褪黑素对人肝癌SMMC—7721细胞的抑制作用

观察褪黑素对人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长抑制作用及其作用机理。方法采用不同浓度的褪黑素通过体外细胞培养、ＭＴＴ显色技术研究其抑制作用,以流式细胞仪和电子显微镜技术观察其作用机理。结果褪黑色素对人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞具有抑制作用,其ＩＣ３０、ＩＣ５０分别为１．１０和２．００ｍｍｏｌ／Ｌ。以ＩＣ３０的褪黑素处理ＳＭＭＣ－７７２１细胞,使其倍增时间由２１．１ｈ延长到３８．４ｈ。流式细胞仪观察到     

低氧诱导对人肝癌SMMC7721细胞生物学行为的影响

目的研究低氧对体外培养的人肝癌细胞株SMMC7721增殖、细胞周期、凋亡和黏附、迁移能力的影响,探讨其中可能存在的分子机制.方法通过氯化钴诱导人肝癌SMMC7721细胞低氧,MTT法、流式细胞术、细胞黏附试验、transwell小室迁移实验观察低氧对肝癌细胞增殖、凋亡和细胞周期以及细胞黏附和迁移能力的影响;采用RT-PCR和免疫细胞化学方法检测低氧对细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶2（MMP2）mRNA和蛋白表达的影响.结果 MTT法显示氯化钴诱导的低氧对肝癌细胞生长起抑制作用;低氧24 h,流式细胞术显示细胞凋亡、坏死增加,细胞周期G0/G1期、S期细胞比例减少,G2/M期比例增加;黏附试验显示低氧后细胞黏附力增强（P〈0.01）,transwell小室实验显示,低氧后细胞迁移能力较常氧时明显增加（P〈0.05）;RT-PCR和细胞免疫化学检测显示低氧条件下HIF-1α、VEGF、MMP2的mRNA和蛋白表达均较常氧时增加（P〈0.05）.结论氯化钴诱导低氧可抑制SMMC7721细胞增殖,使细胞周期阻滞于G2/M期,细胞凋亡、坏死增加,同时细胞黏附、迁移能力增强;低氧时HIF-1αmRNA和蛋白表达增加,并通过调节及其下游靶基因VEGF、MMP2的表达参与了这一生物学行为的转变.     

过表达NNMT对SMMC7721肝癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨尼克酰胺N甲基化酶(NNMT)对人肝癌细胞株SMMC7721恶性生物学行为影响.方法 分别对转染NNMT基因SMMC7721/NNMT组(简称S/NNMT)、对照组SMMC7721细胞组(简称S)及转染pcDNA3.1空质粒SMMC7721/pcDNA3.1(简称S/P)组细胞进行MTT增殖实验、克隆形成实验、黏附实验、侵袭实验等,以研究过表达NNMT对细胞生物学行为的影响.结果 MTT法检测结果显示S/NNMT组细胞增殖速度、克隆形成率与S组、S/P组比较差异无统计学意义(P＞0.05),S/NNMT组细胞异质黏附能力明显高于S组、S/P组细胞(P＜0.001);Transwell侵袭力实验结果显示S/NNMT组细胞OD值明显高于其余两组(P＜0.001).结论 NNMT可以使肝癌细胞的恶性表形发生变化,使其侵袭转移能力增强.     

乙酰咪唑修饰对高密度脂蛋白结合人肝癌SMMC—7721细胞的影响

利用Ｎ－乙酰咪唑修饰高密度脂蛋白－３（ＨＤＬ３）研究其对ＨＤＬ３结合肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞能力的影响。结果：ＨＤＬ３乙酰咪唑修饰降低其竞争结合作用。这一抑制作用取决于乙酰咪唑浓度，在１ｍｏｌ／Ｌ时达最大抑制。结果提示ＨＤＬ３中酪氨酸残基存在于ＨＤＬ３结人合确认部位，参与ＨＤＬ３的受体结合过程。     

