^1H磁共振波谱在大鼠C6脑胶质瘤致痫性评估中的应用

目的:1H磁共振波谱是研究活体脑组织及肿瘤组织代谢与生化指标测定的非侵袭技术,实验通过对种植C6脑胶质瘤大鼠的1H磁共振波谱在体观察,为非侵袭性评价肿瘤的致痫性提供帮助。方法:实验于2007-03/07在中国医科大学附属盛京医院中心实验室完成。①分组处理:选用雌性近交系Wistar大鼠共40只,随机分为实验组和对照组两组各20只。实验组制作C6脑胶质瘤移植动物模型,根据皮质脑电图记录结果确定癫痫发作,并将其分为致痫组与非致痫组;对照组在相同部位注射等量Ham'sF-12培养液。②观察指标:所有大鼠取出内置皮质电极后行1H磁共振波谱检查。分别选择肿瘤周围区及肿瘤实质区作为感兴趣区对每一体积元进行化学位移成像。所测定的主要代谢产物包括N-乙酰基天门冬氨酸、肌酸、胆碱、乳酸/脂质、谷氨酸及γ-氨基丁酸。以肌酸为参照波峰,分别计算各代谢产物与肌酸波的积分面积进行比较。结果:32只大鼠纳入结果分析。①实验组大鼠C6脑胶质瘤肿瘤实质区及肿瘤周围区胆碱及脂质波峰高于对照组(P<0.01,0.05);而肿瘤实质区N-乙酰基天门冬氨酸及谷氨酸波峰高于对照组(P<0.05)。②C6脑胶质瘤致痫组肿瘤周围区谷氨酸波峰高于非致痫组(P<0.01);而γ-氨基丁酸波峰低于非致痫组(P<0.01)。同时,肿瘤周围区乳酸/肌酸两组间比较差异也具有统计学意义(P<0.05)。结论:①1H磁共振波谱检查可为脑胶质瘤的恶性程度及其侵袭性的活体判定提供依据。②通过活体监测肿瘤周围皮质谷氨酸与γ-氨基丁酸二者含量的变化,也可为非侵袭性评价肿瘤的致痫性提供帮助。     

中国人脑星形胶质细胞瘤中表皮生长因子受体的表达及其靶向治疗

背景越来越多恶性脑胶质瘤存在的基因缺陷被发现,恶性脑胶质瘤的基因治疗逐渐成为热点,胶质瘤的治疗可以靶向于脑胶质瘤的基因缺陷.目的研究中国人脑星形胶质细胞瘤中表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactor receptor,EGFR)的表达,并探讨其临床意义.设计以金标准为依据的诊断性试验的病例观察性研究.地点、对象和干预人脑星形胶质细胞瘤新鲜手术标本37例,其中男22例,女15例,年龄11～69岁,平均37岁,均来自于1998/2000长征医院手术病例.样本包含术中所切除肿瘤组织及配对瘤周组织,按照Kernohan病理分级,分为低级别组(Ⅰ～Ⅱ级,12例)和高级别组(Ⅲ～Ⅳ级,25例).人脑胶质瘤细胞株U87MG,U251MG,大鼠脑胶质瘤细胞株C6.应用免疫组化方法(Evision-HRP法)检测人脑星形胶质瘤标本(含配对瘤周组织)和体外培养的多株人和大鼠胶质瘤细胞系的EGFR表达.主要观察指标EGFR在人星形细胞瘤、脑胶质瘤细胞株中的表达;EGFR表达与肿瘤病理分极的相关性.结果人脑星形胶质瘤组织EGFR阳性率为70%(26/37),明显高于瘤周组织(32%,12/37),差异有显著性意义(x2=10.602,P＜0.01).Ⅲ～Ⅳ级肿瘤EGFR阳性率为84%(21/25),Ⅰ～Ⅱ级为42%(5/12),高级别组肿瘤EGFR表达水平显著低于低级别组,差异有显著性意义.(x2=6.955,P＜0.01),体外实验显示不同来源细胞系间的EGFR表达率差异存在显著性意义.结论中国人脑星形胶质瘤存在EGFR的过度表达,提示EGFR可作为恶性脑胶质瘤细胞的标志物.为基因治疗提供了适宜的靶向,为研究EGFR介导的脑胶质瘤靶向性基因治疗建立基础.     

