p53基因、 Fas/FasL在提高肝癌细胞化疗药物敏感性中的作用

目的：探讨野生型p53(wtp53)、Fas/FasL在提高肝癌细胞化疗药物敏感性中的作用及其机制。方法：用化疗药物争光霉素600mg/L分别处理人肝癌细胞株HepG2、Hep3B和PLC／PRF／5，观察争光霉素对肝癌细胞Fas/FasL表达的影响；预先将携带wtp53基因的重组腺病毒分别感染人肝癌细胞株24h，再用争光霉素进行诱导，观察感染前后肝癌细胞Fas/FasL的表达变化，并对经上述处理前后的肝癌细胞进行凋亡检测。结果：单纯争光霉素600mg/L诱导虽可提高肝癌细胞FasL的表达，但对其Fas的表达并无明显作用；感染wtp53基因后再应用争光霉素（600mg/L），则肝癌细胞Fas/FasL的表达水平不仅显著高于单纯争光霉素组，同时自身也发生了明显凋亡。结论：wtp53基因可能是通过上调肝癌细胞Fas/FasL的表达来降低其自身的凋亡阈值，进而提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性，Fas/FasL在wtp53基因逆转肝癌细胞耐药性中具有一定的作用。     

HBVx在肝细胞癌中的研究进展

肝细胞癌（HCC）的发生和发展与HBVX蛋白（HBx）的多种生物学功能密切相关,但HBV与原发性肝癌之间的特异关系仍未完全阐明,HBV慢性感染肝细胞的过程为HBV DNA整合于肝细胞DNA之中[1-2],如果其DNA整合在肝细胞DNA的原癌基因附近,可导致这些原癌基因的激活[3].因此,HBx及其编码基因的研究可揭示HCC发生和发展的机制.通过分析病毒基因组转化活性和病毒DNA推测,病毒DNA自身具有病毒癌基因,并且发现其产物x蛋白或HBx Ag具有反式激活功能.随着HBVx基因（HBx）研究的不断深入,同时还发现其可与抑癌基因产物P蛋白相互作用[4-5].HBx基因及其产物在原发性肝癌发生过程中起着十分重要的作用[6-7].对HBx的全面了解,将有助于对HBV致癌机理的认识.     

HBx基因在乙型肝炎病毒相关性肾炎致病机制中的研究进展

HBx基因是一种多功能的调节因子,具有广泛的反式激活作用,能激活转录因子、抑制DNA修复,并调节细胞的增殖、转化及凋亡.近年来,HBx在乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）致病中的作用成为研究的热点.研究显示,HBx对肾小球系膜细胞增殖、足细胞及肾小管上皮细胞的损伤及凋亡存在广泛影响.此文就HBx的生物学特性及在肾脏损伤机制中的研究进展进行了综述.     

wtp53基因在不同发育阶段大鼠小肠上皮细胞的表达特征及其与肠损伤修复的关系

目的研究抑癌基因wtp53在不同发育时期Wistar大鼠小肠上皮细胞的表达、分布特征以及与细胞增殖分化的关系,探讨wtp53基因在小肠创伤修复时可能发挥的生物学作用.方法利用wtp53单克隆抗体,以超敏的SP免疫组织化学方法,观察wtp53基因在胚胎、新生期各时间段Wistar大鼠小肠上皮细胞的阳性表达与分布特征.同时以细胞增殖活性的标志PCNA表达为参照,对不同时期细胞的增殖分化状况作对比性研究.结果在胚胎第17d(E17d)、E19d、新生期第1(P1)d,小肠上皮细胞wtp53基因的阳性表达范围较广,染色强度较深.P2d和wtp53基因表达不仅范围扩大且染色强度明显增强;到幼鼠期第28d,wtp53基因在小肠上皮细胞的表达为阴性;从胚胎至P2d,PCNA的表达与wtp53类似,而幼鼠期第28d,PCNA阳性细胞仅局限于小肠绒毛隐窝.结论在小肠发育的早期,上皮细胞的快速增殖分化期伴随着wtp53基因的高度表达,可能对遗传物质DNA的完整性起到监视和保护作用.     