乙酰咪唑修饰对高密度脂蛋白结合人肝癌SMMC－7721细胞的影响

利用Ｎ－乙酰咪唑修饰高密度脂蛋白－３（ＨＤＬ３）研究其对ＲＤＬ３结合肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞能力的影响。结果：ＨＤＬ３乙酰咪唑修饰降低其竞争结合作用。这一抑制作用取决于乙酰咪唑浓度，在１ｍｏｌ／Ｌ时达最大抑制。结果提示ＨＤＬ３中酪氨酸残基存在于ＨＤＬ３结合确认部位，参与ＨＤＬ３的受体结合过程。     

阿霉素对人肝癌细胞SMMC—7721抑制作用的研究

目的 研究阿霉素对人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１生长的影响。方法 应用ＭＴ法、流式细胞术及航向电镜技术观察阿霉素对ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长的作用及细胞周期和形态学改变。结果 阿霉素明显抑制人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１的生长（Ｐ〈０．０５）,半数生长抑制剂量（ＩＣ５０）为０．４４ｍｇ／Ｌ。流式细胞术证实,阿霉素作用１２ｈ,细胞阻滞于Ｇ２期,４８ｈ细胞阻滞于Ｇ１期。航向电镜超微结构观察发现阿霉素可使肿     

Nrf3基因对肝癌SMMC7721细胞系的体外研究

目的在体外检测Nrf3基因对肝癌SMMC7721的生长影响作用。方法构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染肝癌SMMC7721细胞系,FCM观察其在体外对肝癌SMMC7721细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果Nrf3在肝癌SMMC7721细胞中表达,荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下肝癌SMMC7721G2/M＋S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制肝癌SMMC7721的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制肝癌SMMC7721细胞的体外生长。FCM分析,未观察到明显的＂亚G1＂峰（即凋亡峰）,提示Nrf3在体外对肝癌SMMC7721细胞的凋亡无影响。结论Nrf3在体外具有抑制肝癌细胞增殖的功能,对肝癌细胞的凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。     

RN181过表达影响SMMC7721肝癌细胞凋亡的初步研究

目的构建过表达RN181基因的SMMC7721重组细胞株,研究RN181对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响,并初步探讨其凋亡机制。方法构建高表达RN181逆转录病毒感染SMMC7721细胞,显微镜观察其细胞株荧光强弱,Western blot鉴定RN181蛋白表达水平;采用DAPI染色法、Western blot检测RN181对顺铂诱导SMMC7721细胞株凋亡的变化情况。结果重组细胞株荧光表达良好,7721RN181细胞中RN181蛋白表达量高于其对照,差异有统计学意义(P0.05)。DAPI染色法观察到在顺铂作用下,7721RN181的细胞凋亡阳性率高于其对照,差异有统计学意义(P0.05);Western blot检测到7721RN181的activated caspase-3、cleaved PARP的表达量高于对照组,procaspase-6,pro-caspase-8的表达量低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 RN181表达能促进肝癌细胞的凋亡,其可能通过参与死亡受体凋亡途径来促进肝癌细胞凋亡。进而推测RN181基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点。     

卟啉氮芥对人肝癌细胞SMMC7721的光动力杀伤作用

目的：研究新单体化合物卟啉氮芥的光化疗抗肿瘤作用。方法：用结晶紫色法测定 啉氮芥对人肝癌细胞SMMC7721的光动力抑制效应。用测定培养上清乳酸脱氢酶（LDH）活性方法研究光动力作用对人肝癌细胞SMMC7721细胞膜的作用,用^3H-Td掺入法研究光动力作用对人肝癌细胞SMMC7721DNA合成的影响。结果：卟啉氮芥（5μg/ml,培养1h）可使人肝癌细胞SMMC7721D值明显降低、经光激发可使培养上清LDH活性显升高;可使体外培养从肝癌细胞SMMC7721的^3H-TdR掺入显下降,经光激发可使体外培养人肝癌细胞SMMC7721的^3H-TdR掺入量进一步显下降。结论：卟啉氮芥可显抑制人肝癌细胞SMMC7721DNA的合成;对人肝癌细胞SMMC7721有显的光动力抑制作用,轲破坏肿瘤细胞的细胞膜,抑制肿瘤细胞DNA的合成,提示卟啉氮芥对肿瘤细胞有显的光动力杀伤作用,具有发展为光化疗抗癌新药的前景。     

