褐藻酸降解菌的筛选及产酶条件优化

目的 通过对褐藻酸钠的降解实验，从病烂海带上筛选出降解能力较高的菌株，从而制取褐藻酸酶。方法 经过筛选，选出产酶活力高的s4菌株，优化产酶条件，制取粗酶，并对酶的性质进行初步研究。结果 s4菌株最佳产酶条件是AlgNa 1．2％，NH4Cl 0．9％，NaCl 1．5％，pH-7．5，温度在25℃最佳。结论 s4菌株所产褐藻酸酶具有较高的酶活力和稳定性     

溶媒耐受性绿脓假单胞菌PseA产生耐溶媒蛋白酶的培养条件优化及产物鉴定

据报道，从源自Pseudomonas aeruginosa的溶媒耐受性绿脓假单胞菌株（PseA）中可获得耐溶媒蛋白酶。本研究所获得产生该酶的优化培养条件：以0．7％甘油为碳源，0．4％酪蛋白和0．6％酵母抽提物作为氮源，pH7．0；种子液培养36h后以2．5％的接种量接种；30℃振荡（250r／min）培养24h。在该条件下，菌体生长最好，酶活力最高（160lu／ml）。该蛋白酶的最适pH与温度为9．0和55℃。     

高产胞外硫酸软骨素酶菌株的筛选、鉴定及发酵条件优化

目的 对从青岛胶东海岸潮间带淤泥中分离筛选高产胞外硫酸软骨素酶的菌株进行鉴定和发酵条件优化。方法 通过平板快速筛选法和摇瓶复筛,筛选到1株高产胞外硫酸软骨素裂解酶的菌株C26,根据形态学和16S rRNA基因序列分析对其鉴定,并采用单因素实验和响应面实验对发酵条件进行优化。结果 根据形态学和16S rRNA基因序列分析,鉴定菌株C26为不动杆菌属（Acinetobacter sp.）,命名为Acinetobacter sp. C26。优化最适发酵条件为：硫酸软骨素15 g?L-1,酵母粉7.69 g?L-1,培养温度23 ℃,在最适条件下硫酸软骨素酶的活力可达11.96 U/mL,是优化前的4.82倍。结论 本研究筛选得到的菌株Acinetobacter sp. C26产酶活力高,发酵周期短,在生物化工及医药方面具有潜在应用价值。     

菊粉酶产生菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

菊粉酶因其能水解菊粉中β-2,1-D果聚糖果糖苷键而广泛用于高果糖浆、低聚果糖和酒精的生产,在药品和食品工业生产中具有重要的应用价值和良好的应用前景。本文从菊芋根际土壤中筛选分离获得28株菊粉酶产生菌株,经进一步复筛获得一株产菊粉酶能力较高的菌株ni-3,在对其常规形态学及生理生化特性鉴定的基础上,对部分长度的16S r DNA同源性进行了分析,发现ni-3菌株与中孢短芽孢杆菌相似度达99.5%,命名为Brevibacillus centrosporus ZF-9。本文还对其发酵产酶培养基进行单因素试验及响应面优化,确定了ZF-9最佳产酶条件为:菊粉45g·L-1,酵母膏11 g·L-1,Na2HPO420 g·L-1,在该培养基下,菊粉酶活可达6.41 U·m L-1。     

海洋假单胞菌纤溶酶的体外溶栓实验研究

目的确证血纤维蛋白溶酶的体外溶栓作用。方法用血纤维蛋白平板法、体外血块溶解实验研究该酶的纤溶特点及对血块的溶解作用。结果可直接水解血纤维蛋白 ,溶栓活性同蝮蛇抗栓酶类似 ,但对红细胞形态没有影响。结论血纤维蛋白溶酶是一种直接纤溶酶 ,有较强的纤溶活性     

