NT-3基因转染对庆大霉素耳毒性的拮抗作用

目的探讨NT-3基因转染对豚鼠庆大霉素耳中毒的保护作用。方法采用阳离子脂质体介导的方法,将携带外源性基因NT-3的重组质粒pIRES2-EGFP-NT-3与阳离子脂质体复合物10μl注入豚鼠左侧耳蜗(设为Ⅰ组),术后3d开始给予庆大霉素肌肉注射(120mg/kg),连续注射14d,分别于停药后1d、2w进行ABR及DPOAE测试,随即处死动物,耳蜗取材,观察耳蜗毛细胞受损情况,并在透射电镜下观察耳蜗传入神经超微结构改变。实验同时设空载体组(Ⅱ组)及正常对照组(Ⅲ组)。结果庆大霉素停药1d时,与正常对照组相比,空载体组DPOAE幅值显著下降(P<0.05),停药2w时,DPOAE幅值下降更显著,尤其在1、1.4及6kHz处幅值下降明显(P<0.05);NT-3转染组在停药1d时,仅高频DPOAE幅值下降(P<0.05),停药2w时,DPOAE幅值下降减缓(P>0.05);各实验组ABR阈值与DPOAE幅值改变相似;荧光显微镜下见庆大霉素停药1d时,NT-3转染组第一排外毛细胞出现部分缺失,庆大霉素停药2w时,第一排外毛细胞缺失加重,并出现少量第二、三排外毛细胞及个别内毛细胞的缺失;空载体组在庆大霉素停药1d时,即出现第一排外毛细胞严重缺失,少量第二、三排外毛细胞及个别内毛细胞的缺失,停药2w时外毛细胞缺失进一步加重;透射电镜下见庆大霉素停药1d时,空载体对照组Ⅰ型及Ⅱ型神经纤维轴索内微管排列出现紊乱,少量崩解,髓鞘板层结构尚可,Ⅰ、Ⅱ型神经元细胞胞体内偶可见少量髓鞘样结构,停药2w时,传入神经退行性改变明显加重,神经纤维崩解,神经元出现大量空泡化。而NT-3转染组在损伤的早期,传入性神经从末梢到神经元仅出现轻微的改变,在庆大霉素停药2w时,神经退行性改变略加重,但仍显著轻于对照组。结论阳离子脂质体介导的NT-3基因转染可减轻庆大霉素对豚鼠耳蜗外毛细胞、传入神经及螺旋神经节细胞的毒性作用。     

人神经营养因子3和绿色荧光蛋白基因共表达腺病毒载体对耳蜗组织的转染

目的:构建一个神经营养因子3(NT3)和绿色荧光蛋白(EGFP)基因共表达重组腺病毒载体,确定Ad/NT-3对离体耳蜗的转染效率和NT3对螺旋神经元存活的作用.方法:使用pAdeasy-1和pAdTrack CMV腺病毒载体系统,产生带绿色荧光标记的NT3重组腺病毒.转染培养新生的大鼠耳蜗基底膜,观察病毒的转染效率.对培养15 d的耳蜗进行神经丝蛋白200免疫荧光染色,计数螺旋神经元.观察NT3对神经存活的影响.结果:重组NT3病毒能够转染整个耳蜗组织中的各型细胞.以外沟细胞最高.约为49%,其次为齿间细胞,为27%.仅有少量的毛细胞和螺旋神经元被转染.Ad/NT-3重组腺病毒处理15 d的耳蜗螺旋神经元存活的数目多于Ad/EGFP腺病毒转染的耳蜗.结论:构建的Ad/NT-3重组腺病毒能够同时在耳蜗组织中表达EGFP和NT3蛋白,主要表达于外沟细胞和齿问细胞,这些细胞释放NT3能够维持耳蜗神经元存活.     