超声微泡-阳离子纳米脂质体复合体制备的实验研究

目的 RI示踪剂动态观察大鼠C6脑胶质瘤的生物学行为及抗肿瘤生成因子治疗的效果。方法 实验对照组:25μg/ml浓度USPIO 标记的C6脑胶质瘤(1×106)细胞采用立体定向方法接种6只大鼠右侧额叶。实验组Ⅰ:150μg反义VEGF核酸与C6脑胶质瘤细胞混合液,立体定向方法接种6只大鼠右侧额叶。实验组Ⅱ:C6脑胶质瘤(1×10⁶)细胞采用立体定向方法接种6只大鼠右侧额叶后3天,肿瘤内注射150μg反义VEGF核酸+脂质体。载体MRT2WI、T2^* 、R2^* ,GRE序列扫描分别于24h、3、7、14、21天进行,测定其信号强度,测定肿瘤大小。获取标本进行大体切片,普鲁士蓝染色光镜分析染色数量、深度与肿瘤生长的关系。测定VEGF表达强度。结果 25μg/ml浓度USPIO 标记大鼠C6胶质瘤细胞,信号强度与接种时间有关(t=5.16、2.35、4.41,P<0.05)。普鲁士蓝染色镜下观察,USPIO 标记大鼠C6胶质瘤细胞在MR成像中清楚显示病变的范围及信号强度,随着脑内肿瘤的不断生长,信号强度随之降低,低信号的铁颗粒逐渐减少、迁徙到肿瘤的边缘,逐渐消失。反义VEGF核酸在C6脑胶质瘤细胞接种前、后使用7、14天均有抑制脑胶质瘤生长的作用,2周后MRI表现、肿瘤生长速度及镜下分析差异无统计学意义(P<0.05)。结论 USPIO 可以成功地载体标记大鼠C6胶质瘤细胞,活体接种脑内完全可以达到MRI示踪的目的,随着肿瘤不断生长,铁颗粒信号逐渐减少而升高,USPIO早期对肿瘤定位具有重要意义。反义VEGF核酸对脑胶质瘤的生长有短时间调控作用,VEGF反义核酸可在分子水平上有效抑制VEGF表达。     

中国人脑星形胶质细胞瘤中表皮生长因子受体的表达及其靶向治疗

背景：越来越多恶性脑胶质瘤存在的基因缺陷被发现。恶性脑胶质瘤的基因治疗逐渐成为热点，胶质瘤的治疗可以靶向于脑胶质瘤的基因缺陷。目的：研究中国人脑星形胶质细胞瘤中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)的表达，并探讨其临床意义。设计：以金标准为依据的诊断性试验的病例观察性研究。地点、对象和干预：人脑星形胶质细胞瘤新鲜手术标本37例，其中男22例。女15例，年龄11～69岁，平均37岁，均来自于：1998／2000长征医院手术病例。样本包含术中所切除肿瘤组织及配对瘤周组织，按照Kernohan病理分级，分为低级别组(Ⅰ～Ⅱ级，12例)和高级别组(Ⅲ～Ⅳ级。25例)。人脑胶质瘤细胞株U87MG，U251MG，大鼠脑胶质瘤细胞株C6。应用免疫组化方法(Evision-HRP法)检测人脑星形胶质瘤标本(含配对瘤周组织)和体外培养的多株人和大鼠胶质瘤细胞系的EGFR表达。主要观察指标：EGFR在人星形细胞瘤、脑胶质瘤细胞株中的表达；EGFR表达与肿瘤病理分极的相关性。结果：人脑星形胶质瘤组织EGFR阳性率为70％(26／37)，明显高于瘤周组织(32％，12／37)，差异有显著性意义(χ^2=10．602，P＜0．01)。Ⅲ～Ⅳ级肿瘤：EGFR阳性率为84％(21／25)，Ⅰ～Ⅱ级为42％(5／12)，高级别组肿瘤：EGFR表达水平显著低于低级别组，差异有显著性意义。(χ^2=6．955，P＜0．01)，体外实验显示不同来源细胞系间的EGFR表达率差异存在显著性意义。结论：中国人脑星形胶质瘤存在EGFR的过度表达，提示EGFR可作为恶性脑胶质瘤细胞的标志物。为基因治疗提供了适宜的靶向，为研究EGFR介导的脑胶质瘤靶向性基因治疗建立基础。     

