CNTF对视神经损伤后视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的：研究睫状神经营养因子（CNTF）对视神经损伤后视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡的影响。方法：采用中号显微血管夹建立视神经中度损伤模型后,取左眼作为治疗组,在即时、1、37、d时分别向玻璃体腔内注入2μl（1μg/μl）CNTF溶液;取右眼作为实验对照组,同治疗组在每个时间点向玻璃体腔内注入2μl双蒸水。于伤后1、3、71、4 d时分别做HE染色、原位末端标记法（TUNEL）检测。结果：光镜下观察治疗组细胞形态明显好于实验对照组。TUNEL显示凋亡RGCs数随视神经损伤时间延长而变化（P〈0.05）。伤后1 d,治疗组和实验对照组凋亡RGCs数两组间相比较无统计学意义（P〉0.05）。伤后3、7、14 d时治疗组的凋亡RGCs数明显比实验对照组少（P〈0.05）。结论：玻璃体腔内注射外源性CNTF可以减少RGCs的凋亡,对视神经中度损伤后RGCs具有明显保护作用。     

睫状神经营养因子对培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的 :观察睫状神经营养因子 (CNTF)对培养大鼠视网膜神经节细胞 (RGCs)凋亡的影响。方法 :15只生后 2～ 3dWistar大鼠 ,视网膜采用胰酶消化法制成细胞悬液后接种于 2 4孔培养板 (每孔 1× 10 5个细胞 ) ,取培养 72h的细胞行免疫细胞化学鉴定。将培养的细胞随机分为对照组、三种浓度CNTF组 (10ng/ml、2 0ng/ml、4 0ng/ml) ,培养 72h后采用TUNEL法和流式细胞仪检测培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡的变化。结果 :培养 72h的细胞 90 %以上为视网膜神经节细胞 ,TUNEL法检测显示培养细胞有凋亡细胞存在 ,流式细胞仪检测结果显示对照组凋亡率为 (11.95± 4 .4 0 0 ) % ,10ng/ml、2 0ng/ml、4 0ng/mlCNTF组凋亡率分别为(7.883± 2 .14 6 ) % ,(6 .4 17± 3.317) % ,(8.0 33± 2 .0 2 3) % ,CNTF组凋亡率显著降低 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ,其中2 0ng/mlCNTF组差异非常显著 (P <0 .0 1)。结论 :CNTF能降低培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡率 ,其促视网膜神经节细胞存活可能是通过减少视网膜神经节细胞凋亡来起作用 ,而高浓度CNTF对视网膜神经节细胞有毒副作用。     

谷氨酸与视网膜神经节细胞凋亡的研究进展

视网膜神经节细胞（RGCs）进行性的死亡和丢失是青光眼导致视功能损害的基础病理。RGCs的死亡是通过细胞凋亡的形式进行的。RGCs损伤后,多种原因导致的细胞外谷氨酸在正常水平之上大量聚集,通过谷氨酸受体引起细胞内Ca2＋增加,继而进入一系列细胞凋亡途径。局部的谷氨酸聚集还会引起半胱天冬酶及肿瘤坏死因子α的增加,共同参与RGCs的凋亡。     

红参对糖尿病大鼠视网膜血管内皮细胞生长因子表达及神经节细胞凋亡的影响

目的:通过观察糖尿病(DM)大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡及血管内皮细胞生长因子(VEGF)在视网膜表达的变化.探讨红参对RGCs凋亡及VEGF表达的影响以及后两者之间的关系.方法:链脲佐菌素诱导实验性DM大鼠模型.造模成功的DM大鼠随机分为模型组(n=10)和治疗组(n=10),并与末造模的正常组大鼠进行比较.治疗组以红参粉末灌胃给药,1次/d.TUNEL法检测RGCs凋亡并计数RGCs凋亡数量.LSAB法检测VEGF在视网膜的表达.图像分析仪检测免疫组化的显色强度,定量分析.结果:与正常组相比,DM大鼠RGCs凋亡数量显著增加(P<0.01);与模型组相比,治疗组RGCs凋亡数量显著减少(P<0.05).与正常组相比,DM大鼠视网膜VEGF的表达增强:与模型组相比,LSAB法标记染色的VEGF在治疗组表达减弱.结论:红参能抑制DM大鼠视网膜VEGF的表达,减少DM大鼠RGCs的凋亡,DM大鼠RGCs凋亡数量与VEGF在视网膜表达呈正相关.     

