 ,在基因上具较近的亲缘关系。     

Prader-Willi综合征分子遗传学诊断

目的为临床怀疑Prader-Willi综合征（PWS）的患者建立快速准确的分子诊断方法,有利于早期治疗。方法对门诊以肥胖和智力落后就诊的1例患者根据1993年Holm等提出的临床诊断标准,高度怀疑Prader-Willi综合征,采用盐析法提取基因组DNA并经亚硫酸盐修饰,应用甲基化特异性PCR,扩增产物以琼脂糖凝胶电泳分离。结果正常对照显示父源（P）和母源（M）2条带,而患者显示母源（M）1条带。该患者确诊为Prader-Willi综合征。结论甲基化方法结果与临床诊断吻合度高。在临床高度怀疑PWS时,建议用甲基化方法快速确诊,以使患儿能得到及时治疗。     

一种经济、快速的凝胶DNA回收方法

目的：用明胶海绵吸收法回收DNA片段,并验证该方法能否有效、快速的从电泳后琼脂糖凝胶中回收DNA片段。方法：将明胶海绵剪成楔形,在紫外灯照射下插入含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶中,待海绵完全膨胀后取出,离心收集DNA溶液;并用该法回收的DNA片段进行PCR扩增,检验其回收的DNA质量。结果：明胶海绵吸收法回收DNA样品的得率介于63%～98%,所回收的DNA进行PCR扩增能够获得相应的目的条带。结论：明胶海绵吸收法是一种快速、有效的DNA回收方法。