TAGLN在胃癌组织中的表达及其与转移的关系

目的观察TAGLN在胃癌中的表达及其与肿瘤细胞侵袭转移能力的关系。方法运用实时PCR、Western blotting及免疫组化方法,检测TAGLN在40例胃癌患者肿瘤组织和相应癌旁组织、7株胃癌细胞株及癌相关成纤维细胞(CAFs)中的表达;分析TAGLN的表达与胃癌临床病理学之间的关系。运用细胞侵袭和移动试剂盒检测高表达TAGLN的CAFs或沉默TAGLN表达后的CAFs对胃癌细胞株MKN45侵袭及移动能力的影响。结果在mRNA和蛋白表达水平方面,各胃癌细胞株间无显著性差异(P>0.05);与相应癌旁组织相比,胃癌组织TAGLN的表达明显上调(P<0.05);免疫组化染色显示,TAGLN蛋白表达于胃癌组织间质中的成纤维细胞、新生血管内皮细胞及肿瘤浸润的黏膜肌层中的肌细胞,且主要表达于细胞膜和细胞浆。淋巴结转移组胃癌组织TAGLN蛋白的表达为3.751±0.681,显著高于无淋巴结转移组的1.084±0.328(P<0.05)。细胞侵袭和移动试验结果显示,高表达TAGLN的CAFs能够促进胃癌细胞株MKN45的侵袭及移动能力;而经siRNA沉默TAGLN表达后的CAFs则明显降低胃癌细胞株MKN45的侵袭及移动能力。结论TAGLN基因在胃癌组织的基质中高表达,其表达上调对胃癌的侵袭和转移可能具有促进作用。     

TAGLN在胃癌组织中的表达及其与转移的关系

目的 观察TAGLN在胃癌中的表达及其与肿瘤细胞侵袭转移能力的关系.方法 运用实时PCR、Western blotting及免疫组化方法,检测TAGLN在40例胃癌患者肿瘤组织和相应癌旁组织、7株胃癌细胞株及癌相关成纤维细胞(CAFs)中的表达;分析TAGLN的表达与胃癌临床病理学之间的关系.运用细胞侵袭和移动试剂盒检测高表达TAGLN的CAFs或沉默TAGLN表达后的CAFs对胃癌细胞株MKN45侵袭及移动能力的影响.结果 在mRNA和蛋白表达水平方面,各胃癌细胞株间无显著性差异(P＞0.05);与相应癌旁组织相比,胃癌组织TAGLN的表达明显上调(P＜0.05);免疫组化染色显示,TAGLN蛋白表达于胃癌组织间质中的成纤维细胞、新生血管内皮细胞及肿瘤浸润的黏膜肌层中的肌细胞,且主要表达于细胞膜和细胞浆.淋巴结转移组胃癌组织TAGLN蛋白的表达为3.751±0.681,显著高于无淋巴结转移组的1.084±0.328(P＜0.05).细胞侵袭和移动试验结果显示,高表达TAGLN的CAFs能够促进胃癌细胞株MKN45的侵袭及移动能力;而经siRNA沉默TAGLN表达后的CAFs则明显降低胃癌细胞株MKN45的侵袭及移动能力.结论 TAGLN基因在胃癌组织的基质中高表达,其表达上调对胃癌的侵袭和转移可能具有促进作用.     

