补骨脂酚拮抗AR转录活性抑制雄激素诱导的前列腺癌细胞LNCaP的增殖

[目的]研究补骨脂酚对雄激素受体(AR)的亲和性和转录活性的调控在雄激素依赖的前列腺癌细胞LNCaP中的作用。[方法]用AR竞争性结合试剂盒检测补骨脂酚结合AR的能力;用荧光素酶报告质粒法检测补骨脂酚对睾酮诱导的AR转录活性的影响;用实时定量PCR法检测补骨脂酚对LNCaP细胞中雄激素应答的靶基因——前列腺特异抗原(PSA)表达的影响;用MTT法检测补骨脂酚对睾酮诱导的LNCaP细胞增殖的影响。[结果]补骨脂酚体外结合AR的能力与AR拮抗剂氟他胺相当;睾酮诱导的AR转录活性可以被补骨脂酚阻断;补骨脂酚可以抑制睾酮对LNCaP细胞PSA表达和增殖的上调作用。[结论]补骨脂酚经由AR抑制雄激素依赖的LNCaP细胞的增殖和基因表达,提示:补骨脂酚可以作为潜在的AR拮抗剂,用于雄激素依赖的PCa药物的开发。     

中药复方PC-SPES Ⅱ抑制人前列腺癌细胞LNCaP增殖及其对AR, PSA表达的影响

基于雄激素受体(AR)信号通路探讨中药复方PC-SPES Ⅱ抑制人前列腺癌细胞LNCaP增殖的作用。采用MTT法检测PC-SPES Ⅱ对LNCaP细胞增殖的影响,显示PC-SPES Ⅱ质量浓度为180~1 440 mg·L^-1时能显著抑制LNCaP细胞增殖,PC-SPES Ⅱ作用24,48 h的IC₅₀分别为311.48,199.01 mg·L^-1;流式细胞仪检测细胞周期分布的变化发现240 mg·L^-1 PC-SPES Ⅱ能阻滞细胞于G₂/M期,在G₀/G₁峰前出现明显的凋亡峰,随作用时间的增加而升高;同时采用Hoechst 33258染色观察凋亡细胞形态和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测凋亡细胞比例,PC-SPESⅡ质量浓度为480 mg·L^-1时凋亡细胞比率增加,作用效果均呈一定剂量依赖性;通过ELISA法检测LNCaP细胞分泌PSA的水平,以25 mg·L^-1 Bic作为阳性对照药,发现480 mg·L^-1PC-SPES Ⅱ能显著降低细胞分泌PSA;采用qRT-PCR和Western blot方法检测AR,PSA mRNA和蛋白表达的变化,结果显示以人工合成雄激素25 μg·L^-1R1881诱导LNCaP细胞后,240~480 mg·L^-1 PC-SPES Ⅱ能显著下调AR,PSA mRNA和蛋白表达,抑制AR由细胞质转移入细胞核。以上结果表明,PC-SPES Ⅱ对LNCaP细胞体外增殖有抑制作用,阻滞细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调AR,PSA的表达,抑制AR核转位有关。     

香加皮水提取物诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制

目的研究香加皮水提取物(CPE)诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制。方法采用G iem sa染色观察细胞凋亡形态学变化;电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测BGC-823细胞凋亡率、细胞周期和细胞凋亡的DNA水平变化;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和surv iv in mRNA表达水平变化;免疫细胞化学方法检测bcl-2、bax和surv iv in蛋白表达的变化。结果经CPE作用后,人胃癌细胞BGC-823出现明显的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变,细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现梯形图。经250μg/mL CPE处理48 h后,多数BGC-823细胞被阻滞在G2/M期,而且细胞发生明显的凋亡变化,BGC-823细胞凋亡率可达18.9%。CPE可抑制BGC-823细胞bcl和surv iv in mRNA及蛋白的表达,促进baxmRNA及蛋白的表达。CPE可明显延长S180荷瘤小鼠生存期,且具有剂量依赖性。结论CPE通过阻滞BGC-823细胞于G2/M期及诱导BGC-823细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其作用机制与抑制细胞的bcl-2和surv iv in基因mRNA及蛋白表达、促进bax基因和蛋白的表达有关。     