大豆黄酮对肝癌SMMC7721细胞及其CD133肿瘤干细胞增殖的影响

目的:探讨大豆黄酮对肝癌SMMC7721细胞及其CD133肿瘤干细胞增殖的影响。方法:取对数生长期的肝癌SMMC7721细胞,分别加入不同浓度的大豆黄酮,在24、48和72 h的时间点上,用MTT法测定大豆黄酮对肝癌SMMC7721细胞的抑制生长率。另外,将培养的细胞与CD133蛋白荧光素一抗标记混合,37℃孵育反应20 min,在525 nm波长下进行流式细胞仪检测。结果:大豆黄酮对于肝癌SMMC7721细胞在24、48和72 h内均有明显的抑制作用,并且抑制率随浓度的增加而增加。经大豆黄酮处理24 h后,CD133肿瘤干细胞的数量也显著减少。结论:大豆黄酮不仅具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,而且也具有抑制CD133肿瘤干细胞增殖的作用。     

siRNA介导的新趋化因子VCC-1沉默对人SMMC7721肝癌细胞生长的影响

 目的 探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC27721生长的影响。方法 采用脂质体法将siRNA质粒导入SMMC7721细胞,建立VEGF相关的趋化因子1（(VEGF correlated chemokine 1,VCC-1）)VCC-1基因表达沉默的肝癌细胞系,用Western blot检测细胞中VCC-1的表达水平,用MTT法、软琼脂克隆形成实验等研究siRNA靶向抑制VCC-1表达对SMMC7721细胞生长的影响。结果 Western blot 结果显示RNA干扰组（shVCC1-1组）细胞VCC-1蛋白表达水平明显低于对照组（P<0.01）; ,MTT法结果显示shVCC1-1组细胞增殖速度、克隆形成率均低于对照组（P<0.05）。结论 siRNA靶向抑制 VCC-1表达可以抑制人SMMC7721肝癌细胞增殖能力及克隆形成能力。     

bcl-2核酶对SMMC7721细胞端粒酶活性的影响作用

目的 观察bcl-2核酶对SMMC-7721细胞的作用,探讨bcl-2表达水平的改变对细胞端粒酶活性的影响。方法 经脂质体介导的方法将PMTr-neo（下向bcl-2核酶真核表达载体）导入SMMC7721细胞中,细胞克隆转移扩大培养后,采用TUNEL,TRAP-PCR-ELISA,免疫组化技术结合图像分析技术检测SMMC7721/PMTr-neo细胞凋亡=细胞端粒酶活性及P16,P12的改变。结果 较对照组SMMC7721/PMTr-neo细胞Bcl-2表达水平显著下降,伴有显著细胞凋亡现象;同时端粒酶活性下降,P16,P21表达水平显著增加。结论 bcl-2核酶可促进SMMC7721细胞发生凋亡,并降低细胞端粒酶活性,提示Bcl-2表达水平的改变对细胞端粒酶活性有一定的影响。     

反义C—myc寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC—7721的生长抑制

针对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ第二外显子起始妈ＡＵＧ及下游４个密码子设计合成了反义、正义及锚配寡核苷酸（ＯＤＮｓ）、并对合成的ＯＤＮｓ进行 硫代磷酸化修饰。在人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１培养体系中，对反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）抑制细胞增殖的作用进行了研究。发现（１）与正义和错配ＯＤＮｓ相比较，反义Ｃ－ｍｙｃＯＤＮ有明显抑制人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１生长的作用；（２）该生长抑制作用随ＡＳＯＤＮ剂量增加而增     

辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL对肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用

目的：研究携带可溶性人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(shTRAIL)基因的辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL在人肝癌细胞株中的表达及其促凋亡作用。方法：体外通过脂质体转染SMMC7721细胞。转染细胞分别接受0(假照组)、2、5和10 Gy X线照射,ELISA法检测sTRAIL的表达;细胞分为正常SMMC7721组,分别接受0(假照组)、2和5 Gy X线照射的转染空质粒pshuttle-Egr1组及转染重组质粒pshutlle-Eyr1-shTRAIL组,采用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率;分别取SMMC772细胞、转染STRAIL细胞、转染空载体及照射组细胞,采用克隆形成实验检测细胞存活率。结果：不同剂量X射线照射SMMC7721-shTRAIL细胞上清中可溶性TRAIL表达量明显高于假照组（P< 0.001）;与假照组比较,照射转染后SMMC7721细胞的凋亡细胞百分数明显增加（P<0.05或P<0.001）,细胞存活率明显下降（P<0.05
或P<0.001）。结论：pshuttle-Egr1-shTRAIL     

