PCR检测痰液结核杆菌DNA

PCR－聚合酶链式反应，是速迅发展起来的一种快速、特定的DNA片段体外扩增法。1996年我们将该技术引入海拔3682米的高原地区，首次用痰液扩增出结核杆菌DNA。1．材料与方法。1．1标本40例痰液均取自西藏自治区结核病防治中心门诊病人的晨痰。1．2试剂和仪器PCR试剂盒（华美公司）；DNAMark（复华公司）；480型体外扩增仪（美国PE公司）。1．3方法a模板的制备：取痰液，加入2－5信液化剂，液化至清亮，取lml液化痰液15000rpm，离心smin，顾去上清，加入1ml无菌生理盐水混是后15000rpm，离心3min，顾去上清，在沉淀中加入40PI裂解液，…     

聚合酶链反应(PCR)检测关节腔液中的结核杆菌DNA

自聚合酶链反应(PCR)技术问世以来,已得到愈来愈广泛的应用,该技术用于检测胸腹水、脑脊液及痰中的结核杆菌 DNA 已见报道,但应用于关节腔液中结核杆菌 DNA 的检测尚未见报道。膝关节结核患病率高,在各部位关节结核中仅次于脊柱结核丽占大关节结核之首位。膝关节滑膜结核发生率比骨结核高,为求得对膝关节滑膜结核的早期诊断,提高关节液对     

聚合酶链反应检测结核杆菌DNA的临床研究

目的 研究荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测临床标本中结核分枝杆菌核酸DNA的应用价值.方法 应用荧光定量PCR技术对80例活动性肺结核患者痰、40例结核性胸膜炎患者的胸水进行结核杆菌DNA检测,同时涂片镜检与培养,并对3种方法检测的阳性率进行比较.结果 80例活动性肺结核患者痰、40例结核性胸膜炎患者的胸水荧光定量PCR阳性率分别为56.2％、27.5％;涂片镜检阳性率分别为16.2％、0.0％;结核培养法阳性率分别为37.5％、2.5％.结论 荧光定量PCR技术较传统方法具有较高的敏感性与特异性,尤其对涂片染色与结核培养阴性的结核病具有更大的诊断价值.     

单管巢式PCR法检测石蜡包理淋巴结组织结核杆菌DNA的评价

巢式聚合酶链反应(PCR)较普通PCR具有更高的敏感性和特异性。然而,由于巢式PCR需两次配制PCR反应体系(双管巢式PCR法),操作复杂,污染机会增加,影响实际应用。本研究采用了两对复性温度不同的巢式PCR引物,将巢式PCR扩增置于同一PCR反应体系中一步完成(单管巢式PCR法),简化了操作步骤,并应用该方法对石蜡包埋组织中结核杆菌DNA特异性序列片段进行检测。     

PCR—SSCP法检测利福平耐药性结核杆菌

结核杆菌多耐药性菌株的出现已对公共健康的构成威胁。多耐药性结核杆菌菌株中对利福平耐药出现最多,对利福平耐药的直接检测成为确认多重耐药性结核病的一个有效工具。参考有关文献[1],应用多聚酶链反应扩增及对扩增产物进行单链构象分析(PCR-single strand conformation poly-morphism,PCR-SSCP)对利福平耐药结核杆菌基因突变进行检测,方法快速,操作简便,现报告如下。 材料和方法 1.临床标本的处理　(1)临床分离培养的结核杆菌菌株,经常规方法鉴定。20份,用机械方法分解(French压力仪4℃以下处理,1400kg/cm2)作为PCR的材料。(2)荧光…     

PCR检测结核杆菌的优越性及局限性分析

PCR由于具有较高的敏感性和特异性而在临床上广泛应用,是目前临床上诊断结核病的主要手段之一,但是在敏感性高,方便快捷的同时,也有很多不足.本文就PCR方法检测结核杆菌的优缺点及改进方法进行分析综述.     

PCR检测血清、痰中结核杆菌的临床诊断价值

本文应用聚合酶链反应 (PCR)扩增技术进行TB—DNA测定。以探讨对血清、痰中结核杆菌DNA在临床诊断结核病中的价值。结果表明 ,结核性胸膜炎患者 ,血清PCR定性阳率 72 5%和痰阳性率 69 1% ,说明PCR具有较高的临床检出率 ,为临床诊断结核病有较强的指导性。     

FQ-PCR法痰结核杆菌DNA检测及其临床应用

目的：探讨荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）法痰结核杆菌DNA检测及其临床应用。方法分别以FQ-PCR,集菌培养和染色镜检检测入选患者的痰标本,比较各方法在结核病诊断中的作用。结果三种检测方法的敏感性为71.8%,39.0%,26.5%,显示FQ-PCR法敏感度最高。结论FQ-PCR法具有简便、快捷、敏感、特异性高的特点,可以快速及时准确的为临床提供诊断依据。     

荧光定量PCR和抗酸染色检测结核杆菌的相关性

目的 探讨荧光定量PCR检测IS6110基因拷贝数和抗酸染色涂片检查阳性分级间的对应关系.方法 对本院250例疑似结核病患者分别行荧光定量PCR检测、抗酸染色涂片镜检,按抗酸染色涂片检查±、1+、2+、3+和4+结果分类统计荧光定量PCR检测结果.结果 250例疑似结核病患者中,荧光定量PCR检测阳性者为85例,其中26例涂片镜检为阴性;抗酸染色涂片镜检阳性者为84例,其中25例的荧光定量PCR检测结果为阴性.在抗酸染色涂片检查±、1+、2+、3+和4+的样本中,荧光定量PCR检测ISS6110基因拷贝数的平均值分别为5.476E+03 copies、5.713E+04 copies、2.349E+05 copies、8.448E+05 copies和8.866E+06 copies.结论 抗酸染色涂片检查±、1+、2+、3+和4+的样本中IS6110基因拷贝数呈现5~10倍的增幅,两种方法对菌量的判定具有较好的对应关系.     