产硫酸软骨素酶菌株的筛选、鉴定及发酵条件优化

目的从土壤中分离筛选产硫酸软骨素酶活性较高的菌株,对目标菌株进行鉴定及发酵条件优化,分析其酶解产物。方法通过初筛及复筛筛选出1株高产硫酸软骨素酶菌株LHYM225,经形态学观察及16SrDNA序列测定并进行系统发育分析对其进行鉴定。利用单因素实验及正交实验对发酵培养基组分及发酵条件进行了优化。通过质谱法检测该酶的酶解产物。结论 16SrDNA序列分析表明菌株LHYM225与节杆菌属菌株(Arthrobacter)亲缘关系最近,将其初步鉴定为节杆菌属菌株(Arthrobacter sp.),该菌株的最佳发酵培养基:硫酸软骨素0.8%,KH2PO40.02%,酵母浸粉0.6%,MgSO4·7H2O...     

假单胞菌发酵制备精氨酸脱亚胺酶

采用假单胞菌（Pseudomonas sp．）发酵制备精氨酸脱亚胺酶，优化发酵培养基配方及培养条件，以葡萄糖为碳源，酵母膏和蛋白胨为氮源，30℃振荡培养20h时，发酵液中精氨酸脱亚胺酶的酶活力可达2．17u／ml。向HepG2肝癌细胞培养液中加入酶粗品0．5u／ml，对肿瘤细胞的生长抑制率为93．4％。     

胞外青霉素酰化酶产生菌的筛选及产酶条件

采用青霉素梯度琼脂平皿法，从土壤中快速筛选出３５株产胞外青霉素酰化酶的菌株，经复筛有５株酶活力较高，经鉴定均为芽胞杆菌，Ｂ３５－１７菌株酶活力最高．研究了Ｂ３５－１７菌株的胞外青霉素酰化酶产生条件，该菌株在最适产酶条件下，酶活力达２．６７ｕ／ｍＬ．在发酵培养基中添加０．２％的玉米浆能降低Ｆｅ２＋对酶合成的抑制作用．     

假单胞菌胆固醇酯酶的生产Ⅰ.菌种筛选和发酵条件的研究

通过平板初筛和摇瓶复筛,从371株菌中筛得一株有工业生产价值的胆固醇酯酶产生菌,并对它进行了发酵条件的研究。用所获得的胆固醇酯酶配制的三酶试剂具有良好的稳定性,适用于临床检测。     

噬琼胶卵链菌β-琼胶酶基因YM01-5的克隆表达及其酶学性质的研究

目的 从青岛近海海水中分离鉴定了1株能够降解琼胶的海洋新菌—嗜琼胶卵链菌（Catenovulumagarivoransgen. nov. sp. nov.）YM01T,并对其进行了全基因组测序。本文对该菌的1个β-琼胶酶基因YM01-5进行了克隆表达,并对重组琼胶酶的酶学性质进行了研究。方法 利用镍柱亲和层析对重组琼胶酶进行了分离纯化,采用DNS法测定重组酶的酶学性质,薄层层析(TLC)和质谱(MS)法对AgaYM01-5的酶解产物进行分析。结果 β-琼胶酶基因YM01-5全长2 412 bp,编码803个氨基酸,预测分子量为91.6 kDa,其催化模块属于糖苷水解酶GH50家族。重组琼胶酶YM01-5酶学性质的研究结果表明,该酶的最适温度为40 ℃,最适pH为9.0。在35 ℃以下具有良好的热稳定性,pH 6～10之间保持较高的稳定性,在该范围的pH缓冲液中放置12 h后,YM01-5仍能保持80%以上的酶活力。此外,该重组琼胶酶降解琼脂糖的Km、Vmax值分别为15.6 mg/mL和188 U/mg, 对降解产物的薄层层析及质谱分析结果表明,β-琼胶酶基因YM01-5以外切酶的形式作用于琼脂糖产生新琼二糖作为终产物。结论 该酶降解产物单一,有利于琼胶寡糖的制备,具有较高的工业应用潜力,它的发现也为研究菌株YM01中琼脂糖的代谢通路提供了参考。     