乳香挥发油抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用

目的探讨乳香挥发油体外抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察乳香挥发油对SMMC-7721的增殖抑制作用;通过吖啶橙染色,观察SMMC-7721的形态学变化;使用琼脂糖凝胶电泳法检测乳香挥发油对细胞DNA降解的影响;利用流式细胞术分析乳香挥发油诱导SMMC-7721凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响;应用间接免疫荧光法观察凋亡调控基因bax和bcl-2蛋白的表达变化。结果乳香挥发油浓度为0.7、0.07、0.007、0.0007、0.00007mg.mL-1作用24h时,能抑制SMMC-7721的生长,并呈浓度依赖性。在浓度为0.07mg.mL-1时,作用48h或72h,电泳结果显示了DNA梯状条带,流式细胞仪检测到凋亡峰,且细胞被阻滞于G1期。间接免疫荧光法的结果表明,促凋亡蛋白bax的表达增强,抗凋亡蛋白bcl-2的表达无明显变化。结论乳香挥发油能抑制肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,并可能通过上调线粒体内bax/bcl-2的表达比例诱导SMMC-7721细胞的凋亡,而且其诱导的凋亡具有细胞周期依赖性。     

双苓扶正抗癌制剂对SGC-7901细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的:研究双苓扶正抗癌制剂对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其凋亡相关基因表达的影响。方法:应用体外培养方法和流式细胞技术,检测双苓扶正抗癌制剂对人胃癌SGC-7901细胞的细胞凋亡率及其凋亡相关基因bax、bcl-2的阳性蛋白标记率。结果:双苓扶正抗癌制剂80~320μg/ml可诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,同时可促进凋亡诱导基因bax和下调凋亡抑制基因bcl-2的表达。结论:双苓扶正抗癌制剂的抗肿瘤作用机制之一可能与其影响bax基因及bcl-2基因的表达而诱导癌细胞凋亡有关。     

α-细辛醚通过Bcl-2途径诱导人肺癌A549细胞凋亡研究

目的:探讨α-细辛醚通过bcl-2途径对人肺癌细胞系A549增殖抑制作用及凋亡诱导作用。方法:人肺癌A549细胞孵育24 h后,分别加入不同剂量α-细辛醚(0.25、0.5、1 mg/ml)作用于A549细胞,继续培养12,24,36,48 h,采用MTT法检测不同浓度α-细辛醚对A549细胞的增殖抑制情况;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA的表达,western blot检测bcl-2和bax蛋白表达水平。结果:随着α-细辛醚剂量(0.25、0.5、1 mg/ml)的增加,可明显抑制A549细胞的增殖,这种抑制作用具有时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测细胞发生了凋亡;α-细辛醚不同剂量(0.25、0.5、1 mg/ml)作用48h后bcl-2 mRNA和蛋白表达明显减少,bax mRNA和蛋白表达明显增加。结论:α-细辛醚对人肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;α-细辛醚可通过下调bcl-2表达和上调bax表达而诱导人肺癌A549细胞发生凋亡。     

红芪多糖HPS-3体外诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的研究

目的:研究红芪多糖均一组分HPS-3体外对人胃腺癌MGC-803细胞增殖及凋亡的作用。方法:应用MTT法、显微荧光术和流式细胞术测定HPS-3对MGC-803细胞的增殖、细胞周期和诱导凋亡的影响,应用流式细胞术测定对Bc1-2和Bax蛋白表达的影响。结果:HPS-3对MGC-803细胞具有抑制增殖、G2/M期阻滞和诱导凋亡作用;HPS-3降低bcl-2蛋白表达,对Bax蛋白表达无明显作用。结论:HPS-3可通过抑制人胃腺癌MGC-803细胞的生长增殖、G2/M期阻滞、诱导细胞凋亡,降低bcl-2蛋白等作用机制发挥肿瘤作用。     

红芪多糖HPS-3体外诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡研究

目的:研究红芪多糖均一组分HPS-3体外对人胃腺癌MGC-803细胞增殖及凋亡的作用。方法:应用MTT法、显微荧光术和流式细胞术测定HPS-3对MGC-803细胞的增殖、细胞周期和诱导凋亡的影响,应用流式细胞术测定对Bc1-2和Bax蛋白表达的影响。结果:HPS-3对MGC-803细胞具有抑制增殖、G2/M期阻滞和诱导凋亡作用;HPS-3降低bcl-2蛋白表达,对Bax蛋白表达无明显作用。结论:HPS-3可通过抑制人胃腺癌MGC-803细胞的生长增殖、G2/M期阻滞、诱导细胞凋亡,降低bcl-2蛋白等作用机制发挥肿瘤作用。     

梁金菇多糖对K562细胞的促凋亡作用研究

目的研究LJPS的抗肿瘤作用及机制。方法：采用MTT法观察LJPS对K562细胞的增殖抑制．用普通光镜．荧光显微镜、电镜、FCM、DNA电泳等技术检测细胞凋亡．用RT--PCR检测bcl-2mRNA的表碉结果：LJPS对K562细胞有明显抑制增殖并诱导细胞凋亡的作用．DNA电泳出现片段化梯形带．F(、Ⅵ检测示细胞阻滞于G1期．出现凋亡峰．LJPS诱导K562细胞凋亡中下调bcl-2mRNA表达。结论LJPS对K562细胞的抑制增殖、促进凋亡的作用与其下调Bcl-2mRNA表达有关。     