脑胶质瘤PS值与MMP-2和MMP-9表达相关性的实验研究

目的 运用CT灌注成像评价大鼠C6脑胶质瘤生长过程中血管通透性的变化及其与MMP-2、MMP-9表达的相关性.方法 采用立体定向方法在30只雌性Wistar大鼠右侧尾状核接种C6细胞,于接种后1 W、2 W、3 W分别进行CT灌注成像,每次检查结束后留取鼠脑标本作病理学检查.结果 各组肿瘤区PS值均比对侧正常脑组织PS值增大(P＜0.01),荷瘤2 W及3 W组肿瘤中心区PS值比相应肿瘤周边区PS值增大(P＜0.01),与荷瘤1 W组比较,荷瘤2 W和3 W组肿瘤中心、肿瘤周边区PS值增大(P＜0.05);肿瘤区MMP-2和MMP-9阳性表达随肿瘤生长而增加;肿瘤周边区PS值与MMP-9表达呈正相关(rx=0.540,P＜0.05).结论 PS值可反映大鼠C6脑胶质瘤生长过程中肿瘤不同区域血管通透性的动态变化,肿瘤周边区域PS值变化与MMP-9表达密切相关.     

明胶酶在脑胶质瘤大鼠中的活性

目的:通过观察脑胶质瘤大鼠动物模型中明胶酶的活性变化,为以明胶酶为靶点的脑胶质瘤治疗奠定实验基础。方法:实验于2004-10/2005-12在解放军军事医学科学院野战输血研究所干细胞生物学研究室完成。9L大鼠胶质瘤细胞购自广州南方医科大学。①选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,24只建立大鼠脑胶质瘤模型,造模后随机数字表法分为建模后7,14,21,28d组,6只/组,每组3只用于灌注固定做免疫组化分析,另3只用于反转录多聚酶链反应和明胶酶谱分析。剩余3只大鼠作为正常对照。②采用反转录多聚酶链反应技术、免疫组织化学和明胶酶谱等方法检测胶质瘤中明胶酶2(matrixmetalloproteinase2,MMP-2)和明胶酶9(matrixmetalloproteinase2,MMP-9)的活性变化。结果:实验选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,全部进入结果分析。①MMP-2和MMP-9mRNA的表达:9L胶质瘤细胞中均可见MMP-2和MMP-9mRNA的表达,MMP-2的表达量高于MMP-9;大鼠脑胶质瘤组织中可见两者mRNA的表达,而正常脑组织MMP-2mRNA低表达,检测不到MMP-9mRNA的表达;随着肿瘤的生长,MMP-9mRNA的表达量增高。②MMP-2和MMP-9免疫组织化学观察结果:9L胶质瘤细胞的免疫组化显示,MMP-2和MMP-9均呈现阳性染色,主要为胞浆和胞膜染色;肿瘤组织MMP-2和MMP-9染色阳性,为胞浆染色,在血管内皮和肿瘤侵袭边缘细胞胞阳性染色明显。随脑胶质瘤的生长,MMP-2和MMP-9染色程度加深。③MMP-2和MMP-9酶活性检测结果:9L细胞无血清培养上清中可见Pro-MMP2(Mr72000)与Pro-MMP9(Mr92000)及其活化形式activeMMP-2(Mr66000)与activeMMP-9(Mr83000)的表达,MMP-2的表达量较高;MMP-2酶原与活化的MMP-2在脑胶质瘤组织中明显表达,而在正常脑组织低表达。MMP-9酶原与活化的MMP-9在脑肿瘤组织中表达,正常脑组织中未检测到其表达。④MMP-2和MMP-9在肿瘤组织中的定位情况:脑胶质瘤组织冰冻切片原位明胶酶谱结果显示,肿瘤组织因表达活性的明胶酶降解载片上的明胶,致使不被染色,肿瘤部位很透亮。对侧脑组织因不表达明胶酶,不能降解明胶,被染黑。结论:脑胶质瘤模型中表达高活性的MMP-2和MMP-9,且与胶质瘤生长速度密切相关。     