Semaphorin3A通过Notch1对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的：探讨轴索导向分子Semaphorin3A（SEMA3A）对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞（RGC）凋亡的影响及可能机制。方法：40只SPF级成年雄性SD大鼠随机分为对照组（正常喂养）、模型组（建立DR模型）、si-SEMA3A组（建立DR模型后玻璃体内注射SEMA3A-siRNA慢病毒）、si-SEMA3A+DAPT组（建立DR模型后玻璃体内注射SEMA3A-siRNA慢病毒和Notch1通路抑制剂DAPT）,每组10只。双标记免疫荧光染色检测视网膜SEMA3A蛋白表达定位;HE染色检测RGC密度;TUNEL法检测RGC凋亡;ELISA检测视网膜炎症因子IL-6和TNF-α表达水平;Western-blot检测视网膜SEMA3A、Notch1及Caspase-3蛋白表达水平。结果：通过SEMA3A和Brn3a（RGC标志物）双标确定SEMA3A在RGC中特异性表达,这说明SEMA3A对视网膜的损伤作用可能是通过RGC实现的。与对照组比较,模型组RGC密度较低（P＜0.05）。与模型组比较,si-SEMA3A组RGC密度较高（P＜0.05）,而si-SEMA3A+DAPT组RGC密度低于si-SEMA3A组（P＜0.05）。对照组大鼠视网膜组织中未检测到TUNEL阳性RGC。与模型组比较,si-SEMA3A组细胞凋亡率较低（P＜0.05）,而si-SEMA3A+DAPT组细胞凋亡率高于si-SEMA3A组（P＜0.05）。与对照组比较,模型组IL-6、TNF-α、SEMA3A和Caspase-3表达水平较高,而Notch1表达水平较低（P＜0.05）;与模型组比较,si-SEMA3A组IL-6、TNF-α、SEMA3A和Caspase-3表达水平较低,而Notch1表达水平较高（P＜0.05）;而si-SEMA3A+DAPT组IL-6、TNF-α、SEMA3A和Caspase-3表达水平高于si-SEMA3A组,Notch1表达水平低于si-SEMA3A组（P＜0.05）。结论：SEMA3A可能通过Notch1信号通路参与糖尿病大鼠RGC凋亡,有望成为糖尿病视网膜病变的治疗靶点。     

视网膜神经节细胞与糖尿病视网膜病变

糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy, DR)是糖尿病最常见的并发症.多年来对其发病机理的研究主要集中在视网膜毛细血管微循环的改变上,对视网膜神经组织的研究较少.20世纪80年代中期已有学者提出DR的主要发病机理可能不仅是视网膜血管本身,而且与血管周围的神经元或神经胶质组织关系更为密切.视网膜的神经元和/或神经胶质可能对长期的高血糖影响特别敏感,微血管损害就成为其代谢紊乱的继发结果[1].近年大量临床电生理学研究表明,糖尿病患者在DR临床发病前,起源于神经网膜内层的振荡电位视网膜电图波振幅下降,潜伏期延长,其异常早于血-视网膜屏障通透性异常.应用持续固定聚焦视网膜电图研究发现,DR病变前期和/或早期,视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells ,RGCs)和双极细胞功能已发生异常.实验动物研究也显示,发生DR前,视网膜神经节细胞和苗勒氏(Müller)细胞已出现凋亡[2].有学者推测,糖尿病因耗尽了神经元所依赖的神经营养因子而导致DR的发生[3],神经网膜、神经细胞与DR的关系探讨成为目前DR发病机制的研究热点.本文就与DR神经网膜关系密切RGCs的研究现状作一综述.     