结核性胸水细胞学和结核杆菌染色联合应用的研究

目的 阐述细胞学和结核菌图片染色联检在诊断结核性胸水中的重要价值.方法 取无法明确诊断的胸水进行细胞学和结核菌涂片染色联检.结果与结论 胸水细胞学与结核杆菌染色联合检查,能提供清晰的特征细胞及细菌图片,同时能排除其他性质的胸水,为临床诊治提供有力证据.     

聚合酶链反应检测痰标本中结核杆菌DNA的应用

对1373例痰标本中的结核杆菌DNA进行PCR检测,同时使用传统的痰浓缩集菌涂片法进行抗酸染色镜检。结果:PCR阳性率38％,(522/1373)涂片法阳性率13.4％。(184/1373)表明:PCR检测具有敏感度高、特异性强的优点,对结核病的早期诊断具有重要意义。     

原位核酸杂交检测前列腺癌中结核杆菌L型DNA

目的：探讨结核杆菌L型DNA表达在前列腺癌发生与发展中的意义。方法：改良抗酸(Intensified kinyoun IK)染色和免疫组化染色(S-P法)检测58例前列腺癌组织中结核杆菌L型和结核杆菌抗原，原位核酸杂交，检测20例前列腺癌细胞内结核杆菌L型DNA。结果：结核杆菌L型阳性率37．9％，结核杆菌抗体(BCG)免疫组化染色阳性表达率39．7％。40％前列腺癌细胞核内有结核杆菌L型DNA阳性信号，前列腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级阳性信号分别为20％、30％、80％，随着前列腺癌级别的增加，结核L型感染率显增高。改良抗酸(IK)染色、免疫组化染色和原位核酸杂交结果基本一致。结论：前列腺癌组织中常伴有结核L型感染，结核杆菌L型DNA可进入前列腺腺上皮细胞核内，引起细胞增生、异型增生和癌变，提示结核杆菌L型感染在前列腺癌发生、发展中起重要作用。     

PCR法快速诊断结核杆菌菌血症

随着结核病例的增多和抗多种药物结核     

关于对恶性肿瘤组织中结核杆菌DNA检测的临床总结

目的：研讨恶性肿瘤组织与结核杆菌DNA的相关关系。方法：对本院226例恶性肿瘤的患者进行结合杆菌检测,采用聚合酶链反应技术。其中,肺癌47例,乳腺癌18例,食管癌21例,肝癌24例,胃癌29例,肠癌17例,胆囊癌16例,胰腺癌20例,肾癌34例。结果：226例患者中,检测出结核杆菌DNA19例,占总数的8.41%。其中,肺癌11例,食管癌1例,胃癌1例,肠癌3例,胆囊癌1例,肝癌2例。对监测结果较多的肺癌和肠癌患者进行分析,肿瘤好发部位与结核好发部位基本一致。结论：恶性肿瘤与结核杆菌DNA检测结果可能存在一定相关性,即结核杆菌感染可能会导致一些恶性肿瘤的发生。     

痰标本多种DNA提取方法检测结核杆菌的对比分析

本文应用ＰＣＲ技术检测结核杆菌，选择具有代表性的痰标本前处理方法，即方法Ｉ（ＮａＯＨ－ＳＤＳ标准裂解法）、方法Ⅱ（水煮法）、方法Ⅲ（ＮａＯＨ－Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００沸水浴裂解法）、方法Ⅳ（ＮａＯＨ－ＴＥ－Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００裂解法）。选取３０例结核病患者痰标本，同时进行以上４种方法作对比，结果表明方法Ｉ、Ⅱ、Ⅳ分别比方法Ⅲ有显著性差异，而方法Ⅳ从灵敏度和特异性等方面又优于方法Ｉ、Ⅱ。提示取痰     

应用聚合酶链反应检测结核性脑膜炎患者脑脊液中结核杆菌DNA

结核性脑膜炎是临床常见的疾病，但其早期诊断一直较为棘手。我们对15例疑似结核性脑膜炎的患者的脑脊液采用聚合酶链反应（PCR）检测（结核菌-DNA），另与8例化脑和4例病毒性脑膜炎患者的脑脊液作对比，兹将结果报告如下。材料和方法一、标本选择。选择本院和邻近医院结核性脑膜炎疑似者脑脊液标本15份；对照组选我院同期住院病人，其中8例化脓性脑膜炎（肺炎双球菌性脑膜炎5例，绿脓杆菌脑膜炎3例）和病毒性脑膜炎4例，同时作涂片找抗酸杆菌。二、主要试剂。引物1：5’CCTGCGAGCGTAGGCGTCGG3，引物2：SCTCGTCCAGCGCCGCT…