NGB基因转染拮抗庆大霉素耳毒性作用的实验研究

目的验证阳离子脂质体介导脑红蛋白(neuroglobin,NGB)基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性的保护作用。方法将ABR反应阈均不超过40dB SPL的120只健康花色豚鼠随机分为5组,每组24只:Ⅰ组:空白对照组;Ⅱ组:人工外淋巴液对照组(经左耳注入人工外淋巴液);Ⅲ组:人工外淋巴液实验组(经左耳注入人工外淋巴液后肌肉注射庆大霉素);Ⅳ组:空质粒转染组(经左耳注入空质粒pEGFP-C1后肌肉注射庆大霉素);Ⅴ组:NGB基因转染组(经左耳注入pEGFP-NGB后肌肉注射庆大霉素),庆大霉素均经后腿肌肉注射120mg.kg-1.d-1,共给药14天。停止给药后喂养14天,各组均行ABR检测,耳蜗基底膜铺片、免疫组化观察各组豚鼠耳蜗基底膜毛细胞形态学及NGB蛋白表达的变化。结果给药后Ⅰ组ABR反应阈平均为37.22dB SPL(左耳)和36.94dB SPL(右耳),Ⅱ组阈值平均为37.22dB SPL(左耳)和37.50dB SPL(右耳),Ⅲ组阈值平均为119.44dB SPL(左耳)和122.22dB SPL(右耳);Ⅳ组阈值平均为119.72dB SPL(左耳)和120.83dB SPL(右耳);Ⅴ组阈值平均为83.89dB SPL(左耳)和100.56dB SPL(右耳)。Ⅴ组ABR反应阈较Ⅰ组和Ⅱ组显著升高(P<0.05),较Ⅲ组和Ⅳ组显著降低(P<0.05)。Ⅴ组中手术耳ABR反应阈较非手术耳降低(P<0.05)。耳蜗基底膜铺片示Ⅰ组和Ⅱ组内外毛细胞排列整齐,无缺失,Ⅲ组和Ⅳ组内外毛细胞极少量残存,其中ABR阈值大于135dB SPL的豚鼠耳蜗毛细胞几乎消失殆尽,Ⅴ组毛细胞部分缺失,且主要是外毛细胞;免疫组织化学染色示Ⅴ组耳蜗毛细胞NGB蛋白表达量较其余各组均显著增高(P<0.05),其余各组几乎均未见明显阳性表达。结论本研究成功验证了阳离子脂质体介导NGB基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性具有有效的保护作用。     

非病毒载体介导脑源性神经营养因子基因的体外转染小鼠耳蜗螺旋神经节细胞实验研究

目的　探究经聚醚酰亚胺（polyetherimide,PEI）表面修饰后的纳米羟基磷灰石载体介导脑源性神经营养因子（derived neurotrophic factor,BDNF）体外转染效率,表达产物对庆大霉素所致小鼠耳蜗螺旋神经节细胞（spiral ganglion cells,SGCs）细胞损伤的保护作用。方法　构建经PEI表面修饰的纳米羟基磷灰石载体和BDNF基因真核表达质粒,体外培养并转染小鼠耳蜗SGCs细胞;分别采用实时定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）、蛋白质免疫印迹和细胞计数试剂盒kit-8（cell counting kit-8,CCK-8）细胞毒实验,检测体外培养小鼠耳蜗SGCs细胞及纳米羟基磷灰石载体介导BDNF基因的体外转染及表达效率,对耳毒性药物庆大霉素所致SGCs细胞损伤的保护作用。结果　DNA核酸电泳结果显示成功构建带有巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）启动子的BDNF真核表达质粒;qRT-PCR和蛋白质免疫印迹结果显示与转染空质粒对照组相比,转染BDNF表达载体构建后SGCs原代细胞中BDNF的mRNA水平显著上调4.19倍（t =5.744,P <0.05）,蛋白水平显著上调3.03倍（t =6.627,P＜0.05）,差异有统计学意义。此外,蛋白质免疫印迹和CCK8细胞毒实验结果表明,庆大霉素处理可显著抑制小鼠耳蜗SGCs细胞内BDNF基因表达,加剧细胞毒性,转染纳米羟基磷灰石载体介导qRT-PCR BDNF基因可明显逆转庆大霉素对SGCs的细胞毒作用,差异有显著统计学意义（t =10.015,P <0.01）。结论　经PEI表面修饰的纳米羟基磷灰石载体可显著增强BDNF基因的跨膜能力,显著上调SGC细胞内BDNF表达产物的表达及对庆大霉素所致SGCs细胞损伤的保护作用,为内耳基因治疗的临床开展及应用提供实验和理论依据。     