共聚物-1对高眼压模型大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的:观察共聚物-1(COP-1)对高眼压(EIOP)模型SD大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的影响.方法:(1)将SD大鼠随机分为空白对照组、安慰剂注射EIOP组和COP-1注射EIOP组.应用大鼠眼前房注入甲基纤维素的方法制作大鼠的EIOP模型.(2) COP-1注射EIOP组动物的后足皮下注射COP-1,安慰剂注射EIOP组动物注射生理盐水,空白对照组动物不做任何处理.(3)在手术显微镜下充分暴露视神经眶内段,以显微剪剪断视神经,眶侧断端留置荧光金海绵.利用荧光金逆行示踪技术检测各组视网膜神经节细胞.(4)在荧光显微镜下,划定样本区,计数每张视网膜铺片中视网膜神经节细胞的平均密度.结果:安慰剂组、COP-1组RGC平均密度均小于对照组(P＜0.05);安慰剂组的RGC平均密度较COP-1组显著减少(P＜0.05).结论:COP-1对EIOP状态下RGC具有保护作用.     

视网膜神经节细胞体外培养研究进展

视网膜神经节细胞（RGC）是视网膜的第三级神经元，在视觉通路中起着重要的传导作用。许多眼科疾病（如视神经病、青光眼等）可导致RGC损伤、变性和凋亡，最终引起视功能丧失，因此保持或促进RGC存活及轴突生长对视功能的维持至关重要，目前国内外学者都在努力探寻体外培养RGC的最有效方法。笔者就RGC的培养、分离、鉴定、纯化等方法的研究进展作一综述。     

急性高眼压对视网膜神经节细胞凋亡的影响及药物保护作用

<正> 青光眼是眼科常见致盲眼病,其病理改变特征是视网膜神经节细胞的损害,但损害机制了解甚少。本文通过制备高眼压动物模型,探索高眼压对视网膜神经节细胞凋亡的影响及药物对视网膜神经节细胞的保护作用。 选用新西兰白兔45只,雌雄兼用,体重2.0～2.5kg,随机分为药物实验组(简称实验组)和实验对照组,每组21只,     

大鼠视网膜共培养诱导神经干细胞分化为视网膜神经节细胞

目的:研究新生大鼠视网膜组织与胚胎上丘源神经干细胞共培养对干细胞分化的影响.方法:采用机械分离、无血清培养基选择培养的方法从孕14 d的胚鼠上丘中获取神经干细胞并传代培养.使用组织-细胞共培养系统将出生4 d的乳鼠视网膜组织与上丘源神经干细胞共培养,观察干细胞分化过程,对分化细胞进行鉴定,并与干细胞的自然分化过程进行比较.结果:从胚鼠上丘中获得的细胞在无血清培养条件下聚集呈球形悬浮生长,可以持续传代培养,具有多向分化能力,经免疫荧光鉴定证实为神经干细胞.新生大鼠视网膜组织与胚胎上丘源神经干细胞共培养促进干细胞的分化,并诱导分化出Thy1.1阳性细胞.结论:从胚胎大鼠上丘可以分离培养神经干细胞,与新生鼠视网膜组织共培养可以诱导上丘源神经干细胞分化出视网膜神经节细胞.     

激肽释放酶结合蛋白对大鼠视神经不完全损伤后视网膜神经细胞的保护作用及轴突再生的研究

目的 探讨激肽释放酶结合蛋白(KBP)是否对体内视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)存在保护和促进其轴突再生的作用.方法 在距SD大鼠视神经球侧端0.5～1.0mm的地方夹持视神经,造成大鼠视神经不完全性损伤;在大鼠视神经损伤的模型中,行玻璃体腔分别注入KBP作为实验组和PBS为对照组;分别于损伤后7d,14d和21d取材,HE染色观察视网膜结构、测量视网膜厚度及RGCs的存活数量;提取术眼视神经行蛋白免疫印迹.根据统计学分析结果,明确KBP是否有视网膜神经节细胞保护和促进其轴突再生作用.结果 ①大鼠不完全视神经损伤模型建立成功.②通过HE染色,我们观察了视网膜各层结构变化,通过双肓法计数RGCs,和视网膜厚度测量,经统计学分析,组间差异具有统计学意义.③对神经再生的标记蛋白GAP-43进行Western-blot,统计学分析,组间GAP-43表达差异具有统计学意义.结论 ①KBP对视神经损伤后的RGCs具有保护作用.②KBP在视神经损伤后可能促进了视神经的轴突再生.     