吡非尼酮抑制肿瘤相关成纤维细胞促进结肠癌细胞系HT29上皮间质转化的作用及机制

目的:探讨吡非尼酮在肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）诱导的HT29结肠癌细胞系侵袭、迁移、增殖、上皮-间质转化（EMT）中的作用及机制。方法:利用共培养小室将CAFs与HT29共培养后CCK-8测定HT29增殖效率;Real time-PCR和Western blot检测HT29结肠癌细胞系E-cadherin和Vimentin转录及蛋白表达水平;Transwell实验检测HT29结肠癌细胞的迁移和侵袭能力。ELISA技术检测CAFs细胞上清液中细胞因子的表达。结果:吡非尼酮抑制CAFs对HT29增殖促进作用（P＜0.05）;CAFs条件培养基培养HT29后,Vimentin表达水平显著升高（P＜0.05） ,E-cadherin显著降低（P＜0.05）;吡非尼酮处理CAFs的条件培养基对HT29细胞中两种蛋白无明显影响;Transwell实验表明CAFs与HT29共培养后,其侵袭和迁移能力明显增强（P＜0.05）;ELISA结果提示CAFs分泌TGF-β1功能受吡非尼酮抑制且存在剂量关系。结论:吡非尼酮通过抑制CAFs分泌TGF-β1抑制CAFs诱导HT29结肠癌细胞系侵袭、迁移、增殖、上皮-间质转化。     

siRNA干扰整合素β4的表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的采用RNA干扰（Small interference RNA,siRNA）技术抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞中整合素β4（integrinβ4）基因表达,观察其对细胞侵袭和迁移能力的影响。方法选用MDA-MB-231乳腺癌细胞为研究对象,应用siRNA技术沉默癌细胞Integrinβ4 mRNA的表达,Real-time PCR和Western blotting方法分别检测未转染Integrinβ4 siRNA的乳腺癌细胞组（简称空白对照组）及转染Integrinβ4 siRNA的乳腺癌细胞组（简称Integrinβ4 RNA干扰组）的Integrinβ4 mRNA和蛋白表达水平;Transwell实验检测两组细胞的侵袭及迁移能力。结果与空白对照组相比,Integrinβ4 RNA干扰组Integrinβ4的mRNA及蛋白表达水平分别降低了86%（P〈0.01）和89%（P〈0.01）,细胞侵袭和迁移能力下降（P〈0.05）。结论应用siRNA干扰技术抑制Integrinβ4表达可使MDA-MB-231细胞迁移及侵袭能力降低,提示Integrinβ4在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用。     

miR-638靶向下调MACC1抑制胃癌细胞的恶性进展

目的 探究miR-638在胃癌中的生物学功能和具体分子机制.方法 采用qRT-PCR检测miR-638和MACC1在胃癌细胞中的mRNA表达,Western blot检测MACC1在胃癌细胞中的蛋白表达;双荧光素酶实验验证MACC1和miR-638靶向结合关系;采用CCK8法测定细胞增殖活性;用划痕愈合实验和Transwell实验评价其迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期分布情况.结果 m i R-638在胃癌细胞中表达下调;过表达m i R-638抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力;MACC1在胃癌细胞中表达显著上调,miR-638靶向抑制MACC1的表达.miR-638是通过靶向下调MACC1抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力.结论 miR-638通过靶向下调MACC1抑制胃癌细胞的发生发展.     

双氢青蒿素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其可能的分子机制.方法 用不同浓度(10、20、40 μmol/L)的DHA分别作用于人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞,采用MTT法、划痕实验、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力和细胞周期与凋亡情况.Western blot检测细胞中DVL2、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1等蛋白的表达量.结果 不同浓度的DHA可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,且呈浓度依赖性增长(P＜0.05).DHA作用48 h后,细胞S期比例显著增加,诱导细胞凋亡(P＜0.05).DHA 可以降低胃癌细胞Dvl2、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达水平(P＜0.05),增加GSK-3β蛋白的表达(P＜0.05).同时,SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路,逆转DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05);XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路,进一步加强DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05).结论 DHA能有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期停留在S期,诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.     