HBx下调miR-16家族表达促进肝癌细胞恶性转化

目的乙型肝炎病毒X(hepatitis B virus X protein,HBx)蛋白通过调控蛋白编码基因表达而广泛参与人原发性肝细胞癌(简称肝癌)的发生和进展。本研究将HBx的调控功能拓展到非编码RNA领域,探讨HBx能否调控宿主肝癌细胞内microRNA(miRNA)的表达,进而参与肝癌细胞生长及恶性转化。方法利用高通量芯片分析及实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,q RT-PCR)鉴定HBx在肝癌细胞内诱发的miRNA表达变化。通过系列蛋白和mRNA表达分析,细胞周期及凋亡实验以及萤光素酶报告实验来检测miR-16家族表达抑制后HepG2肝癌细胞的生物学变化。结果芯片分析结果显示,HBx在HepG2细胞内诱发了大量的miRNAs表达变化,其中miR-16家族的低表达能在HepG2、SK-HEP-1及Huh7肝癌细胞中得到重复。同时,HBx显著上调miR-16家族的靶基因CCND1的表达。c-myc介导了HBx相关miR-16家族沉默,外源表达的miR-16/15a能通过阻滞细胞周期进展和诱导凋亡而抑制HepG2-hbx(稳定表达HBx)细胞的增殖、克隆形成及非贴壁生长能力。反之,沉默miR-16表达能促进HepG2细胞的周期进展和生长。结论 HBx能在体外改变肝癌细胞的miRNA表达谱,尤其是沉默miR-16家族表达。c-myc高表达介导了HBx下调miR-15a/16的过程且是HBx促进HepG2细胞恶性转化所必须的。因此,miR-16家族可能成为HBV相关肝细胞癌的治疗靶点。     

抑制乙肝病毒X蛋白表达对肝癌细胞上皮-间质转化和凋亡的影响

目的 探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)对肝癌细胞转移能力的影响及其机制.方法 采用siRNA干扰技术抑制MHCC97H细胞的HBx表达.通过Transwell小室和裸鼠肺转移模型实验比较HBx抑制前后MHCC97H细胞转移能力的变化.应用Western blotting技术检测肝癌细胞上皮间质转化(EMT)和凋亡相关基因的表达变化.结果 将HBx-siRNA导人MHCC97H细胞可以抑制HBx的表达及其转移能力,可下调EMT相关分子Twist和N-cadherin的表达,并上调E-cad-herin表达而抑制EMT,同时还可通过Twist-P53途径诱发细胞的凋亡.结论 抑制HBx表达可以通过改变上皮-间质转化和诱发凋亡而减弱高侵袭肝癌细胞MHCC7H的转移能力.

Abstract：

Objective To investigate the effects and possible mechanism of action of inhibiting hepatitis B virus X protein (HBx) expression on liver cancer metastasis. Methods The suppression of HBx expression in MHCC97H cells was performed by siRNA interference technique, and the effects of HBx suppression on the metastasis of MHCC97H cells were detected by Matrigel invasion assays and in a lung-metastasis mouse model. The expression levels of related epithelial-mesenchymal transition (EMT) and apoptosis proteins were examined by Western blotting. Results Introduction of HBx-siRNA into MHCC97H cells inhibited the expression of HBx and the ability to metastasize,downregulated the expression of Twist and N-cadherin, and upregulated E-cadherin expression. These changes resulted in inhibiting EMT of MHCC97H cells. Meanwhile, apoptosis involved in the Twist-P53 pathway was also found. Conclusions Inhibiting expression of HBx can decrease the metastatic a-bility of MHCC97H cells by changing EMT and inducing apoptosis.     

乙型肝炎病毒X蛋白与肝细胞癌

乙型肝炎病毒(HBV)是双股环状DNA病毒,包括S/preS、C/preC、P和X4个编码基因.X基因是HBV四个开放读码框中最小的一个,其编码的HBx蛋白分子量为17kDa,由154个氨基酸组成.HBV持续感染与肝细胞癌(HCC)的发生密切相关,HBV-DNA可能以片断性整合的方式存在于肝癌细胞染色体上,其中以HBV X基因的整合为主[1].转基因小鼠实验证明X基因的转入可使小鼠产生肝癌[2].HBV编码的x蛋白(HBx)在HCC的发生过程中起非常重要的作用.本文综述了近年有关HBx对相关基因转录的反式激活作用,对肝细胞DNA损伤修复及细胞凋亡、细胞周期调控、端粒酶活性的影响,HBx对肝细胞的恶性转化作用及针对HBx基因的基因治疗等研究进展.     

乙肝病毒X基因与肝细胞癌关系的研究进展

肝细胞癌 (Hepatic cellular carcinom a,HCC;以下也简称肝癌 )是临床最常见的恶性肿瘤之一 [1 ] 。在我国 ,约 80 %的 HCC合并乙型肝炎病毒 (hepatitis B Virus,HBV )感染 ,HBV被认为 HBV相关性肝癌发生的高危因素之一。但是 ,HBV与肝癌发生的分子机理仍不十分清楚。近年来 ,人们发现 HBV基因中编码 1 7k D的多功能蛋白命名为 x蛋白 ,也称 HBx Ag,为病毒基因组转录所必需 ;其对 HCC的多种生物学活性 ,可能影响 HCC形成和发展的多个环节 ,被认为与慢性 HBV感染者发展为肝癌密切相关 [2 ] 。本文就 HBx与肝癌国内外最新研究…     