姜黄素对前列腺增生动物模型PCNA、Ki67、bcl-2和bax表达的影响

目的：研究姜黄素对实验性前列腺增生的影响及机理。方法：大鼠去势后皮下注射丙酸睾酮引起前列腺增生法造模，腹腔注射不同剂量姜黄素60天后，处死大鼠观察大鼠前列腺湿重，前列腺指数的变化；HE染色光镜观察前列腺病理改变；免疫组织化学方法检测PCNA、Ki67、bax和bcl-2的表达变化。结果：姜黄素可以明显降低大鼠的前列腺湿重和前列腺指数；减少前列腺组织中PCNA、Ki67和bcl-2表达。而上调bax的表达。结论：姜黄素可以抑制实验性大鼠前列腺增生细胞的增殖。其机理可能与下调细胞增殖蛋白PCNA、Ki67和凋亡抑制蛋白bcl-2的表达，增加bax的表达量相关。     

苦参碱抑制人卵巢恶性畸胎瘤细胞株PA-1体外增殖的研究

目的探讨苦参碱(matrine,MAT)对人卵巢恶性畸胎瘤细胞株PA-1体外增殖的影响。方法体外培养人卵巢恶性畸胎瘤细胞株PA-1,分组予不同浓度苦参碱作用。MTT法检测0.25、0.50、1.0 mg/mL不同浓度苦参碱对细胞增殖的抑制作用以及药物作用的量效和时效关系;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;半定量RT-PCR检测bcl-2/bax mRNA表达水平的变化。结果MTT法显示药物作用后,细胞有明显的抑制增殖作用,且呈时间依赖性和剂量依赖性;流式细胞仪检测不同浓度的苦参碱作用后PA-1细胞的凋亡率依次上升,并与作用时间正相关;细胞周期结果显示苦参碱对PA-1细胞具有明显的G_1期阻滞作用,且具有剂量依赖性。结论苦参碱能使PA-1细胞bcl-2 mRNA和bax mRNA的比值下调,产生G_1期阻滞,从而调节细胞周期,最终导致PA-1细胞在体外的增殖受到明显抑制。     

土荆皮酸诱导宫颈癌细胞系HeLa凋亡的实验研究

目的研究土荆皮酸(PAB)对体外培养的HeLa细胞的生物学效应和作用机制。方法用MTT法、流式细胞术、透射电镜检测体外培养的HeLa细胞在PAB作用下的增殖抑制及凋亡程度,用RT-PCR法检测p53/bcl-2/bax的表达水平。结果(1)PAB对HeLa细胞的增殖抑制作用随浓度升高而明显增强,其IC_(50)约10μmol/L。(2)流式细胞术证实10μmol/L PAB呈时间依赖性改变细胞周期分布,一方面降低G_0/G_1期的细胞比例,另一方面增高G_2/M期细胞的比例。(3)RT-PCR法显示HeLa细胞在10μmol/L PAB作用12、24、48 h均显示bax上调和bcl-2的下调,p53则未检测到表达。结论在体外PAB能抑制HeLa细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与bax的上调和bcl-2的下调相关。     

康泉方对大鼠前列腺组织凋亡调控基因bax、bcl-2mRNA表达的影响

目的 探讨康泉方对实验性大鼠前列腺组织凋亡调控基因bax mRNA、bcl-2 mRNA的影响.方法 采用大鼠去势后注射丙酸睾丸酮致前列腺增生法造模,同时灌胃给药30天后,处死大鼠取前列腺组织并测量湿重,RT-PCR法检测各组前列腺腹叶组织bax mRNA、bcl-2 mRNA的表达.结果 与模型组比较,康泉各剂量组前列腺湿重显著下降（P＜0.05或P＜0.01）;康泉高剂量组前列腺湿重与正常组比较,差异无显著性（P＞0.05）;与模型组比较,康泉各剂量组bax mRNA及bax/bcl-2显著升高（P＜0.01）,bcl-2 mRNA显著下降（P＜0.01）;康泉高剂量组bax mRNA、bcl-2 mRNA及bax/bcl-2与正常组比较,差异无显著性（P＞0.05）.结论 康泉方对大鼠良性前列腺增生有明显的治疗作用,其作用机理可能通过调节前列腺组织bax mRNA、bcl-2 mRNA表达,促进前列腺细胞凋亡,并呈明显量效关系.     