通过下调FOXM1的新型小分子抑制剂1-3-51抗胃癌细胞的作用

目的 研究新型小分子抑制剂1-3-51在胃癌中调控FOXM1 (Forkhead box protein M1)表达及其抗癌的作用.方法 CCK-8实验检测1-3-51处理后的BGC823和MKN45细胞IC50;Western blot检测胃癌细胞FOXM1表达;qRT-PCR检测胃癌细胞FOXM1及其下游分子Cyclin D1和MMP9 mRNA表达;流式细胞术测定细胞周期情况;Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力;裸鼠皮下移植瘤模型检测1-3-51抗胃癌增殖效果;在胃癌细胞BGC823中转染FOXM1过表达质粒及其空载质粒,CCK-8实验、Transwell实验分别检测1-3-51对胃癌细胞活性、迁移及侵袭等的影响.结果 新型小分子抑制剂1-3-51在BGC823和MKN45细胞作用48 h后的IC50分别为(5.429±0.225) μmol/L、(5.169±0.239) μmol/L,并可以显著抑制FOXM1的表达及其下游分子Cyclin D1和MMP9 mRNA表达.1-3-51显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭及迁移.过表达FOXM1后,可部分逆转其抑制细胞增殖、侵袭及迁移能力.结论 小分子抑制剂1-3-51在胃癌细胞中可通过抑制FOXM1及其下游分子Cyclin D1和MMP9等的表达,进而降低胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力.     

抑制组织蛋白酶B表达对胃癌BGC-823细胞黏附、增殖和侵袭的影响

目的 探讨抑制组织蛋白酶B表达对胃癌BGC-823细胞黏附、增殖和侵袭的影响.方法 构建针对CB的siRNA表达载体,脂质体LipofectAmineTM2000转染胃癌细胞株BGC-823.荧光定量RT-PCR和免疫印迹检测CB在各组胃癌细胞中的表达水平;细胞黏附实验检测各组胃癌细胞的黏附能力;细胞侵袭性实验检测各组胃癌细胞的侵袭能力;细胞增殖实验检测各组胃癌细胞的增殖能力.结果 与空白对照组和无关siRNA对照组相比,沉默1组和沉默2组细胞中,CB mRNA的相对表达量显著降低(P ＜0.01);CB蛋白表达被显著抑制;纤维粘连蛋白和基质胶黏附的胃癌细胞数目以及穿透基质胶的胃癌细胞数显著降低(P＜0.05);并且在2d、3d、4d及5d细胞孔内的吸光度值亦显著减少,差异有显著性(P＜0.05).而在无关siRNA对照组和空白对照组之间,CB mRNA的相对表达量、两组的黏附细胞数目以及两组穿透基质胶的细胞数都无显著性差异(P＞0.05).结论 设计针对CB基因的siRNA片段构建的siRNA载体能够有效干扰胃癌BGC-823细胞中CB mRNA和蛋白的表达.抑制胃癌BGC-823细胞CB基因表达,可以降低胃癌细胞的生长速度、降低胃癌细胞与基质黏附能力、降低胃癌细胞侵袭和转移的能力.     

长链非编码RNA PRNCR1对胃癌细胞增殖、侵袭及转移的研究

探索胃癌MGC-803细胞和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞中,长链非编码RNA PRNCR1的表达,以及沉默PRNCR1 对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测细胞中PRNCR1 表达水平;设计并合成PRNCR1-siRNA及对照序列（PRNCR1-NC）转染胃癌细胞,通过qRT-PCR 检测细胞中PRNCR1 的沉默效果;利用四甲基偶氮唑盐比色法检测胃癌细胞 的增殖;Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力的变化。结果PRNCR1 在胃癌MGC-803 细胞中的表达高于人正常胃黏膜上皮GES-1 细胞,PRNCR1-siRNA 可以下调胃癌MGC-803 细胞中PRNCR1 的表达,并可以抑制MGC-803 细胞的增殖和侵袭转移能力。结论PRNCR1-siRNA 能够下调PRNCR1 的表达,并有效抑制胃癌细胞的增殖和侵袭迁移力,为以PRNCR1 为靶点的胃癌基因治疗奠定理论基础。     

