黄芪调节哮喘失衡表达转录因子T-bet/GATA-3的研究

目的:观察T细胞特异转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘中失衡表达,探讨黄芪对其调节作用?方法:50只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组(C组)?哮喘组(A组)?黄芪低(H1组)?中(H2组)?高(H3组)剂量组,20只雄性SPF级致敏SD大鼠脾脏中分离获得CD4+T细胞,分为对照组(C组),OVA干预组(A组),黄芪干预组低(H1组)?中(H2组)?高(H3组)?HE染色观察气道病理改变;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞因子(IL)-4,5和IFN-γ含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法检测T-bet和GATA-3 mRNA表达;免疫印迹(Western blot)法检测T-bet和GATA-3蛋白表达?结果:在大鼠肺组织中嗜酸粒细胞(EOS)?淋巴细胞?管壁面积/支气管管腔内周长(WA/Pi)和支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/Pi)A组比C组明显增多或增厚(P均< 0.01),H1?H2?H3组中不同程度的减少或减轻(P > 0.05);血清中IL-4和IL-5含量A组高于C组(P均< 0.01),H1?H2?H3组剂量组均低于A组(P均< 0.01),血清中IFN-γ含量A组远低于C组(P均< 0.01),H1?H2?H3组明显高于A组(P均< 0.01),CD4+T细胞培养上清液中H1?H2?H3组IL-4和IL-5含量均降低,同时增加IFN-γ含量,与A组比较,差异均有统计学意义(P均< 0.01);肺组织和CD4+T细胞中T-bet mRNA和蛋白表达H1?H2?H3组高于A组(P均< 0.01);而GATA-3mRNA和蛋白表达H1?H2?H3组低于A组(P均< 0.01)?结论:T细胞特异转录因子T-bet/GATA-3在哮喘中失衡表达,黄芪抑制哮喘气道炎症可能通过双向调节T-bet和GATA-3平衡来实现     

吸入激素对哮喘患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞水平及Foxp3 mRNA表达的影响

目的观察支气管哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)、Foxp3 mRNA的水平及吸入糖皮质激素对其的影响。方法流式细胞仪检测非急性发作期哮喘患者吸入激素前、后和健康志愿者(正常对照组)外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25+Treg的比例,RT-PCR检测Foxp3 mRNA表达变化,肺功能仪检测第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%pred)和呼气峰流量(PEF)。结果哮喘组治疗前CD4+CD25+Treg水平及Foxp3 mRNA的表达显著低于正常对照组(P<0.05),治疗后CD4+CD25+Treg水平及Foxp3 mRNA的表达较治疗前显著升高(P<0.05);哮喘组治疗前FEV1%pred、PEF显著低于正常对照组(P<0.05),治疗后FEV1%pred、PEF较治疗前显著增加(P<0.05)。结论哮喘患者外周血中具有免疫抑制活性的CD4+CD25+Treg数量减少,功能下降,参与了哮喘的发病过程;吸入激素可以上调哮喘患者外周血CD4+CD25+Treg及Foxp3 mRNA的水平,改善哮喘患者的肺功能。     

中晚期肺癌患者外周血CD4+细胞因子水平的观察

目的 观察中晚期肺癌患者CD4^＋细胞Th1、Th2因子的表达，探讨其在肺癌发病及分型中的意义。方法采取肺癌患者和健康体检者静脉血标本，用Th1、Th2细胞因子标记流式细胞技术检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10，比较肺癌患者相对于健康体检者外周血CD4^＋细胞分泌细胞因子水平的变化。结果 中晚期肺癌患者外周血CD4^＋细胞表达IFN-γ、TNF-α、IL-2水平均低于正常人（P〈0．01）；IL-4、IL-6、IL-10水平均高于正常人（P〈0．01）；中晚期小细胞癌、鳞癌、腺癌患者外周血CD4^＋细胞表达IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10各组间无差异（P〉0．05）；中晚期肺癌患者外周血Th1／Th2（yγ／4）低于正常人（P〈0．01）。结论 肺癌患者体内以Th2型细胞占优势状态，不同病理类型的肺癌Th1、Th2细胞因子间无显著性差异，血清与Th1细胞表达的TNF-α的比值可能对判断预后有一定意义。     