Nogo-A基因敲除鼠视神经损伤后修复的实验研究

目的评价Nogo—A基因在视神经损伤后修复机制中的作用。方法Nogo-A基因敲除联合视神经损伤鼠为实验组（20只）,C57BL／6小鼠联合视神经损伤作为对照组（20只）。制备视网膜、视神经冰冻切片,采用免疫荧光技术检测视网膜神经节细胞和视神经中生长相关蛋白（GAP）43的表达。进行视网膜神经节细胞体外培养,进行GAP-43染色,采用图像分析系统计算细胞轴突长度。结果视神经中GAP-43表达：夹伤后1、3、7d对照组中表达少量GAP-43,实验组中GAP-43表达明显高于对照组（t=2．12,3．56、2．63,均P〈0．01）。GAP-43抗体染色可见着色在体外培养RGC轴突,实验组3d有较长轴突生长,对照组3d有较短轴突生长。RGC于培养1、3及7d,经自动图像分析系统处理,得出细胞突起长度,实验组突起长度明显高于对照组（F=41．36、31．23,均P〈0．01）。结论Nogo—A基因在抑制视神经损伤后轴突再生机制中起重要作用。     

Neuroprotective Effect of Melatonin on Retinal Ganglion Cells in Rats

Glaucoma , the fourth blindness-causing ill-ness in the world, is mainly manifested by twosymptoms : elevated intraocular pressure (IOP)and loss of visual field. Though the IOP of manypatients with glaucoma can be li mited to a properor low level ,it can' t prevent the i mpaired nervefrom deteriorating and therefore , with the condi-tionit is i mportant to protect optic nerve .In addi-tion, the progressive apoptosis of RGCs is thepathological basis for the glaucoma to i mpair thevisual func…     

预先溃变周围神经移植对成年金黄地鼠视网膜节细胞再生的影响

0　引言　本研究探讨了移植预先溃变周围神经对促进视网膜节细胞 (下称节细胞 )的轴突再生 ,是否比正常周围神经更有效这一仍有争议的问题 [1 ,2 ] .1　材料和方法1.1　材料　成年雌性金黄地鼠 2 4只 ,体质量 90～ 10 0 g.随机分为预先夹断、预先切断线扎、预先切断非线扎和对照 4组 ,每组 n=6 .1.2　方法　移植前 8d将左侧坐骨神经主干以显微手术镊夹断 (夹断组 )或切断 ,远侧段断端以细丝线结扎 (线扎组 )或不扎 (非线扎组 ) .距眼球后极 0 .5 mm切断左侧视神经 ,将已夹断或切断的神经远侧段或正常坐骨神经 (对照组 ) ,移植于视神经眶侧断…     

荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞的实验研究

目的建立荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞的方法。方法选取出生1 d的SD大鼠乳鼠,腹腔注射水合氯醛麻醉后,剪开头部皮肤,向双侧上丘各注射4%荧光金注射液1μl,缝合皮肤,4 d后处死,提取视网膜,胰酶消化后培养,显微镜下观察被标记的视网膜神经节细胞。结果混合培养的视网膜细胞中,可见被荧光金标记的视网膜神经节细胞,大约占细胞总数的0.34%,视网膜神经节细胞可存活3周。结论荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞是一种可行的方法,可用于视网膜神经节细胞的鉴定。     

