柯诺辛碱B对百草枯诱导SH-SY5Y细胞自噬与异常聚集TDP-43影响

目的 观察柯诺辛碱B(Cory B)对百草枯(PQ)诱导的SH-SY5Y细胞自噬的调节作用及异常聚集TDP-43的影响.方法 实验分为正常对照组、模型组和Cory B干预组.用PQ诱导氧化应激细胞损伤模型.采用CCK8法检测细胞存活率,免疫荧光染色检测自噬标记物LC3B点状聚集物的形成,免疫印迹法(Western bl...     

氧糖剥夺(OGD)诱导SH-SY5Y细胞自噬性死亡

目的探讨应用体外氧糖剥夺(Oxygen-glucose Deprivation,OGD)模型诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬性死亡与自噬过程的潜在作用机制。方法应用自噬抑制剂(3-Methyladenine,3MA)和siRNA沉默ATG5的表达后,OGD处理24小时,LDH检测各组细胞的死亡率(P0.01);Western blotting检测各组细胞中自噬相关蛋白的表达水平。结果 OGD诱导SH-SY5Y细胞自噬水平升高;细胞死亡率增加,应用3MA和siRNA技术沉默ULK1基因后,细胞死亡率(P0.05)及自噬蛋白Beclin1、LC3蛋白表达水平显著降低,P62蛋白表达水平升高。结论自噬参与并促进了OGD诱导SH-SY5Y细胞死亡。     

芍药苷通过促进细胞自噬抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的氧化损伤

目的研究芍药苷对氧化损伤细胞模型的抗氧化作用和细胞自噬的调控作用。方法以H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞系构建氧化损伤模型。实验设对照组,模型组,芍药苷低、中、高剂量组。采用MTT法检测芍药苷干预后细胞存活率;2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞内ROS水平;Ad-mCherry-GFP-LC3B融合蛋白腺病毒检测细胞自噬水平;Western blot检测细胞自噬相关蛋白LC3及SQSTM1/p62的表达水平。结果 250μmol/L H_2O_2干预24 h后SH-SY5Y细胞存活率约55%为模型复制条件。芍药苷低、中、高剂量干预后,与模型组比较,细胞存活率呈剂量依赖性上升(P0.05)。与对照组相比,模型组细胞内ROS水平升高,差异具有统计学意义(P0.05);自噬溶酶体形成受阻;LC3Ⅱ及SQSTM1/p62在细胞内表达升高,差异具有统计学意义(P0.05)。芍药苷的干预可促进自噬小体与溶酶体结合;与模型组比较,芍药苷中、高剂量组细胞内ROS水平显著下调(P0.05);细胞内LC3Ⅱ及SQSTM1/p62的表达降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论芍药苷可通过促进细胞自噬改善H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤。     

钙蛋白酶在TOCP诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬中的调节作用

目的探究钙蛋白酶对三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬的调节作用。 方法不同浓度TOCP处理未分化和分化的SH-SY5Y细胞,用荧光分光光度法检测钙蛋白酶活性。抑制钙蛋白酶活性后,通过Western blotting检测TOCP对自噬相关蛋白的影响；抑制钙通道后,用荧光分光光度法检测胞质钙离子浓度对钙蛋白酶活性的影响。 结果TOCP诱导未分化和分化的SH-SY5Y细胞钙蛋白酶活性上升；钙蛋白酶抑制剂可降低TOCP诱导的自噬相关蛋白LC3-II和Beclin1表达。维拉帕米和2-APB阻断钙通道后钙蛋白酶活性降低,维拉帕米而非2-APB可以抑制TOCP诱导的自噬相关蛋白LC3-II表达。 结论TOCP在未分化和分化的SH-SY5Y细胞中诱导的自噬受钙蛋白酶活性的调节。     