Activation of p53 signaling and inhibition of androgen receptor mediate tanshinone IIA induced G1 arrest in LNCaP prostate cancer cells

Our group previously reported that tanshinone IIA induced apoptosis via a mitochondria dependent pathway in LNCaP prostate cancer cells. In the present study, the roles of androgen receptor (AR) and p53 signaling pathways were investigated in tanshinone IIA-induced G1 arrest in LNCaP cells. Tanshinone IIA significantly inhibited the growth and proliferation of LNCaP cells by colony formation and BrdU incorporation assays, respectively. Tanshinone IIA induced cell cycle arrest at G1 phase and down-regulated cyclin D1, CDK2 and CDK4. Furthermore, tanshinone IIA activated the phosphorylation of p53 at Ser 15 residue and its downstream p21 and p27. Additionally, tanshinone IIA suppressed the expression of AR and prostate specific antigen (PSA). Conversely, silencing p53 using its specific siRNA reversed cyclin D1 expression inhibited by tanshinone IIA. However, knockdown of AR had no effect on the p53/p21/p27 signaling pathway activated by tanshinone IIA in LNCaP cells. In AR siRNA-transfected cells, tanshinone IIA did not cause cell cycle arrest and reduce cyclin D1, implying that AR is essential to induce G1 arrest by tanshinone IIA in LNCaP cells. Taken together, the findings suggest that tanshinone IIA induces G1 arrest via activation of p53 signaling and inhibition of AR in LNCaP cells.     

仙甲汤对前列腺增生大鼠前列腺组织bcl-2及bax表达影响的研究

目的　观察实验性前列腺增生大鼠前列腺组织bcl- 2及bax的表达及仙甲汤对其的影响。方法　去势加丙酸睾酮注射法复制大鼠前列腺增生模型 ,采用免疫组织化学法检测各组大鼠前列腺组织bcl- 2及bax的表达。结果　bcl- 2表达率模型组显著高于正常组 (P <0 .0 5 ) ,bax表达率模型组显著低于正常组 (P <0 .0 5 ) ;仙甲汤中剂量组、高剂量组及癃闭舒组的bcl- 2 ,bax表达率均接近正常组 (P均 >0 .0 5 )。结论　模型大鼠前列腺组织bcl- 2和bax调控失衡 ,仙甲汤可通过调节凋亡基因的平衡而起到抑制前列腺增生的作用     

牛蒡子苷对胰腺癌细胞抑制作用及其作用机理的实验研究

目的通过牛蒡子苷对胰腺癌细胞株(CAPAN-1)体内外实验,验证其是否具有抗胰腺癌作用。方法在CAPAN-1细胞培养液中加牛蒡子苷,培养72 h并观察癌细胞的增殖抑制率及癌细胞形态变化。流式细胞仪(FCM)检测CA-PAN-1细胞周期及凋亡率;TUNEL法检测CAPAN-1细胞凋亡率;免疫细胞化学检测CAPAN-1细胞的增殖凋亡调控相关蛋白(bax、bc l-2)表达。用CAPAN-1细胞制作Balb/c裸小鼠荷瘤模型,连续每天腹腔注射牛蒡子苷(10 mg.kg-1.d-1)10d,以5-FU(30 mg.kg-1.d-1)作阳性对照观察抑瘤率。结果牛蒡子苷抑制CAPAN-1细胞生长;阻滞CA-PAN-1细胞周期于G0/G1期并诱导细胞凋亡;通过上调bax蛋白表达(P<0.01),下调bc l-2蛋白表达(P<0.05)诱导CAPAN-1细胞凋亡;抑制荷瘤裸小鼠肿瘤生长,抑瘤率为41.7%。结论牛蒡子苷具有抗胰腺癌活性,其作用机理之一是诱导细胞凋亡。     

黄芪甲甙保护阿霉素心肌损伤大鼠抗凋亡作用的机制研究

目的 探讨黄芪甲甙（简称黄芪）抗阿霉素所致心肌细胞凋亡的可能机制。方法 取SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪3个剂量（低、中、高）组。空白组腹腔注射生理盐水,余4组分别给予阿霉素造模（15mg／kg,隔日腹腔注射1次,共6次）。黄芪3个剂量组同时用不同剂量黄芪甲甙灌胃治疗,空白组和模型组同时给予羧甲基纤维素钠。采用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡。细胞免疫组织化学检测bcl-2、bax蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测bcl-2、bax基因的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡发生率增高（P〈0．01）,抑制凋亡因子bcl-2基因及蛋白表达下降（P〈0．01）,而促进凋亡因子bax基因及蛋白表达增强（P〈0．01）,bcl-2／baxmRNA比值降低（P〈0．05）。与模型组比较,黄芪高剂量组大鼠心肌细胞的凋亡率显著下降（P〈0．05）,bcl-2基因及蛋白水平表达增强（P〈0．05）,bax基因及蛋白水平表达下降（P〈0．05）,bcl-2／baxmRNA比值明显上升（P〈0．05）。结论 高剂量黄芪甲甙治疗可以抑制阿霉素所致大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与凋亡基因bcl-2表达有关。