尿苷三磷酸通过PTEN/Vimentin抑制胃癌细胞的侵袭

目的 研究尿苷三磷酸(uridine triphosphate,UTP)对胃癌细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制.方法 采用细胞划痕实验检测UTP对胃癌细胞MKN-45和SGC-7901迁移能力的影响;Transwell检测UTP对正常人胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞MKN-45、SGC-7901侵袭能力的影响;Western blot检测UTP对胃癌细胞MKN-45和SGC-7901 PTEN磷酸化水平及Vimentin表达的影响.结果 细胞划痕实验表明UTP组抑制胃癌细胞MKN-45和SGC-7901迁移(P＜0.05).Transwell实验结果显示UTP组抑制胃癌细胞MKN-45和SGC-7901侵袭(P＜0.01),但对正常人胃黏膜细胞GES-1无影响(P＞0.05).Western blot实验证实UTP组可增强胃癌细胞MKN-45和SGC-7901 PTEN磷酸化水平,同时下调Vimentin的表达.结论 UTP抑制胃癌细胞的迁移和侵袭,可能是与其上调PTEN磷酸化水平,抑制Vimentin表达有关.     

长链非编码RNA BC015134调控胃癌细胞侵袭与迁移的研究

目的 探讨长链非编码RNA BC015134促进胃癌细胞侵袭迁移的作用及机制。方法 通过对GEO数据库中10对胃癌和癌旁组织RNA芯片结果进行分析以及湖州市中心医院2015年1月至2020年12月胃癌根治术患者的临床样本80例验证,筛选胃癌转移相关长链非编码RNA。通过shRNA介导的RNA干扰和质粒介导的过表达技术调节BC015134在胃癌MGC-803细胞中的表达水平,采用Transwell实验检测胃癌细胞侵袭和迁移能力。通过RNA pulldown实验及Western blot法验证BC015134与β-连环蛋白（β-Catenin）能否相互结合。利用qRT-PCR技术检测BC015134在临床样本中的表达水平,并做预后分析。结果 通过对芯片结果进行临床样本验证,发现BC015134在有远处转移的胃癌原发灶中高表达。在MGC-803细胞中过表达BC015134能够促进细胞的侵袭及迁移能力,而敲减BC015134能够抑制细胞的侵袭及迁移能力。BC015134能够与β-Catenin相互结合,过表达β-Catenin后神经型钙黏蛋白（N-cadherin）的表达上调,上皮型钙黏蛋白（...     

香参壳方对人胃癌细胞上皮间质转化及转移的影响

目的 考察香参壳方调节人胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化(EMT)及转移的作用机制。方法 体外培养SGC-7901细胞,随后加入不同浓度的香参壳方含药血清进行干预。划痕实验及Transwell小室法观察SGC-7901细胞的迁移与侵袭能力,MTT法考察SGC-7901细胞的增殖能力,Western blot法检测细胞中N-cadherin、Vimentin、E-cadherin、p-GSK3β/GSK3β、β-Catenin表达水平。结果 香参壳方可有效抑制SGC-7901细胞的迁移及侵袭能力,抑制其增殖,同时下调细胞中N-cadherin、Vimentin、p-GSK3β/GSK3β及β-Catenin的表达,上调E-cadherin的表达。结论 香参壳方主要通过介导GSK3β/β-Catenin信号通路抑制胃癌细胞的EMT,降低弱细胞迁移与侵袭能力,从而发挥其胃癌术后的辅助治疗作用。      