小檗碱通过激活自噬诱导caspase依赖性凋亡发挥抗结直肠癌作用

  目的  探究小檗碱通过自噬依赖性凋亡发挥抗结直肠功效的潜在作用机制。  方法  使用HCT116细胞和移植瘤模型小鼠进行小檗碱抗肿瘤药效和可能作用机制的研究。体外研究中, 通过利用CCK8实验评价小檗碱对结直肠癌细胞活力的影响, 使用细胞克隆实验评价小檗碱对结直肠癌细胞增殖的影响, 同时借助流式细胞术和TUNEL染色法对小檗碱诱导结直肠癌细胞凋亡作用进行研究。透射电镜和mCherry-GFP-LC3B腺病毒转染细胞用于检测细胞内自噬流变化。通过对小鼠组织进行HE染色、免疫组化染色和TUNEL染色, 评价小檗碱体内抗结直肠癌作用。  结果  体外研究结果表明, 小檗碱能够抑制结直肠癌细胞活力, 诱导细胞凋亡, 同时提高细胞内LC3B水平。使用自噬抑制剂3-MA、CQ和BafA1进行干预, 自噬抑制剂能够促进HCT116细胞生长, 抵消小檗碱诱导的结直肠癌细胞凋亡作用。雷帕霉素增强小檗碱上调HCT116细胞中LC3B水平的作用, 同时Z-VAD-FMK或ATG siRNA能够废除小檗碱诱导结直肠癌细胞凋亡的作用。在体研究结果表明, 小檗碱能够降低肿瘤体积和重量, 引起肿瘤组织发生凋亡。进一步的体内作用机制研究结果表明, 小檗碱显著抑制p-mTOR表达, 同时显著上调ATG5、ATG7、cleaved-caspase3和cleaved-caspase8表达。  结论  小檗碱能够通过诱导结直肠癌细胞发生自噬, 促进其发生caspase依赖性凋亡, 进而抑制结直肠癌细胞增殖。      

苦参碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞发生自噬与自噬相关蛋白mTOR相关性研究

目的探讨苦参碱是否可通过抑制mTOR活性阻断PI3K/Akt信号通路,诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬发生。方法苦参碱(终浓度为0、1、2mg/m L)±氯喹(chloroquine)(自噬抑制剂)处理乳腺癌Bcap-37细胞24h,运用免疫印迹(Western-blot)法检测PI3K/Akt信号通路自噬相关蛋白mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6、e IF4E表达。苦参碱(终浓度为0、1、2mg/m L)±Bafilomycin A1(自噬抑制剂)/Rapamcin(自噬诱导剂)处理乳腺癌Bcap-37细胞24h,Western-blot法检测e IF4E蛋白的表达。结果苦参碱剂量依赖性抑制mTOR、p70S6k磷酸化,同时降低e IF4E蛋白表达;当苦参碱联合氯喹(CQ)作用于乳腺癌Bcap-37细胞时,则对上述蛋白表达均无明显抑制作用。苦参碱联合Bafilomycin A1作用于Bcap-37细胞时,e IF4E蛋白表达同样无明显改变;苦参碱联合Rapamcin时,e IF4E蛋白表达则呈剂量依赖性降低。结论苦参碱可通过抑制mTOR活性阻断PI3K/Akt信号通路,从而诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬发生。     

瘦素减轻鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的 探讨瘦素对鱼藤酮（rotenone） 所诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞凋亡的抑制作用。 方法 建立鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤模型,用瘦素进行干预,采用MTT 比色法检测细胞存活率,锥虫蓝检测细胞死亡率,细胞形态学观察,并用Western blot 法检测Bcl-2、Bax、p-GSK-3β（Ser9） 和GSK-3β 的表达水平,免疫荧光检测α-synuclein 的表达水平。 结果 成功建立了鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤模型。在模型的基础上,瘦素干预后,细胞状态改善,细胞存活率提高约14%（P ＜ 0.05）,细胞死亡率降低约17%（P ＜ 0.05）,α-synuclein 的浓度下降,Bcl-2 和p-GSK-3β 的表达显著提高。 结论 瘦素对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤具有明显的抑制作用,可能是通过抑制GSK-3β 的活性上调Bcl-2/Bax 的比率和降低α-synuclein 的表达而得以实现。     

飞燕草素通过AKT/mTOR通路诱导HER-2+乳腺癌细胞自噬

目的：研究飞燕草素对HER-2+乳腺癌细胞MDA-MB-453自噬的诱导作用及其分子机制。方法：以不同浓 度飞燕草素处理MDA-MB-453细胞,CCK-8检测细胞增殖情况;TdT介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)和Western印迹检测细胞凋亡和与凋亡相关蛋白的表达;荧光斑点、免疫荧光和Western 印迹检测自噬的诱导情况和诱导机制。 结果：飞燕草素抑制MDA-MB-453细胞增殖,增加TUNEL阳性细胞数,下调 caspase-3 和caspase-9蛋白活性,上调裂解的caspase-3和裂解的caspase-9蛋白活性。飞燕草素增加GFP-LC3荧光斑点数、 LC3免疫荧光斑点数、LC3-II和ATG5蛋白表达。飞燕草素下调mTOR通路蛋白AKT,mTOR,eIF4E和p70s6k蛋白活 性。结论：飞燕草素诱导HER-2+乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡的同时通过抑制AKT/mTOR通路诱导细胞自噬。     