肝癌组织中乙肝病毒x蛋白与缺氧诱导因子-1α的相关性

目的　探讨乙型肝炎病毒x蛋白 (HBx)与缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)在肝癌组织中表达的相关性及其在肝癌的发生和发展中的作用。方法　采用免疫组织化学染色方法检测 14 1例福马林固定、石蜡包埋的原发性肝癌组织标本HBx和HIF 1α表达 ;用Lipofectamine2 0 0 0将 pHA HBx质粒转染HepG2细胞 ,G418筛选阳性克隆 ,逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测转染后细胞HBx基因和HIF 1α基因转录 ;免疫细胞化学染色检测转染细胞HIF 1α表达。结果　 14 1例肝癌组织标本中 ,HBx和HIF 1α免疫组织化学染色阳性者分别为 98例和 116例 ;转染HBx基因后的HepG2细胞RT PCR结果表明 ,HIF 1α基因呈阳性表达 ,而未转染细胞则为阴性 ;免疫细胞化学染色显示 ,转染后的细胞 75 %HIF 1α表达阳性 ,未转染细胞几乎未见阳性细胞。结论　肝癌组织中HBx与HIF 1α的表达明显相关 (P <0 .0 1) ,HBx可以明显上调肝癌组织中HIF 1α的表达 ,两者的共同表达对原发性肝癌细胞的生物学行为可能有重要影响。     

HBX基因对人肝癌细胞系HepG2中HNF-4α及NF-κB表达的影响

目的通过检测转染X基因HepG2人肝癌细胞脂质体中NF-4α及NF-κB的表达,探讨X基因与HNF-4α,NF-κB及肝癌细胞的关系。方法将Hep G2成人肝癌细胞分成三组:将HBx真核表达载体pc DNA3/HBx转入Hep G2细胞做为实验组;以转染空载体细胞组和未转染Hep G2细胞组作为对照组。PCR检测各组X基因、HNF-4α及NF-κB的核内RNA表达情况,Western Blot检测NF-κB核内蛋白的表达情况。结果转染HBx细胞组中HNF-4α的表达值低于另两组,而NF-κB表达值高于另两组。同组中,HNF-4α的表达值与NF-κB表达值呈负相关。结论成功将X基因转染入Hep G2细胞,并在细胞中表达,转染HBx基因可通过X蛋白抑制HNF-4α的表达而增强NF-κB的活性,促进肝癌细胞增殖致其癌变及生长转移等方面加速。     

转乙型肝炎病毒x基因肝癌细胞株的建立

目的 建立表达转乙型肝炎病毒Ｘ基因（ＨＢＸ）的人肝癌细胞株,为研究ＨＢＸ基因与肝癌生物学行为间的关系提供模型。方法 以聚合酶链反应（ＰＣＲ）法从３．２ｋｂ 型肝炎病毒（ＨＢＶ）全基因组中主增ＨＢＸ基因,亚克隆至逆转 功体,磷酸钙共沉淀法将其导入包装细胞系,以含病毒的培养上清感染人肝癌细胞系ＱＧＹ７７０１,新霉素（Ｇ４１８）筛选,ＰＣＲ与反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）鉴定。结果 ＰＣＲ法从ＨＢＶ基因     

原发性肝细胞癌中乙型肝炎病毒基因整合状态研究

目的：探讨原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC)与肝硬化（liver cirrhosis,LC)组织中乙型肝炎病毒（HBV）基因各片段的整合情况。方法：采用PCR与Southern杂交技术检测HCC与LC各35例肝组织标本DNA中是否存在HBV基因的整合。结果：HCC组中HBV DNA阳性率为94％（33/35), 其中X片段阳性率为92％（32／35）；HBV DNA整合率为69％（24／35），其中X片段整合率为69％（24／35），LC组中HBV DNA阳性率为94％（33／35），其中X片段阳性率为84％（29／35）；HBV DNA整合率为60％（21／35），其中X片段整合率为40％（14／35）。两组在X片段整合率上存在统计学差异（P＜0．05）。结论：HBV基因的整合在肝硬化与肝癌中是一个普遍的现象。HBV基因的整合是癌变的早期事件。HBV基因中的X片段的整合与HCC关系密切。     

原发性肝细胞肝癌患者癌组织和血清中HBV前C区基因的检测

目的 乙型肝炎炎病毒（ＨＢＶ）是原发性肝细胞肝癌（ＨＣＣ）的主要诱导因素之一。为探讨ＨＢＶ在ＨＣＣ中的重要性，我们检测了ＨＣＣ患者癌组织及血清中的ＨＢＶ前Ｃ区基因。方法 根据ＨＢＶ前Ｃ区ＤＮＡ序列，采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对２３例手术切除后病理确诊有ＨＣＣ患者癌组织以及血清进行了检测。结果 ＰＣＲ显示２３例ＨＣＣ患者癌组织和血清中ＨＢＶ前Ｃ区基因的阳性率分别为５２．２％（１２／２３）和３０．４     