染色体驱动蛋白KIF4A对胃癌细胞迁移和转移的影响

目的 前期的研究证实,染色体驱动蛋白KIF4A在胃癌组织中低表达, 过表达KIF4A抑制了胃癌细胞的增殖。本研究进一步研究KIF4A与胃癌细胞迁移与转移的关系,从而为胃癌临床治疗提供新的治疗靶点。方法 应用组织芯片和免疫荧光染色技术研究胃癌及其周围淋巴结组织中KIF4A蛋白分子的表达差异性;利用细胞小分子RNA干扰和Transwell迁移实验,检测KIF4A对细胞迁移运动能力的影响。结果 65%(26/40)的胃癌组织中KIF4A蛋白分子表达水平低于周围的淋巴结组织;KIF4A的表达水平与胃癌组织的TNM分期密切相关;KIF4A蛋白分子的表达随胃癌转移侵袭能力的增强而降低;抑制胃癌细胞内KIF4A蛋白分子的表达明显增强胃癌细胞的迁移运动能力。结论 染色体驱动蛋白分子KIF4A通过抑制胃癌细胞的迁移运动能力参与控制胃癌的临床转移过程。     

癌胚抗原黏附分子1对胃癌细胞株AGS生物学特性的影响

目的:探讨癌胚抗原黏附分子1对胃癌细胞株AGS生物学特性的影响.方法:将CEACAM1 siRNA转染人胃癌细胞株AGS,再用western-blot检测CEACAM1的表达;流式细胞术、Transwell实验和裸鼠负荷瘤实验分析转染后的AGS细胞的生物学特性变化.结果:转染CEACAM1 siRNA后的AGS细胞几乎不表达CEACAM1.CEACAM1沉默基因对AGS细胞增殖、凋亡和细胞周期无影响.转染CEACAM1 siRNA后的AGS细胞侵袭能力明显降低,荷瘤裸小鼠肿瘤的生长受到抑制.结论:沉默CEACAM1基因的表达能够明显抑制AGS细胞的转移以及活体成瘤性,为胃癌的基因治疗提供理论依据.     

KISS1基因激活ERK1/2磷酸化通路抑制鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的研究

目的:探讨KISS1及其受体基因KISS1-R在ERK1/2磷酸化通路中调节鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR以及蛋白免疫印迹技术,检测KISS1、KISS1-R基因、黏着斑激酶（FAK）的表达;验证ERK1/2信号通路的磷酸化激活,EZR蛋白的表达与鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的关系。构建过表达KISS1及KISS1-R基因载体,通过划痕实验及Transwell实验分析过表达KISS1（SUNE-KISS1）及KISS1-R（SUNE-1R）基因对SUNE-1-5-8F鼻咽癌细胞系的迁移能力的影响。通过蛋白免疫印迹技术,检测在过表达KISS1及KISS1-R基因后,磷酸化FAK（p-FAK）和磷酸化ERK（p-ERK）以及EZR蛋白的表达水平。通过阻断ERK1/2通路的磷酸化激活,验证KISS1及KISS1-R基因对鼻咽癌细胞迁移能力的影响,以及对细胞转移相关蛋白p-FAK、EZR表达量的影响。最后,通过siRNA抑制KISS1基因表达,进一步验证KISS1基因对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的调控作用。结果:实时荧光定量PCR实验发现,KISS1基因在SUNE-1-6-10B细胞中表达量相对于SUNE-1-5-8F细胞中较高。蛋白免疫印迹分析发现,KISS1及KISS1-R的蛋白表达量,以及p-FAK的表达量与鼻咽癌细胞转移能力呈负相关;EZR与鼻咽癌细胞转移能力呈正相关关系。划痕及Transwell实验分析发现,过表达KISS1及KISS1-R基因均能够有效抑制SUNE-1-5-8F细胞的迁移和侵袭能力。蛋白免疫印迹分析发现,过表达KISS1及KISS1-R基因能增加p-FAK及p-ERK1/2的蛋白表达量,抑制EZR蛋白的表达。加入ERK1/2通路特异性的阻断剂PD98059后,由过表达KISS1及KISS1-R基因引起的细胞迁移和侵袭的抑制状态被阻断。同时,由过表达KISS1及KISS1-R引起的p-FAK与p-ERK1/2的上调,EZR的下调均被恢复。通过siRNA的干扰,抑制了KISS1基因表达,从而引起SUNE-1-5-8F细胞的迁移和侵袭能力的增加。结论:过表达KISS1基因可以显著抑制鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力;同时,通过siRNA干扰KISS1基因的表达,能够增加鼻咽癌细胞的迁移能力。KISS1及KISS1-R基因通过磷酸化激活ERK1/2通路,进一步激活p-FAK并抑制EZR表达,从而抑制鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力。     