舒尼替尼通过抑制 Akt／mTOR 信号通路诱导肾癌细胞自噬

目的：研究舒尼替尼引起的肾癌细胞出现细胞自噬的机制。方法：以肾癌细胞系ACHN细胞为细胞模型,利用3-(4,5-二甲基)-5-(3-羧甲基苯环)-2-(4-硫基苯)-2H 四唑盐复合物［3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,innersalt,MTS］检测法观察舒尼替尼对ACHN 细胞活性的影响;应用RNA干扰技术敲降自噬相关蛋白Beclin1和微管相关蛋白1轻链3融合蛋白（microtubule associated protein 1 light chain 3 fusion protein, LC3）检测自噬与舒尼替尼引起的细胞凋亡。使用电子显微镜和荧光显微镜观察在舒尼替尼作用下自噬体的形成;蛋白质免疫印迹检测舒尼替尼对LC3-Ⅱ的积累,自噬相关信号通路蛋白激酶B(protein kinase B, PKB/Akt)、哺乳动物雷帕霉素受体( mammalian target of rapamycin, mTOR) 及聚腺苷二磷酸核糖聚合酶( poly ADP-ribose polymerase,PARP) 切割的变化和过量表达,以及敲降Akt检测诱导自噬的变化。结果: 舒尼替尼能显著抑制ACHN的细胞活性,这种作用具有时间和浓度依赖性;敲降自噬相关蛋白Beclin1和LC3减少自噬可改变舒尼替尼引起PARP的切割;透射和荧光显微镜观察结果表明,舒尼替尼引起细胞自噬体明显增加;蛋白质免疫印迹结果显示舒尼替尼增加自噬同时减少了Akt/mTOR的磷酸化。过量表达持续活化的Akt抑制了该化合物引起的自噬,而敲降Akt可促进自噬发生。mTOR抑制剂雷帕霉素能上调舒尼替尼引起的自噬并促进细胞活性的丢失。结论：舒尼替尼通过抑制Akt/mTOR信号通路促进肾癌细胞ACHN的自噬,其诱导的自噬与凋亡有关。     

苦参碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞发生自噬与mTOR相关性研究

目的：明确苦参碱是否可通过抑制mTOR活性阻断PI3K/Akt信号通路,从而诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬发生。 方法：苦参碱(终浓度为0、1、2mg/ml)±氯喹(Chloroquine)(自噬抑制剂)处理乳腺癌Bcap-37细胞24小时,运用免疫印迹(Western-blot)法检测PI3K/Akt信号通路上的自噬相关蛋白mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6、eIF4E的表达。苦参碱(终浓度为0、1、2mg/ml)±BafilomycinA1(自噬抑制剂)/ Rapamcin(自噬诱导剂)处理乳腺癌Bcap-37细胞24小时,Western-blot法检测eIF4E蛋白的表达。 结果：苦参碱剂量依赖性抑制mTOR、p70S6k的磷酸化,同时降低eIF4E蛋白的表达;当苦参碱联合氯喹(CQ)作用于乳腺癌Bcap-37细胞时,则对上述蛋白表达均无明显抑制作用。苦参碱联合BafilomycinA1作用于Bcap-37细胞时,eIF4E蛋白表达同样无明显改变;苦参碱联合Rapamcin时,eIF4E蛋白表达则呈剂量依赖性降低。 结论：苦参碱可通过抑制mTOR活性阻断PI3K/Akt信号通路,从而诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬发生。     

钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在盐酸布比卡因诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用