豚鼠骨髓间充质干细胞培养及体外转染神经营养因子-3的研究

目的建立豚鼠骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）的体外培养体系,体外脂质体2000介导神经营养因子 3（neurotrophic factor 3,NT 3）转染BMSCs,为内耳移植提供前期研究基础。方法①采用全骨髓贴壁法培养豚鼠BMSCs并传代,取P3代做生长曲线图,流式细胞仪上检测BMSCs的表面标志物CD29,CD90以及造血细胞表面标志物CD45;②按照不同质粒-脂质体配比介导pEGFP N1 NT3转染P3代BMSCs,转染后48 h计算转染效率,选择最佳配比将pEGFP N1 NT3质粒转染P3代BMSCs,转染后1、3、7、14 d,观察其荧光表达情况;③转染后3 d的BMSCs提取蛋白,Western Blot验证NT 3蛋白表达。结果①全骨髓贴壁法获得细胞数量多,增殖快,传代可以纯化细胞。生长曲线符合Logistic生长曲线。流式细胞仪检测细胞CD29和CD90阳性表达,CD45阴性表达,符合BMSCs特征;②不同配比中质粒：脂质体为4 μg:12 μl时转染率最高,为最佳配比;③转染后48 h荧光表达较强,7 d荧光表达但较前明显减弱,14 d基本未见明显荧光表达。Western Blot验证NT 3基因成功表达。结论①全骨髓贴壁法可以成功培养出增殖快,细胞纯度高的BMSCs;②脂质体法成功介导NT 3真核质粒在BMSCs内表达,BMSCs可能作为内耳基因治疗的理想载体。     

一氧化氮合酶抑制剂和神经营养因子3对噪声暴露下豚鼠耳蜗的保护作用

目的观察一氧化氮合酶抑制剂——N-硝基左旋精氨酸甲酯（N^G-nitro-L-arginine methyl ester，L-NAME）和神经营养因子3（neurotrophin 3，NT3）对噪声性听力损失的保护作用。方法80只雄性杂色豚鼠按区组随机分为非噪声组（n=20）和噪声暴露组（n=60），噪声暴露组又分为生理盐水组（n=20）、L-NAME组（n=20）、L-NAME＋NT3组（n=20）。L-NAME组和L-NAME＋NT3组动物在噪声暴露（4kHz倍频程、声压级115dB，5h）之前2d和噪声暴露前30min给予L-NAME 10mg／kg（腹腔注射），生理盐水组动物给予等体积的生理盐水。NT3（10μg／ml）在噪声暴露前4d经微量渗透泵（200μl，0．5μl／h）输入到L-NAME＋NT3组动物的右侧耳蜗鼓阶，持续到噪声暴露后10d。噪声暴露前和暴露后10d测试听性脑干反应（auditory brainstem response，ABR），暴露后3d测试耳蜗组织一氧化氮（nitric oxide，NO）水平，最后一次ABR测试后计数耳蜗毛细胞的存活率。结果无噪声暴露组动物无明显的听力改变和毛细胞缺失；生理盐水组动物的ABR阈移、毛细胞缺失率及耳蜗组织NO水平均高于L-NAME组和L-NAME＋NT3组，差异有统计学意义（P值均〈0．01）；与L-NAME组相比，L-NAME＋NT3组豚鼠的ABR阈移减小，差异有统计学意义（P〈0．01），而耳蜗组织NO水平和毛细胞缺失率差异则没有统计学意义（P=0．197及P=0．095）。结论与单独给予L-NAME相比，联合使用NT3可以更大程度减轻噪声对豚鼠耳蜗的损伤。     

脑源性神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞在受损耳蜗内的生存和分化

目的探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor gene,BDNF)基因转染的骨髓间充质干细胞(bone-marrow mesenchymal stem cells,BMSC)在受损耳蜗内的生存和分化情况。方法将转染了BDNF基因并在体外诱导分化的BMSC(BDNF-BMSC)标记后,通过鼓阶注射植入阿米卡星致聋的豚鼠耳蜗内(BDNF-BMSC组,18只),并设注射未诱导分化的BMSC的豚鼠为对照组(BMSC组,18只)。在注射后1、2、4w取耳蜗组织石蜡切片,HE染色和荧光染色观察注射细胞的分布;神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protien,GFAP)抗体免疫组化染色观察注射细胞在耳蜗内的分化。结果 BDNF-BMSC和BMSC在耳蜗内均能成活并分布到一定的区域,鼓阶和前庭阶较多,中阶和蜗轴较少。NSE和GFAP免疫化学可见BDNF-BMSC部分细胞阳性染色,而BMSC阳性细胞较少。BDNF-BMSC在1、2w时平均光密度(AOD)值较高,在4w时显著下降(P<0.05);在各时间点,BDNF-BMSC组AOD值均显著高于BMSC组(P<0.01)。结论诱导分化前后的BMSC耳蜗移植后均能成活并分布到一定的区域,在耳蜗内BDNF-BMSC分化能力明显强于BMSC,但随时间延长分化能力下降。     