SD大鼠C6脑胶质瘤伽玛刀干预前后VEGF的表达变化

目的通过对C6大鼠脑胶质瘤的伽玛刀治疗,检测伽玛刀治疗前后VEGF的变化,探讨伽玛刀治疗胶质瘤作用机制。方法 50只SD大鼠,采用立体定向法对40只SD大鼠进行动物造模,10只作为正常对照组,14 d后对其中20只进行伽玛刀治疗作为治疗组,20只作为肿瘤对照组。伽玛刀治疗后7 d,对所有大鼠处死并应用免疫组化法检测VEGF并进行统计学分析。结果 VEGF在正常大鼠基本没有表达,在肿瘤对照组大鼠中表达增强,伽玛刀照射组VEGF的表达降低。结论伽玛射线可降低大鼠C6脑胶质瘤VEGF表达。     

人参皂甙Rh2对脑胶质细胞瘤侵袭性的影响

目的　探讨人参皂甙Rh2对C6胶质细胞瘤体内侵袭的影响。方法　将携带增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因的pegfp N3质粒体外转染C6胶质瘤细胞 ,将C6阳性克隆以立体定向法植入SD大鼠脑实质内 ,建立大鼠胶质瘤移植模型。一周后经MRI检测接种成功的大鼠 ,随机分成两组 ,采用阴性对照及腹腔给药的方法 ,用病理检查、荧光显微镜及MRI观察Rh2对胶质瘤侵袭的影响。结果　稳定转染EGFP基因的C6瘤细胞于体内、外均可发出绿色荧光 ,在荧光显微镜下易于区分肿瘤与非肿瘤区。 16 μl/mlRh2可明显抑制肿瘤体内侵袭。 结论　Rh2降低了C6瘤细胞的体内侵袭性 ,抑制肿瘤生长。     

胶质瘤组织中CPEB4蛋白的表达及临床意义

目的探讨人脑胶质瘤中胞质多聚腺苷酸化成分结合蛋白家族(CPEBs)中CPEB4表达水平与肿瘤级别之间的相关性及临床意义。方法应用免疫组织化学法检测65例胶质瘤组织和10例正常脑组织中CPEB4的表达情况,统计分析其蛋白的表达差异性与病理级别之间的关系。结果正常脑组织和胶质瘤组织中CPEB4蛋白阳性表达率分别为0%和63.10%(41/65)(P<0.05),Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤中阳性率分别为25.0%、36.8%、71.4%、100%,在不同级别胶质瘤中CPEB4蛋白的表达强度亦有统计学差异(P<0.05)。结论 CPEB4表达与胶质瘤病理分级相关,并与胶质瘤恶性进展及预后差密切相关,这为CPEB4作为脑胶质瘤诊断及分级的指标应用于临床的可行性提供了依据,并有助于评估胶质瘤侵袭、增殖能力及预后,为胶质瘤的靶向治疗提供新思路。     