目的探讨钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）抑制剂KN93对盐酸布比卡因诱导的人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y细
胞）损伤的影响。方法SH-SY5Y细胞随机分为4组（n=6）：正常培养组（C组）;KN93组（K组,KN93终浓度1 μmol/L孵育24 h）;
布比卡因组（B组,盐酸布比卡因终浓度1 mmol/L孵育24 h）;KN93+布比卡因组（KB组,KN93终浓度1 μmol/L和盐酸布比卡
因终浓度1 mmol/L孵育24 h）。孵育24 h后在显微镜下观察各组细胞形态改变及免疫印迹法检测各组细胞Cav3.1亚型T型钙
通道（Cav3.1）蛋白的表达;在孵育前（T1）、孵育后1 h（T2）、6 h（T3）、12 h（T4）、24 h（T5）MTT法检测细胞活力及流式细胞仪检测细
胞凋亡率。结果SH-SY5Y细胞经1 mmol/L盐酸布比卡因处理后,细胞突触消失,胞体变圆;细胞活力降低;细胞凋亡率升高;
Cav3.1蛋白的表达上调;1 mmol/L的KN93则可以减少盐酸布比卡因所致的上述改变的幅度。结论CaMKⅡ可能参与盐酸布
比卡因所致的SH-SY5Y细胞损伤,且与上调Cav3.1蛋白的表达有关。
     

丙戊酸钠通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路抑制SH-SY5Y细胞自噬

目的探讨丙戊酸钠（VPA）对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经 母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24 h,采用 定量PCR分析VPA处理对ATG4B mRNA与miR-34c-5p表达的影响,免疫印迹法分析VPA处理对ATG4B蛋白表达的影响,将 含ATG4B启动子片段的报告质粒转染SH-SY5Y细胞,然后通过荧光素酶报告基因系统分析VPA处理对ATG4B启动子活性的 影响,用VPA单独或联合转录抑制剂放线菌素D分别处理SH-SY5Y细胞不同时间,定量PCR分析检测不同处理对ATG4B mRNA稳定性的影响,用VPA单独或联合miR-34c-5p抑制剂处理细胞24 h,通过检测不同处理对ATG4B表达变化的影响,进 而判断miR-34c-5p在VPA下调ATG4B表达中的作用,同时通过Western blot检测不同处理对LC3-II表达的影响,分析细胞自 噬水平变化。结果VPA可剂量依赖性降低SH-SY5Y细胞中ATG4B的mRNA和蛋白水平（P<0.05）。VPA处理不影响SHSY5Y 细胞中ATG4B的启动子活性（P>0.05）,但显著下调其mRNA的稳定性（P<0.05）。同时,VPA处理明显增强SH-SY5Y细 胞中miR-34c-5p的表达水平（P<0.05）。使用miR-34c-5p抑制剂与VPA联合处理SH-SY5Y细胞,可逆转VPA对ATG4B表达的 下调作用。VPA处理还下调了SH-SY5Y细胞中LC3-II的表达水平（P<0.05）。结论VPA可能通过激活miR-34c-5p/ATG4B信 号通路而抑制SH-SY5Y细胞自噬。     

氯化钴诱导SH-SY5Y细胞缺氧损伤作用的研究

目的探讨氯化钴(Co Cl2)诱导SH-SY5Y细胞缺氧损伤的作用及相关机制。方法用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)观察不同浓度Co Cl2对SH-SY5Y细胞生长情况影响;ELISA法检测细胞内相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3及缺氧相关蛋白HIF-1α的表达情况。结果 Co Cl2可以诱导SH-SY5Y细胞损伤,并呈现浓度和时间依赖性;Co Cl2作用于SH-Y5Y细胞导致HIF-1α、Caspace-3和Bax的表达增多(P<0.05),Bcl-2表达减少(P<0.01)。结论 Co Cl2诱导SH-SY5Y细胞缺氧损伤与上调HIF-1α表达、促进细胞凋亡有关。     

野生型肺炎链球菌溶血素通过PI3K-I/Akt/mTOR途径诱导A549细胞自噬

目的:研究肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)诱导人肺上皮细胞自噬发生的现象及其机制。方法:常规培养人肺上皮A549细胞与野生型Sp;将GFP-LC3真核载体转染A549细胞,分为实验组(Sp,MOI=30∶1)、阴性对照组[渥曼青霉素(wortmannin,WT),2μmol/L 2 h,自噬抑制剂]、阳性对照组[雷帕霉素(rapamycin,Rapa),1 mmol/L 10 h,mTOR抑制剂]和参照组(WT和Sp共同处理),各组处理时间均为1、2、3和4 h;荧光显微镜观察各组自噬点形成,透射电镜观察各组细胞自噬体结构,Western blot检测各组微管相关蛋白轻链-Ⅰ/Ⅱ(microtuble-associated protein light chain 3-Ⅰ/Ⅱ,LC3-Ⅰ/Ⅱ)、磷酸化UNC-51-K激酶1(phosphorylated UNC-51-like kinase1,P-ULK1)和螯体1(sequestosome 1,P62)的表达;将溶血素表达载体RFP-PLY(red fluorescent protein-pneumo...     