PLGA微球载NGF联合超声对视神经节细胞的保护作用

目的：探讨乳酸-羟基乙酸共聚物（ploy lactic-co-glycolic acid,PLGA）微球联合神经生长因子（nerve growth factor,NGF）对视神经损伤大鼠视神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）的保护作用。方法：PLGA 为原料制备包载有NGF的PLGA微球。检测载药微球的载药量和包封率,观察其形态特点测量粒径分布。将Sprague-Dawley（SD）雄性成年大鼠69只随机分为5个组,正常组（A组）和假手术组（B组）各9只大鼠,生理盐水注射组（C组）、神经生长因子注射组（D组）、PLGA微球联合NGF注射组（E组）各17只大鼠,B～E组大鼠均行超声辐照处理。各组分别于0.5、1、3、7 d取样行视网膜切片免疫组化染色和和苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE）,观察视网膜上葡萄糖钙调蛋白（glucose regulated rrotein 78 kD,GRP78）表达和组织病理的变化,并采用荧光金（fluorogold,FG）逆行标记视神经节细胞于视神经钳夹损伤造模后第7 d取样计数各组RGCs数量。结果：PLGA载药微球包封率68.4%,载药量0.032 3%,体外7 d的累计释放率82.6%,微球粒径（3.17±0.6） μm。FG逆行标记RGCs计数5组间差异有统计学意义（F=65.858,P=0.000）,A组与B组间差异无统计学意义（P=0.862>0.05）,其它各组间差异均有统计学意义（P<0.05）。免疫组化染色A组、B组未见阳性细胞,RGCs的GRP78阳性细胞率显示,C～E组不同时间各组间差异有统计学意义（F组别=184.330,P组别=0.000）,各组在各时间点间差异亦有统计学意义（F时间=21.472,P时间=0.000）。HE染色提示第7天时E组视网膜水肿较C、D组减轻。结论：NGF-PLGA微球联合超声治疗视神经损伤大鼠能提高对RGCs的保护作用。     

银杏叶提取物对豚鼠视神经横断伤后视网膜神经节细胞结构及功能的保护作用

目的： 探讨腹腔注射银杏叶提取物（Ginkgo biboba extract,EGb 761）对豚鼠视神经横断伤后视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell, RGC）形态及功能的保护作用。 方法： 75只白化豚鼠随机等分为正常对照组、假手术组、模型组、生理盐水组和EGb 761组。分离暴露豚鼠的右眼视神经并于球后1.0 mm处进行横断造模,正常对照组不作任何处理,假手术组仅分离暴露视神经。生理盐水组和EGb 761组分别于实验开始前1周每日腹腔注射1次相应体积生理盐水和EGb 761（100 mg/kg）,术后继续给药4周。术后第4天,各组随机处死3只豚鼠,采用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end-labeling, TUNEL）法检测RGC凋亡;分别于术后第14和28天进行图形视网膜电图（pattern electoretinogram, PERG）检查;摘取眼球作组织病理学检查并计数视网膜垂直经线RGC数目。 结果： 术后第4天,正常对照组、假手术组和EGb 761组均未见TUNEL阳性RGC,模型组和生理盐水组均见有TUNEL阳性RGC。术后第14和28天,模型组和生理盐水组RGC数目均少于正常对照组和假手术组（P〈0.05）,EGb 761组少于正常对照组和假手术组（P〈0.05）,但显著多于模型组和生理盐水组（P〈0.05）;术后第14和28天,EGb 761组PERG的N95振幅较模型组和生理盐水组高（P〈0.05）,与模型组和假手术组相近（P〉0.05）。RGC数目与N95振幅呈正相关（r=0.859, P=0.001 5）。 结论： 腹腔注射银杏叶提取物EGb 761能抑制豚鼠视神经横断后的RGC凋亡,对RGC的结构和功能具有保护作用。     

用MATLAB定量视网膜神经节细胞

视网膜神经节细胞的定量计数在眼科研究方面具有重要价值.用MATLAB软件对标记的SD大鼠视网膜神经节细胞图像进行定量计数,所编写的程序不仅操作简单,适合非计算机专业人员使用;而且可避免眼睛计数所造成的人为误差,提高计数效率,提高可靠性、稳定性、可重复性和精确性.     

Long Evans大鼠视网膜神经节细胞培养与鉴定

目的建立Long Evans大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)体外培养的方法,为RGCs的体外实验研究奠定基础.方法出生后1～3 d的Long Evans大鼠视网膜神经上皮层,胰蛋白酶 透明质酸酶消化制成单细胞悬液,用DMEM培养液进行培养,观察细胞生长规律,图像分析系统分析有突起的RGCs数目、胞体面积和最长的突起长度,Thy1.1单克隆抗体和微管相差蛋白2多克隆抗体荧光双标法鉴定RGCs.结果 Long Evans大鼠RGCs体外培养存活4 d;荧光双标显示RGCs纯度为80%～90%.结论在普通培养基中Long Evans大鼠RGCs体外培养能获成功.胰蛋白酶 透明质酸酶联合消化较单独用胰蛋白酶消化效果好.