小鼠耳蜗神经营养因子-3基因的克隆及其基因工程细胞模型的建立

目的：克隆小鼠耳蜗组织神经营养因子－3（neurotrophin-3,NT3)基因，并转染该基因在体外培养的T淋巴细胞系的Jurkat细胞，建立能够表达和分泌NT3的基因工程细胞模型，为后续体内应用作准备。方法：用反转录PCR方法扩增NT3基因，定向克隆入测序载体pUC19。酶切和测序鉴定正确后，再以pUC19－NT3质粒为模板，通过PCR方法得到上下游能够与pCDNA3载体中酶切位点匹配的NT3片段，进一步克隆获得pCDNA3－NT3质粒。酶切鉴定正确的质粒经阳离子脂质体包埋转染入Jurkat细胞，通过G418反复筛选后，有克降隆形成再扩大培养；收集部分细胞提取其中的总RNA，反转录PCR检测有无NT3基因片段存在；并利用这些细胞的培养上清鉴定有无生物学活性。结果：正确克隆的小鼠耳蜗组织NT3基因转染Jurkat细胞后，能够表达和分泌NT3蛋白并具有生物学活性，促进离体毛细胞和听觉神经元的存活。结论：在体外建立表达NT3基因并分泌NT3蛋白的基因工程细胞模型是可行的，为进一步应用到体内治疗感音神经性聋奠定了实验基础。     

阳离子脂质体介导小鼠原代螺旋神经节细胞NT-3基因转染的实验研究

目的通过阳离子脂质体携带构建的神经营养因子-3(NT-3,Neurotrophin-3)-绿色荧光蛋白基因(pEGFPC2)转染小鼠耳蜗原代培养的螺旋神经节细胞,观察NT-3-pEGFPC2的共表达及其对螺旋神经节细胞生长的影响。方法构建携带绿色荧光蛋白报告基因的重组质粒-NT3 pEGFPC2,建立体外培养原代小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的方法,并用神经丝蛋白(NF200)单克隆抗体进行免疫组化染色鉴定。利用阳离子脂质体携带重组质粒瞬时转染原代小鼠耳蜗螺旋神经节细胞,观察转染后NT-3的表达及对螺旋神经节细胞生长数量的影响。结果成功培养了小鼠原代耳蜗螺旋神经节细胞。基因转染后24 h在荧光显微镜下观察到胞体及轴突发出绿色荧光的螺旋神经节细胞。用Western blot方法检测到相应NT-3蛋白表达。继续培养12 d后各组细胞数量均减少,但NT-3转染组细胞减少数量低于空载体组。结论阳离子脂质体可作为NT-3基因的载体。NT-3的基因转染对抑制耳蜗螺旋神经节细胞的退行性变有一定作用。     

两种神经营养因子对噪声性毛细胞损伤协同防护作用的观察

目的：观察胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derved neurotrophic factor,GDNF)和神经营养素－3（neurotrophin-3,NT-3)对噪声引起毛细胞肌动蛋白损伤的协同防护作用。方法：采用改进的豚鼠耳蜗微渗透压泵慢性灌注技术,将GDNF和NT－3缓慢注入12只豚鼠左侧内耳,在左耳灌注人工外淋巴液的9只豚为对照,检测噪声暴露后豚鼠听功能和耳蜗毛细胞缺失率的变化。结果：动物术后14d(噪声暴露后10d)实验组手术耳和非手术耳的脑干诱发电位反应（auditory brainstem responses,ABR)阈值低于对照组（秩和检验,下同,P＜0．05,P＜0．01）,毛细胞表皮板和纤毛肌动蛋白荧光染色计数发现实验组手术耳和非手术耳外毛细胞缺失率均低于对照组（P＜0．001,P＜0．01）,内毛细胞缺失率也均低于对照组（P＜0．01,P＜0．01）。结论：GDNF和NT－3对噪声性聋具有较好的协同防护作用。     

Ultrastructural localization of gentamicin in the cochlea

The ultrastructural distribution of gentamicin in the cochlea was investigated immunocytochemically. Specific labeling was restricted to the organ of Corti, in particular to the outer and inner hair cells, the Deiters' cells, Hensen's cells and the tympanic layer cells of the basilar membrane. Other cochlear tissues did not demonstrate any labeling. At the subcellular level, gentamicin was found in lysosomes, multivesicular bodies and small tubules and vesicles.