顺铂通过诱导膀胱癌细胞自噬促进细胞凋亡

目的：研究自噬在顺铂引起膀胱癌细胞凋亡中的作用。方法：以膀胱癌细胞T24为细胞模型,利用透射电镜观察自噬泡形成,荧光显微镜观察转染绿色荧光蛋白和微管相关蛋白1轻链3融合蛋白（green fluorescent protein and microtubule associated protein 1 light chain 3 fusion protein,GFP-LC3）的质粒的荧光聚集情况。应用蛋白质免疫印迹检测LC3-Ⅱ的积累,检测顺铂能否诱导膀胱癌T24细胞发生自噬。此外,蛋白质免疫印迹还被用来检测自噬相关信号通路哺乳动物雷帕霉素受体（mammal target of rapamycin, mTOR）及其下游相对分子质量70 000的核糖体蛋白质S6激酶（70 000 ribosomal protein S6 kinase,P70S6K）的变化,以及凋亡标志蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的切割,之后利用3-(4,5-二甲基)-5-(3-羧甲基苯环)-2-(4-硫基苯)-2H-四唑盐复合物检测法［ 3-( 4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-5-( 3-carboxymethoxyphenyl)-2-( 4-sulfophenyl)-2H- tetrazolium, inner salt,MTS］观察在自噬促进剂雷帕霉素（rapamycin）存在与否的情况下顺铂引起的膀胱癌细胞活力变化。本实验还使用了RNA干扰技术敲降LC3表达。结果：电子显微镜显示相比对照组,顺铂可以引起膀胱癌细胞出现大量自噬泡。荧光显微镜观察GFP-LC3聚集程度,顺铂组也明显高于对照组。蛋白质免疫印迹检测LC3的结果发现顺铂组的LC3-Ⅱ含量随时间延长和顺铂浓度增加而明显增加,尤其是在48 h时,50与100 μmol/L顺铂处理下LC3-Ⅱ/Actin（%）的灰度值分别升高了30和44,而mTOR/P70S6K的磷酸化也受到顺铂处理的抑制,在48 h,100 μmol/L顺铂处理下其磷酸化条带几乎完全被抑制。MTS结果发现顺铂可导致细胞活力的丢失,在50和100 μmol/L顺铂处理24 h时分别下降了12%和35%,而且用自噬促进剂雷帕霉素和顺铂联合处理组的细胞活力丢失大于单用顺铂处理的对照组（F=74.890,P<0.01）。RNA干扰实验显示,敲降自噬相关基因LC3,可减少顺铂引起的PARP剪切,细胞凋亡减少。结论：发现顺铂可以引起膀胱癌细胞T24发生自噬,并发现该自噬的作用能促进顺铂诱导的细胞凋亡。     

熊胆粉通过线粒体依赖性途径诱导人肝癌细胞凋亡

Objective:To evaluate the effect of Bear Bile Powder(熊胆粉,BBP) on the growth and apoptosis of HepG2 human hepatocellular carcinoma cells,and investigate the possible molecular mechanisms mediating its anti-cancer activity.Methods:HepG2 cells were treated with 0.4-1.0 mg/mL of BBP for 24,48 and 72 h.The viability of HePG2 cells was determined by MTT assay.Cellular morphology was observed via phase-contrast microscopy.Fluorescence-activated cell sorting analysis with Annexin-V/propidium idodide and 5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethyl-benzimidazol-carbocyanine iodide(JC-1) staining was performed to determine cell apoptosis and the loss of mitochondrial membrane potential,respectively.Activation of caspase-9 and-3 was evaluated by a colorimetric assay.Results:The treatment with 0.4-1 mg/mL of BBP for 24,48,or 72 h respectively reduced cell viability significantly by 7%-60%,20%-90%or 25%-98%,compared with the untreated control cells(P0.01).In addition,BBP treatment induced morphological changes in HepG2 cells.Furthermore,after treated with 0,0.4,0.6,0.8 and 1.0 mg/mL of BBP,apoptosis cells(including early and late apoptotic cells) were 18.0%±1.3%,34.9%±2.2%,33.9%±2.8%,37.4%±2.8%and 46.0%±2.5%,respectively(P0.05);and the percentage of cells with reduced JC-1 red fluorescence were 6.6%±0.8%,8.5%±0.8%,13.5%±1.6%,17.6%±2.3%and46.7%±3.6%,respectively(P0.01).Finally,BBP treatment significantly and dose-dependently induced activation of both caspase-9 and caspase-3 in HepG2 cells(P0.05).Conclusions:BBP could inhibit the growth of HepG2hepatocellular cancer cells through mitochondrion-mediated apoptosis,which may,in part,explain its anti-cancer activity.BBP may be a potential novel therapeutic agent for the treatment of hepatocellular carcinoma.     