海绵体上抗肿瘤放线菌的分离筛选及菌株Streptomyces sp.A01059的发酵条件优化

目的分离筛选抗肿瘤活性放线菌,并提高菌株Streptomycessp.A01059抗肿瘤活性物质的产量。方法以抗稻瘟霉,MTT法为筛选模型,对分离自海南岛周边海域海绵样品的放线菌进行筛选,并对菌株Streptomycessp.A01059的发酵培养基组成及培养条件进行优化。结果筛选获得8株抗肿瘤活性较好的菌株,优化出菌株A01059发酵的最佳碳源,氮源,盐度,pH值及接种量等。结论优化条件下,菌株A01059发酵液稀释100倍时,对人肝癌细胞SMMC-7721,小鼠肉瘤细胞S180,人正常肝细胞L-20的抑制率分别为80%,81%,12%。     

海洋真菌KLEB-07培养条件的研究

一株海洋来源的真菌KLEB-07发酵物对小鼠乳腺癌温敏型tsFT210细胞具有细胞凋亡诱导活性。为得到该菌株产生抗肿瘤活性物质的最佳培养条件,对其发酵培养基进行了优化。并比较了不同培养基、不同发酵条件下KLEB-07发酵物的活性强弱,考察了发酵物中活性成分对温度、酸碱的稳定性及其所在的活性部位。结果表明KLEB-07在28℃,130r.min-1发酵7d产生抗肿瘤活性物质的活性最强,发酵物对高温、酸碱稳定,其活性部位在醋酸乙酯萃取液中,为研究该菌株的抗肿瘤活性成分提供了依据。     

海洋真菌Penicillium sp.产抗肿瘤天然产物brefeldin A的发酵优化研究

目的 对海洋来源真菌Penicillium sp.产抗肿瘤天然产物brefeldin A的发酵优化,以期获得高产率目标化合物。方法 运用单因素实验设计,重点考察了培养方式、发酵培养基组成 (如碳源、氮源、盐度等)以及培养条件 (温度、摇床转速)等因素。结果 最佳发酵条件为：马铃薯200 g/L,麦芽糖10 g/L,淀粉20 g/L,海盐15 g/L,28 ℃, 摇床转速160 r/min,培养14天。结论 在该发酵条件下,brefeldin A的实际产量达到40 mg/L,较优化前提高了近10倍。     

北极放线菌BF-1发酵条件优化及代谢产物抑菌活性研究

目的优化发酵工艺以提高北极放线菌BF-1发酵液中抑菌活性物质的产量;测定BF-1次级代谢产物的体外抑菌活性。方法以发酵液抑菌活性为指标,采用单因素实验和正交实验对放线菌BF-1发酵培养基和发酵条件进行优化;琼脂稀释法测定BF-1发酵液最低抑菌浓度。结果最佳发酵培养基:淀粉5g.L-1,NH4Cl 5g.L-1,黄豆15g.L-1,MgSO40.25g.L-1,海水晶30g.L-1;最佳发酵条件:28℃,起始pH7,接种量5%;BF-1发酵液对绿脓杆菌的最低抑菌浓度(MIC)为640μg.mL-1。结论北极放线菌BF-1发酵液中次级代谢产物具有显著的体外抑菌活性,优化后BF-1发酵液的抑菌活性与优化前相比提高了约2.6倍。     

二酮哌嗪类化合物诱导海洋共栖细菌NJ6-3-1产生抗菌活性的研究

目的 选择一株具有抗茵活性的海绵共栖细菌NJ6-3-1为实验茵株,研究其抗茵物质的代谢是否受到群体感应诱导信号分子的调控.方法研究在不同生长条件细菌NJ6-3-1代谢物的抗茵活性与细胞密度的关系,利用细菌NJ6-3-1自身代谢产物的3种二酮哌嗪类化合物(diketopiperazines.DKPs)作为自诱导物质(AI).研究了低密度条件下的细茵NJ6-3-1与3种不同DKPs共培养时的抗菌活性情况.结果实验发现细菌NJ6-3-1代谢抗茵物质的行为与细胞密度密切相关.且发现该茵具有群体感应机制的现象(quorum sens-ing),在高密度条件(OD630>0.4)下细菌才能产生抗菌活性,NJ6-3-1不产生抗菌物质的低密度生长条件:1/5MB培养基、25℃;同时发现cyclo-(L-Phe-L-Val)能诱导NJ6-3-1在不产生抗菌物质的生长条件下代谢抗菌物质.结论以上结果初步说明细茵NJ6-3-1具有种内群体感应系统.其抗茵活性受到自诱导物cyclo-(L-Phe-L-Val)的调控.     