A model is proposed in which it is hypothesized that gentamicin is internalized by endocytotic vesicles and is transferred to the lysosomal compartment as well as to the endoplasmic reticulum and Golgi complex.     

阿霉素对豚鼠耳蜗外侧壁中多耐药基因1基因表达的影响

目的:探讨豚鼠耳蜗外侧壁中多耐药基因1(mdr1)是否对外源性的阿霉素(ADM)发生应激反应;ADM在耳蜗内淋巴液中积聚浓度的变化。方法:经静脉注射中毒剂量的ADM后,利用RTPCR技术半定量mdr1mRNA;采用高效液相色谱法(HLPC)检测内淋巴液中的ADM浓度。结果:①注射后24h时相点ADM组mdr1mRNA的量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而其4h时相点,与空白组相比差异无统计学意义;生理盐水组各时相点mdr1mRNA的量与空白组间差异无统计学意义;②内淋巴液中的ADM浓度4h时相点较24h时相点高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:mdr1是一种防御或应激基因,可被外源性ADM所诱导;其在耳蜗外侧壁中的表达,可能与减少耳毒性药物在内淋巴液中的积聚,增强耳蜗自我保护功能有关。     

重组腺病毒构建及介导报告基因在豚鼠耳蜗中的表达

目的：带绿色荧光蛋白（GFP）基因的重组腺病毒,为利用重组腺病毒介导外源基因转导内耳提供依据。方法：通过细菌内同源重组方法构建携带有报告基因的重组腺病毒（Ad-GFP）,将重组腺病毒经耳蜗底回途径导入豚鼠耳蜗鼓阶外淋巴后,观察手术后不同时间GFP基因在豚鼠耳蜗内的表达、分布情况;检测手术前后听觉脑干诱发电位,观察手术和病毒对豚鼠听觉功能的影响。结果：构建的重组腺病毒经酶切电泳鉴定正确;豚鼠耳蜗底回途径导入腺病毒24 h后即有报告基因表达,3 d后最高,表达时间可持续2周以上;报告基因表达部位主要分布在血管纹、鼓阶外淋巴面的间皮细胞和耳蜗Corti器等部位;听觉脑干诱发电位（ABR）在各组动物手术前后无明显改变。结论：成功构建了携带GFP基因的重组腺病毒,通过该方法构建的腺病毒可以介导报告基因在豚鼠耳蜗中表达,并且对豚鼠听觉功能无明显影响,为内耳基因治疗提供了理论依据。     

A functional and histological study of the combined effects of gentamicin and aminooxyacetic acid on the organ of Corti of the guinea pig

Summary Aminooxyacetic acid (AOAA) is a transaminase inhibitor that has been shown to protect the inner ear from loud noises. This study was done to determine if it can also protect against the cochleotoxic action of gentamicin. Four groups of guinea pigs were injected with gentamicin in doses approximating a clinical therapeutic dose and then in ototoxic doses. Thereafter animals were treated with parenteral AOAA. The effect on hearing was investigated using Preyer's reflex measurements. All animals were sacrificed and their cochleas were examined histologically using the surface preparation technique and mid-modiolar semithin sections. Histocochleograms were plotted to compare the effects of treatment in the animal groups. There was no difference seen among the groups tested. Cochlear damage was nearly equal in all animals, and AOAA was not found to protect the cochlea against gentamicininduced ototoxicity of gentamicin. The mechanism of the ototoxicity produced is discussed on the basis of the findings. Additionally, hair cell degeneration was studied after therapeutic doses of gentamicin. Changes seen were found to be equal to or less than 5% of the hair cells and were scattered throughout the entire cochlea.This work was performed in the ENT Department, University of Tübingen, in a cooperative research project between Egypt and the Federal Republic of Germany (Channel System)Supported by a grant from the Deutsche Forschungsgemeinschaft (PL 79/3)     