肿瘤的基因治疗前期研究：反转录病毒介导的肿瘤坏死因子α基因抗C6胶质瘤效应☆

目的：探讨反转录病毒介导的肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因对C6胶质瘤的抗瘤效应，从而为肿瘤的基因治疗提供基础研究数据。方法：将重组TNF-α反转录病毒载体PLJ+TNF转染大鼠C6胶质瘤细胞，ELISA法检测该细胞中目的基因的表达，MTT法检测体外增殖能力；将实验大鼠随机分为实验组和对照组，每组10只，实验组大鼠右股内侧接种转基因2&;#215;10^6C6细胞，对照组同法同部位接种未转基因C6细胞，常规饲养5周，每周测量肿瘤大小，绘制肿瘤生长曲线，比较两组皮下肿瘤大小并进行统计学分析。结果：C6胶质瘤细胞与C6细胞的体外增殖能力比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)；转基因前后TNF-α分泌情况：1&;#215;10^6个C6细胞体外培养24h每毫升上清液分泌TNF-α(2．42&;#177;0．76)U；1&;#215;10^6个C6胶质瘤细胞体外培养24h每毫升上清液分泌TNF-α(1753&;#177;2．31)U，两者比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)；动态TNF-α检测显示：转基因C6细胞能稳定地表达高水平的TNF-α；大鼠皮下接种肿瘤细胞5周后，实验组3只未见肿瘤生长，其余肿瘤直径为(15&;#177;0．3)cm，对照组肿瘤直径为(2．4&;#177;0．2)cm，两组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：TNF-α基因转染大鼠C6胶质瘤细胞后能持续分泌高水平的TNF-α，对大鼠C6胶质瘤皮下肿瘤具有明显的抗瘤效应。     

肿瘤的基因治疗前期研究:反转录病毒介导的肿瘤坏死因子α基因抗C6胶质瘤效应

目的探讨反转录病毒介导的肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因对C6胶质瘤的抗瘤效应,从而为肿瘤的基因治疗提供基础研究数据.方法将重组TNF-α反转录病毒载体PLJ+TNF转染大鼠C6胶质瘤细胞,ELISA法检测该细胞中目的基因的表达,MTT法检测体外增殖能力;将实验大鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,实验组大鼠右股内侧接种转基因2×106 C6细胞,对照组同法同部位接种未转基因C6细胞,常规饲养5周,每周测量肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线,比较两组皮下肿瘤大小并进行统计学分析.结果C6胶质瘤细胞与C6细胞的体外增殖能力比较,差异无显著性意义(P＞0.05);转基因前后TNF-α分泌情况1×106个C6细胞体外培养24 h每毫升上清液分泌TNF-α(2.42±0.76)u;1 ×106个C6胶质瘤细胞体外培养24 h每毫升上清液分泌TNF-α(17.53±2.31)u,两者比较,差异有显著性意义(P＜0.01);动态TNF-α检测显示转基因C6细胞能稳定地表达高水平的TNF-α;大鼠皮下接种肿瘤细胞5周后,实验组3只未见肿瘤生长,其余肿瘤直径为(1.5±0.3)cm,对照组肿瘤直径为(2.4±0.2)cm,两组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).结论TNF-α基因转染大鼠C6胶质瘤细胞后能持续分泌高水平的TNF-α,对大鼠C6胶质瘤皮下肿瘤具有明显的抗瘤效应.     

人脑胶质瘤组织的IMP3和IGF2的表达水平及其临床意义

目的探讨胰岛素样生长因子-2(IGF-2)、胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3(IMP3)在人脑胶质瘤中的表达及其对患者预后的影响。方法回顾性分析2010年4月至2013年12月收集的68例人脑胶质瘤,且行手术治疗的患者的临床资料,将其纳入观察组(n=68),选择同期基线资料与观察组匹配的非瘤脑患者最为对照组(n=20)。采用免疫组化染色SP法观察两组标本中IGF-2、IMP3蛋白的表达水平,并分析其与患者临床病理特征、预后的关系。结果观察组标本中IMP3蛋白阳性表达水平为50. 00%,显著的高于对照组标本中的5. 00%,差异有统计学意义(P 0. 05);观察组标本中IGF-2蛋白阳性表达水平为42. 65%,显著的高于对照组标本中的10. 0%,差异有统计学意义(P 0. 05);观察组标本中IMP3、IGF-2蛋白阳性表达水平在不同的肿瘤分级中差异具有统计学意义(P 0. 05),Ⅰ级和Ⅱ级脑胶质瘤组织中的IMP3、IGF-2蛋白阳性表达水平显著的低于Ⅲ级Ⅳ级患者;观察组标本中IMP3、IGF-2蛋白阳性表达水平在不同年龄、性别脑胶质瘤患者中的表达差异无统计学意义(P 0. 05); IMP3阳性的脑胶质瘤患者3年总生存率(29. 41%)显著低于IMP3阴性患者(50. 00%)(P 0. 05),IGF2阳性的脑胶质瘤患者3年总生存率(28.21%)显著低于IMP3阴性患者(41. 03%)(P 0. 05)。结论脑胶质瘤组织中的IMP3、IGF-2蛋白阳性表达水平显著增高,并且与肿瘤分级及患者预后关系密切。     