人肺腺癌中癌相关成纤维细胞的分离培养与初步分析

目的：分离鉴定人肺腺癌组织中的癌相关成纤维细胞（cancer-associataed fibroblasts,CAFs）,分析CAFs对肺癌细胞增殖和迁移能力的影响,为进一步探索CAFs在肺癌发生发展中的作用及机制奠定基础。方法：获取人肺腺癌患者手术样本,分离并培养癌组织中的成纤维细胞。采用相差显微镜观察细胞形态,采用间接免疫荧光实验分析关键分子标志物的表达。采用CCK-8法检测细胞增殖,采用流式细胞仪分析细胞周期;采用Transwell实验分析细胞迁移能力。采用共培养和制备条件培养基方法分析CAFs对肺腺癌细胞A549增殖和迁移能力的影响。采用qRT-PCR检测关键基因表达的变化。结果：从人肺腺癌新鲜组织中分离获得CAFs,其形态为长梭形,表达纤粘蛋白和波形蛋白等成纤维细胞标志物,不表达上皮细胞角蛋白8/18（CK8/18）等上皮细胞标志物。肺腺癌CAFs增殖活跃。肺腺癌CAFs能明显促进A549的增殖和迁移能力,并明显上调A549细胞中c-Myc、PIM1、SOCS3和CCND1基因的表达。结论：成功分离了人肺腺癌CAFs,其能明显促进肺癌细胞的增殖和迁移能力。     

透明质酸合酶-2在癌相关成纤维细胞促进舌癌细胞侵袭中的作用

目的:检测透明质酸合酶2 (hyaluronan synthase 2,HAS2) 在正常成纤维细胞(normal zone fibroblasts,NFs)及癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)中的表达,并探讨其在CAFs介导的舌鳞癌细胞系Cal27侵袭行为中的作用?方法:分别从同一舌癌患者手术切除标本的癌组织及癌旁组织获取CAFs和NFs?免疫细胞化学?Western blot法鉴定细胞表型?实时定量RT-PCR及Western blot检测透明质酸合酶在两种细胞中的表达?利用Transwell小室共培养模型,观察CAFs及NFs对舌癌细胞系Cal27侵袭能力的影响?利用siRNA抑制CAFs 中的HAS2,并分析其对Cal27侵袭能力的影响?结果:α-SMA表达于CAFs,NFs中几乎无表达?Cal27在CAFs组中的侵袭力显著高于NFs组及空白对照组(P < 0.01)?实时定量RT-PCR结果显示HAS2在CAFs中的表达是NFs的7倍(P < 0.01),蛋白水平则为NFs的3倍(P < 0.01);Cal27在HAS2干扰组的侵袭力显著低于CAFs组及无关序列组(P < 0.01)?结论:CAFs具有促进舌癌细胞侵袭能力的作用,高表达HAS2可能是其作用机制之一,抑制肿瘤微环境中CAFs的HAS2功能可能是一条新的抗肿瘤侵袭转移的途径?     