肝癌组织中HBx蛋白与上皮-间叶样表型转化的关系

目的 探讨肝癌组织中是否存在上皮-间叶样表型转化(epithelial-mesenehymal transition,EMT)及其与HBx蛋白表达的关系.方法 采用免疫组织化学方法对76例肝癌患者的癌组织标本进行检测.结果 上皮细胞标志物上皮钙黏素、β-连环素表达缺失率分别为34%(26/76)、20%(15/76),HBx和问叶细胞标志物神经钙黏素、纤维连接蛋白表达阳性率分别为68%(52/76)、55%(42/76)、46%(35/76);上皮钙黏素表达缺失与神经钙黏素和HBx蛋白阳性表达有关(P＜0.01),神经钙黏素和纤维连接蛋白阳性表达与β-连环素表达缺失和HBx蛋白阳性表达均有关(P＜0.05).结论 肝癌组织中存在EMT,其发生可能与HBx蛋白表达有关.     

肝细胞癌组织中HBsAg、AFP的研究

本研究对65例肝细胞癌标本进行免疫组化测定组织细胞中的HBsAg和AFP,结果显示肝癌细胞中存在有HBsAg、AFP,二者都主要存在于细胞浆中,表示HBV·DNA可以表达HBsAg抗原,致使肝细胞产生AFP,促发肝细胞癌。肝细胞癌中AFP反映了肝癌细胞的分化状态,比血清AFP更具有特异性的肝癌标志物。     

HBx基因大鼠卵圆细胞株的建立及鉴定

目的 构建带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达质粒pEGF-HBx,建市稳定、高效表达乙型肝炎病毒x基因(HBx)的大鼠卵圆细胞株,以便进一步研究HBx基因和卵圆细胞在肝癌发牛过程中的作用和机制.方法 用PCR方法从质粒pcDNA3.1-HBx中扩增含Kpn Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的HBx基因序列.对增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-NI)及扩增的HBx目的 基因片段进行双酶切,纯化后用连接酶连接得到重组体pEGFP-HBx,将其转化大肠杆菌DHSα,抗生素筛选培养得到阳性克降,提取质粒后用双酶切和基因测序进行鉴定.通过脂质体介导将质粒pEGFP-HBx转染到大鼠卵圆细胞株(LE/6)中,经G418筛选,尤限传代后得到稳定表达EGFP-HBx融合蛋白的细胞株.分别采用RT-PCR和免疫细胞化学技术检测细胞株中HBx基凶的表达情况.结果 双酶切及基因测序结果均显示构建的pEGFP-HBx质粒中含有完整的HBx基因片段.将得到的抗性细胞株培养传代20次后仍表达强的荧光;RT-PCR及免疫细胞化学检测均发现HBx基因在抗性细胞(LE/6)中得到了稳定转录和翻译.结论 已成功构建带HBx基因的真核表达质粒pEGFP-HBx,获得了稳定、高效表达EGFP-HBx融合蛋白的大鼠卵圆细胞株,为进一步研究HBx基凶和卵圆细胞在肝癌发生过程中的作用和机制奠定了实验基础.     

肝细胞癌与乙型肝炎病毒基因变异关系研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的主要病因,研究发现HBV基因变异与HCC的发生过程关系密切.本文从病因学方面对乙型肝炎病毒致肝癌的主要机制作一综述.HBV基因有4个开放读码区(S、C、P、X区),主要通过点突变、插入、截短变异等方式与HCC发生相关.     

焦点粘附激酶在肝细胞癌中的表达、活化及其临床意义

目的　研究焦点粘附激酶 (FAK )在肝细胞癌 (HCC)中的表达、活化及其临床意义。方法　采用原位分子杂交法检测 3 5例肝细胞癌 ,8例肝硬变及 5例正常肝组织中FAKmRNA的表达 ,并通过Western印迹杂交法分析肝癌组织中FAK的磷酸化 (Tyr -3 97)状态。 结果　肝癌组织中FAKmRNA水平明显高于肝硬变、正常肝组织 ( P <0 .0 1) ;同时低分化、存在转移的肝癌组织中FAK磷酸化水平明显高于高分化、无转移的肝癌 (P <0 .0 5 )。结论　FAK的高表达及磷酸化水平的上调可能参与了肝癌的发生发展 ,检测FAK的磷酸化 (Tyr -3 97)水平具有一定的临床病理意义