NT3重组腺病毒对耳蜗螺旋神经节的保护作用

目的　观察含有神经营养素 - 3(neurotrophin - 3,NT3)的重组腺病毒在豚鼠耳蜗中的表达及其在噪声损伤后对螺旋神经节的保护作用。方法　 2 7只白色纯种豚鼠 ,暴露于 135dBSPL、4kHz的窄带噪声中 4h。 7天后 ,12只经圆窗注入ad -NT3,12只经圆窗注入腺病毒携带的Lac2基因 (adenviruslacopron ,ad -LacZ) ,3只注入人工外淋巴液。分别于 1、4、8周后取材 ,石蜡包埋中轴切片后 ,用免疫组化方法 (ABC法 )检测NT3的表达。于光镜下计数螺旋神经节细胞。结果　在耳蜗各回中NT3均有表达 ,4、8周组动物较 1周组动物染色弱。注入ad -NT3组较ad -LacZ组和人工外淋巴组螺旋神经节发生退行性病变的数目少 ,螺旋神经节细胞计数结果经t检验有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　含有NT3的重组腺病毒在耳蜗中能高效表达 ,且在噪声损伤情况下对螺旋神经节有保护作用     

Endothelial nitric oxide synthase upregulation in the cochlea of the guinea pig after intratympanic gentamicin injection

Single-shot transtympanic gentamicin therapy has become a popular treatment modality for Menieres disease despite the known possible ototoxic properties of this drug. It was shown recently that NO production and iNOS were upregulated after gentamicin application, which was interpreted as a possible effect of ototoxicity. In this study we analyzed the expression of eNOS after gentamicin application to determine a possible correlation of this enzyme with gentamicin-induced ototoxicity. We compared eNOS expression in gentamicin-treated and non-treated guinea pigs in the second turn of the cochlea, an area corresponding to speech perception in humans. Gentamicin (4 mg) was injected intratympanically into the middle ear of guinea pigs ( n =3) and the reduction of the hearing threshold level was determined by recording acoustic-evoked potentials (AEP) before and 5 days after gentamicin application. Morphological alterations in the organ of Corti were analyzed by light and electron microscopy. Gold-labeled anti-eNOS antibodies were counted in eight different cell areas for quantification of eNOS expression. Seven animals were analyzed as controls. After gentamicin application, a deterioration of hearing level was observed varying from 10 to 30 dB. A high degree of vacuolization was identified in the third row of outer hair cells. At the subcellular level, the subsurface cisterns in outer hair cells were dissociated from the basolateral cell membrane, and the mitochondrial membranes were frequently damaged. Statistically significant upregulation of eNOS was observed in all cell types analyzed. Depending on the various cell types the amount of gold-labeled eNOS antibodies was 2.5 to 5.7 times higher after gentamicin application. We observed significant eNOS upregulation after gentamicin application in the cochlea, in conjunction with cellular damages and decreased hearing.     

Math1基因内耳导入径路的探索研究

目的研究腺病毒携带Math1-EGFP基因经完整圆窗膜途径及鼓阶打孔途径导入耳蜗后对听功能和转导效率的影响,为内耳基因治疗提供实验基础和理论依据。方法健康成年白色红目豚鼠40只,雌雄不限,体重250—300g。随机分成四组,完整圆窗膜组12只,鼓阶打孔组12只,各组分别设对照8只。实验组（24只）导入重组腺病毒携带的Math1基因及增强型绿色荧光蛋白基因（enhanced green fluorescent protein,EGFP）,对照组（16只）导入人工外淋巴液,所有动物均以左耳作为导入耳。术前及术后分别行听性脑干反应（ABR）检查。分别于术后5天、14天取双侧耳蜗标本做基底膜铺片观察基因表达情况。结果完整圆窗膜组导入耳ABR阈值,术后5天各频率与术前比较无显著性差异（P〉0．05）;鼓阶打孔组导入耳ABR阈值,术后5天在2kHz、4kHz与术前比较无差异（P〉0．05）,8kHz较术前增高（P〈0．05）,16kHz、20kHz较术前明显增高（P〈0．01）,术后14天在16kHz、20kHz较术后5天时明显好转（P〈0．01）,但较术前仍有增高（P〈0．05）。转导成功率鼓阶打孔组为91．6％,优于完整圆窗膜组的50％。两种转导途径对目的基因在耳蜗内的表达部位和表达时间没有显著影响。结论完整圆窗膜途径及鼓阶打孔途径在转导成功率及听功能保护方面各有优劣。完整圆窗膜途径因其对耳蜗的损伤极小,在临床应用方面具有更好的发展前景。