明胶酶在脑胶质瘤大鼠中的活性

目的：通过观察脑胶质瘤大鼠动物模型中明胶酶的活性变化，为以明胶酶为靶点的脑胶质瘤治疗奠定实验基础。方法：实验于2004-10／2005-12在解放军军事医学科学院野战输血研究所干细胞生物学研究室完成。9L大鼠胶质瘤细胞购自广州南方医科大学。①选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只，24只建立大鼠脑胶质瘤模型，造模后随机数字表法分为建模后7，14，21，28d组，6只／组，每组3只用于灌注固定做免疫组化分析，另3只用于反转录多聚酶链反应和明胶酶谱分析。剩余3只大鼠作为正常对照。②采用反转录多聚酶链反应技术、免疫组织化学和明胶酶谱等方法检测胶质瘤中明胶酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP-2）和明胶酶9（matrix metalloproteinase 2，MMP-9）的活性变化。结果：实验选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只，全部进入结果分析。①MMP-2和MMP-9mRNA的表达：9L胶质瘤细胞中均可见MMP-2和MMP-9mRNA的表达，MMP-2的表达量高于MMP-9；大鼠脑胶质瘤组织中可见两者mRNA的表达，而正常脑组织MMP-2mRNA低表达，检测不到MMP-9mRNA的表达；随着肿瘤的生长，MMP-9mRNA的表达量增高。②MMP-2和MMP-9免疫组织化学观察结果：9L胶质瘤细胞的免疫组化显示，MMP-2和MMP-9均呈现阳性染色，主要为胞浆和胞膜染色；肿瘤组织MMP-2和MMP-9染色阳性，为胞浆染色，在血管内皮和肿瘤侵袭边缘细胞胞阳性染色明显。随脑胶质瘤的生长，MMP-2和MMP-9染色程度加深。③MMP-2和MMP-9酶活性检测结果：9L细胞无血清培养上清中可见Pro—MMP2（Mr72000）与Pro—MMP9（Mr92000）及其活化形式activeMMP-2（Mr 66000）与activeMMP-9（Mr83000）的表达，MMP-2的表达量较高；MMP-2酶原与活化的MMP-2在脑胶质瘤组织中明显表达，而在正常脑组织低表达。MMP-9酶原与活化的MMP-9在脑肿瘤组织中表达，正常脑组织中未检测到其表达。④MMP-2和MMP-9在肿瘤组织中的定位情况：脑胶质瘤组织冰冻切片原位明胶酶谱结果显示，肿瘤组织因表达活性的明胶酶降解载片上的明胶，致使不被染色，肿瘤部位很透亮。对侧脑组织因不表达明胶酶，不能降解明胶，被染黑。结论：脑胶质瘤模型中表达高活性的MMP-2和MMP-9，且与胶质瘤生长速度密切相关。     

细胞红蛋白在脑胶质瘤的表达和临床意义

目的：探讨细胞红蛋白（Cygb）在不同级别脑胶质瘤的表达及其在预后判断等方面的意义。方法采用免疫组织化学方法检测88例脑胶质瘤组织标本（WHOⅠ级10例,Ⅱ级37例,Ⅲ级26例,Ⅳ级15例）Cygb的表达情况,并分析其与临床病理、肿瘤复发和预后的关系。结果在低级别胶质瘤（Ⅰ～Ⅱ级）中Cygb呈高表达,在高级别胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ级）中Cygb呈低表达。Kruskal-Wallis test分析Cygb的表达程度与胶质瘤的病理级别呈高度负相关（P＜0.01）;Mann-Whitney U test分析Cygb与胶质瘤术后是否复发也呈高度负相关（P＜0.01）。Cygb低表达组患者的生存率低于Cygb高表达组。Cox回归分析Cygb低表达为脑胶质瘤高风险因素之一。结论 Cygb的表达水平能作为判断脑胶质瘤恶性程度的另一个指标, Cygb的表达水平还可以作为判断脑胶质瘤患者的预后和是否复发指标之一。     