哮喘患者外周血CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的表达及临床意义

目的探讨哮喘患者外周血中CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的变化及意义。方法采用流式细胞技术检测40例哮喘患者和40例健康对照者外周血中CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的表达水平,同时测定20例急性发作期哮喘患者肺功能。结果哮喘患者外周血中CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比为3.02±1.85%,明显低于健康对照组(P<0.01);急性发作期哮喘患者外周血中CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞明显低于非急性发作期(P<0.01);急性发作期患者外周血CD_4~+CD_(25)~+T细胞百分率与FEV1呈显著正相关(r=0.5874,P<0.01)。结论CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞在哮喘的疾病活动中起着重要作用,是导致哮喘患者细胞免疫失调的重要原因。     

浙江省丽水市强直性脊柱炎患者外周血CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞程序性死亡因子1的表达及意义研究

目的 检测浙江省丽水市强直性脊柱炎（AS）患者外周血CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞程序性死亡因子1（PD-1）阳性率,分析其与疾病活动性临床指标的关系,初步探讨其在AS发生发展中的作用。方法 收集2013年12月-2014年4月浙江省丽水市中心医院收治的AS患者35例,根据Bath强直性脊柱炎活动指数（BASDAI）分为活动组（BASDAI＞4）21例和稳定组（BASDAI≤4）14例,另选取同时期本院体检健康者20例为对照组。应用流式细胞术检测外周血CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞PD-1阳性率,分析AS患者外周血CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞PD-1阳性率与疾病活动性临床指标的相关性。结果 活动组CD4+T淋巴细胞PD-1阳性率高于对照组和稳定组（P＜0.05）;稳定组和活动组CD8+T淋巴细胞PD-1阳性率高于对照组（P＜0.05）。AS患者外周血CD4+T淋巴细胞PD-1阳性率与CD4+T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+呈负相关（P＜0.05）,与CD8+T淋巴细胞百分比、BASDAI、红细胞沉降率（ESR）呈正相关（P＜0.05）,与C反应蛋白（CRP）无直线相关关系（P＞0.05）。AS患者外周血CD8+T淋巴细胞PD-1阳性率与CD4+T淋巴细胞百分比、CD8+T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+、BASDAI、ESR、CRP无直线相关关系（P＞0.05）。结论 浙江省丽水市AS患者外周血CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞PD-1表达增加,CD4+T淋巴细胞PD-1阳性率在AS活动期明显增加,与疾病的炎性反应指标相关,可能在AS的免疫病理中起重要作用。     

哮喘小鼠CD4+T细胞中microRNA-31和FOXP3mRNA的表达及相互关系的研究

目的 初步探讨哮喘CD4+T细胞中microRNA-31和FOXP3的表达水平、两者的相关性及激素对它们的影响.方法 以卵蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘小鼠模型.将15只BALB/c小鼠分为正常对照组、OVA组和地塞米松组,EHSA检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IFN-γ水平;实时荧光定量PCR检测小...     

PI3K转录因子在哮喘患者T淋巴细胞中的表达及意义

目的：初步了解磷脂酰肌醇3激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）在急性发作期哮喘患者外周血T淋巴细胞中的蛋白表达情况。方法：收集2008年9月至2009年2月间20例急性发作期哮喘患者及健康对照组15例,尼龙毛柱法提纯T淋巴细胞,用Western blotting法检测哮喘患者T淋巴细胞中PI3Kγ蛋白的表达水平：将对数生长期的T淋巴细胞分为哮喘组（A组）、对照组（B组）,再将哮喘组随机分为3组,分别进行检测;结果：Western blotting方法检测哮喘组与对照组T淋巴细胞中磷酸化PI3Kγ蛋白表达,结果显示,与正常人相比,急性哮喘发作期患者外周血T淋巴细胞中的PI3Kγ蛋白表达水平显著上调。正常对照组外周血T淋巴细胞中PI3Kγ蛋白表达较低（10945±960）,哮喘组（20079±838.7）,表达差异显著,有统计学意义（P〈0.01）;3个哮喘组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。     