冈田酸诱导SH-SY5Y细胞tau蛋白的过度磷酸化

目的 观察冈田酸（0A）对SH—SY5Y细胞tau蛋白磷酸化的影响。方法 MTT比色法观察OA对SH—SY5Y细胞代谢率的影响，免疫细胞化学法和蛋白免疫印迹法观察OA对SH—SY5Y细胞磷酸化tau蛋白水平的影响。结果 40nmol／LOA孵育SH—SY5Y细胞24h可显著降低细胞代谢率，其效应随着OA浓度的增加和孵育时间的延长而增强。OA作用于细胞3～48h，蛋白免疫印迹显示Ser-396位点磷酸化tau蛋白水平逐步升高，24h达高峰，之后下降。免疫细胞化学法显示，OA作用于细胞24h，Ser-396位点磷酸化tau蛋白水平较对照组细胞增强。结论 OA增强SH—SY5Y细胞tau蛋白Ser-396位点磷酸化水平。     

左旋棉酚通过ERK通路诱导Daudi细胞发生自噬及意义

目的 探讨左旋棉酚诱导淋巴瘤Daudi细胞发生自噬可能机制及对细胞存活率的影响.方法 采用CCK-8法检测左旋棉酚在体外对Daudi细胞增殖抑制作用的影响;采用台盼蓝排斥实验检测不同处理对细胞存活率的影响;Western blot检测细胞中自噬相关蛋白LC3、ERK和磷酸化ERK的表达情况;AO染色观察经左旋棉酚处理后Daudi细胞酸性小体的变化情况.结果 左旋棉酚能剂量依赖性地抑制Daudi细胞的增殖和促进细胞死亡;AO染色后经左旋棉酚处理的细胞内可观察到大量的酸性小体形成;Western blot显示左旋棉酚能显著上调自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达及增强磷酸化ERK的水平,抑制ERK的磷酸化能下调LC3Ⅱ的表达;ERK抑制剂U0126及自噬抑制剂CQ和3-MA均能显著增强左旋棉酚的杀细胞效力.结论 左旋棉酚可能通过ERK通路诱导Daudi细胞发生自噬,抑制ERK介导的自噬能够显著增强左旋棉酚的抗瘤效应.     

瘦素抑制冈田酸诱导的SH-SY5Y细胞Cdk5的表达

目的探讨瘦素（1eptin）与阿尔茨海默病的联系。方法将人神经纤维母细胞瘤细胞系（SH—SY5Y）分为3组：对照组、冈田酸（okadaic acid,OA）损伤模型组（40nmol／LOA诱导12h）和Leptin处理组。用OA诱导SH—SY5Y,建立阿尔茨海默病细胞模型。Leptin处理组是在模型组基础上,给予外源性leptin（0．4仙g／m1）处理6h,用WesternBlot检测细胞周期依赖性蛋白激酶5（Cdk5）和β-actin蛋白表达水平。瘦素受体（ObR）和Cdk5的共定位情况用双重免疫荧光染色检测。结果模型诱导成功后,Westel33 Blot显示Cdk5表达明显升高（p〈0．01）;给予leptin后,Cdk5蛋白表达显著降低（p〈0．01）。双染法免疫荧光实验表明,SH—SY5Y细胞中ObR和Cdk5蛋白均主要在细胞质中表达,并且红色和绿色标记重叠为橙色荧光,可认为两种蛋白共定位,提示ObR和Cdk5之间可能存在相互作用。结论Leptin能够在体外降低阿尔茨海默病相关的Cdk5表达,为其治疗提供了新靶点。