地榆鞣质抗肝癌细胞SMMC—7721的MTT及FCM分析

探讨中药成分地榆鞣质的抗癌活性，并试图建立一种筛选抗癌药物的方法，方法：运用ＭＴＴ法测定ＳＴＭ及ＳＴＬ对体外培养人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞的杀伤率并通过流式细胞仪分析细胞分裂周期各时象ＤＮＡ变化。结果；ＳＴＭ与ＳＴＬ均有明显抗癌活性，与阴性对照组相比有显著差异，并具有剂量效应关系，ＳＴＭ，ＳＴＬ与ＭＭＣ联合用药抗癌活性增强，与单独用药组相比差异显著；     

藜蒿黄酮粗提物对SMMC7721细胞生长抑制作用

目的 制备藜蒿黄酮粗提物,并检测其对人肝癌细胞株SMMC7721的抑制作用.方法 采用乙醇热回流和超声波辅助乙醇温浸法制备藜蒿黄酮粗提物,用紫外分光光度法进行鉴定,然后MTT法鉴定藜蒿黄酮粗提物对SMMC7721细胞的生长抑制作用.结果 采用乙醇热回流法黄酮得率为1.67％,超声波辅助乙醇温浸法黄酮得率为3.71％.750～1 250μg/mL各组藜蒿黄酮粗提物均抑制肿瘤细胞生长,呈剂量依赖性.结论 超声波辅助乙醇温浸法提取藜蒿黄酮优于乙醇热回流法,藜蒿黄酮粗提物可显著抑制肝癌细胞株SMMC7721的生长.     

槲皮素对人肝癌细胞耐药株SMMC7721／VCR逆转作用的实验研究

目的探讨槲皮素（Que）对人肝癌细胞耐长春新碱（VCR）耐药株（SMMC7721／VCR）逆转作用的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析Que对人肝癌细胞敏感株（SMMC7721／S）、耐药株（SMMC7721／VCR）的抑制作用；Que与VCR联合作用时，SMMC7721／S对VCR的增敏作用及对SMMC7721／VCR耐药性的逆转作用。结果SMMC7721／S、SMMC7721／VCR对VCR的IC50值分别为（1．16±0．06）mg／L和（13．28±0．35）mg／L。SMMC7721／VCR对VCR耐药倍数为11．45倍。Que对两细胞株的生长有明显的抑制作用。25．0～50．0μmol／L终浓度的Que在体外能够明显提高SMMC7721／VCR对VCR的敏感性。结论Que能够部分逆转SMMC7721／VCR细胞的耐药性。它可作为有效的多药耐药逆转剂，与其它化疗药物联合应用于肿瘤的化学治疗。     

奥沙利铂对人肝癌细胞株SMMC7721的体外抗肿瘤作用

目的研究奥沙利铂对人肝癌细胞株SMMC7721生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其机制。方法以不同浓度的奥沙利铂作用于SMMC7721细胞,应用MTT法检测奥沙利铂对SMMC7721细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;采用分光光度法检测caspase-3、cas-pase-8、caspase-9的活性。结果奥沙利铂可抑制SMMC7721细胞的生长并具有时间和剂量依赖性,Hoechst33258荧光染色可见典型的细胞凋亡特征,流式细胞仪检测到细胞阻滞于S期和SubG1峰。经过奥沙利铂诱导,caspase-3、caspase-9活性被上调,较对照组明显升高（P〈0.05）,caspase-8活性未见明显改变（P〉0.05）。结论奥沙利铂具有抑制肝癌细胞株SMMC7721增殖及诱导凋亡作用,此作用可能通过激活内源性凋亡途径实现。