肺癌患者外周血Foxp3检测及临床意义

目的检测肺癌患者外周血中Foxp3以及化疗前后的变化,探讨肺癌患者的发病机制,为肺癌临床治疗和预后提供依据。方法利用流式细胞仪检测96例肺癌患者和51例健康对照者外周血Foxp3水平,并对49例肺癌患者进行化疗前后的动态观察。结果肺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T淋巴细胞显著增多,化学治疗后较治疗前明显降低。结论CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T淋巴细胞的增多与机体的免疫力下降以及肿瘤的发生发展有一定关系,化学治疗后有一定程度的恢复,检测Foxp3对肺癌患者发病机制的探讨和治疗观察有一定意义。     

支气管哮喘患者血清胸腺活化调节趋化因子水平测定及意义

目的 探讨胸腺活化调节趋化因子(TARC)在哮喘发病中的作用及意义.方法 选择同期收治的40例哮喘患者(哮喘组、急性发作期及慢性持续期各20例)及20例健康体检者(对照组),采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清TARC、白细胞介素-4(IL-4)水平,血细胞分析仪计数外周血嗜酸性粒细胞(EOS).结果 哮喘组血清TARC、IL-4水平及EOS计数均显著高于对照组,且急性期患者显著高于慢性期患者(P<0.05),三种指标间均呈正相关(P<0.05)血清TARC水平升高可能在哮喘发生和发展中起重要作用,可能机制为趋化CCR4阳性Th2细胞,使其释放大量IL-4、EOS等炎症因子. Abstract： Objective To investigate the change and significance of thymus and activation regulated chemokine (TARC) level in serum of patients with bronchial asthma.Methods Forty patients with bronchial asthma were divided into two groups according to clinical manifestation, in which the serum level of TARC and IL-4 and 20 healthy individuals were measured respectively by ELISA. The serum EOS were counted by hemocyte analyzer.Results The levels of TARC,IL-4 and the numbers of EOS in serum of acute asthma group were all significantly higher than those of chronic and control group. The levels of TARC,IL-4 and the numbers of EOS in serum of chronic asthma group were all higher than that in controls group(P<0.05). Positive correlations were found between TARC,IL-4 and absolute numbers of EOS in serum.Conclusions TARC plays an important role in pathogenesis of asthma. The level of serum TARC may be related to the clinical manifestation of asthma. Selective recruitment positive CCR4 cells is the possible mechanism.     

CD4＋CD25＋调节性T细胞及其相关基因Foxp3在非小细胞肺癌患者外周血中的变化

目的:探讨非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)数量变化及其相关基因Foxp3 mRNA的表达改变.探讨CD4+CD25+调节性T细胞在诱导肿瘤免疫耐受中的作用.方法:采用流式细胞术检测患者外周血中CD4%D25+调节性T细胞数量变化:采用半定量RT-PCR方法检测肺癌患者外周血PBMC中Foxp3 mRNA的表达水平.选取30名非肿瘤患者作为对照.结果:肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞数量明显高于正常组(P＜0.05);Foxp3 mRNA在肺鳞癌和肺腺癌患者外周血PBMC中的表达明显增强(P＜0.05).结论:CD4+CD25+调节性T细胞可能在肺癌免疫耐受中发挥重要作用.     