大鼠C6胶质瘤模型构建及生长特性的研究

目的 建立Wistar大鼠C6胶质瘤模型,研究C6脑胶质瘤的发生,发展过程,细胞侵袭情况,肿瘤细胞及血管特性,肿瘤自发消退现象,模型最佳应用时间段及应用范围.方法 Wistar大鼠各50只,其中9只用于对照.将C6胶质瘤细胞悬液和DMEM培养基立体定向接种于大鼠的右侧尾状核,分别于接种后3,7,14.21,28,35.50 d进行增强MRI扫描及病理切片HE染色,MMP-2,CD31免疫组化染色.同时观察荷瘤鼠的生物学行为.结果 肿瘤模型于接种后7 d可在MRI上见到肿瘤生长,病理切片可见肿瘤细胞沿神经纤维向周边侵袭,成出芽状生长,14～28 d为快速增长期,免疫组化染色显示基质金属蛋白酶MMP-2及新生血管CD31成强阳性表达,肿瘤细胞聚集,血脑屏障严重破坏,并可沿胼胝体向对侧生长.大部分荷瘤鼠死于30 d内,但有2只28d后出现肿瘤自发消退现象,病理切片可见大量炎细胞浸润,肿瘤内部出现软化灶.结论 大鼠C6胶质瘸模型的生长过程,病理性质与人脑间变,胶质母细胞瘤具有相似性,生长稳定.尽管部分荷瘤鼠出现肿瘤自发消退现象,但此模型仍适合大部分抗胶质瘤药物或基因治疗等的临床前期研究.试验研究最佳时间窗为14～28 d.     

人脑胶质瘤基质金属蛋白酶-9的表达与肿瘤血管形成的相关性及对其肿瘤防治的意义

目的：观察基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在胶质瘤中的表达情况与微血管密度(MVD)的关系，探讨MMP-9对胶质瘤血管形成的作用和意义。方法：采用免疫组化S-P法检测58例不同病理分级人脑胶质瘤及10例正常脑组织标本中MMP-9和CD34的表达，测定其阳性细胞数和阳性血管数。结果：胶质瘤中MMP-9表达于肿瘤细胞胞浆和血管内皮细胞，少数强表达者肿瘤细胞核也见阳性表达；不同病理分级胶质瘤中MMP-9阳性表达率分别为Ⅰ级42．9％，Ⅱ级65．0％，Ⅲ级86．7％，Ⅳ级88．9％，其MMP-9表达显著高于正常脑组织(P&;lt;0．01)且与胶质瘤恶性程度呈正相关(ra=0．597，P&;lt;0．05)；不同病理分级胶质瘤中MVD差异有显著性意义(Ⅳ=47．865，P&;lt;0．05)；MMP-9表达与MVD显著正相关(ra=0．897．P&;lt;0．01)。结论：MVD和MMP-9的表达与胶质瘤恶性程度呈正相关，可作为临床判断胶质瘤恶性程度、侵袭性及预后的重要指标；MMP-9在胶质瘤的血管形成中起重要作用，可通过促进肿瘤血管形成加速肿瘤的进展。     

VEGF在脑胶质瘤中的表达及其与预后的关系

[目的]研究血管内皮生长因子(VEGF)在脑胶质瘤中的表达及与肿瘤恶性程度及预后的关系.[方法]应用免疫组化方法检测120例脑胶质瘤标本中VEGF表达,并结合临床资料进行统计学分析.[结果]VEGF的表达在低级别组(Ⅰ～Ⅱ级)与高级别组(Ⅲ～Ⅳ级)之间存在显著差异(P＜0.05);单因素预后分析显示VEGF的表达与患者的术后总生存期(OS)及无进展生存期(PFS)相关(P＜0.05),VEGF的高表达预示较短的OS和PFS;多因素COX比例风险回归模型分析显示VEGF是独立的不良预后的危险因素.[结论]VEGF在脑胶质瘤中的表达与肿瘤的病理分级有关,而且是脑胶质瘤预后的不利因素.     