一株海洋来源鞘氨醇单胞菌胞外多糖的含量测定

目的 建立一种简便快捷的测定海洋来源鞘氨醇单胞菌分泌的胞外多糖威兰胶含量的方法。方法通过测定威兰胶同葡萄糖的换算因子以及发酵液中葡萄糖和总糖的浓度,建立了一种利用苯酚-硫酸法测定发酵液中威兰胶含量的方法,并采用单因素及正交实验对该方法的影响因素进行了优化及方法学验证。 结果 最佳的优化条件为：苯酚用量为0.8 mL、浓硫酸用量为6 mL、显色时间为30 min、显色温度为80 ℃。方法学验证结果表明,该方法的平均回收率为98.94%,相对标准偏差（RSD）为0.53%;显色产物在2 h内稳定,RSD为0.48%;仪器的精密度良好,RSD为0.77%。结论 建立的苯酚-硫酸法可用于发酵液中威兰胶的含量测定。     

Effect of heavy metals on marine Bacillus sp. and Flavobacterium sp.

Responses to varying concentrations of Hg, Cd, and Zn were studied in two strains of bacterial isolates (Flavobacterium sp. and Bacillus sp.) from Indian coastal waters. Growth responses showed inhibition (in terms of percentage reduction with respect to control) and the order of inhibition was Hg>Zn>Cd in the case of Bacillus sp. and Hg>Cd>Zn in the case of Flavobacterium sp. With prolonged incubation Bacillus sp. overcame the inhibitory effect whereas Flavobacterium sp. did not. Higher concentrations of glucose in the growth medium increased the inhibitory effect of the metal. At lower concentrations (15g ml^-1) there was a stimulatory effect on [¹⁴C] glucose uptake on Flavobacterium sp. Our studies showed that the Gram positive isolate was less adaptable to metals than the Gram negative.     

生米卡链霉菌的耐前体变株选育及发酵工艺优化

目的提高生米卡链霉菌的发酵水平和有效组分A1含量。方法出发菌株109S通过紫外线、亚硝基胍的组合诱变处理后筛选高产前体抗性突变株,并考察高产变株的发酵周期、最适补加前体的时间和剂量。结果和结论共筛选了368个抗性突变株,得到一株生产能力比出发菌株提高33%、A1组分提高16%的高产变株B64-5,连续传4代生产能力基本不变,较稳定;确定了变株发酵周期为52 h,发酵最佳补加前体时间为0 h,最佳补加剂量为0.3 g.L-1。     

南极细菌Pseudoalteromomas sp.S-15-13的分子鉴定及其胞外多糖促进小鼠脾淋巴细胞转化的作用

目的探讨产胞外多糖南极细菌的筛选，对高产糖菌株S-15—13进行分子鉴定。并测定其胞外多糖的体外免疫活性。方法采用显微镜检测以厦细菌胞外多糖染色方法对南极产糖菌进行了筛选；通过16SrDNA对菌株S-15—13进行了分子鉴定并采用Heek方法测定了该菌胞外多糖促进小鼠脾淋巴细胞增殖的作用。结果与结论从南极科学考察采集、分离的57株细菌中．通过胞外多糖染色法筛选获得27株产胞外多糖的菌株，16SrDNA鉴定菌株S-15—13为Pseudoalteromonas sp．。胞外多糖分离、纯化后获得的组分Ⅰ（EPSⅠ）单独或联合Con A使用可明显促进脾淋巴细胞增殖。