CD4+CD25+、CD4+CD25hig调节性T细胞和Foxp3 mRNA在婴幼儿喘息中的表达及意义

目的探讨婴幼儿喘息CD4+CD25+、CD4+CD25hig调节性T细胞(Treg)和叉头/翼状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA的表达及意义。方法采用流式细胞术检测51例首次喘息婴幼儿外周血CD4+CD25+Treg和CD4+CD25hig Treg的比例,RT-PCR检测Foxp3mRNA的表达量,酶联免疫吸附法(ELASA)检测总IgE水平,并与正常婴幼儿对照。结果喘息婴幼儿外周血CD4+CD25+Treg、CD4+CD25higTreg占CD4+T细胞的百分比分别为(6.31+2.96)%和(3.52+1.46)%,均明显低于健康对照组(P<0.01);特应征喘息组CD4+CD25+Treg、CD4+CD25higTreg及Foxp3mRNA表达均低于非特应征喘息组(P<0.05)。喘息患儿CD4+CD25higTreg百分率及Foxp3mRNA表达与血清总IgE之间呈显著负相关(r=-0.75,r=-0.61,P<0.01),而CD4+CD25+Treg百分比与血清总IgE存在正相关(r=0.36,P<0.05)。结论 CD4+CD25+Treg、CD4+CD25hig Treg及Foxp3mRNA在婴幼儿喘息的发病中起重要作用。     

成年人类免疫缺陷病毒感染者/艾滋病患者长期抗病毒治疗后免疫功能重建分析

背景　抗逆转录病毒治疗（ART）使人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者/艾滋病（AIDS）患者寿命得以延长,但ART后患者长期免疫功能重建状态数据有限。近年来CD4+T淋巴细胞（简称CD4细胞）：CD8+T淋巴细胞（简称CD8细胞）比值（CD4∶CD8比值）作为免疫状态评估的重要指标之一,准确了解患者ART后免疫重建情况至关重要,为临床医师管理及治疗提供可供参考的指标。目的　探讨HIV感染者/AIDS患者ART后免疫功能重建情况。方法　连续收集2014年7月就诊于成都市公共卫生临床医疗中心感染科门诊,并使用替诺福韦酯（TDF）+拉米夫定（3TC）+依非韦伦（EFV）方案完成ART 48个月的HIV感染者/AIDS患者98例,分析基线及ART 6、12、24、36、48个月免疫标志物变化,对观察终点CD4∶CD8比值进行相关性分析。结果　基线、ART 6、12、24、36、48个月,患者CD4细胞计数、CD8细胞计数、CD4细胞恢复率、CD4∶CD8比值、CD4∶CD8比值正常化、多重T细胞重建所占比例比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。基线CD4细胞计数≤200、201~349、≥350个/μl患者中,不同基线及各随访时间点CD4∶CD8比值比较,差异均有统计学意义（P<0.001）;不同基线及各随访时间点CD4∶CD8比值正常化比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。ART 48个月,CD4细胞计数≥500个/μl、CD4∶CD8比值正常化、多重T细胞重建分别占59.8%（58/97）、22.7%（22/97）、19.6%（19/97）。ART 48个月后,CD4∶CD8比值与基线CD4细胞计数（rs=0.269,P=0.01）、基线CD4∶CD8比值（rs=0.592,P<0.01）呈正相关,与基线CD8细胞计数（rs=-0.355,P<0.01）呈负相关,与年龄（rs=0.129,P=0.21）、HIV确诊至ART启动时间（rs=-0.141,P=0.17）、HIV-RNA病毒载量（VL）（rs=0.145,P=0.15）无关。结论　长期ART成功的HIV感染者/AIDS患者仍存在免疫功能重建不良。CD4∶CD8比值与基线免疫水平相关,未来仍需大样本长时间的研究。     

下调Foxp3基因表达对人调节性T细胞功能的影响

目的 利用RNA干扰技术下调Foxp3表达,观察其对人CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表型及功能的影响.方法 利用Foxp3 siRNA转染人CD4+CD25+Treg,荧光显微镜和流式细胞仪(FACS)检测转染效率,实时定量PCR和Western印迹分别鉴定Foxp3基因及Treg功能相关基因表达、Foxp3蛋白表达,细胞增殖实验检测Treg抑制功能,FACS测Treg表型标记,ELISA检测细胞因子表达.结果 Foxp3 siRNA转染人CD4+CD25+Treg效率为68%,与对照组相比,转染后的细胞Foxp3基因下调了61.4%(P<0.01),Foxp3蛋白表达较低,Treg功能相关基因和主要表型标记也较对照组有改变,差异有统计学意义.功能试验提示无论是在异种还是同种抗原刺激的淋巴细胞反应中,Foxp3 siRNA转染的Treg与对照组相比,对效应性T细胞的抑制作用较弱(异种抗原组83%比48%,P<0.05;同种抗原组65%比28%,P<0.01),且主要抑制性和效应性细胞因子的表达下降,差异有统计学意义.结论 Foxp3是人天然Treg 维持其抑制性功能的核心细胞内标志.