P16和survivin蛋白在脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的探讨P16和survivin在人脑胶质瘤组织中的表达及临床意义。方法按Kernohan四级分类法将96例胶质瘤分为Ⅰ级26例、Ⅱ级32例、Ⅲ级28例和Ⅳ级10例,另外12例正常脑组织作为对照组,采用免疫组化S-P法检测P16和sur-vivin的表达情况。结果在正常对照组和胶质瘤组中P16、survivin阳性表达率分别为91.7%、0%和53.1%、58.3%,两者比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤中P16蛋白的阳性表达率分别为80.8%、59.4%、32.1%、20.0%,而survivin的阳性表达率分别为38.4%、53.1%、75.0%和80.0%,各组间差异均具有统计学意义(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤的P16阳性表达率明显低于Ⅰ、Ⅱ级而survivin的阳性表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ级(P<0.05)。P16蛋白表达与survivin蛋白表达呈负相关(r=-0.415,P<0.05)。结论 P16蛋白的表达缺失和survivin蛋白的过度表达与脑胶质瘤恶性程度相关,它们在其发生、发展中可能起协同作用。     

脑胶质瘤基质金属蛋白酶9表达与磁共振成像特征的相关性

目的 探讨脑胶质瘤MMP-9表达与肿瘤病理分级、磁共振成像(MRI)特征的关系.方法 31例胶质瘤患者分为低级别组(Ⅰ、Ⅱ级)20例、高级别组(Ⅲ、Ⅳ级)11例, 术前均接受MR平扫及增强扫描.以免疫组化染色观察MMP-9表达,并与MRI瘤周水肿指数(EI)、强化程度(EP)及肿瘤最大直径相比较.结果 高级别胶质瘤组MMP-9表达、EI、EP、肿瘤最大直径显著高于低级别胶质瘤组(t=6.312、4.405、6.286和5.026,P均＜0.05).MMP-9表达与肿瘤EI、EP、最大直径呈正相关(r=0.516,0.554和0.676,P＜0.05).MMP-9表达在边界清晰和不清晰肿瘤间差异无统计学意义(t=0.906,P＞0.05),而在信号均匀与不均匀肿瘤间差异有统计学意义(t=2.637,P＜0.05).结论 MMP-9表达与脑胶质瘤侵袭性密切相关,MRI所示瘤周水肿、肿瘤强化程度、肿瘤最大直径、信号均匀与否反映MMP-9表达,可作为判断肿瘤恶性的指标.     

不同时机协同给药诱导裸鼠脑胶质瘤细胞凋亡的对照研究

目的对比观察不同时机给予持续低剂量抗肿瘤细胞增殖和抗血管增生药物协同治疗裸鼠U251MG脑胶质瘤抑制脑胶质瘤生长的情况。方法分为两实验组,Ⅰ组,将2.5μl细胞悬液接种至6周龄雄性裸鼠脑白质内,接种次日预防性给药,是口服吲哚美辛(4 mg/kg)和腹腔注射榄香烯(70 mg/kg)协同给药;Ⅱ组,将等量的细胞悬液接种至4周龄雄性裸鼠脑白质内,接种后第20天治疗性协同给药,每组2只裸鼠,共4只裸鼠。给药20 d和30 d时,断椎处死裸鼠,脑标本石蜡切片3μm厚,分别行HE、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、CD34、TUNEL和PDCD-5等染色。结果预防性给药20 d裸鼠脑内未见明显增殖瘤细胞,亦无大量凋亡的瘤细胞,30 d时大量瘤细胞发生凋亡,GFAP呈阴性表达;治疗性给药裸鼠脑内仍可见胶质瘤细胞,20 d部分细胞发生凋亡,30 d大量细胞发生凋亡。结论预防性持续低剂量抗肿瘤增殖和抗血管增生药物协同治疗裸鼠脑胶质瘤,可有效遏制肿瘤的生长;治疗性给药虽能起到遏制肿瘤生长的目的,但治疗效果欠佳。