O-GlcNAc糖基化修饰和Akt1对胃癌细胞体外增殖及侵袭力的影响

目的 探讨O-连接N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)糖基化修饰对胃癌细胞体外增殖及侵袭力的影响,并评价Akt1在O-GlcNAc糖基化促进胃癌细胞体外增殖及侵袭过程中的作用.方法 通过使O-GlcNAc转移酶(OGT)过表达(过表达OGT组)或沉默表达(沉默OGT组)及使用O-GlcNAc水解酶(OGA)特异性抑制剂Thiamet-G(抑制剂组)下调O-GlcNAc水解酶活性(抑制剂组)等构建O-GlcNAc糖基化水平升高或降低的细胞模型;采用MTT法检测各组胃癌细胞增殖活力;软琼脂集落形成实验观察各组胃癌细胞集落形成;Transwell细胞迁移实验各组胃癌细胞体外迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组胃癌细胞Akt1活性;Thiamet-G处理Akt1表达沉默(沉默Akt1组)的胃癌细胞以评价Akt1在O-GlcNAc糖基化促进胃癌细胞侵袭中的作用;利用Thiamet-G处理Akt1过表达(过表达Akt1组)的胃癌细胞以进一步验证Akt1在O-GlcNAc糖基化调控胃癌细胞侵袭性过程中的作用.结果 O-GlcNAc糖基化水平升高可促进胃癌细胞增殖并显著提高细胞集落形成、体外迁移和侵袭的能力;Akt1活性被由O-GlcNAc糖基化水平升高所介导的Ser473磷酸化上调而激活;Thiamet-G诱导的细胞侵袭性被Akt1 shRNA所抑制;Akt1高表达可进一步促进由Thiamet-G诱导的细胞侵袭性增强.结论 O-GlcNAc糖基化可部分通过Akt1途径增强胃癌细胞的体外增殖及侵袭力.     

靶向c-myc基因小RNA干扰对胆囊癌细胞侵袭运动的影响

目的 研究c-myc基因在胆囊癌侵袭和转移中的作用及其机制。方法 采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测亲代和高转移胆囊癌细胞系中c-myc基因表达,设计靶向c-myc的干扰性小RNA(siRNA)转染高转移的胆囊癌细胞,体外Transwell实验研究c-myc siRNA对胆囊癌高转移细胞迁移和侵袭能力的影响。通过蛋白质印迹法检测转染c-myc siRNA后c-myc下游部分信号通路的变化。结果 高转移细胞中c-myc基因表达高于亲代细胞,转染c-myc siRNA后,c-myc的表达在转录和翻译水平均降低。同时GBC-SD/M3细胞的转移和侵袭能力受到抑制。对c-myc下游信号通路的检测发现LIN28的表达下调。结论 c-myc在高转移的胆囊癌细胞中表达上调;通过siRNA下调其表达后可以抑制胆囊癌细胞的转移和侵袭,这种抑制作用可能与LIN28的下调有关。     

m6A去甲基化酶ALKBH5抑制胃癌细胞运动侵袭和Wnt信号通路活性的机制

目的 研究RNA去甲基化酶ALKBH5对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制.方法 利用人类癌症基因库(the cancer genome Atlas,TCGA)对ALKBH5差异表达的胃癌患者进行总生存期分析;应用小鼠胃原位种植和转移模型分析ALKBH5的蛋白表达与胃癌细胞转移的相关性;通过构建敲低/过表达细胞株,结合Transwell实验研究ALKBH5对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响;利用m6A修饰位点预测网站m6AVAR(http://m6Avar.renlab.org/index.html),结合蛋白免疫印迹、放线菌素D处理结合实时荧光定量PCR,检测Wnt信号通路下游基因表达和mRNA稳定性.结果 TCGA数据库提示ALKBH5的低表达提示胃癌患者更短的生存期;体内实验验证ALKBH5的低表达与胃癌细胞远处转移相关;ALKBH5的敲低可以促进胃癌细胞的侵袭和转移;Wnt下游分子MYC,CD44,c-Met的mRNA上存在m6A修饰位点;ALKBH5缺失时,Wnt下游分子的蛋白表达增加及mRNA稳定性增强.结论 ALKBH5表达缺失促进胃癌细胞迁移和侵袭能力,维持Wnt信号通路的激活.