Abstract：

Objective To employ the technology of interfering RNA (RNAi) to identify the role of Foxp3 in the in vitro suppressive effect of human regulatory T cell (Treg) on effector T cells. MethodsExpanded human Treg were transfected with siRNA targeting Foxp3 genes. The transfection efficiency, the level of corresponding gene and its protein expression were measured by fluorescent microscopy, fluorescence-activated cell sorting (FACS), real-time PCR and Western blot respectively. The phenotypes of Treg were analyzed by FACS. The siRNA transfected Treg was then co-cultured with porcine PBMC or human PBMC-stimulated autologous CD4+CD25- T cells. Their proliferations were examined by WST-1. Treg and autologous CD4+CD25- T cell-related suppressive cytokines were assessed by ELISA. ResultsA 68% transfection efficiency in expanded Treg was achieved for Foxp3 siRNA. Real-time PCR revealed a 61.4% mRNA knockdown induced by siRNA targeting Foxp3 genes in Treg versus the control (P<0.01). Some Treg-associated surface markers were significantly altered versus the control. And the production of suppressive cytokines was lowered. These changes were correlated with the diminished Treg activity in suppressing the proliferation of effector CD4+CD25-T cells. There was 83% suppression by non-transfected Treg vs 48% suppression by Foxp3 siRNA transfected Treg in xeno-immune response (P<0.05);and 65% suppression by non-transfected Treg vs 48% suppression by Foxp3 siRNA transfected Treg in allo-immune response (P<0.01). Conclusion Foxp3 is a key intracellular marker for maintaining the phenotypes and functions of Treg.     

类风湿关节炎患者外周血CD4+T细胞表面PD-1的表达及意义

目的观测类风湿关节炎（RA）患者外周血CD4+T细胞表面程序性死亡因子1（PD-1,CD279）表达的变化、探讨PD-1在RA发生、发展中的作用。方法应用流式细胞术检测40例RA患者和20例健康体检者外周血CD4+T细胞表面PD-1的阳性率,对比分析RA患者病情活动组与稳定组间PD-1表达的差异,分析PD-1阳性率与C反应蛋白（CRP）,红细胞沉降率（ESR）,类风湿因子（RF）等临床指标的相关关系。结果病情活动期RA患者外周血CD4+T细胞PD-1阳性率为（32.90±12.15）%,明显高于健康体检者（22.32±6.04）%,差异有统计学意义（P＜0.01）;稳定期RA患者的PD-1阳性率为（27.49±6.79）%,与健康体检者的差异无统计学意义（P＞0.05）。RA患者中,CD4+T细胞表面PD-1阳性率与RF呈正相关（r=0.525,P＜0.01）,与ESR呈正相关（r=0.328,P＜0.05）,与CRP无明显相关性（r=0.232,P＞0.05）。结论病情活动期RA患者外周血CD4+T细胞表面PD-1表达增加,可能对疾病的发生、发展具有重要意义。     

哮喘患者外周血Th1、Th2、CD4＋CD（25）＋T细胞的变化及其意义

目的探讨哮喘患者外周血Th1、Th2、CD4＋CD25＋T细胞的变化及其临床意义。方法采用流式细胞术检测52例急性哮喘患者（急性组）、56例慢性哮喘患者（慢性组）和60名健康对照人群（对照组）外周血中Th1、Th2和CD4＋CD25＋T细胞的水平,并计算Th1与Th2的比值。结果急性哮喘患者外周血中Th1、CD4＋CD25＋T细胞水平和Th1/Th2比值明显低于慢性哮喘患者和健康对照人群（P〈0.05）;急性哮喘患者外周血中Th2水平明显高于慢性哮喘患者和健康对照人群（P〈0.05）。结论 Th细胞和CD4＋CD25＋T细胞在哮喘的疾病活动中起到重要的作用,是导致哮喘患者细胞免疫失调的重要原因。